裸鼠移植瘤方法建立

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裸鼠移植瘤方法建立

1.细胞准备：用PBS 清洗细胞两遍，加入胰酶消化，吹打离心，无血清培养基清洗两次，然后用无血清培养基将细胞重悬，进行细胞计数，使得200μL 悬浮液里面含有1×107个细胞。

总共需要细胞: 18（只）*200ul*=×107个，将混合好的细胞放于4°C冰盒运至动物房。

2.裸鼠准备：3周龄小鼠饲养一周后，每只于右侧腋腹壁皮下接种MDA-MB-231和MCF-7细胞1×107/200μ L。

每日观察肿瘤生长情况, 待出瘤后使用游标卡尺测量肿瘤体积, 肿瘤体积=(D×d 2)/2(D表示肿瘤的长径, d表示肿瘤的短径)。

（注射器型号BD一次性使用无菌胰岛素注射器规格：1ml 25G）当肿瘤体积约为80 mm3 时(100至150左右)，将裸鼠进行随机分成3 组（肿瘤大小，体重尽量接近），每组3只。

对照组，TO901317组，DADS组。

每天（每天给药？会不会太频繁？可以查阅相关类似成药的半衰期或综合国外文献的数据）将实验组灌胃TO901317，剂量为25mg/kg/d，将粉末状的TO901317 溶解到蓖麻油（或芝麻油以及生理盐水）里，每只裸鼠注射含有TO901317 的蓖麻油200μL；对照组注射等体积的蓖麻油。

连续注射两周。

（12号灌胃针头，每次用后一定要煮沸消毒）（灌胃进针时针头偏右，一般就不会进肺了）腹腔注射DADS，剂量为50mg/kg (含10%小牛血清的D ME M培养液（最好使用生理盐水）)每次注射200 μL , 隔日注射, 连续7次给药。

每2～3d观察测量1次, 计算肿瘤相对体积(RTV)。

以每组动物移植瘤体积的平均值, 绘制移植瘤生长曲线。

实验结束时在超净工作台上对裸鼠进行拍照，完整剥离肿瘤，用游标卡尺对肿瘤的大小进行测量，用电子天平称量移植瘤重量，用手术剪取出肿瘤，拍照。

照相结束后，用剪刀将每个肿瘤分成 3 份，一份用来提取总RNA，一份用来提取组织内总蛋白质，这两份组织放到冻存管里，冻于液氮罐中，第三份用来做免疫组化，因此，该样本须置于4%的多聚甲醛（有毒，小心配置）固定剂中进行固定。

裸鼠肿瘤接种技术实验操作方法

裸鼠肿瘤接种技术实验操作方法裸鼠肿瘤接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式，接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种。

l楼主看来是做体外培养的细胞的裸鼠接种，一般用带6号针头的注射器取适量细胞悬液注射于裸鼠的皮下，部位看试验要求而定，一般在腋下或背部皮下，每个接种部位注射0.1-0.2ml。

就是将培养的细胞收集起来调整到适宜浓度重悬于不含血清的培养液或PBS中，放于冰盒中携至动物房，直接注射即可。

是牵涉到细胞株的成瘤性问题，可以通过增大细胞悬液浓度的办法来解决。

一般细胞浓度可在1*10的6次方到5*10的7次方之间，浓度再大就可能打不进去了。

具体浓度需要查相关文献。

如果成瘤率太低，可以通过把瘤块在裸鼠身上传2—3代的方法提高成瘤率，即将已成瘤鼠的瘤块取出接种于新鼠身上，成瘤后再取出接种新鼠，如此传几代，肿瘤性质稳定后，再将肿瘤取出，剪碎、研磨、匀浆成为细胞悬液后再接种。

一、可移植性肿瘤的建立方法1．腹水瘤的建立将动物实体瘤细胞注入受体动物腹腔内，或将实体疤移植于受体动物的腹壁内，肿瘤生长后引起腹水，腹水内含高大量瘤细胞可移植传代．即为腹水瘤。

建议腹水瘤初期、腹水往往是血性，多次传代后逐渐变为乳白色的瘤性腹水。

腹水如培养基一样供给瘤细胞生长所需的营养。

若将腹水瘤细胞注入皮下，又可形成实体瘤。

由于瘤细胞游离在腹水内，因此总呈圆形，体积可有大、中、小之分c：r．在一些细胞边缘偶见大小不等的泡状突起，称之为“鼓泡”。

一般在接种后第5天时核分裂相达高峰。

偶见三吸或四极分裂。

二、肿癌移植方法1．常规保种传代方法(1)腹水瘤移植方法：瘤源一般用接种后第5～6天的腹水，抽出的腹水以乳白色为佳。

接种应从下腹部件入受体动物腹腔，一般接种o．1一o．2m1。

可在腹水内加适量的抗凝药物。

(2)实体型肿瘤接种法：1)小块接种法：将瘤取出后，切开，选出生长良好而无变性坏死、呈谈红色、鱼肉状的瘤组织，切成小块(约5*5*5mm)；在受体动物腹部外例剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下。

人卵巢癌裸鼠移植实体瘤模型的建立

，
（．ｉｎｘｎｔｕｅｏａｏｒＨｙｉｎｎｃｕａｉｎｌＭｅｉｎ，ａｃａｇ３００，ｈｎ１ＪｇｉＩｓｔｔｆｂｕｇｅｅａｄＯｃｐｔａｄｃｅＮｎｈｎ３０６ＣｉａａｉＬｏｉ
２．ｉｎｘｔｒｌａｄＣｈｌａｔＮａｃａｇ３００６，ｉａ；ＪａｇｉＭａｅｎａｎｉＨｅｌｈ，ｎｈｎ３０ｄＣｈｎ
【要】目的建立人卵巢癌裸鼠移植实体瘤模型。方法摘
将１例人卵巢癌组织移植裸鼠，立人卵巢癌裸建
鼠原代移植实体瘤模型的基础上，再将实体瘤皮下移植、体瘤原位移植、体瘤细胞移植裸鼠。观察裸鼠实体瘤实实生长和转移情况，量其体重、宫卵巢重、重及瘤的大小，作病理、镜、色体检查。结果成功地建立人称子瘤并电染
３．ｄｃｌｃｏｌｆａｃａｇＵｉｅｓｙＮｎｈｎ３０６ＣｉａＭｅｉｈｏｏｎｈｎｎｖｒｉ，ａｃａｇ３００，ｈｎ）ａＳＮｔ
【ｂｔｃ】ＯｊｃｖＴｓｂｓｈｍｎｏａｉａｃｒｒｎｐｎｄｓｂｕｎｏｓｕｅｍｃｏｅ．ＴｓｂｓＡｓａｔｒｂｅｔｅｏｅａｌｈｕａｖｒｎｃｎｅａｓｌｔｕｃｔｅｕｌｎｄｉｍｄ１ｏｅｔｌｈａｉｔｉａｔａｅａｙｅａｉ
维普资讯
２００８年８月
中国比较医学杂志

