超高压液相色谱-高分辨飞行时间质谱仪校验方法
液相色谱-质谱联用仪校准规范
ICS备案号：JJF XXXX －XXXX液相色谱-质谱联用仪校准规范Calibration Specification for Liquid Chromatography — Mass SpectrometersXXXX-XX-XX 发布 XXXX-XX-XX 实施福建省质量技术监督局 发布Calibration Specification for LiquidChromatography —Mass spectrometers本规程经福建省质量技术监督局于XXXX年XX月XX日批准，并自XXXX年XX月XX日起施行。
归口单位：起草单位：福建省计量科学技术研究所本规程技术条文由起草单位负责解释本规范主要起草人：参加起草人：目录1 范围 (1)2 引用文献 (1)3 术语和计量单位 (1)4 概述 (2)5 计量性能要求 (3)6 校准条件 (3)6.1实验室环境要求 (3)6.2 标准物质和试剂 (4)6.3 校准设备 (4)7. 校准项目和校准方法 (4)7.1外观及功能性检查 (4)7.2校准方法 (5)8 校准结果的处理 (8)9. 复校时间间隔 (8)附录A校准证书内页格式（供参考） (9)附录B校准记录格式 (10)附录C不确定度评定 (12)附录D碘化铯钠（NaI.CSI）离子质量 (13)液相色谱－质谱联用仪校准规范1 范围本规程适用于离子阱（QIT）、单级四极杆(Q)和三重四级杆(Q-Q-Q)液相色谱—大气压离子化质谱联用仪（Liquid Chromatography —Atmospheric Pressure Ionization Mass Spectrometers，简称LC-APIMS）的校准。
其他类型LC-MS的校准检测可参照此规范进行。
2 引用文献GB/T 6041-2002 《质谱分析方法通则》JJG（教委）003-1996《有机质谱仪检定规程》JJS K0136-2004 《高效液相色谱法-质谱分析法一般规则》使用本规范时，应注意使用上述引用文献的现行有效版本。
超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱
超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱
超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱（UPLC-QTOF-MS）是一种
综合性的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
该技术将
高效液相色谱（UPLC）和四极杆-飞行时间质谱（QTOF-MS）相结合，
具有分离技术分辨率高、分析方法灵活、精确度高、基质干扰小等优点。
UPLC是一种高效液相色谱技术，其分离柱颗粒大小通常为1.7微米，比传统的HPLC柱颗粒小得多，因此具有更高的分离能力和更快的
分离速度。
QTOF-MS则是一种高分辨质谱技术，具有高精度、高分辨率、高灵敏度和高通量等特点。
QTOF-MS通过对物质的分子离子进行加速、分离和检测，可以得到物质的分子式、分子量和结构信息。
UPLC-QTOF-MS技术结合了两种先进的技术，可以实现快速、准确地分离、鉴定和定量各种样品中的化合物。
在医疗保健领域，UPLC-QTOF-MS技术可以用于快速筛选和鉴定化合物中的生物标志物，为疾病诊断和治疗提供重要依据。
同时，在药物研发方面，该技术可以快速
鉴定化合物的结构、性质和代谢产物，为新药研发提供重要信息。
总的来说，UPLC-QTOF-MS技术是一种高效、精确的分析技术，已经被广泛应用于化学、生物、医药等领域。
该技术的广泛应用将为相
关科研、工业和医疗保健领域提供更为准确和精密的分析手段。
超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱
超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）是一种高级的质谱技术，结合了超高效液相色谱（UPLC）和飞行时间质谱（Q-TOF-MS）两种先进的仪器技术。
以下是对这一技术的解析：1.UPLC：超高效液相色谱是高效液相色谱（HPLC）的进化版本，它具有更高的分辨率、更快的分离速度和更小的样品用量。
