人肝癌组织裸鼠移植瘤模型建立及其应用
裸鼠人肝癌原位移植耐药模型的建立的开题报告
裸鼠人肝癌原位移植耐药模型的建立的开题报告【开题报告题目】裸鼠人肝癌原位移植耐药模型的建立【研究背景】肝癌是常见的恶性肿瘤之一，严重危害人类健康。
目前，肝癌可通过手术、化疗、放疗等综合治疗。
然而，由于肝癌细胞的异质性和基因突变等因素，导致治疗效果仍不尽如人意。
因此，开展肝癌治疗的研究非常必要，尤其是建立一种有效的肝癌耐药模型。
【研究目的】本研究旨在建立一种裸鼠人肝癌原位移植耐药模型，以此用于开展肝癌治疗药物的筛选和耐药机制的研究。
【研究内容】本研究主要包括以下内容：1.采用原位移植方法建立裸鼠肝癌模型，采用人肝癌细胞原位移植至裸鼠肝脏；2.通过连续药物选压，筛选出耐药肝癌细胞株；3.建立肝癌细胞原位移植耐药模型，并研究耐药机制；4.对耐药肝癌细胞株进行化学治疗药物筛选。
【研究方法】本研究采用原位移植法建立模型，连续药物选压筛选出耐药肝癌细胞株。
建立肝癌细胞原位移植耐药模型，并通过实时荧光定量PCR、Western blotting等手段进行耐药机制研究。
在耐药肝癌细胞株中，筛选可逆转耐药的化学治疗药物。
【研究意义】本研究将建立一种裸鼠肝癌原位移植耐药模型，以此作为研究肝癌治疗药物的筛选平台和耐药机制研究的手段。
通过研究耐药机制，并对耐药肝癌细胞株进行化学治疗药物筛选，有望为肝癌的治疗提供有力的参考和帮助。
【研究进展】目前，已通过原位移植法建立裸鼠人肝癌模型，连续药物选压成功筛选出耐药肝癌细胞株，正在进行建立耐药模型，并研究耐药机制的工作。
【研究预期成果】本研究预期能够建立一种裸鼠肝癌原位移植耐药模型，并研究耐药机制。
在此基础上，筛选出可逆转耐药的化学治疗药物，为肝癌的治疗提供新的思路和方法。
【研究周期和预算】本研究周期为2年，预算总共10万元。
包括实验室耗材费、动物实验费、仪器设备购置和维护费、研究人员工资和报酬等。
裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立
２８ ７ 第 卷 ２ ０ 年 月 ５第 １ ０ 期
・ 础研 究 ・ 基
裸 鼠皮 下 人肝 癌 种 植 瘤 模 型 的建 立
易石 坚 李 兰兰 ， 德 许 ， 竹林 ， 伦喜 ， 钟 杨 段
（ ． 圳 市福 永 人 民医 院 ， １ ｅ ｖ ｄ ａ ｄ ｔ ｅ ｍｉ ｅ ｗｅ ｅ ｅ ｅ ｕ ｅ ｆｅ ０ ｗｅ ｋ ． ａ ｈ ｌ ｇｅ ｅ ａ ｎ ｔ ｎ ｅ ｅ ｔｏ ｆ ＡＦ ｎ ｒ ｗｔ ｆｔ ｍｏ ｓ ｏ ｓ ｒ ｅ ｎ ｈ ｃ ｒ ｘ ｃ ｔ ｄ ａ ｔ ｒ １ ｅ ｓＰ ｔ ｏｏ ｉ ｘ ｍｉ ａ ｉ ．ｄ ｔ ｃ ｉｎ ｏ Ｐ ｉ ｏ ｓ ｒ ｍ ｙ ｒ ｄ ａ ｉ ｎ ｉ ｅ ｕ ｂ ａ ｉ ｔ ｍｍｕ ｉａ ｉ ｎ ｌ ｃ ｒ ｎ ｃ ｏ ｃ ｐ ｂ ｅ ａ ｉ ｎ ａ ｄ ｄ ｔ ｃ ｉ ｎ ｏ ｏ ｎ ｚ ｔｏ ．ｅ ｅ ｔｏ ｍｉ ｒ ｓ ｏ ｅ ｏ ｓ ｒ ｔｏ ｎ ｅ ｅ ｔｏ ｆ ＭＶＤ ｙ ｉ ｖ ｂ ｍｍｕ ｏ ｉｔ ｃ ｅ ｓｒ ｒ ｎ ｈ ｓｏ ｈ ｍｉｔ ｗｅ ｅ ｙ ｕ ｅ ｏ ｏ ｓ ｒ ｅ ｔ ｅ ｇ ｏ ｈ ｃ ｎ ｉｉｎ ｆ ｔ ｍｏ ． ｓ ｌｓ Ｔ ｅ ｍｏ ｅ ｏ ｓｒ ｃｅ ａ ｈ ａｎ ｒ ｈ ｌｇ ｌ ｃ ａ ａ ｔ ｒ ｓ ｄ ｔ ｂ ｅ ｈ ｒ ｗ ｏ ｄ ｔ ｏ ｕ ｒＲｅ ｕ ｔ ： ｈ ｄ ｌ ｃ ｎ ｔ ｔ ｄ ｈ ｄ ｔ ｅ ｓ ｌ ｅ ｍｏ ｐ ｏｏ ｉａ ｈ ｒ ｃ ｅ ｖ ｔ ｏ ｕ ｃ
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人大肠癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立
［ 关键 词 ］癌； 大肠； 肿瘤移植 ； 疾病模型， 动物； 小鼠， 裸 ［ 中图分类 号 ］Ｒ３．４Ｒ３—５ ７５３ ７ ３２ ［ 文献标 识码 ］Ａ ［ 文章编 号 ］１ ０ ７７２１）３ ２７ ４ ０ － ０（０００－ ４－ ０２ ０ ０
Ｅｓａ ｌｓ ｍ ｅ ｆＳｕ ｕ ａ ｅ ｕ ａ ｐ ａ ａｔｏ ｍ ｏ ｏ ｅｓ ｔ ｂ ｉｈ ｎｔｏ ｂｃ ｔ ｎ ｏ ｓ Ｔｒ ｎｓ ｌ ｔ ｉｎ Ｔｕ ｒ Ｍ ｄ ｌ ｏ ｕ ａ Ｃｏｏ ｒ ｉ ｏ ａ ｗｉｈ Ｎｕｄ ｉｅ ｆＨ ｍ ｎ ｌ ｎ Ｃａ ｃｎ ｍ ｔ ｅＭ ｃ
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Ｚ ＨＡＮＧ ｎ ｘ ｎ ＹＡＮ ｎｇ ｕ Ｄｏ ｇ ｉ ｇ， Ｄｅ ｇ ｏ，ＺＨＡＯ ｎｇ ｏ Ｂｉ ｂ
关于人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察
关于人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察【摘要】目的建立一种能很好模拟人体内生物学行为的胃癌裸小鼠原位移植和转移模型。
方法采用人胃癌SGC-7901细胞株在裸鼠皮下经反复传5代形成实体瘤的完整组织块，建立人胃癌裸小鼠原位移植生长和转移模型16个。
观察所建立的模型肿瘤生长状况、移植成功率和自发转移的发生率，常规H-E染色光镜下观察胃癌原位移植瘤、胃癌淋巴结转移和肝转移情况。
电镜下观察肿瘤超微结构及免疫组化S-P法检测肿瘤诱导型环氧化酶-2（COX-2）。
结果胃癌裸鼠原位移植块再次原位移植的原位成瘤率达100％（16/16），淋巴结广泛转移率为87.5%（14/16），肝转移发生率为75.0％（12/16），腹腔积液形成率为12.5%（2/16）。
结论原位移植和转移模型均具有人胃癌自然生长过程的特点，具有人胃癌的生物学活性。
【关键词】胃肿瘤肿瘤细胞原位移植疾病模型裸小鼠Abstract： Objective To develop a nude mouse model of human gastric cancer that can mimic its natural human biologic activities. Methods Human gastric cancer cell line SGC-7901 was cultured in nude mice repeatedly for 5 generations to get the subcutaneous solid tumor， which was then emulsified and orthotopicly inplanted into the anterior wall of the stomach in 16 nude mice. The tumor growth characters， tumor-take rate and metastatic rate were studied grossly， the transplanted tumor and its lymphatic and hepatic metastases， after routine H-E staining; the ultrastructures， by electron microscopy; and COX-2， by immunohistochemical method． Results The tumor-take rate was 100％（16/16）， the rates of metastasis to lymph nodes and liver were 87.5％（14/16） and 75.0％（12/16） respectively， the rate of ascites formation was 12.5%（2/16）. Conclusion The model of human stomach cancer established is qualified， exhibiting natural growth characters and biological activities.Key words: stomach neoplasms; orthotopic thansplantation; disease model; nude mouse既往胃癌动物模型的建立多采用皮下接种方式，虽然这种移植方式简单易行，肿瘤的生长情况也便于观察，且在一定程度上也近似地模拟了原有肿瘤的形态学、生物学及生物化学特性；然而接种于裸小鼠皮下组织毕竟属于异位移植，脱离了其起源组织器官的微环境，因此在实验中移植瘤的某些行为常不同于患者原发恶性肿瘤的生物学行为。
