裸鼠人肝癌模型模拟临床化疗实验研究

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人非小细胞肺癌裸鼠原位种植转移模型的建立实验具体步骤及方法

人非小细胞肺癌裸鼠原位种植转移模型的建立实验具体步骤及方法将表达GFP的质粒pRNAT-U6/Neo转染人肺腺癌细胞A549，G418筛选获得稳定表达GFP细胞，对比转染前后细胞的生长活性和成瘤性。

将转染后细胞原位种植裸鼠预定标准处死。

HE染色和免疫组化检测转移灶的位置和数目。

利用KODAK IS2000MM系统检测肿瘤播散情况。

一、实验材料准备1. BALB/c nu/nu裸鼠40只，雄性，4-6周龄，体重18-20 g，无特定病原体(SPF)级饲养。

2. 肺腺癌细胞株A549，用含10%小牛血清的RPMI 1640培养基(美国Gibcobrl公司)，5% CO237℃培养，常规传代。

3. 质粒和筛选药物质粒pRNAT-U6/Neo(美国Genscript公司)，携带Neomycin耐药基因供筛选，在CMV启动子控制下编码cGFP作为转染标记物。

G418(美国Promega公司)800 μg/ml初筛后200 ug/ml维持筛选。

二、细胞的转染1. 哺乳动物磷酸钙转染系统(美国Promega公司)，按照操作指南将质粒pRNAT-U6/Neoo转入A549细胞，转染后24~48 h荧光显微镜下观察转染效率。

2. 后培养液内加G418筛选获得稳定转染。

3. 利用平板克隆形成试验测定细胞克隆形成率>10%后，有限稀释法获得表达GFP阳性细胞。

4. 1月后收获转染细胞，常规传代培养，培养液中加G418(200 ug/ml)维持筛选。

5. 测定转染后A549细胞增殖动力学指标，对比转染前后A549细胞生长曲线，检测转染后细胞的生长活性是否受转染的影响。

6. 待细胞增殖达一定数量后，裸鼠皮下注射转染前后细胞，记录成瘤时间，用公式V=1/2x长x宽计算肿瘤体积，对比转染前后两组裸鼠的瘤体大小以检测成瘤性是否有差别。

三、人肺腺癌A549裸鼠原位种植模型的建立1. 取转染后细胞，用不含血清的RMPI 1640培养液冲洗2次并调整细胞最终浓度为5x106/0.2 ml备用。

采用HepG2细胞株建立裸鼠肝癌模型的方法

１３１肝癌细胞及传代．．
按常规要求配制细胞培养
液和消化液，Ｈｅ％细胞在细胞培养室经数次传代将ｐ
２．瘤体直径、量的测量种植Ｈｅ％细胞后５４重ｐ
培养，其能提供足够数量的癌细胞。使
采用ＨｅＧ细胞株建立裸鼠肝癌模型的方法ｐ２
李军李福涛开丽谭娅鲁永玲周红
Ｉ
（三军医大学药理教研室重庆第
４０３）００８
摘要目的：探讨采用Ｈｐ细胞株建立裸鼠肝癌模型的方法。方法：ｅ％采用皮下注射Ｈｐ细胞（．ｅ％１２
１３２制备动物荷瘤模型取培养的Ｈｅ％细胞，．．ｐ经计数后调整浓度为６． ×１细胞・升～裸鼠１００毫。４只称重后，为肿瘤种植组和对照组２组，组７只，分每
天即可在注射部位看到并摸到明显的瘤块，７天左右瘤块变硬，逐渐长大，当瘤体直径大于ｌｍ时．杀２ｃ活
×１６建立裸鼠肝癌模型，０）观察种植细胞后１４天内裸鼠的死亡率，并在１４天时活杀动物测定瘤体重量、直径及血清ＡＦＰ浓度。结果：法遣模成功率达１０。结论：方法操作简便，期短，功率高等可作为肝癌模型该０％该周成
应用。
关键词
Ｈｅ％细胞株；鼠；ｐ裸动物模型；甲胎蛋白

人乳腺癌的裸鼠移植模型的制作讨论(一)2024

人乳腺癌的裸鼠移植模型的制作讨论（一）引言概述：人乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，研究人乳腺癌的病理机制和新型治疗方法对于提高乳腺癌患者的治疗效果具有重要意义。

裸鼠移植模型作为一种重要的实验模型，在研究人乳腺癌中起着关键的作用。

本文将讨论人乳腺癌裸鼠移植模型的制作方法和相关注意事项。

正文：1. 选择裸鼠种类：- 了解裸鼠种类的特点和应用范围- 考虑使用的乳腺癌细胞系和裸鼠种类的适配性- 考虑裸鼠的耐受性和维护成本等因素2. 人乳腺癌细胞系的选取：- 选择与研究需求匹配的人乳腺癌细胞系- 考虑细胞系的来源、传代数和特殊基因改造等因素- 确保细胞系的纯净性和生长状态3. 裸鼠移植模型的建立：- 麻醉裸鼠并准备手术场所和器械- 选择合适的手术方法：正常组织移植、原位肿瘤移植等- 控制操作时间和温度，在手术中保证裸鼠的生命安全4. 裸鼠移植后的观察和评价：- 监测裸鼠移植部位的肿瘤生长情况- 测定肿瘤体积和质量等指标- 运用影像学和组织学等方法评估移植肿瘤的特征和转移能力5. 实验数据的分析与解释：- 对裸鼠移植模型进行数据统计和分析- 比较不同实验组间的差异和相关性- 结合其他实验结果和临床数据解释实验结果的意义总结：人乳腺癌裸鼠移植模型的制作是研究乳腺癌病理机制和治疗方法的重要实验手段。