UPLC使用更小粒径的柱和更高的操作压力，可以实现更高的分离效率。
2.Q-TOF-MS：四级杆串联飞行时间质谱是一种质谱仪器，包括四级杆（Quadrupole）、离子漂移室（Ion Mobility）和飞行时间质谱仪。
Q-TOF-MS 能够以高灵敏度和高分辨率检测样品中的离子，并通过测量飞行时间来确定其质荷比。
3.UPLC-Q-TOF-MS：将UPLC与Q-TOF-MS结合，可以实现高效的色谱分离和高分辨率的质谱分析。
这种组合能够提供详细的化合物分析，包括准确的质量测定、离子碎片的信息，以及高灵敏度的检测。
4.应用领域：UPLC-Q-TOF-MS 在药物分析、代谢组学、蛋白质组学、环境分析等领域得到广泛应用。
它可以用于对各种复杂样品的全面分析，有助于识别未知化合物、量化目标分子，并研究化学反应、生物代谢等过程。
5.优势：UPLC-Q-TOF-MS相对于传统的方法具有更高的分析速度、更高的分辨率、更好的敏感性和更少的样品消耗。
这使得它成为许多科研领域和实验室中的首选分析工具之一。
总体来说，UPLC-Q-TOF-MS是一种高级的分析技术，适用于对复杂混合物中化合物的详尽分析，为化学、生物和环境科学领域提供了强大的工具。
国家计量检定规程超高效液相色谱串联质谱仪
国家计量检定规程超高效液相色谱串联质谱仪超高效液相色谱串联质谱仪（UPLC-MS）是一种高级的分析仪器，能够同时提供高分辨率和高灵敏度的分析结果。
在国家计量检定中，UPLC-MS的规程对该设备的性能参数进行了详细说明，以确保其在实际使用中能够准确可靠地进行质量检测和分析。
首先，UPLC-MS的规程对设备的基本技术参数进行了明确的要求。
例如，对于UPLC部分，规程要求设备能够实现高效的分离和分析，具有高分辨率和灵敏度；同时对于MS部分，规程要求设备具有高质量的质谱分辨率和灵敏度，能够准确识别和定量分析目标化合物。
此外，规程还对UPLC-MS的自动化控制、数据采集和处理等功能进行了详细的要求。
其次，国家计量检定规程对UPLC-MS的检定程序和方法进行了规范。
在检定程序方面，规程要求在检定之前需进行设备的保养和校准，确保设备在良好的工作状态下进行检定。
在检定方法方面，规程要求采用标准样品进行检定，确定设备的灵敏度、分辨率、线性范围、定量极限等性能参数，并对检定结果进行准确的数据分析和评价。
另外，国家计量检定规程还对UPLC-MS的使用和维护进行了要求。
在使用方面，规程要求设备在使用过程中需进行严格的操作规程，保证质量检测结果的准确性和可靠性；在维护方面，规程要求对设备进行定期的维护保养，并记录相关的维护和保养情况，以确保设备的长期稳定性和可靠性。
总之，国家计量检定规程对UPLC-MS的性能参数、检定程序和方法、使用和维护等方面进行了详细的规范和要求，以确保该设备在实际使用中能够准确可靠地进行质量检测和分析。
符合国家计量检定规程的UPLC-MS能够为国家各个领域的质量检测和分析提供可靠的技术支持和保障。
超高压液相色谱-高分辨飞行时间质谱仪检定报告.
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质谱条件 Parameter Capillary
Sampling Cone
Setting
Source Offset Source Temperature Desolvation Temperature
Cone Gas Desolvation Gas
2.8 检定结果
平均信噪比 峰面积的平均标准偏
2.2 气源供给
2.3 电源供给
2.4 调节旋钮、开关、指示灯等
2.5 检测器名称
2.6 检查条件 液相条件
Parameter Run time Pressure limit low Pressure limit high Seal Wash Gradient start Solvent A1 Solvent B1
差 质量测定准确度 保留时间重复性
正离子模式
2.9 对应色谱质谱图编号
负离子模式
3 结论
检 定：_______________ 审 核：_______________ 批 准：_______________ 检定日期：_______________
超高压液相色谱-高分辨飞行时间质谱 仪
检定报告
仪器名称： 出厂编号： 内部编号： 检定周期：