《2024年人绒癌裸鼠原位移植瘤模型、转移瘤模型的构建及二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长的影响》范文
《人绒癌裸鼠原位移植瘤模型、转移瘤模型的构建及二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长的影响》篇一一、引言人绒癌是一种常见的恶性肿瘤，其发生和转移给临床治疗带来了巨大的挑战。
为了更好地研究人绒癌的生物学特性和治疗策略，建立有效的动物模型至关重要。
裸鼠作为实验动物，因其生理构造与人类相似，成为建立人绒癌移植瘤模型的首选动物。
本文旨在探讨人绒癌裸鼠原位移植瘤模型及转移瘤模型的构建方法，并分析二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长的影响。
二、人绒癌裸鼠原位移植瘤模型及转移瘤模型的构建1. 实验材料与方法（1）细胞株：选用人绒癌细胞株。
（2）裸鼠：选取健康的裸鼠作为实验动物。
（3）建模方法：通过将人绒癌细胞注射到裸鼠体内，构建原位移植瘤模型及转移瘤模型。
2. 模型构建过程（1）原位移植瘤模型构建：将人绒癌细胞注射到裸鼠子宫内，待肿瘤生长至一定大小后，进行相关指标的检测。
（2）转移瘤模型构建：通过静脉注射、腹腔注射等方式，将人绒癌细胞注射到裸鼠体内，待肿瘤发生转移后，观察并记录转移情况。
三、二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长的影响1. 实验材料与方法（1）二氢杨梅素：购买高质量的二氢杨梅素。
（2）实验分组：将裸鼠随机分为实验组和对照组，实验组裸鼠给予二氢杨梅素治疗。
（3）观察指标：观察并记录两组裸鼠的转移瘤生长情况。
2. 实验结果与分析（1）实验组裸鼠给予二氢杨梅素治疗后，转移瘤生长速度明显减缓，肿瘤体积较对照组小。
（2）通过病理学检查发现，实验组裸鼠的肿瘤细胞凋亡率较高，表明二氢杨梅素具有抑制肿瘤细胞生长的作用。
（3）进一步分析发现，二氢杨梅素可能通过抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等途径，发挥抗肿瘤作用。
四、结论本文成功构建了人绒癌裸鼠原位移植瘤模型及转移瘤模型，为研究人绒癌的生物学特性和治疗策略提供了有效的动物模型。
此外，研究发现二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长具有明显的抑制作用，可能通过抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等途径发挥抗肿瘤效果。
裸大鼠人肝癌原位模型的建立及其生物学特性的初步观察
肝 癌细 胞系（ ｈ７ 裸 大 鼠原位 移植 模 型 ，并对 人 Ｈｕ ．）
肝 癌在 裸大 鼠体 内的 生物 学行 为进 行探 讨 。
下 。成瘤 后，用 组织 块移 植 的方 法连 续传 代 ， 成 形
稳定传 代 的皮 下移 植 瘤模 型，作为 瘤源 供试 验用 。 １ 人肝癌 裸大 鼠皮下移 植瘤 ． ３
裸 大 鼠人肝癌 原位模 型 的建 立
及其生 物 学特 性 的初步 观 察
沈 艳 彭秀华 一徐 春 华 一周文 江 １ ， ， ， ， ２ （． １上海 市公 共 卫生 床 中心 ， 海 ２ １０ ， ． Ｊ 毒 上 ０ ５ ８２ 复旦 大学 实验 动物科 学部 ， 海 ２０ ３ ） 上 ０ ０２ ［ 摘要］ 目的 探讨人肝癌原位移植后肿瘤在裸 大鼠（ ／ ｕ生长和转移等生物学特性。方法 Ｈｕ． ｍｕｎ） ｒ ｈ７ 细胞株接 种 于裸 小 鼠皮 下成瘤组 织块移植 于裸 大 鼠皮 下成瘤 ，之后 将裸 大 鼠皮下肿 瘤移植 至其肝 脏 以建立原位移 植模型 ，观 察所 建立模 型原位 成瘤率 、移植瘤 生长 、侵 袭和转移 情况 ，同时进行 病理组织 学 、超微 结构 、细胞增 殖 周期和异 倍体 的观 察 。结 果 原位 移植 瘤模 型裸 大 鼠成瘤 率
生长 活跃 的鱼 肉样 组织 ， 成直 径为 １ 剪 ｍｍ３ 的小块
６周龄 裸大 鼠（ ｕｒｕ （ ｒ： Ｈ． ｏ ｎ ）４只 、 ｒ ／ ） ｌ ｎ ｎ Ｃ ＮＩ Ｆ ｘ １２
【 收稿 日期】 ０ ００ —６ ２ １—４０ 【 者 简介 】 作 沈 艳 （９ ７）女， １７ ． ， 硕士 ， 主要 从 事 动物 模 型 的建
４８ ２
实验动物 ｌ 卜比较 医学 Ｌ ｂ ｒｔｒ Ａ ｉ ｌｎ ｏ ａａｖ ｄ ｉｅ ａｏａ ｙ ｎｍａａｄＣ ｍｐ ｒｔ ｅ ｏ ｉ Ｍｅｉ ｎ ｃ
裸鼠模型在肿瘤治疗研究中的应用
裸鼠模型在肿瘤治疗研究中的应用近年来，肿瘤治疗研究一直是医学界的热门话题。
而其中一个被广泛应用的模型就是裸鼠模型。
该模型是一种没有免疫系统的小鼠，其所患种类繁多的人类癌症与人体癌症的生理和生化特征高度一致。
因此，裸鼠模型被视为一种可靠的人类癌症模型，在肿瘤治疗研究中得到越来越广泛的应用。
一、裸鼠模型有助于肿瘤药物筛选和剂量的选择裸鼠模型的特点是没有免疫系统，因此可以有效地模拟人类癌症患者对化疗药物的反应。
研究人员可以将不同类型的人类肿瘤细胞种植到裸鼠的体内，然后观察不同药物的疗效以及适应性。
这种方法可以帮助筛选出最有效的化疗药物，并确定最佳的剂量方法，以降低剂量过大或过小的患者药物副作用和治疗效果不佳的风险。
二、裸鼠模型可以用于研究免疫药物的作用机制裸鼠模型的另一个重要特点是它们缺乏免疫系统。
因此，在研究免疫药物的作用机制时，其免疫抑制作用可以被完全消除。
这些免疫药物通常用于治疗肿瘤细胞免疫逃逸的疾病。
研究人员可以在裸鼠体内种植癌细胞，并给予不同的免疫药物处理，以便研究药物在治疗肿瘤免疫逃逸方面的作用和机制，为开发更加有效的肿瘤免疫疗法提供理论基础。
三、裸鼠模型可以模拟人类癌症的药物耐受性药物耐受性是肿瘤治疗中的一个重要问题。
但是直接在人体内进行研究很难获得满意的结果，因为某些药物在实验室中表现出的耐受性可能与实际情况不同。
通过使用裸鼠模型，可以准确地模拟人类癌症的耐受性情况，并研究这些药物的各种机制。
这种方法可以帮助人们更好地了解药物耐受性的机制，促进新药物的开发，改善现有的肿瘤治疗方法。
四、裸鼠模型可以进行肿瘤的转移研究在许多情况下，治疗肿瘤并不仅仅是消灭原发肿瘤，还需要防止肿瘤进行转移。
而裸鼠模型在这个方面有很大的应用潜力，尤其是在研究转移性肿瘤时。