通过选择合适的裸鼠种类和人乳腺癌细胞系，进行细致的手术操作和观察评价，以及对实验数据的严谨分析，可以获得可靠的实验结果，并进一步深入了解乳腺癌的发生发展机制，为治疗提供理论依据。

但在使用裸鼠移植模型进行实验时，也需遵守伦理和动物保护的原则，确保实验的科学性和可行性。

动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型

动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型一、嘉美实验裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建方法采用腋窝皮下接种PC-9人肺癌细胞，建立PC-9人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型并给与药物进行干预，观察药物对肿瘤的作用。

二、裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建及后续实验操作1、25只BALB c裸鼠，适应性饲养一周后，调整制备好的PC-9人肺腺癌细胞单细胞悬液浓度，用1m 1l无菌注射器吸取细胞悬液，于每裸鼠右侧腋下皮下注射0.2mL细胞悬液(接种细丹包量约为1×x102/ml)，细胞悬液接种于裸鼠的右侧腋下7-10d后，观察成瘤情况，肿瘤仁本积大于100m3后，选取肿瘤大小相近的小鼠按肿瘤体积随机分为4组:(1)对照组，5只；(2)高剂量组，7只:(3)中剂量组，7 )顺铂组，6只。

当天高剂量组、中剂量组、顺铂组开始给药其中，高剂量组连续21天每天灌胃给药，顺铂组每三天腹腔注射给药，齐量5m/e次。

每两天测量荷瘤裸鼠体重和冲瘤体积。

于第22天停止给药病禁食2h，第再次测量肿瘤体积，计算相对肿瘤体积(RTV)，绘制肿瘤生长曲线，毛材当天称量最后一次体重和瘤重计算肿瘤指数完整剥离瘤块，其中一半瘤块组织于 10%福尔马林中固定，备用；另半肿瘤组织存放于液氮中冻存。

血样用109 mmol/L枸櫞酸钠19抗凝，分离血浆。

2、小鼠接种PC-9人肺腺癌细胞后 9天左右，可观察到裸鼠右侧腋下均现黄豆大小瘤块，于当天开始测量肿瘤体积并称重。

于接种第11天时，测量肿瘤生长指数和体重时发现，各组荷瘤裸鼠肿瘤体积均值达到100mm3，于当天开始分组给药在给药过程中发现，顺铂组荷瘤裸鼠的体重下阳夆明显，与对照组相比具有极显著性差异루(P<0.01)高剂量组荷瘤裸鼠的体重于d7、dI 3、d19天时有显著性差异(P~0.05)，其他各组体重与对照组相比均无明显差异。

顺铂组肿瘤体积于d13、d17、dl9、d21 d23时与对照组相比明显减小，并有显著性差 :(P<0.05)，在d15天时有极显著性差쿠(P<0.01)。

人肝癌多药耐药细胞系 Bel-7402／DOX 两种模型比较

人肝癌多药耐药细胞系 Bel-7402／DOX 两种模型比较钟兴国;龚仁华;孙登群;曹葆强;范育林;姜世涛;蔡军;何新苗;骆会来【摘要】目的：比较体外浓度梯度递增诱导和裸鼠肝脏移植诱导两种方法建立人肝癌多药耐药细胞系Bel-7402/多柔比星（ Doxorubicin ，DOX）模型的生物学特性。

方法分别采用体外浓度梯度递增诱导和裸鼠肝脏移植诱导建立人肝癌多柔比星多药耐药细胞亚系Bel-7402/DOXV 和Bel-7402/DOXL 后，利用相差显微镜观察细胞，MTT法检测两种细胞的耐药性，细胞计数法绘制生长曲线并用公式法计算倍增时间，流式细胞仪测定细胞DOX的摄入和外排以及P糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白（MRP）、谷胱甘肽硫转酶系统（GSH/GST）的表达。

结果两组耐药细胞Bel-7402/DOXV 和Bel-7402/DOXL 对DOX、CD-DP均产生了交叉耐药性，较亲本Bel-7402 IC50值差异有统计学意义（P＜0．01）；较亲本细胞的倍增时间明显延长，分别为65 h和46 h；较亲本的DOX外排率明显升高，分别为81．06％、66．56％；两组耐药细胞P-gp、MRP表达较亲本细胞显著提高（ P＜0．01），而GSH/GST的表达无明显变化。