人肾上腺皮质腺癌细胞株裸鼠移植瘤模型的建立及其意义

１３４３
重庆医学２１００年６月第３９卷第１１期
・
论
著・
人肾上腺皮质腺癌细胞株裸鼠移植瘤模型的建立及其意义
蒋莉罗佐杰，，邝晓聪。梁杏欢秦映芬卢德成。，，，（广西医科大学：．１第一附属医院内分泌科；．理生理学教研室；２病
ｔｒ６ｗｅｋｈｅｔｍｏｏｍｅｔａｅｏｆｔｍｏｉｎｓｓｗａ０．Ｅｔｉｈｅｅｓｔｕｒｆｒｄ，ｈｅｒｔｕｒｇｅｅｉｓ１０Ｈｓａｎｓｏｗｅｈｔａｌｒｅｎｄｔａａｇｕｍｂｅａｅｅｌｓｉｈｅｒｏｆｃｎｃｒｃｌｓｗａｎｔ
ｓｏｏ；Ｚｇ
３ＤｅａｔｎｆＥｏｒＺ＿ｒｔｅＯｌＧｕｎｘｄｃｌＵｎｖｒｉｙ，ｎｉｇ，ａｇｉ５００Ｃｈｎ）．ｐｒｍｅｔｏｃ０ｇ０，ｈｄ；ａｇｉ＿门ＭｅｉａｉｅｓｔＮａｎｎＧｕｎｘ３００，ｉａ
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３Байду номын сангаас第一附属医院老年内分泌科，宁．南

人大肠癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

［关键词］癌；大肠；肿瘤移植；疾病模型，动物；小鼠，裸［中图分类号］Ｒ３．４Ｒ３—５７５３７３２［文献标识码］Ａ［文章编号］１０７７２１）３２７４０－０（０００－４－０２００
ＥｓａｌｓｍｅｆＳｕｕａｅｕａｐａａｔｏｍｏｏｅｓｔｂｉｈｎｔｏｂｃｔｎｏｓＴｒｎｓｌｔｉｎＴｕｒＭｄｌｏｕａＣｏｏｒｉｏａｗｉｈＮｕｄｉｅｆＨｍｎｌｎＣａｃｎｍｔｅＭｃ
ｈｍａｏｏｅｔｌｃｒｉｏｔｕｅｍｉｅ．Ｍｅｈｏ：Ｆｒｓｉｓｅｆｃｌｒｃａａｃｎｍａｗｅｅｃ１ｕｎｃｌｒｃａａｃｎｍａｗｉｈｎｄｃｔｄｓｅｈｔｕｓｏｏｏｅｔｃｒｉｏｒｏ．ｓｌ１ｃｅｅｔｄ，ａｒｎｐａｔｄｉｔｕｃｔｎｏｌｃｓｏｕｅｍｉｅｎｄｔａｓｌｎｅｎｏｓｂｕａｅｕｓｐａｅｆｎｄｃ．Ｔｈｅｓｃｅｓｕｌｒｎｐａｔｄｐｉｒｕｃｓｆｌｙｔａｓｌｎｅｒｍａｙｇｎｒｔｎｔｍｏｓｔｅｓｅｏｏｆｒｈｒｇｎｅａｉｎ．Ｆｅｄｉｇａｄａｔｖｔｔｔｓｏｕｒｅｅａｉｕｒｗａｈｎｐａｓｄｄｗｎｔｕｔｅｅｒｔｏｓｏｅｎｎｃｉｉｙｓａｕｆｔｍｏ・
ＺＨＡＮＧｎｘｎＹＡＮｎｇｕＤｏｇｉｇ，Ｄｅｇｏ，ＺＨＡＯｎｇｏＢｉｂ

人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

ｗｅｇｔｆｔａｓｌｎｅｕｒｎｈｒｈｕｒｌｓｌｂｅｖｄＲｓｌＴｒｎｐａｔｄｔｍｏｓｗｅｅｆｒｄｉｌｎｄｉｈｒｎｐａｔｄｔｍｏｓａｄｔｅｍｏｐｏｓｗｅｅｃｏｅｙｏｓｒｅ．ｅｕｔｏｓａｓｌｎｅｕｒｒｏｍｅｎａｌｕｅｍｉｅＴｈｖｒｇｉｅｏｈｉｆｒｔｎｗａｂｕａｓＴｈｖｒｇｎｉｍｅｅｎｈｒｉｍｅｅｆｈｓｕｒｒｃ．ｅａｅａｅｔｆｔｅｒｏｍａｉｓａｏｔ７ｄｙ．ｍｏｅａｅａｅｌｇｄａｔｒａｄｓｏｔｄａｔｒｏｅｅｔｍｏｓｗｅｅｏｔ
有利于后续体内实验。【键词】裸鼠；动物模型；ＳＣＡ１细胞株；肺腺癌关Ｐ —一【图分类号】Ｒ３；Ｒ７４２【中３２３．文献标识码】Ａ【章编号１１０ — ６０２１）１０８ — ３文０２２０（０００ — ０００
ａｏｔ（９２ ± ３８）ｍｍｎ（４９ ± ２７）ｍｍｅｐｃｉｅｙ２ａｓｌｔｒｎｈｖｒｇｏｕｆｈｍｓｃｌｕａｅｏｂｕ１．０．５ａｄ１．４．８ｒｓｅｔｌ８ｄｙａｅ，ａｄｔｅａｅａｅｖｌｍｅｏｅｗａａｃｌｔｄｔｖｔｂｂｕ２１４１ｅａｏｔ（４．０± １２７７）ｍｍ。Ｔｈｖ．７± ０６ｇＭｏｔｔａｓｌｎｅ３．２．ｅａｅａｅｗｅｇｔｗａａｃｌｔｄｔｅａｏｔ１３．）．ｓｒｎｐａｔｄ

裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤

裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。

种植的点也有讲究，一般选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝。

可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。

裸鼠（Balb/c 鼠，无毛发， T 淋巴细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。

裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。

当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。

☞肿瘤细胞移植时的简要步骤首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择1x106 左右；肿瘤细胞可与基质胶 1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。

戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。

将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒3 次。

右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。

然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，放置其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。

2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。

如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌PBS（或1640 培养基）洗涤3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。

将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用 75% 酒精消毒 3 次，然后用眼科剪剪开约 0.5 cm 小口，小镊子将皮下筋膜与皮肤分开，然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部，每个位置放置 2～3 块肿瘤组织，注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。

动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型

动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型一、嘉美实验裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建方法采用腋窝皮下接种PC-9人肺癌细胞，建立PC-9人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型并给与药物进行干预，观察药物对肿瘤的作用。

二、裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建及后续实验操作1、25只BALB c裸鼠，适应性饲养一周后，调整制备好的PC-9人肺腺癌细胞单细胞悬液浓度，用1m 1l无菌注射器吸取细胞悬液，于每裸鼠右侧腋下皮下注射0.2mL细胞悬液(接种细丹包量约为1×x102/ml)，细胞悬液接种于裸鼠的右侧腋下7-10d后，观察成瘤情况，肿瘤仁本积大于100m3后，选取肿瘤大小相近的小鼠按肿瘤体积随机分为4组:(1)对照组，5只；(2)高剂量组，7只:(3)中剂量组，7 )顺铂组，6只。

当天高剂量组、中剂量组、顺铂组开始给药其中，高剂量组连续21天每天灌胃给药，顺铂组每三天腹腔注射给药，齐量5m/e次。

每两天测量荷瘤裸鼠体重和冲瘤体积。

于第22天停止给药病禁食2h，第再次测量肿瘤体积，计算相对肿瘤体积(RTV)，绘制肿瘤生长曲线，毛材当天称量最后一次体重和瘤重计算肿瘤指数完整剥离瘤块，其中一半瘤块组织于 10%福尔马林中固定，备用；另半肿瘤组织存放于液氮中冻存。

血样用109 mmol/L枸櫞酸钠19抗凝，分离血浆。

2、小鼠接种PC-9人肺腺癌细胞后 9天左右，可观察到裸鼠右侧腋下均现黄豆大小瘤块，于当天开始测量肿瘤体积并称重。

于接种第11天时，测量肿瘤生长指数和体重时发现，各组荷瘤裸鼠肿瘤体积均值达到100mm3，于当天开始分组给药在给药过程中发现，顺铂组荷瘤裸鼠的体重下阳夆明显，与对照组相比具有极显著性差异루(P<0.01)高剂量组荷瘤裸鼠的体重于d7、dI 3、d19天时有显著性差异(P~0.05)，其他各组体重与对照组相比均无明显差异。

顺铂组肿瘤体积于d13、d17、dl9、d21 d23时与对照组相比明显减小，并有显著性差 :(P<0.05)，在d15天时有极显著性差쿠(P<0.01)。

小鼠皮下移植瘤实验步骤

皮下移植瘤实验步骤
1、提前2-5个工作日与细胞房人沟通好收细胞时间，收到细胞后，用锡箔纸包裹EP管。

2、将接种所用的细胞、注射器和记录纸等带去动物房，放进传递窗，喷酒精，照紫外线灭菌10min。

3、用1ml注射器吸取适量培养基与细胞轻轻吹打混匀（吸取量视所需接种体积确定）。

4、抓起裸鼠，于裸鼠左侧腋窝处皮下注射，接种对照组细胞，右侧接种实验组细胞，接种体积均为0.1ml。

5、把耳标放入打孔器中，用手抓起固定好裸鼠，用打孔器把耳标固定在裸鼠耳朵上。

6、称重，并登记好相应信息。

7、每三天称量一次裸鼠体重，成瘤后每三天用游标卡尺测量一次肿瘤长径和短径，将相应数值填写在记录纸上。

8、待肿瘤生长至合适大小，用CO2处死小鼠，按照实验结果摆拍裸鼠（如图）
9、用手术剪剪开裸鼠肿瘤周围皮肤，用组织镊小心分离肿瘤附近组织，将剥离出来的肿瘤放在垫了锡箔纸的冰上。

待所有肿瘤都取下后，称重，记录数据，按照实验结果摆拍（如图）
10、选取其中差异大的三组，将肿瘤小心分为两部分，一部分4%PFA固定，一部分放已灭菌离心管冻存。

剩余组织放已灭菌离心管冻存。

（需要冻存的组织放进EP管后要插入冰盒的冰里）
11、将组织带回公司，需要冻存的放进-80°C，并填写《-80°C动物组织存放表》。

人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法

人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法先用组织学完整的新鲜人肝癌组织接种于裸鼠皮下，形成皮下移植瘤，然后用此移植瘤组织再接种于裸鼠肝内，建立肝原位移植瘤模型（间接肝原位移植瘤模型），并将其与直接肝原位移植瘤模型、皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型作比较。

一、间接肝原位移植瘤模型的制备1. 用新鲜的肝癌外科手术切除标本（来自长海医院，患者为1名47岁男性，病理诊断：肝左叶肝细胞癌，粗梁型，Ⅱ级），在Hanks液中，去除坏死组织和非癌组织后切成1～2 mm3小块。