研究人员可以通过种植具有转移潜力的细胞系，观察肿瘤转移的过程和机制，并测试不同的治疗方案，以便开发更加有效的肿瘤转移治疗方法。
五、裸鼠模型可以用于研究基因治疗基因治疗是一种新型的肿瘤治疗方法，其作用机制涉及基因转导、表达、调控和重组等方面。
人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法
人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法先用组织学完整的新鲜人肝癌组织接种于裸鼠皮下，形成皮下移植瘤，然后用此移植瘤组织再接种于裸鼠肝内，建立肝原位移植瘤模型（间接肝原位移植瘤模型），并将其与直接肝原位移植瘤模型、皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型作比较。
一、间接肝原位移植瘤模型的制备1. 用新鲜的肝癌外科手术切除标本（来自长海医院，患者为1名47岁男性，病理诊断：肝左叶肝细胞癌，粗梁型，Ⅱ级），在Hanks液中，去除坏死组织和非癌组织后切成1～2 mm3小块。
2. 取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠腰背部皮下，待皮下移植瘤长到直径约1 cm时切取肿瘤，在Hanks液中，去除坏死组织后切成1～2 mm3小块，裸鼠用戊巴比妥钠腹腔麻醉后，行左上腹横切口，暴露肝脏。
3. 取上述2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠肝右叶深部实质内，全层关腹。
二、直接肝原位移植瘤模型的制备1. 同一例新鲜肝癌手术切除标本，处理方法同皮下移植，裸鼠处理同间接肝原位移植，取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头直接植入裸鼠肝右叶深部实质内。
2. 皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型的制备。
三、病理检查和相关指标检测1. 解剖和组织学检查（1）所有裸鼠接种后，分组分笼饲养，自由进食，每天观察1～2次。
（2）当裸鼠处于全身衰竭状态时处死并作大体解剖，对接种瘤和转移瘤分别进行观察、测量，记录肿瘤侵袭和转移情况，重要器官（主要为肝和肺）经10%中性甲醛固定后，常规石蜡制片，光学显微镜检查。
2. 周围血甲胎蛋白(AFP)检测处死前，均采用摘眼球采血的方法获得血液，用生化法检测AFP的分泌量。
3. 瘤细胞DNA含量分析留取部分移植瘤标本采用流式细胞术进行DNA含量分析。
注意事项目前，肝癌的复发和转移仍然是其术后长期存活的主要障碍。
为了研究肿瘤的转移机制，建立接近于人体的肿瘤动物模型显得尤为重要。
人胃癌完整组织块裸鼠原位种植高转移模型的建立实验具体步骤及方法
人胃癌完整组织块裸鼠原位种植高转移模型的建立实验具体步骤及方法人胃腺癌SGC27901 细胞株，裸鼠皮下注射(2x106/L 细胞悬液) ，成瘤后反复传代形成实体瘤，以第6 代瘤源为组织材料，打开腹腔，通过生物胶粘贴法用OB 医用生物胶将瘤块粘贴在裸鼠胃壁胃大弯血管分布稠密处；待荷瘤鼠出现衰竭体征濒临死亡时处死解剖检查。
一、皮下种植瘤模型的建立和传代BALB/c nu/nu 裸鼠24 只，雄性，6 周龄，体质量18～20 g，SPF 级条件下饲养。
人胃腺癌细胞株SGC-27901，2x106/L 细胞悬液裸鼠皮下注射，成瘤后反复传代形成实体瘤，本组瘤源为第6代。
二、人胃癌组织块裸鼠原位种植模型的建立1. 实验动物术前禁食12 h，氯胺酮50 mg/kg 腹腔麻醉，常规消毒，选择左侧正中旁切口进腹，暴露胃壁，在胃大弯处近胃窦旁用1 mL无菌空针头划破胃壁浆肌层，用无齿镊将破损处向内推压，使局部胃壁形成凹龛，植入1 块瘤组织块，并在瘤表面滴上1 滴OB 生物胶(由广州白云医用胶公司提供) ，使其覆盖瘤组织表面, 约40 s 凝固后将胃壁回纳入腹腔，0 号丝线缝合腹膜及皮肤，关腹。
2. 整个过程严格遵循无菌操作。
3. 所有模型动物无麻醉意外，SPF 级饲养。
4. 术后1 周内，死亡2 只。
5. 定时观察所有裸鼠全身状况、运动情况、腹部体征。
6. 当荷瘤鼠出现明显消瘦、弓背、精神萎靡等衰竭体征时，脱颈椎处死解剖，取原位瘤体、肿大淋巴结、胸腹腔内脏器、收取腹水。
7. 所取标本以10% 甲醛固定，石蜡包埋、切片，H-E 染色，作组织病理学检查。
8. 实体瘤细胞染色体鉴定。
注意事项体外实验虽然能在一定程度上反映胃癌细胞的运动能力和侵袭能力，但是不能完全替代体内胃癌转移的器官环境及转移效果，因此体内移植模型成为肿瘤实验研究的主要方法。
以往多是皮下移植，但可能因皮下纤维包膜的包绕致转移较少。
近年研究表明，肿瘤细胞株原位种植裸鼠体内不能完全表达肿瘤的生物学特性，而完整组织块原位移植可显著提高转移率。
裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立
裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立是一种重要的疾病模型，它可以为肝癌治疗研究提供有力的实验支持。
本文将对裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立方法、优点、应用以及未来发展进行详细的探讨。
一、裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立方法1.1 细胞培养：选择合适的肝癌细胞系进行体外培养，确保细胞状态正常、细胞活性强。
1.2 细胞检测：检测细胞的纯度、细胞数目、细胞的拓扑形态、基因表达差异等，以保证肝癌细胞的最佳种植状况。
1.3 裸鼠荷瘤：通过注射细胞的方式给裸鼠诱发肝癌，注射前需要消毒裸鼠的皮肤及手术器械，减少致病菌的感染；肝癌细胞的注射部位可以是裸鼠体表组织、皮下或者肌肉内部。
1.4 实验监测：在瘤细胞注入裸鼠后，要检测裸鼠的体温、体重、食欲等生理指标，观察种植瘤的生长状态；待瘤体体积足够大时进行实验，通过静脉注入药物、瘤组织取材等方式进行肝癌治疗药物研究。
二、裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的优点2.1 模型来源稳定：使用人肝癌细胞系进行裸鼠皮下肝癌模型建立，不同于动物体内自然发生的肝癌，因此可以控制稳定来源，有利于肝癌治疗药物的研究。
2.2 生理指标齐全：裸鼠作为模型动物，具有生物学模拟度高、生活习性简单、繁殖周期短等特点，且实验性调节饲养和环境等因素更为容易，因此比较适合进行肝癌相关实验研究。
2.3 操作方便：裸鼠皮下肝癌模型建立起来比较简单，易于进行肝癌治疗药物研究，而且与其他模型动物相比，裸鼠实验后的数据质量也能更好地保证。
三、裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型在肝癌治疗研究中的应用3.1 新药筛选：裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型可以用于新药筛选，通过对不同的治疗手段处理，以期找到最有效的肝癌治疗方式。
3.2 治疗机制研究：通过裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立，开展治疗机制的研究，从生物学角度解析肝癌的治疗机制，为临床诊断和治疗提供科学依据。