结论两种方法建立的耐药细胞系模型均有稳定的耐药性。

肝脏移植法更能高度模拟人肝癌，它是具有近似人肝癌生物学和抗癌药物动力学特征的较理想模型。

%Objective To compare the biological characteristics of two types of human hepatocellular carcinoma multi -drug re-sistant cell sub-lines Bel-7402/DOX models established by two methods .Methods We established human hepatocellular carcinoma doxorubicin multi-drug resistant cell sub-lines models Bel-7402/DOXV and Bel-7402/DOXL by in vitro concentration gradient in-creased induction and nude mice liver-implanted induction , respectively .Phase contrast microscopy was used to observe the cells and MTT ( methyl thiazolyltetrazolium ) method was used to detect drug resistance of the two different sub-lines of cells .The ingestion and excretion of cellular doxorubicin (DOX) and the expression of P-glycoprotein (P-gp), multi-drug resistance-sociated protein (MRP) and glutathione S-transfer enzyme system ( GSH/GST ) were detected by flow cytometry .Results The Bel-7402/DOXV and Bel-7402/DOXL generated cross-resistance to DOX and CDDP ( cis-Diaminedichloroplatinum ) , they showed a significant difference in re-sistance to Bel-7402 IC50 value (P<0.01).The doubling times were significantly extended , compared with the parent cell line (39 h) , and were 65 h ( Bel-7402/DOXV) and 46 h ( Bel-7402/DOXL) .The excretion rates of DOX were significantly increased , com-pared with the parent cell (34.14%) line and were 81.06%(Bel-7402/DOXV) and66.56%(Bel-7402/DOXL).Expressions of P-gp and MRP in the two groups of resistant sub-lines cells were significantly enhanced (P<0.01).There was no significant variation in the expression of GSH/GST (P>0.05).Conclusions Stable resistance is involved in the resistant cell line model established by the two methods above .Liver implantation is a good simulation of human hepatocellular and proves to be an ideal model with characteristics similar to human hepatocellular biology and the pharmacokinetics of anticancer drugs .【期刊名称】《武警医学》【年(卷),期】2014(000)007【总页数】5页(P728-732)【关键词】肝癌;多药耐药;多柔比星;细胞系模型【作者】钟兴国;龚仁华;孙登群;曹葆强;范育林;姜世涛;蔡军;何新苗;骆会来【作者单位】230041 合肥，武警安徽总队医院普外科;230041 合肥，武警安徽总队医院普外科;230041 合肥，武警安徽总队医院普外科;230041 合肥，武警安徽总队医院普外科;230041 合肥，武警安徽总队医院普外科;230041 合肥，武警安徽总队医院普外科;230041 合肥，武警安徽总队医院普外科;230041 合肥，武警安徽总队医院普外科;230041 合肥，武警安徽总队医院普外科【正文语种】中文【中图分类】R735.7目前对于肝癌，尤其是对中晚期肝癌的治疗仍以手术及化疗相配合治疗为主。