_____________超高压液相色谱-高分辨飞行时间质 谱仪
________________年检定报告 1 环境条件 天气： 室温： ℃ 大气压：
kPa 相对湿度： %
2 运行检查记录 2.1 外观和标志
高压液相色谱仪校准方法说明书
高压液相色谱仪校准方法说明书1. 引言高压液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于制药、化工、环境监测等领域。
为了确保HPLC分析结果的准确性和可靠性，校准方法的正确应用至关重要。
本说明书旨在提供一种可行的HPLC校准方法，以供操作人员参考和实施。
2. 原理介绍HPLC校准方法是通过与已知标准物质相比较，校正和调整仪器参数，使仪器能够准确测量待分析样品中的目标化合物。
HPLC校准常用的标准物质包括纯品标准溶液和外标法的校准溶液。
3. 实验器材和试剂准备3.1 实验器材：- HPLC色谱仪以及相关附件- 保留色谱柱和固定相- 进样器和检测器- 注射器和样品瓶- 色谱柱温度控制装置（如适用）3.2 试剂准备：- 纯品标准物质（待分析目标化合物的纯品）- 溶剂（选择适合的溶剂，如甲醇、乙酸乙酯等）4. 校准方法步骤4.1 色谱柱准备- 检查色谱柱的状态和使用记录，确保没有损坏或串柱的情况发生。
- 根据分析需求选择和安装合适的保留色谱柱和固定相。
- 洗脱色谱柱，并将色谱柱与仪器连接。
4.2 仪器参数设置- 打开HPLC色谱仪的电源，并确保仪器处于正常工作状态。
- 设置分析条件，包括流速、温度、检测器波长等。
根据不同的分析要求进行相应的参数调整。
4.3 样品制备与进样- 准备待分析样品，确保样品溶解度适当，避免堵塞色谱柱。
- 验证校准溶液的浓度并稀释，使其适用于实际分析。
- 使用注射器将样品注入进样器，并设置相应的进样体积。
- 开始进样，确保样品自动加载完整。
4.4 校准曲线的建立- 准备一系列浓度不同的标准溶液，包括纯品标准溶液和外标法的校准溶液。
- 依次注入标准溶液，记录峰面积或峰高的数值。
- 绘制校准曲线，采用目标化合物的峰面积或峰高作为纵坐标，标准溶液的浓度作为横坐标。
4.5 仪器校准和验证- 使用校准曲线进行仪器校准，根据校准曲线的结果调整仪器的灵敏度和准确性。
- 进行系统适应性测试，验证仪器的稳定性和重复性。
药物分析中的超高效液相色谱飞行时间质谱技术研究
药物分析中的超高效液相色谱飞行时间质谱技术研究在药物分析领域，高效、准确的分析方法对于药物的研究和开发具有重要意义。
其中，超高效液相色谱飞行时间质谱技术（Ultra-High Performance Liquid Chromatography Time-of-Flight Mass Spectrometry，简称UHPLC-TOF-MS）作为一种先进的分析方法，近年来在药物分析中得到广泛应用。
本文将对UHPLC-TOF-MS技术在药物分析中的研究进展进行探讨。
一、UHPLC-TOF-MS技术简介UHPLC-TOF-MS技术是将超高效液相色谱（Ultra-High Performance Liquid Chromatography，简称UHPLC）与飞行时间质谱（Time-of-Flight Mass Spectrometry，简称TOF-MS）相结合的分析方法。
UHPLC 是一种高效的色谱技术，具有高分离能力、高灵敏度和高速分析等特点。
而TOF-MS则是一种质谱技术，能够快速获得样品中各种化合物的质谱图谱和分子量信息。
将两者结合，可以充分发挥各自的优势，提高分析效率和准确性。
二、UHPLC-TOF-MS技术在药物分析中的应用1. 药代动力学研究药物在人体内的代谢和排泄过程对于药物的疗效和安全性具有重要影响。
UHPLC-TOF-MS技术可以快速、精确地确定药物及其代谢物在体内的浓度变化，揭示药物在人体内的代谢途径和动力学特性。
通过研究药代动力学，可以帮助科研人员更好地了解药物在体内的行为，提高药物疗效和降低药物副作用。
2. 药物残留分析药物残留是指在食品、环境和生物组织中残留的药物及其代谢产物。
这些残留物可能对人类健康和环境造成潜在威胁。
UHPLC-TOF-MS技术可以对食品、水样和环境样品中的药物残留进行分析，实现对于不同样品中药物残留水平的准确检测和定量。
这对于食品安全监管和环境保护具有重要意义。
超高效液相飞行时间质谱原理