3.3 评估药物的毒副作用：裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型在肝癌药物毒副作用评估中起着重要作用，有助于肝癌药物研发单位减少不必要的药物开发风险，提高药物研发效率。
裸大鼠人高转移肝癌皮下和原位移植模型的建立
表 １皮下移植裸 大鼠体重和瘤体积 变化
１ ． 病理取材及形态学观察 处死裸大 鼠，肉眼 ．２ ６ 大 体 观 察 皮 下 和 原位 移 植 瘤 生长 部 位 、体 积 、质
地 、 活 动 度 、 有 无 胸 腹 水 ， 肝 、肺 、 肾 、脾 等
雌雄 兼用 ， １ ０ｇ左 右 。 由复旦 大 学 附属 公 共卫 生 ０ 临床 中心提 供 ［Ｃ Ｓ ＸＫ（ ）０ ５０ ０ ］ 沪 ２ ０ ．０ １（ 从美 国 Ｃ ａｌｓ ｈｒ ｅ
Ｒｖｒ ａｏａｏｉｓ ｉｅ ｂ ｒｔｒ 引进） Ｌ ｅ 。裸 大 鼠饲 养于 复旦大 学 附 属公共 卫 生临床 中心 动物 中心 Ｓ Ｆ屏 障系统 中 ，饲 Ｐ 以 高压灭 菌 水和 辐照 饲 料 ，饲 养 室相对 湿 度（０± ５ １） ％，温 度 （ ２４ ２ ℃ ，光 照 １ ０ ２ － ） ｈ明暗 交 替 。 ２
１ ３５ ５ ．４± １６ ．９
ｌ １４ ５ ． ４± １８ ．８
液化 ，有弹性 的实性瘤体 ，４周左右 时瘤块增大 ，
实验动物与 比较医学 Ｌ ｂ ｒｔｒ ｉ ｌｎ ｏ ａａｉｅ ｄ ｉ ａ ｏａ ｙ ｍａａ ｄ ｍｐｒｔ ｉ ｎ ｏ Ａｎ Ｃ ｖ Ｍｅ ｃ ｅ
２ 结果
２１ 皮 下移 植模 型 ．表 ２ 原 位 移 植 裸 大 鼠 体 重 变 化 后时间 ／ 周 体重 儋
１ ０８ ０ ．９± １ ３ ． ７ １ ４６ １ ． １± １６ ．６
２１１ 裸 大 鼠及 皮下瘤 的生 长情 况 ．．
连续观 察皮下
１ ６３ ± １２ ２ ．８ ．０
（） ｂ ，依据 公 式 Ｖ＝ ｂ ２计算 肿 瘤体 积 ； ａＶ 原位 移植 和大 小 ， 以腹部 出现可 触及 的实体 性包块 作 为成瘤 标 志 。 当裸 大 鼠出现 明 显 消瘦 、 弓背 、精 神萎 靡 等衰竭体征时结束实验 。
人结肠癌SW480裸鼠肝转移模型的建立
人结肠癌SW480裸鼠肝转移模型的建立作者：牛洪欣何庆泗冷永德刘英姿【关键词】结直肠肿瘤肝肿瘤肿瘤转移小鼠裸肝脏是结直肠癌最常见的靶向转移部位，肝转移成为结直肠癌患者死亡的最主要因素［1］，虽已有大肠癌早期肝转移的预测研究报告［２］，但以人结直肠癌细胞在裸鼠体内建立肝转移模型，已成为研究结直肠癌肝转移机制和抗转移治疗的主要实验方法。
本研究模拟结直肠癌切除术后癌细胞回流入门静脉至肝脏血道播散而发生肝转移的过程，采用脾脏种植法建立SW480裸鼠肝转移模型。
1 材料与方法1.1实验动物和细胞株4～6周龄BALB/C裸鼠24只，雌性，体质量12～18 g，购自山东大学实验动物中心，饲养于SPF环境下。
人结肠癌细胞株SW480，购自第四军医大学。
1.2结肠癌肝转移动物模型的建立1.2.1收集制备细胞悬液人结肠癌SW480细胞培养于RPMI 1640含新生牛血清（体积分数10%）的培养液中，置于37 ℃、含5% CO2的培养箱内恒温孵育传代，获得足够细胞数量后，选择生长状态良好，约80%汇合的细胞进行收集，制成5×107ml-1的细胞悬液，冰浴至脾内接种。
1.2.2脾内种植（保留脾脏）法建立结肠癌肝转移动物模型裸鼠称重，用1%戊巴比妥钠45 mg/kg腹腔内注射麻醉，手术野皮肤消毒，左背部斜切口（左腋后线与肋缘交界下方）0.5～1.0 cm，进腹暴露脾脏后，将脾下极轻柔地提出腹腔，用5号针头将结肠癌SW480细胞缓慢注入裸鼠脾脏，每只裸鼠注射细胞悬液0.2 ml（即1×107/只），注射时间约3 min，可见脾被膜肿胀、变白，注射完毕拔针后以75%乙醇棉棒压迫针眼2 min，以压迫止血和杀灭可能外渗的癌细胞，防止腹腔内种植转移。
将脾脏放回原位，关腹。
麻醉清醒后常规饲养。
整个操作过程遵循无菌操作原则。
1．3疗效观察定期观察裸鼠的一般状况。
分别于接种后第1、2、3和4周各处死3只裸鼠，剩余裸鼠待其自然死亡，观察生存期。
肝癌人源肿瘤异种移植模型构建及初步应用
ＨＵＡＮＧ Ｈａ ｏ ，Ｌ Ｉ Ｂ ａ ｏ — ｌ ｉ ａ ｎ ｇ ，ＹＡＮ Ｇ Ｘ ｉ ｕ ａ ｎ ，Ｚ ＨＵ Ｒｕ ｉ — ｍｉ ｎ ，ＨＵ Ｊ ｕ ａ ｎ － ｊ ｕ ａ ｎ ，ＷＥＩ Ｒｏ ｎ ｇ — ｆ ｅ ｉ ， Ｌ Ｉ Ｋｅ — ｊ ｕ ａ ｎ ，Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｌ ｉ “ ，Ｇ ＡＯ Ｒａ ｎ
Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ，Ｐ ｅ ｋ ｉ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｏ ｎ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ，Ｂｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ ０ ２ １ ，Ｃｈ ｉ ｎ ａ ；２ ． Ｂｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｄｉ ｔ ａ ｎ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ，Ｃａ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ ０ １ ５）
瘤 组 织 与 患 者 肿 瘤 组 织 形 态结 构 的 一 致 性 。 将 成 功 传 至 第 三 代 的 Ｐ Ｄ Ｘ模型制 备肿瘤细胞 悬液 ， Ｂ Ａ Ｌ Ｂ ／ ｃ 裸 鼠 皮 下 接种制作肝癌移植瘤模 型 １ ５只 ， 成 瘤 后 随机 分 为 ５ 一 氟尿 嘧啶 （ ５ － ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｏ ｕ ｒ ａ ｃ ｉ ｌ ， ５ － Ｆ Ｕ） 组、 索拉 非尼 （ ｓ ｏ ｒ ａ ｆ ｅ ｎ ｉ ｂ ） 组 和 阴 性对照组 ， 每组 ５只 。定 期 监 测 各 组 荷 瘤 小 鼠肿 瘤 体 积 和 重 量 ， 根据瘤重计算 抑瘤率 ， 评估疗效 。结果 本 研 究 共 建成肝癌 Ｐ Ｄ Ｘ模 型 ６例 ， 成功率为 ３ ３ ． ３ ％（ ６ ／ １ ８ ） ， 模 型 较 好 的保 持 了原 发 肿 瘤 的特 征 。 １ 例 Ｐ Ｄ Ｘ模 型 中 ， ５ － Ｆ Ｕ与
裸鼠的肿瘤移植模型研究
裸鼠的肿瘤移植模型研究肿瘤是一种常见的疾病，也是医学研究的一个重要领域。
随着科学技术的不断发展，人们对肿瘤的认识也在不断深入。
其中，裸鼠的肿瘤移植模型研究是一种常用的实验手段。
一、裸鼠是什么裸鼠是一种没有毛发的实验小动物，通常被用来进行肿瘤移植研究。
这种小动物一般来自人工培育的遗传变异株，因为它没有毛发，所以被称为裸鼠。
这种小动物体型小、活力强，非常适合作为实验对象。
二、肿瘤移植模型的意义肿瘤移植模型是一种通过将人类肿瘤细胞移植到裸鼠体内来模拟肿瘤生长和发展的实验方法。
这种实验方法能够为生物医学研究人员提供宝贵的研究材料，用于发现和开发新的抗肿瘤药物和治疗方法。
同时，肿瘤移植模型还能够为临床医学研究提供重要的参考，帮助医生们更好地了解肿瘤生长和发展的规律，找到控制肿瘤的有效方法。
三、裸鼠肿瘤移植模型的基本步骤1. 建立肿瘤细胞株首先，需要建立一种稳定的肿瘤细胞株。