裸鼠模型在肿瘤治疗研究中的应用

裸鼠模型在肿瘤治疗研究中的应用近年来，肿瘤治疗研究一直是医学界的热门话题。

而其中一个被广泛应用的模型就是裸鼠模型。

该模型是一种没有免疫系统的小鼠，其所患种类繁多的人类癌症与人体癌症的生理和生化特征高度一致。

因此，裸鼠模型被视为一种可靠的人类癌症模型，在肿瘤治疗研究中得到越来越广泛的应用。

一、裸鼠模型有助于肿瘤药物筛选和剂量的选择裸鼠模型的特点是没有免疫系统，因此可以有效地模拟人类癌症患者对化疗药物的反应。

研究人员可以将不同类型的人类肿瘤细胞种植到裸鼠的体内，然后观察不同药物的疗效以及适应性。

这种方法可以帮助筛选出最有效的化疗药物，并确定最佳的剂量方法，以降低剂量过大或过小的患者药物副作用和治疗效果不佳的风险。

二、裸鼠模型可以用于研究免疫药物的作用机制裸鼠模型的另一个重要特点是它们缺乏免疫系统。

因此，在研究免疫药物的作用机制时，其免疫抑制作用可以被完全消除。

这些免疫药物通常用于治疗肿瘤细胞免疫逃逸的疾病。

研究人员可以在裸鼠体内种植癌细胞，并给予不同的免疫药物处理，以便研究药物在治疗肿瘤免疫逃逸方面的作用和机制，为开发更加有效的肿瘤免疫疗法提供理论基础。

三、裸鼠模型可以模拟人类癌症的药物耐受性药物耐受性是肿瘤治疗中的一个重要问题。

但是直接在人体内进行研究很难获得满意的结果，因为某些药物在实验室中表现出的耐受性可能与实际情况不同。

通过使用裸鼠模型，可以准确地模拟人类癌症的耐受性情况，并研究这些药物的各种机制。

这种方法可以帮助人们更好地了解药物耐受性的机制，促进新药物的开发，改善现有的肿瘤治疗方法。

四、裸鼠模型可以进行肿瘤的转移研究在许多情况下，治疗肿瘤并不仅仅是消灭原发肿瘤，还需要防止肿瘤进行转移。

而裸鼠模型在这个方面有很大的应用潜力，尤其是在研究转移性肿瘤时。

研究人员可以通过种植具有转移潜力的细胞系，观察肿瘤转移的过程和机制，并测试不同的治疗方案，以便开发更加有效的肿瘤转移治疗方法。

五、裸鼠模型可以用于研究基因治疗基因治疗是一种新型的肿瘤治疗方法，其作用机制涉及基因转导、表达、调控和重组等方面。

人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法

人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法先用组织学完整的新鲜人肝癌组织接种于裸鼠皮下，形成皮下移植瘤，然后用此移植瘤组织再接种于裸鼠肝内，建立肝原位移植瘤模型（间接肝原位移植瘤模型），并将其与直接肝原位移植瘤模型、皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型作比较。

一、间接肝原位移植瘤模型的制备1. 用新鲜的肝癌外科手术切除标本（来自长海医院，患者为1名47岁男性，病理诊断：肝左叶肝细胞癌，粗梁型，Ⅱ级），在Hanks液中，去除坏死组织和非癌组织后切成1～2 mm3小块。

2. 取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠腰背部皮下，待皮下移植瘤长到直径约1 cm时切取肿瘤，在Hanks液中，去除坏死组织后切成1～2 mm3小块，裸鼠用戊巴比妥钠腹腔麻醉后，行左上腹横切口，暴露肝脏。

3. 取上述2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠肝右叶深部实质内，全层关腹。

二、直接肝原位移植瘤模型的制备1. 同一例新鲜肝癌手术切除标本，处理方法同皮下移植，裸鼠处理同间接肝原位移植，取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头直接植入裸鼠肝右叶深部实质内。

2. 皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型的制备。

三、病理检查和相关指标检测1. 解剖和组织学检查（1）所有裸鼠接种后，分组分笼饲养，自由进食，每天观察1～2次。

（2）当裸鼠处于全身衰竭状态时处死并作大体解剖，对接种瘤和转移瘤分别进行观察、测量，记录肿瘤侵袭和转移情况，重要器官（主要为肝和肺）经10%中性甲醛固定后，常规石蜡制片，光学显微镜检查。

2. 周围血甲胎蛋白(AFP)检测处死前，均采用摘眼球采血的方法获得血液，用生化法检测AFP的分泌量。

3. 瘤细胞DNA含量分析留取部分移植瘤标本采用流式细胞术进行DNA含量分析。

注意事项目前，肝癌的复发和转移仍然是其术后长期存活的主要障碍。

为了研究肿瘤的转移机制，建立接近于人体的肿瘤动物模型显得尤为重要。

裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立

裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立是一种重要的疾病模型，它可以为肝癌治疗研究提供有力的实验支持。

本文将对裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立方法、优点、应用以及未来发展进行详细的探讨。

一、裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立方法1.1 细胞培养：选择合适的肝癌细胞系进行体外培养，确保细胞状态正常、细胞活性强。

1.2 细胞检测：检测细胞的纯度、细胞数目、细胞的拓扑形态、基因表达差异等，以保证肝癌细胞的最佳种植状况。

1.3 裸鼠荷瘤：通过注射细胞的方式给裸鼠诱发肝癌，注射前需要消毒裸鼠的皮肤及手术器械，减少致病菌的感染；肝癌细胞的注射部位可以是裸鼠体表组织、皮下或者肌肉内部。

1.4 实验监测：在瘤细胞注入裸鼠后，要检测裸鼠的体温、体重、食欲等生理指标，观察种植瘤的生长状态；待瘤体体积足够大时进行实验，通过静脉注入药物、瘤组织取材等方式进行肝癌治疗药物研究。

二、裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的优点2.1 模型来源稳定：使用人肝癌细胞系进行裸鼠皮下肝癌模型建立，不同于动物体内自然发生的肝癌，因此可以控制稳定来源，有利于肝癌治疗药物的研究。

2.2 生理指标齐全：裸鼠作为模型动物，具有生物学模拟度高、生活习性简单、繁殖周期短等特点，且实验性调节饲养和环境等因素更为容易，因此比较适合进行肝癌相关实验研究。

2.3 操作方便：裸鼠皮下肝癌模型建立起来比较简单，易于进行肝癌治疗药物研究，而且与其他模型动物相比，裸鼠实验后的数据质量也能更好地保证。

三、裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型在肝癌治疗研究中的应用3.1 新药筛选：裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型可以用于新药筛选，通过对不同的治疗手段处理，以期找到最有效的肝癌治疗方式。

3.2 治疗机制研究：通过裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立，开展治疗机制的研究，从生物学角度解析肝癌的治疗机制，为临床诊断和治疗提供科学依据。

3.3 评估药物的毒副作用：裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型在肝癌药物毒副作用评估中起着重要作用，有助于肝癌药物研发单位减少不必要的药物开发风险，提高药物研发效率。