超高效液相飞行时间质谱原理
超高效液相飞行时间质谱结合了超高效液相色谱（UHPLC）和飞行时间质谱（TOFMS）两种技术，具有高灵敏度、高分辨率和高分析速度的特点。
其原理如下：
1.超高效液相色谱（UHPLC）：UHPLC是一种色谱技术，其利用高压系统和细小粒径的填充物，使得样品在极短的时间内得到分离。
这种高效的分离能力使得待测物质迅速通过色谱柱，并且可以更好地分辨和定量目标分子。
2.飞行时间质谱（TOFMS）：TOFMS是一种质谱技术，它利用飞行时间原理测定样品分子离子在电场作用下飞行所需的时间。
由于具有高灵敏度和高分辨率，TOFMS可以精确地确定待测物质的分子质量。
3.联合应用：UHPLC-TOFMS将UHPLC与TOFMS结合，前者提供高效的分离，后者提供高灵敏度的质谱分析。
当样品通过UHPLC分离后，进入TOFMS进行离子化和质谱分析，可以获得高分辨率、高灵敏度的分析结果。
同时，由于其分析速度快，因此适用于高通量的分析需求。
(2021年整理)超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱联用仪
（完整）超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱联用仪编辑整理：尊敬的读者朋友们：这里是精品文档编辑中心，本文档内容是由我和我的同事精心编辑整理后发布的，发布之前我们对文中内容进行仔细校对，但是难免会有疏漏的地方，但是任然希望（（完整）超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱联用仪）的内容能够给您的工作和学习带来便利。
同时也真诚的希望收到您的建议和反馈，这将是我们进步的源泉，前进的动力。
本文可编辑可修改，如果觉得对您有帮助请收藏以便随时查阅，最后祝您生活愉快业绩进步，以下为（完整）超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱联用仪的全部内容。
附件：技术参数一、超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱联用仪1。
应用范围:系统主要用于有机化合物的定性和定量分析.可分别通过多目标未知物筛查流程、完全未知物筛查流程等来开展未知物的发现和鉴定工作；还可以开展药物代谢、代谢物鉴定和代谢组学研究等.2。
工作环境条件:2。
1 电源：230Vac,10%，50/60Hz，30A.2。
2 环境温度:15 ~ 26C。
2.3 相对湿度：20 ~ 80％。
3。
总体要求：3。
1 该系统基本组成包括超高效液相色谱部分和具有超高灵敏度、超快扫描速度的落地式高频四极杆—飞行时间串联质谱仪部分。
仪器由计算机控制、配有独立的ESI和APCI离子源。
软件包括仪器调节、数据采集、数据处理、定量分析和报告。
3.2 仪器灵敏度要高，性能稳定，重复性好。
3.3 国际知名质谱公司（10年以上商品化四极杆—飞行时间质谱生产经验)推出的主流产品，产品全部为原装进口，其性能达到或超过以下要求。
4. 质谱性能指标:4.1 离子源：配有电喷雾离子源（ESI)、大气压化学电离源（APCI），离子源切换方便、快速，清洗、维护方便。
4。
1.1 插拔式可互换ESI及APCI喷针，可实现ESI源及APCI源的快速更换。
4。
1。
2 大气压离子源采用锥孔结构，使用气帘气技术，而无毛细管（半径〈1mm）设计装置，以同时保持高灵敏度和优异的抗污染能力。
高分辨飞行时间液质联用仪使用方法
高分辨飞行时间液质联用仪使用方法高分辨飞行时间液质联用仪 (HRMS-LC) 是一种先进的质谱分析仪器，可以对复杂的样品进行高效的分离和分析。
本文将介绍 HRMS-LC 的使用方法，包括样品制备、仪器设置、数据采集和数据分析等方面。
下面是本店铺为大家精心编写的5篇《高分辨飞行时间液质联用仪使用方法》，供大家借鉴与参考，希望对大家有所帮助。
《高分辨飞行时间液质联用仪使用方法》篇1一、样品制备HRMS-LC 的分析对象是液态样品，因此需要将固态或气态样品转化为液态样品。
一般可以通过将样品溶解在适当的溶剂中来实现。
样品制备的过程中需要注意以下几点:1. 选择合适的溶剂：溶剂的选择应根据样品的性质来确定，既要能够溶解样品，又要能够与 HRMS-LC 的离子源相容。