一般来说，肿瘤细胞株可以从患者的体内或者文献报道中获取，然后通过培养和筛选，筛选出能够稳定生长的肿瘤细胞株。
2. 准备裸鼠裸鼠一般都需要进行体表消毒和饲养管理等操作。
在进行实验前，需要将裸鼠的体表消毒，避免外来细菌对实验结果的影响。
此外，裸鼠的饲养、环境、温度、湿度等也需要进行精心管理，确保实验的准确性和有效性。
3. 移植肿瘤细胞将准备好的肿瘤细胞接种到裸鼠的体内，一般是通过皮下注射或者腹腔注射的方式进行。
移植后，需要观察肿瘤的生长和发展情况，并及时进行处理、剖解和测量等操作。
四、裸鼠肿瘤移植模型的优缺点优点：1. 易于建立：裸鼠的肤色和体毛特征明显，容易观察，建立肿瘤移植模型相对容易。
2. 可控性强：通过各种手段可以有效控制实验的变量，确保实验结果的可靠性和准确性。
3. 结论可靠：通过对裸鼠肿瘤移植模型的研究，可以得到比较可靠的实验结论，从而为后续的研究提供重要参考。
缺点：1. 模拟程度低：由于裸鼠与人体存在较大的生物学差异，因此在某些肿瘤特征的模拟程度上会存在一定的局限性。
人胃癌裸鼠原位种植转移模型的建立实验具体方法及步骤
人胃癌裸鼠原位种植转移模型的建立实验具体方法及步骤以反复接种传代于裸鼠皮下的SGC-7901 人胃癌细胞株建立的移植瘤组织块为材料，将其用生物吻合OB胶原位粘贴于裸鼠胃壁，并与传统"胃囊法"、”皮下移植法“比较观察移植肿瘤的生长情况、移植成功率和自发转移的发生率。
一、实验材料准备6周龄BALB/c 无胸腺裸鼠24只，雌雄兼用，体重18-20 g。
传代于裸鼠皮下的SGC-7901人胃癌细胞株，本实验肿瘤组织为第6代。
二、人胃癌SGC-7901组织块制备1. 无菌条件下取人胃腺癌SGC-7901J标本中的组织数块，直径约0.5-1.0 cm，去除坏死组织，漂洗，滤纸吸干后置RPMI-1640液中剪成1-2 mm 的小块，制备成单细胞悬液（5×108-2.5×1011 /L）。
2. 置于18号套管针针口，碘棉消毒裸鼠右腋背部皮下，局部接种，逐日观察，待肿瘤长至1.0-1.5 cm时处死裸鼠，取出肿瘤组织按上述方法传代，传代瘤鼠与实验用鼠同为BALB/c无胸腺裸鼠，本组瘤源为第6代。
三、模型的建立1. 将24只健康裸鼠随机分为3 组，即皮下移植组、胃囊法组和OB胶粘贴组，每组8只。
2. 将传代瘤鼠拉颈处死，无菌操作，从腋部皮下剥取肿瘤组织，剔除纤维包膜，切开选取生长良好、呈淡红色、鱼肉状的瘤组织，切成1 mm ×1 mm×1 mm小块，置于生理盐水中备用。
3. 皮下移植组：将切好的瘤块置于18号套管针针口，碘棉消毒裸鼠右腋背部皮下，局部接种。
4. 胃囊法组：腹腔注射50 mg/kg氯胺酮麻醉裸鼠，无菌条件下沿左侧正中旁线切开，刀口约1.5 cm，小心暴露腹膜、胃壁，在胃壁缝制粘膜小囊，将肿瘤组织块包埋于其中，缝合关腹。
5. OB胶粘贴组：腹腔注射50 mg/kg氯胺酮麻醉裸鼠，常规消毒皮肤，沿左侧正中旁线切开，刀口约1.5 cm处小心暴露腹膜、胃壁，用一次性注射针头轻微损伤胃大弯中部浆肌层，以出血为度，将肿瘤组织用医用吻合OB胶粘合在破损处，用0号线缝合腹膜腹壁，关腹。
PDX模型的建立、分析和应用 ppt课件
新
PPT课件
1
传统模型：肿瘤细胞系
• 可以很方便的在体外进行培养和实验 • 缺点：
– 在培养和传代过程中进行“筛选”，肿瘤细胞 逐渐适应体外培养环境而失去原有特性
– 缺乏肿瘤相关的生长环境
• 支持性的非肿瘤基质 • 血液细胞，免疫系统的交互 • 其他肿瘤微环境因子
PPT课件
2
肿瘤研究模型
• 使用传统的肿瘤研究模型没能取得临床上 的成功！
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分析内容 – 分子水平
• DNA
– 基因序列
• 第二代测序平台：Illumina HiSeq等
– 基因突变
• Sequenom OncoCarta™ Panels V1-3
– V1：涵盖19个常规癌基因的238个突变位点 – V2：涵盖18个癌基因或癌抑制基因的152 个突变位点 – V3:：涵盖22个癌基因的105个突变位点
Nude
T淋巴细胞严重缺失
SCID
Severe Combined Immunodeficiency
T淋巴细胞和B淋巴细胞缺失
NOD-SCID
Non-obese Diabetic SCID
与普通SCID相比NK细胞活性低， 更低的免疫恢复几率
NSG
NOD-SCID-IL2Rγ-/-
缺失T淋巴细胞，B淋巴细胞和NK 细胞
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分析内容 – 常规
• 临床背景
– 患者年龄/性别； – 肿瘤类别，原位瘤/转移瘤； – 治疗史
• 移植瘤分析
– 生长曲线； – 药理学特性
• 针对特定药物处理的反应
• 组织学和分子生物学分析
– 原瘤 vs. 移植瘤
PPT课件
人肝癌裸鼠移植模型的研究进展
Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 200Biblioteka ;14(36):3500-3503
Research progress of human hepatocellular carcinoma models in nude mice
Pian Ye, Shu-Ling Zhang, Sheng-Hua Jie, Ji-Hua Dong Pian Ye, Shu-Ling Zhang, Sheng-Hua Jie, Ji-Hua Dong, Department of Infectious Disease, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China Correspondence to: Shu-Ling Zhang, Department of Infectious Disease, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China. yp_breezy@ Received: 2006-06-14 Accepted: 2006-08-10
Key Words: Hepatocellular carcinoma; Nude mouse; Transplantation; Animal Model
Ye P, Zhang SL, Jie SH, Dong JH. Research progress of human hepatocellular carcinoma models in nude mice.
肝癌人源肿瘤异种移植模型构建及初步应用