2. 取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠腰背部皮下，待皮下移植瘤长到直径约1 cm时切取肿瘤，在Hanks液中，去除坏死组织后切成1～2 mm3小块，裸鼠用戊巴比妥钠腹腔麻醉后，行左上腹横切口，暴露肝脏。

3. 取上述2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠肝右叶深部实质内，全层关腹。

二、直接肝原位移植瘤模型的制备1. 同一例新鲜肝癌手术切除标本，处理方法同皮下移植，裸鼠处理同间接肝原位移植，取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头直接植入裸鼠肝右叶深部实质内。

2. 皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型的制备。

三、病理检查和相关指标检测1. 解剖和组织学检查（1）所有裸鼠接种后，分组分笼饲养，自由进食，每天观察1～2次。

（2）当裸鼠处于全身衰竭状态时处死并作大体解剖，对接种瘤和转移瘤分别进行观察、测量，记录肿瘤侵袭和转移情况，重要器官（主要为肝和肺）经10%中性甲醛固定后，常规石蜡制片，光学显微镜检查。

2. 周围血甲胎蛋白(AFP)检测处死前，均采用摘眼球采血的方法获得血液，用生化法检测AFP的分泌量。

3. 瘤细胞DNA含量分析留取部分移植瘤标本采用流式细胞术进行DNA含量分析。

注意事项目前，肝癌的复发和转移仍然是其术后长期存活的主要障碍。

为了研究肿瘤的转移机制，建立接近于人体的肿瘤动物模型显得尤为重要。

裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立

裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立裸鼠前列腺原位肿瘤模型是研究前列腺癌的一种重要方法，可以帮助研究前列腺癌的发生机制、治疗方法以及预后。

在这篇文档中，我们将介绍创建裸鼠前列腺原位肿瘤模型的步骤和需要注意的事项。

一、实验动物选择当前，最常用的裸鼠前列腺原位肿瘤模型是使用BALB/c裸鼠进行实验。

这种鼠标品系的免疫系统极度压制，不会产生对异位移植物的免疫反应，从而提供了可行的肿瘤原位移植模型。

二、细胞株选择在建立裸鼠前列腺原位肿瘤模型的时候，选择合适的细胞株非常重要。

选择常用的前列腺癌PC-3和LNCaP细胞，或者使用病人前列腺癌细胞系，也可以根据需要转移所选原位移植物的特定表型。

三、移植前肿瘤细胞的处理肿瘤细胞的本质是异种细胞体，从人体获取到的肿瘤组织处理一般包括酶处理过程和细胞悬液制备过程。

酶液（例如胰酶）可以消化组织基质和纤维素，使细胞更容易生长。

酶液需要在恰当的温度和pH值下进行消化，并获得最高的细胞产量。

消化完毕后，过滤产生的细胞系悬液，以获得细胞。

四、移植前的裸鼠准备在移植前，要为裸鼠准备好阴茎垫和保持体温的设备。

可以使用小激光剪切器轻轻地切割皮肤做一个小孔，将悬液注入到前列腺内。

五、细胞移植移植前，应将细胞重新悬浮在适合的细胞培养基中，调整至合适的细胞浓度。

将细胞直接注入到头孢钠和甲苯磺丁脲等抗生素加载的BALB/c裸鼠前列腺中。

六、术后护理在移植完成后，将裸鼠安置在恰当的环境中，并监测它们的舒适程度。

为了预防感染和控制感染，需要注射抗生素和止痛药，以及监测患处的融合情况。

七、标本收集和肿瘤评估从移植的裸鼠体内收集原位移植物的标本，并用组织学方法鉴定癌细胞的形态学，确定癌细胞类型。

在肿瘤评估过程中，还可以进行微管道侵袭实验、体内药物毒理学试验等进一步的研究。

总之，裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立对研究前列腺癌的发生机制、治疗方法和预后等方面有重要意义。

从以上步骤和注意事项可以看出，建立该模型的过程繁琐，需要确保实验严谨，才能有效提高研究精度和推进前列腺癌的临床治疗。

皮下移植瘤模型的建立方法

皮下移植瘤模型的建立方法可以使用多种不同的方法来建立皮下移植瘤模型，例如通过将实验动物裸鼠体内的细胞植入到其他裸鼠的皮肤下方来实现这一目标。

其中一种常用的方法是采用Hepa1-6细胞进行移植，具体步骤如下：
首先，从健康的小鼠体内提取Hepa1-6细胞并将其接种至平板培养皿中。

其次，在细胞充分生长之后将它们收集起来，并将一定数量的细胞注入到另一只裸鼠的皮肤下面。

最后，经过一段时间的观察和等待，可以在移植部位形成皮下移植瘤模型。

需要注意的是，在整个过程中需要严格按照相关实验规程和要求操作，以确保实验结果准确可靠。

此外，不同类型的细胞和移植方式可能会影响到移植瘤模型的质量和特性，因此在选择合适的方法时需要根据实验目的进行权衡考虑。

胃癌细胞株MKN-45裸鼠移植瘤模型的建立与应用

卞庚，赵文英，杨志敏，叶晓斌，陈冬云，陈景华，耿飚，沈国栋，程民
（１．皖南医学院弋矾山医院肿瘤内科，安徽芜湖２４１００１；２．安徽省立医院肿瘤营养与免疫重点实验室，安徽合肥２３０００１）
ＭＫＮ－４５ｘｅｎｏｇｒａｆｔｍｏｄｅｌｏｆｎｕｄｅｍｉｃｅ
ＢＩＡＮＧｅｎｇ，ＺＨＡＯＷｅｎ．ｙｉｎ，ＹＡＮＧＺｈｉ．ｍｉｎ，ｅｔａｌ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｅｄｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ，Ｙｊｉ￣ｈａｎＨｏｓｐｉｔａｌｆＷｏａｎｎａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｗｕｈｕ２４１００１，Ｃｈｉｎａ）
ｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ａｆｔｅｒｔｕｍｏｒｃｅｌｌｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｆｏｒｔｗｏｗｅｅｋｓ，ｔｕｍｏｒ — ｂｅａｉｎｒｇｍｉｃｅｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｍｅｄｉ —
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｉｄｅａｌｎｕｄｅｍｉｃｅｍｏｄｅｌｂｅａｉｒｎｇｇａｓｔｉｒｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＭＫＮ－４５，ａｎｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｘｅｎｏｇｒａｆｔｆｏｒａｎｔｉ — ｃａｎｃｅｒｄｒｕｇｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＮｕｄｅｍｉｃｅｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈ５×１０ＭＫＮ－４５ｇａｓｔｉｒｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅｉｒｇｈｔｌｆａｎｋｆａｔ