常用的溶剂有甲醇、乙腈、水等。
2. 样品的溶解度：样品在溶剂中的溶解度应足够高，以确保样品能够被完全溶解并注入到 HRMS-LC 中进行分析。
3. 样品的处理：在样品制备的过程中，需要对样品进行充分的搅拌和超声处理，以确保样品均匀溶解，并且不会出现沉淀或析出现象。
二、仪器设置HRMS-LC 的仪器设置包括以下几个方面:1. 离子源:HRMS-LC 的离子源一般采用电喷雾离子源 (ESI) 或大气压化学离子源 (APCI)。
在选择离子源时，需要根据样品的性质来确定。
2. 质谱仪:HRMS-LC 的质谱仪通常采用傅里叶变换离子质谱仪(FT-ICR) 或线性离子阱质谱仪 (LIT)。
不同的质谱仪具有不同的质量分辨率和检测器灵敏度，需要根据分析要求来选择。
《高分辨飞行时间液质联用仪使用方法》篇2高分辨飞行时间液质联用仪（HRMS-LCMS）是一种先进的质谱分析仪器，它可以将液相色谱（LC）和质谱（MS）技术结合起来，实现对复杂样品的高分辨率质谱分析。
以下是使用高分辨飞行时间液质联用仪的一般步骤：1. 样品制备：根据样品的性质和分析要求，选择合适的样品制备方法。
高分辨飞行时间液质联用仪使用方法
高分辨飞行时间液质联用仪使用方法：高分辨飞行时间液质联用仪（High-Resolution Time-of-Flight Mass Spectrometry, HR-TOF-MS）是一种先进的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域的研究中。
本文将介绍高分辨飞行时间液质联用仪的使用方法，帮助用户正确操作并获取准确的实验结果。
一、仪器准备1. 将高分辨飞行时间液质联用仪置于相应的实验室台架上，并将其连接至电源和气源。
2. 打开仪器电源，待仪器启动完成后，进行系统初始化，确保各个部件运行正常。
二、样品制备1. 根据实验需要，准备待测样品，并将其置于质谱仪样品盘中。
2. 样品的制备方法应根据具体实验目的和分析对象的特点进行优化，以提高实验结果的准确性和重现性。
三、仪器设置1. 打开质谱软件，并选择相应的分析模式和参数设置。
2. 根据实验需求，设置离子源温度、电压、毛细管电压等参数，以保证分析过程的稳定性和精确性。
四、质谱分析1. 点击软件中的“开始”按钮，启动质谱分析过程。
2. 在分析过程中，观察并记录监控指标的变化情况，如质谱图谱、离子通量等。
3. 根据实验需要，可在分析过程中进行数据采集和实时分析，并根据实验结果调整相关参数。
五、数据处理与解读1. 在质谱软件中，对获取的原始数据进行预处理和峰识别。
2. 利用质谱库和相关数据库进行数据比对和解读，以确定样品中的化合物成分。
3. 对数据进行统计分析和数据可视化处理，以便更好地理解和解释实验结果。
六、实验结束1. 在实验完成后，关闭质谱仪和相关设备，并按照实验室规定进行设备的整理和清洁。
2. 将实验数据进行备份和保存，以便后续的分析和验证。
通过以上步骤，我们可以正确地操作高分辨飞行时间液质联用仪，并获取准确的实验结果。
然而，对于初次使用该仪器的用户来说，还应不断学习和探索，以熟练掌握仪器的操作技巧，并结合实际实验情况对操作方法进行优化和改进。
高分辨飞行时间液质联用仪使用方法(一)
高分辨飞行时间液质联用仪使用方法(一)高分辨飞行时间液质联用仪使用方法简介高分辨飞行时间液质联用仪（High-resolution Time-of-flight Liquid Chromatography-Mass Spectrometry，简称HR-TOF LC-MS）是一种高灵敏度的分析仪器，广泛应用于药物研发、环境监测等领域。
本文将详细介绍HR-TOF LC-MS的使用方法。
准备工作在使用HR-TOF LC-MS之前，需要做一些准备工作：1.确保仪器的正常运行状态，并进行系统校准。
2.准备好待测样品，并按照样品制备方法进行预处理。
样品进样HR-TOF LC-MS使用前，需要将样品进样至仪器中进行分析。
进样的方法有以下几种：•自动进样器进样：将待测样品注入自动进样器中，设置相应进样参数，通过仪器控制软件实现自动进样。
•手动进样：使用微量注射器或微量移液管手动取一定量的样品，再通过进样口进样。
液相色谱条件设置液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是HR-TOF LC-MS的一部分，需要根据样品的特性进行条件的设置。