肝癌人源肿瘤异种移植模型构建及初步应用黄昊;高苒;李宝亮;杨星九;李梦媛;朱瑞敏;胡娟娟;韦荣飞;李克娟;蒋力【摘要】目的建立肝癌人源肿瘤异种移植(patient-derived xenografts,PDX)模型,探讨其在肝癌精准医疗中的作用.方法取临床肝癌新鲜手术切除标本,NCG小鼠皮下接种肿瘤组织建立PDX模型,HE染色比较移植肿瘤组织与患者肿瘤组织形态结构的一致性.将成功传至第三代的PDX模型制备肿瘤细胞悬液,BALB/c裸鼠皮下接种制作肝癌移植瘤模型15只,成瘤后随机分为5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)组、索拉非尼(sorafenib)组和阴性对照组,每组5只.定期监测各组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量,根据瘤重计算抑瘤率,评估疗效.结果本研究共建成肝癌PDX模型6例,成功率为33.3%(6/18),模型较好的保持了原发肿瘤的特征.1例PDX模型中,5-FU与索拉非尼组肿瘤抑瘤率分别为63.7%和29.6%,5-FU组抑瘤率比较差异有显著性(P< 0.05),索拉非尼组抑瘤率比较差异无统计学意义,与临床结果相符.结论肝癌PDX模型保持了患者肿瘤组织的组织形态,可以适用于肝癌患者的精准医疗.%Objective To establish a patient-derived xenografts (PDX) mouse model of liver cancer (LC) and to explore its role in precision medicine.Methods PDX model was established by subcutaneous implantation of tumor tissues in NCG mice.The morphological structure of tumor tissue was exaimed using HE staining.Fifteen BALB/c nude mice were subcutaneously inoculated with tumor cell suspension from the PDX models.The xenograft mice were randomly divided into 5-fluorouracil (5-FU) group, sorafenib group and negative control group.The tumor volume and body weight of the tumor-bearing mice were measured regularly, the tumor inhibition rate was calculated and the curative effect wasevaluated.Results The success rate was 33.3% (6/18) in the establishment of liver cancer PDX mouse model, and the model well retained the characteristics of the primary tumor.In one case of PDX mouse model, the tumor inhibition rates of 5-FU and sorafenib group were 63.7% and 29.6%, with a statistically significant differece between them (P< 0.05), and there was no significant difference between the sorafenib group and negative control group, consistent with clinical observation.Conclusions The PDX mouse model of liver cancer can maintain the histological structure of primary tumor, and can be applied to precision medicine for patients with liver cancer.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2017(027)008【总页数】6页(P60-65)【关键词】人源性肿瘤异种移植模型;肝癌;精准医疗【作者】黄昊;高苒;李宝亮;杨星九;李梦媛;朱瑞敏;胡娟娟;韦荣飞;李克娟;蒋力【作者单位】中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京 100021;中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京 100021;首都医科大学附属北京地坛医院,北京 100015;中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京 100021;中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京 100021;中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京 100021;中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京 100021;中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京 100021;中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京 100021;首都医科大学附属北京地坛医院,北京 100015【正文语种】中文【中图分类】R-33人源肿瘤组织异种移植模型(patient-derived xenograft models，PDX)是指将病人的新鲜肿瘤组织或肿瘤细胞通过原位或异位等方式移植到免疫缺陷小鼠体内，依靠小鼠提供的环境生长的一种异种移植模型[1]。
人胃癌组织块裸鼠胃癌原位移植模型的建立实验具体方法及步骤
人胃癌组织块裸鼠胃癌原位移植模型的建立实验具体方法及步骤一、实验材料准备BALB /C nu /nu裸鼠12只，雌雄兼用，4～6周龄，体质量18～20 g，SPF级条件下饲养。
传代于裸鼠皮下的SGC-7901人胃癌细胞株。
二、裸鼠皮下移植瘤的建立和传代1. 收集体外培养的SGC-7901细胞，使细胞含量为5 x107 /ml，制成细胞悬液然后取0.2 ml注入裸鼠颈背部皮下。
2. 当皮下移植瘤长至直径为1 cm左右时无菌操作取出移植瘤，去除坏死组织，漂洗后，将瘤组织切成约1～2 mm的小块，研磨过滤制备成单细胞悬液局部注入另一只裸鼠颈背部皮下，如此成瘤后鼠间反复传5代。
三、原位移植模型的建立1. 将第5代致瘤的裸鼠脱颈处死后无菌操作取出第5代皮下移植瘤，剔除纤维包膜和坏死组织，选取生长良好呈淡红色鱼肉状的瘤组织用眼科剪切成1 mmx1 mm x2 mm的小块，浸泡于已配好的纤维蛋白原溶液中置于冰袋上备用。
2. 实验裸鼠术前禁食，以1 ml氯胺酮( 5 g/ml)腹腔注射麻醉后，固定四肢并进行常规皮肤消毒，选腹左侧正中切开皮肤1. 5 cm，逐步进腹，显露胃壁后将胃拉出，在胃大弯处近胃窦旁用1 ml无菌空针头划破胃壁浆肌层，植入3～4块瘤组织块，并在瘤表面滴上约10 μl凝血酶，使其覆盖瘤组织表面，约10 s左右待凝血酶与纤维蛋白原发生反应形成胶状物后，瘤组织块黏合在胃壁破损处，然后将胃壁口纳入腹腔。
3. 分别采用6-0缝合线缝合腹膜(含肌层) ，3-0缝合线缝合腹壁，关腹结束手术，以上操作均在超净台内进行，共建6例模型。
四、原位移植致瘤率及移植瘤侵袭和转移情况观察1. 移植术后精心饲养，定时观察所有裸鼠全身状况、进食情况、运动情况和腹部体征。
2. 当荷瘤鼠出现消瘦、精神萎靡及弓背等全身衰竭体征时，脱颈处死，探查腹腔中瘤体生长状况、有无腹腔积液形成及周围脏器受累情况。