裸鼠的肿瘤移植模型研究

裸鼠的肿瘤移植模型研究肿瘤是一种常见的疾病，也是医学研究的一个重要领域。

随着科学技术的不断发展，人们对肿瘤的认识也在不断深入。

其中，裸鼠的肿瘤移植模型研究是一种常用的实验手段。

一、裸鼠是什么裸鼠是一种没有毛发的实验小动物，通常被用来进行肿瘤移植研究。

这种小动物一般来自人工培育的遗传变异株，因为它没有毛发，所以被称为裸鼠。

这种小动物体型小、活力强，非常适合作为实验对象。

二、肿瘤移植模型的意义肿瘤移植模型是一种通过将人类肿瘤细胞移植到裸鼠体内来模拟肿瘤生长和发展的实验方法。

这种实验方法能够为生物医学研究人员提供宝贵的研究材料，用于发现和开发新的抗肿瘤药物和治疗方法。

同时，肿瘤移植模型还能够为临床医学研究提供重要的参考，帮助医生们更好地了解肿瘤生长和发展的规律，找到控制肿瘤的有效方法。

三、裸鼠肿瘤移植模型的基本步骤1. 建立肿瘤细胞株首先，需要建立一种稳定的肿瘤细胞株。

一般来说，肿瘤细胞株可以从患者的体内或者文献报道中获取，然后通过培养和筛选，筛选出能够稳定生长的肿瘤细胞株。

2. 准备裸鼠裸鼠一般都需要进行体表消毒和饲养管理等操作。

在进行实验前，需要将裸鼠的体表消毒，避免外来细菌对实验结果的影响。

此外，裸鼠的饲养、环境、温度、湿度等也需要进行精心管理，确保实验的准确性和有效性。

3. 移植肿瘤细胞将准备好的肿瘤细胞接种到裸鼠的体内，一般是通过皮下注射或者腹腔注射的方式进行。

移植后，需要观察肿瘤的生长和发展情况，并及时进行处理、剖解和测量等操作。

四、裸鼠肿瘤移植模型的优缺点优点：1. 易于建立：裸鼠的肤色和体毛特征明显，容易观察，建立肿瘤移植模型相对容易。

2. 可控性强：通过各种手段可以有效控制实验的变量，确保实验结果的可靠性和准确性。

3. 结论可靠：通过对裸鼠肿瘤移植模型的研究，可以得到比较可靠的实验结论，从而为后续的研究提供重要参考。

缺点：1. 模拟程度低：由于裸鼠与人体存在较大的生物学差异，因此在某些肿瘤特征的模拟程度上会存在一定的局限性。

原代人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

究结肠癌奠定了基础。
关键词结肠癌
裸鼠
移植瘤模型
ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆＩｉｔｌｌｎａｎｃｏｌｏｎｃａｒｃｉｎｏｍａｉｍｐｌａｎｔｔｕｍｏｒｍｏｄｅｌｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅＨｅＺｉｂｉａｏ．Ｙａｎｇ
ｅｎｔａｎｄｔｒｙｐｓｉｎｄｉｇｅｓｔｉｏｎ．Ｉ＇ｈｅｐｕｒｉｆｉｅｄｈｕｍａｎｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙｉｎｌｅｆｔ
ａｎｄａｃｔｉｖｉｌｙｓｔａｔｕｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖ（ｄ．ＡＩｔｈｅｅｎｄｏｆｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄｔｕｍｏｒｓｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅｗｅｒｅ
ａｘｉｌｌａｒｙｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆｎｕｄｅｍｉｃｅ．Ｔｕｍｏｒｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈ，ｔｕｍｏｒｓｉｚｅ，ｎｕｄｅｍｉｃｅｆｅｅｄｉｎｇ
取移植瘤以ＨＥ染色和ＣＥＡ及ＣＫｚ。免疫组化检验。结果本实验原代结肠癌细胞可以在裸鼠皮下存
活，接种后第８天见有移植瘤形成．成瘤率为８Ｏ。病理切片显示组织细胞排列成不规则腺体状，有核分裂相。ＣＥＡ及ＣＫ。检验阳性。结论初步建立了人结肠癌的裸鼠皮下移植瘤模型，为进一步研

人胃癌裸鼠原位种植转移模型的建立实验具体方法及步骤

人胃癌裸鼠原位种植转移模型的建立实验具体方法及步骤以反复接种传代于裸鼠皮下的SGC-7901 人胃癌细胞株建立的移植瘤组织块为材料，将其用生物吻合OB胶原位粘贴于裸鼠胃壁，并与传统"胃囊法"、”皮下移植法“比较观察移植肿瘤的生长情况、移植成功率和自发转移的发生率。

一、实验材料准备6周龄BALB/c 无胸腺裸鼠24只，雌雄兼用，体重18-20 g。

传代于裸鼠皮下的SGC-7901人胃癌细胞株，本实验肿瘤组织为第6代。

二、人胃癌SGC-7901组织块制备1. 无菌条件下取人胃腺癌SGC-7901J标本中的组织数块，直径约0.5-1.0 cm，去除坏死组织，漂洗，滤纸吸干后置RPMI-1640液中剪成1-2 mm 的小块，制备成单细胞悬液（5×108-2.5×1011 /L）。