•色谱柱选择：根据样品的特性，选择合适的色谱柱，例如反相柱、离子对柱等。
•流动相选择：根据样品的溶解性和分离需求，选择合适的流动相组成。
•流速设定：根据分离效果和分析时间的要求，设定合理的流速。
•温度控制：对需要控制温度的样品，可以设置柱温或流动相温度。
质谱条件设置HR-TOF LC-MS的质谱部分是通过飞行时间质谱（Time-of-flight Mass Spectrometry，简称TOF-MS）实现的。
•离子源设置：根据需要，选择正离子模式（PositiveIonization Mode）或负离子模式（Negative IonizationMode）。
•离子源参数设置：设置离子源的参数，例如母离子质量、碰撞能量等。
•质量分析器设置：设置TOF质量分析器的参数，例如离子束角度、离子反射器设置等。
超高效液相色谱质谱联用仪的操作步骤
超高效液相色谱质谱联用仪的操作步骤超高效液相色谱质谱联用仪（UHPLC-MS）是一种高级分析仪器，能够以高效、快速和准确的方式对化合物进行分离和鉴定。
操作UHPLC-MS需要一系列的步骤来确保实验的可靠性和准确性。
本文将详细介绍UHPLC-MS的操作步骤。
1. 仪器准备在开始操作UHPLC-MS之前，需要进行仪器的准备工作。
首先，确保仪器处于正常工作状态，检查液相色谱（UHPLC）部分和质谱（MS）部分的连接是否稳固。
然后，检查各个部件的状态，例如溶剂瓶、进样器、色谱柱等，确保其都处于良好的工作状态。
2. 样品准备在进行UHPLC-MS分析之前，需要准备待测样品。
根据待测物的性质选择合适的提取方法，例如固相萃取、液液萃取等。
将样品处理至合适的浓度和体积，以确保分析结果的准确性和灵敏度。
3. 仪器设置在进行UHPLC-MS实验之前，需要对仪器进行一系列参数的设置。
首先，设置流动相的组成和流速，在UHPLC部分确保色谱柱的温度和压力达到合适的状态。
然后，对质谱部分进行一些设置，例如离子源的温度、电压等。
通过这些设置，能够最大限度地提高分析的效率和分辨率。
4. 质控样品运行在正式分析样品之前，运行质控样品进行仪器的校准和质量控制。
通过使用已知浓度的标准品，可以验证仪器的准确性和灵敏度。
此步骤的目的是确保分析的准确性和可靠性。
5. 样品进样与分离将样品注入进样器，并按照预设的方法对样品进行分离。
在进样器中，设置合适的体积和时间，以确保样品的充分进样。
然后，样品通过色谱柱进行分离，分离条件根据样品的性质和需求进行优化。
通过这一步骤，能够将复杂的样品分离成单一的化合物，为后续的质谱分析做好准备。
6. 质谱分析在分离后的化合物进入质谱部分进行鉴定和定量。
根据样品的性质选择合适的质谱检测模式，例如正离子模式或负离子模式。
通过设置离子源和质谱仪的参数，将化合物转化为离子并进行质谱分析。
质谱分析可以提供化合物的分子量、结构等信息，从而确认化合物的身份。
超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法定性定量检测硫化胶中促进剂DPG
第 2 期温 劭等．超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法定性定量检测硫化胶中促进剂DPG 151超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法定性定量检测硫化胶中促进剂DPG温 劭，张清智，吴爱芹（青岛思通检测技术有限公司，山东青岛266045）摘要：利用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法，以乙腈＋水（含体积分数为0.000 3的甲酸）为流动相进行梯度洗脱，采用ESI正离子模式，对硫化胶中促进剂DPG进行定性定量分析。
结果表明，在质量浓度为1～1 000ng·mL-1范围内，促进剂DPG溶液标准曲线线性关系良好，相关因数为0.993，检出限为0.01 ng·mL-1，回收率为94.0%～100.5%。