3. 然后留取原位瘤组织，胸腹腔重要脏器胃、肺、肝、腹膜等组织，用10%甲醛固定后，石蜡包埋、切片、HE染色，进行组织病理学检查。
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人肝癌组织裸鼠移植瘤模型建立及其应用王全凯1，杨全会2，郭静2，谢广云1，崔涛1，许荣焜2，许建宁1*1. 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所，北京 1000502. 中国医学科学院基础医学研究所，北京 100005摘要：目的建立人肝癌组织裸鼠移植瘤模型，对其特性进行鉴定，并应用于抗肿瘤药物制剂疗效的观察。
方法将人原发肝癌手术新鲜组织移植于BALB/c裸鼠皮下，建立人肝癌组织裸鼠移植瘤动物模型；于同体移植后第15 天连续ig给予长科制剂（CKBM），通过观察动物日常状况、接种部位出现肿块时间，测定瘤体体积和质量、抑瘤率以及进行组织病理学观察，初步评价CKBM的抗肿瘤疗效。
结果人肝癌组织裸鼠移植瘤保持了人肝癌组织特性，并能通过同体移植传代；观察发现CKBM对人肝癌荷瘤裸鼠的抑瘤率达45.71%，对癌细胞生长有一定的抑制作用。
结论在成功建立人肝癌组织裸鼠移植瘤模型基础上，观察发现CKBM具有一定的抗肿瘤疗效。
关键词：肝癌；裸鼠；移植瘤；动物模型；抑瘤率中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)03 - 0398 - 05DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.03.018Establishment and application of implantation model of human hepatocellular carcinoma in nude miceWANG Quan-kai1, YANG Quan-hui2, GUO Jing2, XIE Guang-yun1, CUI Tao1, XU Rong-kun2, XU Jian-ning11. National Institute of Occupational Health and Poison Control, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing100050, China2. Institute of Basic Medical Sciences Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100005, ChinaAbstract:Objective The human hepatocellular carcinoma model was established by implantation in BALB/c nude mice. Its characteristics were certified in the model which was used for the observation of antitumor efficacy. Methods Human hepatocellular carcinoma were sc implanted to BALB/c nude mice for the establishment of the implantation model of the human hepatocellular carcinoma in BALB/c nude mice. The nude mice were exposed to the pharmaceuticals from CK Life Sciences Limited by ig on day 15 after the implantation to find out its healing efficacy through the animal reflecting, the occurring time, volume, weight of tumors, the rate of tumor inhibited, and pathological histology. Results The characteristics of human hepatocellular carcinoma could be kept with passaging by autograft. The tumor inhibiting rate of the pharmaceuticals was 45.71%, showing the certain inhibitory effect on growth of tumor cells. Conclusion A certain antitumor efficacy of the pharmaceuticals made by CK Life Sciences Limited is found out on the basis on the human hepatocellular carcinoma model in nude mice established successfully.Key words: hepatocellular carcinoma; nude mice; implanted tumor; animal model; tumor inhibitory rate人类肝癌的基础和临床实验研究多数都借助于实验动物模型。
目前，以人肝癌组织移植裸鼠建立的动物移植瘤模型是最接近人类肝癌的整体实验模型，是肝癌基础和临床实验研究理想的动物模型。
人肝癌组织裸鼠移植瘤模型是指把人肝癌组织块接种于裸鼠皮下建立的实验动物模型，常用于筛选抗肿瘤药物和制剂、实验性治疗和抗肿瘤机制研究[1]。
基于为肝癌实验和临床研究以及药物筛选提供体内实验系统的目的，本研究建立了人肝癌组织裸鼠移植瘤模型，对其特性进行鉴定，并应用于抗肿瘤药物长科制剂（CKBM）疗效的观察。
1材料与方法1.1实验动物BALB/c（nu/nu）裸小鼠（由北京维通利华实验动物技术有限公司提供）。
饲养于中国医学科学院基础医学研究所/中国协和医科大学基础医学部收稿日期：2013-06-03作者简介：王全凯（1977—），男，北京人，主管技师，研究方向为毒理学。
Tel: (010)83132199 E-mail: kylewang@ *通信作者许建宁，硕士生导师，研究方向为毒理学。
Tel: (010)83132592 E-mail: jnx999@SPF屏障系统动物室，鼠龄5～6周龄，体质量18～20 g，雄雌各半。
1.2药品长科制剂（CKBM），香港长江生命科技有限责任公司研制，药物组成包括人参、五味子、酸枣仁、山楂、大豆、酵母菌等[2]。
1.3人肝癌组织选用经病理确诊的肝癌患者手术切除的新鲜肿瘤组织，立即置培养液中，尽快移植。
1.4癌组织移植[3]在超净台中用培养液反复数次冲洗新鲜的癌组织，去除明显坏死或可疑坏死的组织，将其切成大小适宜（2～3 mm3）的小块，直接接种于裸鼠肩背部、腋下皮下部位。
每例肝癌患者癌组织标本接种雄、雌性裸鼠各2只。
尽可能缩短取得癌组织到移植的过程时间。
裸鼠间传代方法依此同样进行。
1.5动物体内肿瘤生长情况测定癌组织移植完成后，每日观察动物的活动、进食及饮水情况，并记录异常情况；分别于实验开始、结束及每周称量动物体质量；详细观察记录移植部位有无感染，肿瘤/肿块出现的时间；每隔3～7天，用卡尺测量皮下移植瘤的最大长径（a）和横径（b），按公式计算瘤体积（V）＝ab2/2。