2. 置于18号套管针针口，碘棉消毒裸鼠右腋背部皮下，局部接种，逐日观察，待肿瘤长至1.0-1.5 cm时处死裸鼠，取出肿瘤组织按上述方法传代，传代瘤鼠与实验用鼠同为BALB/c无胸腺裸鼠，本组瘤源为第6代。

三、模型的建立1. 将24只健康裸鼠随机分为3 组，即皮下移植组、胃囊法组和OB胶粘贴组，每组8只。

2. 将传代瘤鼠拉颈处死，无菌操作，从腋部皮下剥取肿瘤组织，剔除纤维包膜，切开选取生长良好、呈淡红色、鱼肉状的瘤组织，切成1 mm ×1 mm×1 mm小块，置于生理盐水中备用。

3. 皮下移植组：将切好的瘤块置于18号套管针针口，碘棉消毒裸鼠右腋背部皮下，局部接种。

4. 胃囊法组：腹腔注射50 mg/kg氯胺酮麻醉裸鼠，无菌条件下沿左侧正中旁线切开，刀口约1.5 cm，小心暴露腹膜、胃壁，在胃壁缝制粘膜小囊，将肿瘤组织块包埋于其中，缝合关腹。

5. OB胶粘贴组：腹腔注射50 mg/kg氯胺酮麻醉裸鼠，常规消毒皮肤，沿左侧正中旁线切开，刀口约1.5 cm处小心暴露腹膜、胃壁，用一次性注射针头轻微损伤胃大弯中部浆肌层，以出血为度，将肿瘤组织用医用吻合OB胶粘合在破损处，用0号线缝合腹膜腹壁，关腹。

人胃癌组织块裸鼠胃癌原位移植模型的建立实验具体方法及步骤

人胃癌组织块裸鼠胃癌原位移植模型的建立实验具体方法及步骤一、实验材料准备BALB /C nu /nu裸鼠12只，雌雄兼用，4～6周龄，体质量18～20 g，SPF级条件下饲养。

传代于裸鼠皮下的SGC-7901人胃癌细胞株。

二、裸鼠皮下移植瘤的建立和传代1. 收集体外培养的SGC-7901细胞，使细胞含量为5 x107 /ml，制成细胞悬液然后取0.2 ml注入裸鼠颈背部皮下。

2. 当皮下移植瘤长至直径为1 cm左右时无菌操作取出移植瘤，去除坏死组织，漂洗后，将瘤组织切成约1～2 mm的小块，研磨过滤制备成单细胞悬液局部注入另一只裸鼠颈背部皮下，如此成瘤后鼠间反复传5代。

三、原位移植模型的建立1. 将第5代致瘤的裸鼠脱颈处死后无菌操作取出第5代皮下移植瘤，剔除纤维包膜和坏死组织，选取生长良好呈淡红色鱼肉状的瘤组织用眼科剪切成1 mmx1 mm x2 mm的小块，浸泡于已配好的纤维蛋白原溶液中置于冰袋上备用。

2. 实验裸鼠术前禁食，以1 ml氯胺酮( 5 g/ml)腹腔注射麻醉后，固定四肢并进行常规皮肤消毒，选腹左侧正中切开皮肤1. 5 cm，逐步进腹，显露胃壁后将胃拉出，在胃大弯处近胃窦旁用1 ml无菌空针头划破胃壁浆肌层，植入3～4块瘤组织块，并在瘤表面滴上约10 μl凝血酶，使其覆盖瘤组织表面，约10 s左右待凝血酶与纤维蛋白原发生反应形成胶状物后，瘤组织块黏合在胃壁破损处，然后将胃壁口纳入腹腔。

3. 分别采用6-0缝合线缝合腹膜(含肌层) ，3-0缝合线缝合腹壁，关腹结束手术，以上操作均在超净台内进行，共建6例模型。

四、原位移植致瘤率及移植瘤侵袭和转移情况观察1. 移植术后精心饲养，定时观察所有裸鼠全身状况、进食情况、运动情况和腹部体征。

2. 当荷瘤鼠出现消瘦、精神萎靡及弓背等全身衰竭体征时，脱颈处死，探查腹腔中瘤体生长状况、有无腹腔积液形成及周围脏器受累情况。

3. 然后留取原位瘤组织，胸腹腔重要脏器胃、肺、肝、腹膜等组织，用10%甲醛固定后，石蜡包埋、切片、HE染色，进行组织病理学检查。

人肾上腺皮质癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

人肾上腺皮质癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立徐文清;肖戈;吴义高;黄福;王尉;胡卫列【摘要】目的：建立人肾上腺皮质癌裸鼠皮下移植瘤模型。

方法采用人肾上腺皮质癌细胞株SW-13细胞接种于裸鼠腋下皮下，记录成瘤潜伏期，观察肿瘤生长情况，并绘制生长曲线，对移植瘤进行组织病理学鉴定。

结果采用SW-13细胞皮下接种方式建立移植瘤的模型成瘤百分率为95％，成瘤平均潜伏期为（18±1．2）d，移植瘤体积倍增时间为（10±1．8）d天，移植瘤组织病理学形态与人肾上腺皮质腺癌相似。

结论成功建立人肾上腺皮质癌裸鼠皮下移植瘤模型，为研究其发病机制及诊治方法提供实验依据。

%Objective To establish a subcutaneous xenograft model of human adrenocortical carcinoma in nude mice . Methods Human adrenocortical carcinoma cell line SW-13 cells were inoculated subcutaneously into the oxter of nude mice . The proliferation of tumor were observed and the growth curve were draw .The pathological identification of tumors were carried out.Results The mean incubation period of xenograft by inoculating subcutaneously with SW -13 cell was (18 ±1.2) days with 95%of tumor forming rate.The time tumor took to double its volume was (10 ±1.8) days.Morphologically, xenograft was simi-lar with the original tumor .Conclusion The establishment of xenograft model of human adrenocortical carcinoma can provide ex -perimental foundation for the study of adrenocortical carcinoma .【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】3页(P489-490,494)【关键词】肾上腺皮质癌;裸鼠;移植瘤;SW-13细胞株【作者】徐文清;肖戈;吴义高;黄福;王尉;胡卫列【作者单位】510010 广州军区广州总医院泌尿外科;510010 广州军区广州总医院泌尿外科;510010 广州军区广州总医院泌尿外科;510010 广州军区广州总医院泌尿外科;510010 广州军区广州总医院泌尿外科;510010 广州军区广州总医院泌尿外科【正文语种】中文【中图分类】R73-35肾上腺皮质癌(adrenocortical carcinoma)是发生于肾上腺皮质的1种恶性程度高、预后差的恶性肿瘤[1]。