裸鼠荷瘤实验

接种量要查文献来确定接种量，在找不到任何相关资料的情况下，最高就用到1*107/0.2ml/site,再高也没有意义了。

如果你的细胞很小，1*107/0.1ml也可以操作，不至于很粘稠，那么最好是1*107/0.1ml/site。

查文献看他们的构建条件是什么样的，比如培养条件，接种量，接种位置什么的，是不是一定要用雌性鼠等等。

有的瘤株也有可能很容易成瘤，而且生长速度很快。

建议用几只动物试试不同的接种浓度，万一能够长出来，而且还长得很快，那你就要根据情况选择一个合适的浓度了。

基本上一般认为比较合适的接种浓度有这么几个特征：1. 接种后10到15天左右可以开始试验。

2. 开始试验时可以用于试验的动物数不少于60~70%，而且SD 不大于平均值的1/3左右。

3. 开始试验三、四周后肿瘤重量大于1g，并且没有溃烂。

当然，这些条件都是锦上添花的东西，如果以1*107/site 都勉勉强强长出肿瘤，那么就不必过多的去考虑它了。

接种部位接种部位:腋窝中部外侧皮下为好。

皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。

接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。

如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不可以接种多个位点用于保证可用的模型数。

因为在有些情况下，一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论这几个肿瘤相距有多远。

要是想多打几个部位做做预试验，倒也不是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。

皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时候进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。

注射前针头稍微动一动，能动就说明在皮下，否则可能在皮内或者肌肉内。

裸鼠抑制肿瘤瘤实验具体步骤及方法

动物体内抑瘤实验具体步骤及方法活体生物发光成像技术的原理：在小型哺乳动物体内利用报告基因（荧光素酶基因）表达所产生的荧光素酶蛋白与其小分子底物荧光素在氧、Mg2+存在的条件下消耗ATP 发生氧化还原反应，将部分化学能转化为可见光能释放。

因此只有在活细胞内才会发生发光现象。

并且光的强度与标记细胞的数目线性相关。

一、材料准备1. 动物：裸鼠9 只，6～8周龄，雄性；C57小鼠24 只，6～8 周龄，雄性；动物均为自由饮水采食。

2. 细胞：MDA-MB-231人乳腺癌细胞系，使用荧光素酶基因标记。

方法：用荧光素酶报告基因标记的质粒转染人乳腺癌细胞，共转染的还有选择性标记基因，从而保证转染细胞的稳定性，形成表达荧光素酶的肿瘤细胞株；B16 黑色素瘤细胞。

二、实验步骤1. 紫杉醇混合胶束的制备（1）将适量紫杉醇溶解在少量无水乙醇和丙二醇的混合溶剂中.（2）加入适当比例的磷脂和表面活性剂A 进行充分混合，制得稳定的紫杉醇混合胶束前体制剂，载药浓度为6 g/L。

（3）临用时按剂量加入生理盐水中稀释、摇匀后即可使用。

制剂体系的粒径大小与分布特征采用动态激光光散射粒度仪检测。

2. MDA-MB-231人乳腺癌细胞荷瘤鼠模型的建立（1）培养荧光素酶基因标记的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系，使用DMEM 培养基（添加10%胎牛血清），37 ℃、5% CO2 培养箱中培养，每3天传代1次。