1.6血清甲胎蛋白（AFP）测定采用上海科华生物工程股份有限公司生产的甲胎蛋白定量检测试剂盒（酶联免疫法）测定裸鼠全血中AFP的量。
1.7组织病理学检查动物处死时进行大体解剖观察，肉眼观察移植瘤形态，以及有无腹水、胸水和各脏器表面有无转移瘤结节；取肿瘤、脑、肺、心、肝、脾、肾、胃、肠及区域淋巴结（双腋下、双腹股沟、颈前和肺门），以10%福尔马林固定、石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察肿瘤转移和各脏器病理变化及淋巴结窦性组织细胞增生情况。
1.8模型初步应用[4]应用第3代同体移植的荷瘤裸鼠模型，对CKBM的抗肿瘤疗效进行初步观察。
同体移植雄、雌性各15只动物，分为模型组和给药组，移植部位为背部、一侧腋部皮下。
给药组的雄雌各8只动物于同体移植后第15天开始每日ig给药20 mg/kg（临床拟使用剂量）的CKBM，每日观察动物日常状况、接种部位出现肿块时间，每周测定动物体质量、瘤体大小2次，连续给药45 d，实验结束时测定瘤质量和主要脏器质量，对瘤体和动物主要脏器进行组织病理学检查，并计算抑瘤率。
抑瘤率＝1－给药组瘤质量/ 模型组瘤质量2结果2.1人肝癌组织原代移植本研究用2例临床确诊的肝癌患者手术切除标本（具体情况见表1）进行裸鼠皮下移植，每例接种雄、雌性各2只动物，有1例获得移植成功，原代移植成功率为12.5%，原代移植瘤潜伏期为56 d，并可在同种动物连续传代。
2.2移植瘤传代当动物皮下瘤体达1 cm3时，进行同种间移植瘤传代，成功率达100%（表2）。
移植瘤连续传代，自第3代同体移植开始瘤体生长潜伏期为25 d；不同代荷瘤裸鼠全血中AFP量均值高于检测灵敏度20 ng/mL的100倍以上。
表12例人肝癌组织临床资料Table1Clinical data of hepatocellular carcinoma in two cases编号性别年龄肿瘤病理类型AFP /(ng·mL−1) 1*男59 肝右叶肝细胞肝癌99 940.02男57 肝右后叶中度分化肝细胞肝癌433.8*移植成功*implanted successfully表2人肝癌移植瘤传代情况Table2Passaging condition of human implantedhepatocellular carcinoma代数数量 / 只潜伏期 / d 出瘤率 / %原代8 56 12.51 6 35 1002 6 25 1003 6 25 100 2.3病理学检查对原代和不同代移植裸鼠均进行大体解剖观察和病理组织学检查。
移植瘤组织形态和病理组织学检查与原人肝癌组织相似（表3）。
2.4人肝癌裸鼠移植瘤模型初步应用2.4.1 CKBM毒性评价根据测定的动物体质量的变化对药物毒性进行评价，即实验末体质量（FBW）/实验初体质量（IBW）≥0.80时为无毒性反应，FBW/IBW＜0.80时为有毒性反应。
从表4、5表3肝癌组织病理学检查结果Table3Histopathology of hepatocellular carcinoma组织类型病理组织学检查结果人肝癌组织肝脏正常组织结构消失，可见到形状似球腺泡状的癌巢，被周围的结缔组织包绕；癌巢由癌细胞组成，癌细胞形态大小不一，呈现圆形、椭圆形、锥形及不规则形，细胞界限模糊，癌细胞排列较为松散；癌细胞的核仁较大，染色质浓染，胞浆所占比例小，可见到核分裂像同体移植第1代癌组织癌组织破坏了肝脏的正常结构，可见到形似球腺状聚集的癌巢；癌巢由癌细胞组成，癌细胞形态各异，呈现圆形、椭圆形、锥形及不规则形，癌细胞大小不一；癌细胞的核仁较大，染色质浓染，胞浆所占比例小，可见到核分裂像同体移植第2代癌组织肝脏正常组织结构消失，癌组织排列紧密，生长旺盛；可见有较大范围的出血现象；癌细胞的形态差异很大，有圆形、椭圆形、索形、多边形及不规则形等多种形态，细胞的大小差异很大；癌细胞染色质染色很深，核仁明显增大，胞浆部分较少，同时可以见到明显的核分裂像同体移植第3代癌组织癌组织呈浸润式分布，排列紧密，生长旺盛；可见有较大范围的出血现象；癌细胞的形态差异大，有圆形、椭圆形、索形、多边形及不规则形等多种形态，细胞的大小差异也较大；癌细胞染色质染色很深，核仁明显增大，胞浆部分较少，可以见到明显的核分裂像同体移植第4代癌组织肝脏正常组织结构消失，可见大片肝脏组织坏死；癌组织呈腺管状，排列紧密，生长旺盛，癌细胞的形态差异很大，有圆形、椭圆形、索形、多边形及不规则形等多种形态，细胞的大小差异大；癌细胞可见2个或多个核仁，染色质染色深，浓集，核仁明显增大，胞浆部分较少；同时可以见到较明显的核分裂像表4雄性小鼠体质量变化情况(±x s)Table4Changes of body weight of male mice (±x s)移植不同时间小鼠体质量 / g组别第1天第4天第7天第11天第14天第17天第21天第25天第28天模型（n＝7） 20.67±1.0522.07±1.0323.67±1.6324.19±1.8224.23±2.0824.03±2.0524.07±2.24 23.79±2.45 24.56±2.46给药（n＝8） 19.81±0.9420.65±0.94*22.70±1.3923.74±1.9423.79±2.1323.74±2.4623.64±2.44 23.44±2.21 23.61±2.23移植不同时间小鼠体质量 / g组别第32天第35天第39天第42天第46天第49天第53天第56天第60天模型（n＝7） 24.53±2.4123.04±2.7422.60±2.6022.61±2.4122.64±2.2721.76±2.3222.03±2.62 22.49±3.08 22.67±3.61给药（n＝8） 24.04±2.2622.20±2.5322.00±2.6021.63±2.8321.48±2.5520.93±2.4519.45±2.26 19.27±2.77 20.68±2.19与模型组比较：*P＜0.05，下同*P < 0.05 vs model group, same as below表5雌性小鼠体质量变化情况(±x s)Table5Changes of body weight of female mice (±x s)移植不同时间小鼠体质量 / g组别第1天第4天第7天第11天第14天第17天第21天第25天第28天模型（n＝7）18.64±1.7018.21±0.6719.47±0.7219.36±0.8519.23±0.8919.60±1.1018.97±1.6218.30±1.6418.86±1.78给药（n＝8） 18.58±0.7818.85±0.8119.90±1.0620.43±1.8320.71±1.59*20.70±1.9119.30±1.5719.39±1.8720.19±1.95移植不同时间小鼠体质量 / g组别第32天第35天第39天第42天第46天第49天第53天第56天第60天模型（n＝7）19.06±1.9218.06±2.0617.46±2.0517.57±2.0418.01±2.0317.63±2.1916.26±3.0518.17±2.0018.40±2.12给药（n＝8） 20.31±2.0219.43±1.9218.86±1.8519.01±1.9318.89±1.8818.33±1.6617.49±1.6617.12±2.3817.63±2.46可见两组不同性别小鼠体质量增长无显著性差异（P＞0.05），且给药组FBW/IBW均大于0.80，表明CKBM对动物无毒性反应。