裸小鼠脑胶质瘤原位移植瘤模型的建立及磁共振成像研究

裸小鼠脑胶质瘤原位移植瘤模型的建立及磁共振成像研究王舒楠，张伟国，陈金华，马长锁，赵丽(第三军医大学大坪医院野战外科研究所放射科，重庆400042)摘要：目的建立裸鼠脑胶质瘤原位移植瘤模型并进行MR扫描，摸索扫描的最佳参数，探讨1.5T磁共振在检测裸鼠颅内成瘤的可行性，为下一步实验奠定基础。

方法SHG-44细胞传代培养后，用微量注射器吸取肿瘤细胞悬液直接穿刺接种，在肿瘤细胞接种后第15天行1.5T MR扫描，裸鼠麻醉后置于小动物线圈采集图像并利用影像工作站测量体积。

而后取脑组织做病理切片，计算体积后行HE及CD34染色，与MRI图像进行对比分析。

结果除去围手术期死亡2只裸鼠外，剩余的13只裸鼠在MR增强序列图像上均能见到肿瘤，成瘤率达100%，且位置同组织切片相一致。

在MR 图像上测得的肿瘤体积为（29.41±10.95）mm3，组织切片测得的肿瘤体积为(26.57±9.70) mm3，二者无显著性差异（P＞0.05）但具有明显的相关性（r=0.985，P ？）。

肿瘤微血管丰富，且主要集中在肿瘤的边缘。

结论采用微量注射器直接建立裸鼠胶质瘤原位移植瘤模型简单便捷，成瘤率高。

1.5T 磁共振能活体检测裸鼠脑胶质瘤成瘤情况，并能进行一定的功能成像，是动态监测裸鼠胶质瘤发生发展的有效途径。

关键词：裸鼠；胶质瘤；磁共振成像；原位移植Estabilshment of human glioma orthotopic model in nude mice and monitored by 1.5T magnetic resonance imagingWang Shu-nan, Zhang Wei-guo, Chen Jin-hua, Ma Chang-suo, Zhao Li（Department of Radiology, Daping Hospital, The Third Military Medical University, Chongqing 400042, China）Abstract：Objective To establish the model of human glioma orthotopic implantation in nude mice，and investigate 1.5T magnetic resonance in the detection of transplanted tumor. Methods The glioma cell line SHG-44 was cultured in vivo. The glioma cells were injected into nude mice brain using micro-syringe to form glioma. Fifteen days later, nude mice were scaned by 1.5T MR with animal-coil to detect the tumor. Tumor volume was measured in AW4.3 imaging workstation. Then take brain tissue biopsy done with HE staining and CD34 staining. Tumor volnme was measure under microsope to evaluated the relativity with the dates in MR imagings. Results Two nude mice were dead in perioperative, the other thirteen mice survive and be detected tumor in bran by MR scanning with contrast injected. The location in MRI isconsistent withthat in tissue section. Tumor volume is 29.41±10.95mm3measured by MRI and is 26.57±9.70mm3 measured under microsope. There is no significant difference（P＞0.05）but significant correlation（r =0.985）. Conclusion It is easy and convenient using micro-syringe directly to establish the human glioma orthotopic implantation model in nude mice. 1.5T MR can detect the tumor in mouse brain in vivo, and to carry out certain functional imaging. 1.5T MR is an effective way to dynamic monitor the occurrence and development of glioma in nude mice.Key word：Nude mice；Glioma；Orthotopic implantation；Magnetic resonance imaging胶质瘤是脑内最常见、浸润性最强的一种原发性脑肿瘤，临床治疗效果差，病死率很高。

人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立叶园英;黄煜;颜莉莉;赵淑萍;张磊;刘倩倩【摘要】目的：建立人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型。

方法培养人子宫内膜癌细胞系Ishikawa，制成肿瘤细胞悬液，于裸鼠（10只）右侧肩胛背部皮下注射，每只裸鼠注射约1×107个细胞。

接种后每日观察裸鼠精神、活动、饮食、排便等状况及是否有肿瘤生长、肿瘤生长速度等。

以接种部位可见或触及肿瘤小结节为成瘤标准，若第一次移植失败则考虑行二次瘤细胞接种。

发现肿瘤生长后每3 d计算肿瘤体积。

当肿瘤最长径达15 mm或出现皮肤破溃时，立即处死荷瘤裸鼠；否则于接种第49天将荷瘤裸鼠处死、剥出肿瘤，测量瘤体长径，称取瘤体质量。

取肿瘤组织切片后行HE染色，观察肿瘤组织病理变化。

结果有1只裸鼠第一次接种失败，在第二次接种后移植成功，一次成瘤率为9／10。

在接种第40天和第46天各发现1只裸鼠瘤体表面皮肤破溃，发现后脱颈处死荷瘤裸鼠，测得肿瘤最长径分别为12．2、12．6 mm，肿瘤体积分别为505．14、510．30 mm3，肿瘤质量分别为0．88、0．86 g；至接种第49天，存活的7只裸鼠移植瘤瘤体表面皮肤完整，无破溃缺损，处死裸鼠后完整剥离肿瘤，测得肿瘤最长径为11．7～14．0 mm，瘤重0．86～1．23 g。

取移植瘤组织进行病理检查，肿瘤组织大体表现与镜下表现符合人子宫内膜癌的特点。

结论采用将Ishikawa细胞株接种于裸鼠右侧肩胛皮下的方式成功建立人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型，且移植瘤组织和细胞保留了人子宫内膜癌的病理特征。