（2）待细胞密度为80%～90%、细胞总量达到实验所需要求时，使用胰酶消化，收集于PBS溶液重悬。

（3）如有需要，在细胞培养一定时间后，应使用抗生素Zeocin进行抗性筛选，保证荧光素酶基因的表达量足够。

（4）收集细胞，使用PBS稀释至细胞数1.5×108/mL，接种于裸鼠腋下，每只裸鼠的接种量为0.1 mL 。

3. 动物活体成像检测（1）接种后将裸鼠随机分为3组，分别为生理盐水组、紫杉醇注射液组、紫杉醇混合胶束制剂组，每组3只。

如何进行小鼠肿瘤模型的建立及鉴定

如何进行小鼠肿瘤模型的建立及鉴定小鼠肿瘤模型的建立及鉴定是癌症研究中非常重要的一步，可以用于研究肿瘤的发生机制、治疗策略以及评估新的抗癌药物。

下面将详细介绍小鼠肿瘤模型的建立及鉴定的方法并提供一些实用的技巧。

肿瘤模型建立的方法主要包括人工移植方法、化学物质诱导方法和遗传工程方法。

一、人工移植方法：1.将人类肿瘤细胞、移植物肿瘤组织或细胞株移植到小鼠体内，可以通过裸鼠或免疫缺陷小鼠模型建立人类肿瘤模型。

当细胞或组织取出并经过相关处理后，通过给小鼠注射或将其移植到小鼠体内，研究人类肿瘤的生长和发展。

2.移植人体肿瘤片段。

3.使用免疫缺陷小鼠模型，如裸鼠、严重联合免疫缺陷小鼠等，可以接受外源组织移植而不会引发排斥反应。

二、化学物质诱导方法：1.化学物质诱导肿瘤模型是通过给予小鼠致癌物质或诱导剂来诱发肿瘤发生。

2.应遵循相关伦理原则使用易获得且时间成本低的致癌物质。

3.诱导剂可通过各种途径给予小鼠，如口服、皮下注射、腹腔注射等。

4.对于使用化学物质诱导的肿瘤模型，需要在给药期间和给药后对小鼠进行定期观察和血液检测，以评估肿瘤的发生和发展情况。

三、遗传工程方法：1.遗传工程方法可利用转基因技术将特定肿瘤相关基因引入小鼠体内，例如，通过敲除或激活肿瘤抑制基因或癌基因等，产生特定类型的肿瘤模型。

2.通过基因敲除、敲入或点突变技术，可改变小鼠体内特定基因的表达水平，以模拟人类肿瘤的发生和发展。

确定小鼠肿瘤模型建立成功后1.观察和检测小鼠是否出现明显的肿瘤体积增大和质地变硬等症状。

2.定期观察小鼠的体重变化，以评估肿瘤对小鼠健康状况的影响。

3.使用体重表、肿瘤质量表等测量工具定期测量肿瘤体积，以评估肿瘤生长速度。

4.进行组织学检测，通过活体组织活检或解剖后进行病理学检测，以确定肿瘤种类和分级。

5.对肿瘤样本进行免疫组织化学染色、分子生物学检测等，以确定肿瘤的分子特征。

总结：建立和鉴定小鼠肿瘤模型是一项复杂的工作，需要专业的知识和技术支持。

动物模型

现介绍三种自发性乳腺癌小鼠模型
C3H小鼠：繁殖用雌鼠自发性乳腺癌发生率为小鼠：
85%~100%。 85% 100%。 100%
A系小鼠：经产雌鼠乳腺肿瘤发生率为30% 80%。系小鼠：经产雌鼠乳腺肿瘤发生率为30% 80%。 30%~80% CBA小鼠：雌鼠自发性乳腺癌发生率为60% 65%。雌鼠自发性乳腺癌发生率为60% 65%。 60%~65%
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肿瘤体积变化对时间作出生长曲线变化对时间作出生长曲线, 将肿瘤体积变化对时间作出生
8.摘要：目的建立结肠癌肝转移的动物模型，用于肿瘤转移防治的实验方法，对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经脾脏注入指数生长期的的小鼠结肠腺癌细胞（ＣＴ２６）悬液０．１ｍｌ，含细胞１＊１０＾６个，保留脾脏。观察接种后小鼠的生存期，小鼠分别于接种后第７、１０、１５天及自然死亡后剖腹、观察腹腔内肿瘤生长情况，留标本作病理检查和流式细胞术（ＦＣＭ）倍体检测。结果小鼠平均自然生存时间为（１８．２±１．８）天，尸解发现接种动物的肝
4.【摘要】目的建立并对比两种异位种植结肠癌肝转移小鼠模型。方法以1×106个/mL小鼠结肠癌细胞株(CT26)0.2mL对BALB/c小鼠分别行肝门静脉注射法,脾脏种植切除脾脏法构建结肠癌异位种植肝转移动物模型。术后待小鼠自然死亡,比较两种动物模型的肝转移率和成瘤效果、肺转移率以及小鼠生存期的差异。结果肝门静脉注射法与脾脏种植切除脾脏法相比,前者在肝转移率、肝脏成瘤效果和肺转移率方面高于后者,后者在小鼠生存时间和操作难易程度方面优于前者。结论本研究建立并对比了两种具有高转移率的结肠癌肝转移小鼠模型,肝门静脉法在肝转移率和肝脏成瘤效果方面更具优势,适合对肝转移率和取材要求较高的实验研究;而脾脏种植切除脾脏法则更适合验证周期较长的药物实验。

戊巴比妥钠用于雄性裸鼠皮下-肝原位移植人肝细胞癌模型麻醉的方法

戊巴比妥钠用于雄性裸鼠皮下-肝原位移植人肝细胞癌模型麻
醉的方法
冯盈;薛万江;倪侃;李鹏;毛勤生
【期刊名称】《南通大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2012(32)1
【摘要】目的:研究戊巴比妥钠在裸鼠皮下-肝间接原位移植人肝细胞肝癌模型建立中的合适剂量.方法:共30例接种肝癌细胞株的皮下瘤雄性裸鼠取瘤后,对共150只雄性裸鼠行皮下-肝包膜下瘤体原位移植,观察供受体麻醉过程、药物剂量和效果.结果:供体手术戊巴比妥钠麻醉的剂量以80 mg/kg合适,受体手术戊巴比妥钠麻醉剂量以70 mg/kg合适.结论:在裸鼠皮下-肝脏原位肝癌模型建立的手术中,戊巴比妥钠是一种理想的麻醉药品.
【总页数】3页(P13-15)
【作者】冯盈;薛万江;倪侃;李鹏;毛勤生
【作者单位】南通大学附属医院普外科,南通,226001;南通大学附属医院普外科,南通,226001;南通大学附属医院普外科,南通,226001;南通大学附属医院普外科,南通,226001;南通大学附属医院普外科,南通,226001
【正文语种】中文
【中图分类】R971.+2;R735.7
【相关文献】
1.人食管癌裸鼠皮下移植及原位移植模型的建立 [J], 姚文健;白玉;赵宝生
2.体内连续筛选法建立人原发性小肠恶性淋巴瘤裸鼠原位移植肝转移模型 [J], 脱朝伟;刘秋珍;张宁;杨波;王明耀;魏强
3.人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立 [J], 白俊文;苏秀兰;杨成旺;王玉芳
4.人原发性胃恶性淋巴瘤裸鼠原位移植肝转移模型的建立 [J], 杨波; 脱帅; 脱朝伟
5.人上皮性卵巢癌细胞系SKOV3-luc裸鼠皮下及原位移植瘤模型的建立与研究[J], 朱沁怡;王昕婧;汪希鹏
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三氧化二砷—泊洛沙姆407缓释剂瘤内注射治疗裸鼠人肝癌移植瘤的实验研究