【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2016(056)035【总页数】3页(P28-30)【关键词】子宫内膜癌;Ishikawa细胞株;子宫内膜癌移植瘤;动物模型【作者】叶园英;黄煜;颜莉莉;赵淑萍;张磊;刘倩倩【作者单位】青岛市妇女儿童医院，山东青岛266000; 青岛大学;青岛市妇女儿童医院，山东青岛266000; 青岛大学;青岛大学;青岛市妇女儿童医院，山东青岛266000; 青岛大学;青岛市妇女儿童医院，山东青岛266000;青岛市妇女儿童医院，山东青岛266000; 青岛大学【正文语种】中文【中图分类】R737.33子宫内膜癌是女性生殖道三大恶性肿瘤之一，病死率仅次于卵巢癌，发病率逐年上升[1，2]。

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1.细胞准备：
1.1用PBS 清洗细胞两遍，加入胰酶消化，吹打离心，无血清培养基清洗两次，
然后用无血清培养基将细胞重悬，进行细胞计数，使得200μL 悬浮液里面含有1×107个细胞。

总共需要细胞: 18（只）*200ul*1.2=4.32ml×107个，将混合好的细胞放于4°C冰盒运至动物房。

2.裸鼠准备：
2.1 3周龄小鼠饲养一周后，每只于右侧腋腹壁皮下接种MDA-MB-231和MCF-7细胞1×107/200μ L。

每日观察肿瘤生长情况, 待出瘤后使用游标卡尺测量肿瘤体积, 肿瘤体积=(D×d 2 )/2(D表示肿瘤的长径, d 表示肿瘤的短径)。

（注射器型号BD一次性使用无菌胰岛素注射器规格：1ml 25G）
2.2 当肿瘤体积约为80 mm 3 时(100至150左右)，将裸鼠进行随机分成3 组（肿瘤大小，体重尽量接近），每组3只。

对照组，TO901317组，DADS组。

连续注射两周。

（12号灌胃针头，每次用后一定要煮沸消毒）（灌胃进针时针头偏右，一般就不会进肺了）
腹腔注射DADS，剂量为50mg/kg (含10%小牛血清的D ME M培养液（最好使用生理盐水）)每次注射200 μL , 隔日注射, 连续7次给药。

2.3每2～3d观察测量1次, 计算肿瘤相对体积(RTV)。

以每组动物移植瘤体积的平均值, 绘制移植瘤生长曲线。

备注：
1. 裸鼠饲养情况裸鼠有专门的SPF饲养动物房，买裸鼠前动物住的盒子、垫料、水和饲料要消毒。

提前准备好，一般送裸鼠的单位会配备专门的SPF箱子，接到裸鼠后在专门裸鼠动物房进行交接。

这个有个通风台也要提前消毒预备好。

裸鼠到达目的饲养地后一般是饲养1-2周才开始试验，这也是国际上的通行规定。

盒子要每2-3天消毒一次，根据裸鼠的排泄情况而定，所以要有替换的盒子。

一般来说各个医院的动物房这些盒子比较紧缺，需要提前计算好。

别到时候需要更换的时候找不到盒子。

2.动物接种数量根据你离心后细胞计数的数量。

然后是用多少的液体稀释，一般是PBS。

如果你培养后经
过离心收集到的细胞总数是1*108次方。

也就是10*107次方/5×106个= 20个。

那你可以稀释到4ml，每次给予0.2ml，正好可以接种20只裸鼠。

根据肿瘤细胞的类型和你所给予的干预情况，一般接种3周瘤子可以达到0.5-1.2cm左右。

用左手揪起来一块皮，然后在揪起来的皮和身体之间那里注射，就是皮下而不是皮内了
先把针头插进去，然后挑起来，看清楚不是体内而是皮下，也没有戳穿皮肤，然后再开始注射
裸鼠的皮皱皱的，很容易揪起来一块，如果不麻醉就是用手拎着注射针头很容易戳到别的地方
放在4度30~40分钟对细胞活力影响不大。

用哪种液体悬浮细胞也都行，用无血清培养基效果可能会好一点点。

应该是用PBS或HANKS液处理的,建议不要用无血清培养基或者其他培养液.里头成分复杂:
1,虽然裸鼠免疫缺陷,但是培养基成分复杂,有时还会有致敏原什么的,引起不必要的麻烦.
2,只要能够维持一定的渗透压,持续一个小时肯定是没有问题的,这点PBS或HANKS液就够了,而且影响因素少.
裸鼠对于实验环境又很敏感，特别是在给予药物处理之后。

不知道大家给药的灌胃器或注射器是否消毒？药液是否无菌过滤？
3、操作是否严格
我们以前也会遇到这样的情况，我们现在对于裸鼠的操作都在超净台里进行（包括对于饲养人员的换水换料也是在超净台里进行的），对不同笼子的动物进行操作的时候要用酒精擦手。

平时多注意对裸鼠的观察如果有异常表现如体重忽然下降、弓背、皮屑增多，应马上对其进行隔离观察。

总之一定要多观察细节，对于打架的动物也应及时隔离。

4、环境因素
我个人认为这个是最重要的，首先免疫缺陷鼠应在单独的SPF级房间内进行饲养绝对不能和其它非免疫缺陷鼠在同一个房间内时行饲养，并且减少人员流动，物品进出屏障一定要严格消毒，只有大家共同维护好环境才是保障实验成功的关键。

我碰到过裸鼠身上起白皮，体重也下降挺严重的，一是动物质量的问题，二是有感染某种菌，三可能是药物的作用。

我当时也是在做药效中发生的，没有太好的方法，我就是每次做时用酒精棉球擦拭全身，不过还是可以恢复的，好后与正常鼠没区别。

其实裸鼠很强壮，没有想象中那么娇嫩，但是最怕鼠肝炎，所以要在隔绝与正常大小鼠的直接或者间接接触上下功夫。

其实极端一点的情况，只要操作者没有去接触普通大小鼠的话，直接裸手去接触裸鼠做实验都不太会引起什么问题。

裸鼠移植瘤方法建立