三氧化二砷—泊洛沙姆407缓释剂瘤内注射治疗裸鼠人肝癌移植瘤的实验研究肝癌恶性程度高,预后差,是一种威胁人类健康的恶性肿瘤,严重影响着人们的生存健康,早期手术是最佳治疗方案,但获此良机者甚少,中晚期原发性肝癌患者未经治疗,其自然生存期为1～4个月。

因而寻求安全可靠的非手术疗法、研究开发高效抗肿瘤药物,帮助中晚期肝癌患者延长生命、提高生存质量,显得尤为重要,也是肿瘤研究工作者不断的奋斗目标。

经过不懈的研究,无论在药物运用方面,还是给药方式方面都取得了重大进展。

肝癌介入治疗。

现已发展成为国内外公认是治疗中晚期肝癌的首选方法,方法包括经导管肝动脉化疗栓塞术(TACE)、经皮肤肝瘤体内注射、激光高温治疗、冷冻治疗、放射性同位素介入和中药介入治疗等。

近年经皮瘤体内注射中药也取得较好的疗效,主要是有毒类中药,体内外实验均证实有良好的抗肿瘤作用,如去甲斑蝥素、三氧化二砷等。

三氧化二砷(As2○3)是中药砒霜的主要有效成分,其注射液最早用于治疗急性早幼粒细胞白血病,又扩大到实体瘤肝癌的治疗上,实验和临床证实,其抗肝癌疗效确定。

但As2○3抗肿瘤作用具有浓度、时间依赖关系,在一定范围内药物浓度越高,用药时间越长,抗肿瘤效果越好,由于其治疗剂量与中毒剂量接近,较大剂量使用时毒性亦较大,副作用增大。

合成低浓度As2○3缓释剂型瘤内注射,既可使其具有良好的靶向性,使局部药物浓度增加、作用时间延长提高治疗效果,又可减轻全身副作用。

泊洛沙姆407(P407)是高分子非离子型表面活性剂,是一种温敏型原位凝胶,毒性低,刺激性小,生物相容性好,是一种较理想的新型药物控释载体,可作为抗癌药物载体肝癌内注射,延缓药物释放而提高抗癌疗效。

本实验建立裸鼠皮下人肝癌移植瘤模型,将P407作为药物控释载体,与As2O3制成As2O3-P407缓释制剂,进行瘤体注射,并与As2O3常规剂型对比,比较抑瘤疗效,探讨缓释剂是否达到低浓度抗肿瘤,副作用小的目的。

人胃癌HGC-27裸鼠皮下移植瘤模型的建立

人胃癌HGC-27裸鼠皮下移植瘤模型的建立靳俊峰;欧小波;阮媛;郭瑞珍【摘要】目的建立人胃癌细胞株HGC-27裸小鼠皮下移植瘤模型,为胃癌的研究提供简单实用的载体.方法培养HGC-27人胃癌细胞,达106～ 10 7个活细胞/瓶,以0.9％氯化钠无菌水溶液为溶剂制成单细胞悬液,随机注射到裸小鼠左腋下或右腋下,观察肿块的形成,并进行组织学观察.结果注射后8d触及米粒般大小的肿块,14 d可见肿块明显隆起.组织学观察癌细胞无腺体样结构形成,呈片状、巢状或条索状排列,细胞形状不规则,呈圆形、梭形或不规则形,核大深染,核质比增高,可见核分裂象.结论人胃癌细胞株HGC-27裸小鼠皮下移植瘤模型的建立,操作简便,肿块表浅,可直接观测肿瘤,为进一步的研究能提供简单有效的模型.【期刊名称】《遵义医学院学报》【年(卷),期】2015(038)001【总页数】3页(P29-31)【关键词】胃癌;裸鼠;细胞株;移植瘤模型【作者】靳俊峰;欧小波;阮媛;郭瑞珍【作者单位】遵义医学院珠海校区病理学教研室,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区病理学教研室,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区病理学教研室,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区病理学教研室,广东珠海519041【正文语种】中文【中图分类】R735.2胃癌是危害我国居民身体健康的常见消化系统恶性肿瘤，其发病率和死亡率居于所有恶性肿瘤的前列[1]。

由于人的胃癌标本相对难以获得，受时间、空间、社会、伦理等诸多因素的限制，故动物实验就成为研究胃癌的重要手段之一。

通过动物实验可以方便地获得大量实验材料，从而为下一步的实验提供有效的研究载体。

胃癌动物模型的建立就成为开展研究的先决条件，目前，胃癌动物模型的建立方法主要有诱导致瘤法和移植瘤法[2]，其中皮下诱导致瘤法操作相对简便，因此本实验以裸小鼠的皮下诱导致瘤模型的建立为研究对象，为胃癌的基础和临床研究提供可靠实用的动物模型制作方法。

人参皂苷联合姜黄素抑制人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长及机制的研究

分类号：R2-031 学校代码：10541密级：公开学号：20153230 湖南中医药大学硕士学位论文人参皂苷联合姜黄素抑制人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长及机制的研究学科专业：中西医结合临床医学研究方向：中西医结合防治肿瘤研究研究生姓名：刘晓斌导师姓名、职称：田雪飞教授学位类型：专业学位中国湖南长沙••二Ｏ一八年五月目录中文摘要 (1)Abstract (3)引言 (6)第一部分人参皂苷联合姜黄素对裸鼠人肝癌皮下移植瘤模型肿瘤生长的影响 (10)1.实验材料 (10)1.1药物来源 (10)1.2．细胞来源 (10)1.3．实验动物来源 (10)1.4试剂来源 (10)1.5实验仪器设备 (11)2 .实验方法 (11)2.1．细胞培养 (11)2.2动物造模 (12)2.2.1裸鼠人肝癌皮下移植瘤的建立 (12)2.3药物配制、动物分组和药物干预 (12)2.3.1药物制剂 (12)2.3.2动物分组和药物干预 (13)2.4裸鼠肿瘤抑制率的测定 (13)3．统计分析 (13)4．实验结果 (14)4.1裸鼠肝癌皮下移植瘤模型 (14)4.2人参皂苷和姜黄素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响 (14)5.结论 (17)第二部分人参皂苷联合姜黄素对裸鼠肝癌组织PD-1/PD-L1及炎症因子NF-κB、MMP-9的影响 (18)1．实验材料 (19)1.1细胞株来源 (19)1.2实验动物来源 (19)1.3药物来源 (19)2．主要试剂 (19)3．实验仪器 (20)4.实验方法 (20)4.1组织蛋白的提取 (20)4.2 BCA法检测蛋白质含量 (20)4.3．PD-1、PD-L1、NF-κB、MMP-9的蛋白表达 (21)5 .统计分析 (22)6 .实验结果 (22)6.1人参皂苷联合姜黄素对裸鼠肝癌组织PD-1蛋白表达的影响 (22)6.2人参皂苷联合姜黄素对裸鼠肝癌组织PD-L1蛋白表达的影响 (24)6.3人参皂苷联合姜黄素对炎症因子NF-κB蛋白表达的影响 (26)6.4 人参皂苷联合姜黄素对炎症因子MMP-9蛋白表达的影响 (27)7 .结论 (29)讨论 (30)结论 (33)参考文献 (34)致谢 (40)综述 (41)中文摘要目的:本研究旨在探讨人参皂苷与姜黄素联合应用对人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型肿瘤生长抑制的影响，以及探讨两者对免疫、炎症相关细胞因子程序性死亡受体PD-1/PD-L1和NF-κB、MMP-9的调节作用。

多种肿瘤裸鼠成瘤实验具体步骤及说明

多种肿瘤裸鼠成瘤实验具体步骤及说明诱发性肿瘤动物模型是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物的肿瘤等。

一、肝癌1．二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌（1）取体重250 g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘；（2）按性别分笼饲养。

除给普通食物外，饲以致癌物，即用0.25%DEN水溶液灌胃，剂量为10 mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用；（3）共约4个月可诱发成肝癌；（4）也可以单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。

2．4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌（1）用含0.06%DBA的饲料喂养大鼠，饲料中维生素B2 不应超过1.5～2 mg/kg；（2）4～6月就有大量的肝癌诱发成功。

3．2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌（1）给成年大鼠含0.03% 2AAF标准饲料；（2）每日每平均2～3 mg 2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。

4．二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌：（1）用剂量为每日0.3～14 mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予；（2）6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。

5．亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌（1）用1%OAAF苯溶液（约0.1 ml含1 mg）涂在动物的两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。

（2）实验后7～8周即而出现第一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。

（3）或用2.5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝癌。

6．黄曲霉素诱发大鼠肝癌（1）每日饲料中含0.001～0.015 ppm，混入饲料中喂6个月后，肝癌诱发率达80％。

二、胃癌1．甲基胆蒽诱发小鼠胃癌（1）取20 g左右的小鼠，无菌手术下，在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆蒽（MC）线结。

（2）含MC的线结是用普通细线，在一端打结后，将线结置于盛有MC小玻璃试管内，在酒精灯上微微加温，使MC液化渗入线结。