关键词：超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱；促进剂DPG；定性分析；定量分析中图分类号：TQ330.7＋2；TQ330.38＋5 文章编号：1000-890X（2019）02-0151-04文献标志码：A DOI：10.12136/j.issn.1000-890X.2019.02.0151促进剂DPG为二苯胍类促进剂，主要作为中速促进剂用于橡胶，常与噻唑类、秋兰姆类及次磺酰胺类促进剂配合，具有品种少、用量小的特点，但又不可或缺，是橡胶硫化促进剂重要品种之一。
促进剂DPG可提高白炭黑与偶联剂硅烷化反应的效率，随着绿色轮胎的发展，白炭黑被广泛应用于轮胎工业，促进剂DPG保持一种长期需求增长的势头[1-4]。
目前，常用高效液相色谱（HPLC）法[5]测定硫化胶中促进剂DPG含量，但在实际检测中，因硫化胶成分复杂且互相干扰较大，加之促进剂DPG极性较强，在常规C18色谱柱上保留能力差，与溶剂及其他小分子物质重叠时较难分离，定量结果易产生误差；同时，色谱类仪器均仅以保留时间定性，存在一定的误判。
高分辨飞行时间质谱具有高分辨率、高灵敏度等特点，可利用保留时间、一级质谱及二级碎片的准确质量数、离子丰度等手段对化合物进行准确定性，同时也可利用标准品对复杂样品中关注的化合物进行准确定量，定量结果不受基体及相邻或重叠物质干扰。
超高压液相色谱-高分辨飞行时间质谱仪校验方法
超⾼压液相⾊谱-⾼分辨飞⾏时间质谱仪校验⽅法超⾼压液相⾊谱-⾼分辨飞⾏时间质谱仪校验⽅法1 概述本规程适⽤于超⾼压液相⾊谱-⾼分辨飞⾏时间质谱仪周期检定。
2 仪器技术指标2.1 外观和标志：外观应完好⽆损；标志应齐全、清晰。
2.2 ⽓源供给：在正常操作条件下，所有⽓路连接处应⽆泄漏。
2.3 电源供给：电源供给的电压、频率等技术要求应符合仪器说明书的规定。
2.4 性能指标：见表1。
3 运⾏检查技术条件3.1 环境：温度：25℃；相对湿度：20~60%；室内⽆易燃、易爆和强腐蚀性物质，⽆强烈的机械振动和电磁⼲扰。
3.2 安装要求：仪器应平稳⽽牢固的安装在⼯作台上，电缆线的接触件应紧密配合，接地良好。
⽓体管路应使⽤不锈钢管、铜管、聚⼄烯管，禁⽌使⽤橡⽪管。
3.3 标准溶液3.3.1确保流动相中使⽤的⽔与有机相均符合LCMS级别要求。
3.3.2 标准稀释液：混合500mL超纯⽔、50uL甲酸、250uL氨⽔溶液。
混匀并超声。
3.3.3标准样品储备液：Waters（p/n 700008892-4）。
储备液详细参数列于表23.3.4 混合标样1（5pg/uL SDM）：将100uL“标准样品储备液”与1900uL流动相A1/A2充分混合，得到“混合标样1”。
3.3.5混合标样2（1pg/uL SDM）：将200uL“标准样品储备液”与800uL流动相A1/A2充分混合，得到“混合标样2”。
3.4 仪器参数3.4.1 液相系统3.4.1.1分别使⽤⼄腈、甲醇、异丙醇与含有0.2%甲酸⽔溶液prime系统。
3.4.1.2准备流动相A与流动相B。
流动相A：100uL甲酸、500uL氨⽔溶液与1L超纯⽔混合。
流动相B：50uL甲酸与500mL⼄腈混合。
3.4.1.3使⽤流动相A与流动相B分别清洗流动相管理5分钟。
3.4.1.4将ACQUITY UPLC BEH C18 (2.1 x 50-mm, 1.7-µm)⾊谱柱安装⾄液相系统上。
高效液相色谱检测器——高分辨飞行时间质谱仪的研制
质 谱 学 报
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高效液相色谱检测器 " " " 高分辨飞行时间质谱仪的研制
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通讯作者 ! 杨芃原 $ & 男$ 汉族 % & 上海人 & 教授 & 从事高分辨质谱仪研制与蛋白质组学研究 ’1 ( % + 0 +! % $ 2 3 4 5 3 @ B C D 3 @= 8 D C= > @ " ? ; ; A
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质 谱 学 报 """"""""""""""""" 第 ! ( 卷"
摘要 ! 本文研制的质谱仪是具有电喷雾离子源和射频四极杆接口的高分辨飞行 时 间 质 谱 仪 $ 1 I L $ MMM $ N O P $ % ’ 该仪器的特点如下 ( 采用可三维调节 ) 带有加热雾 化 气 的 电 喷 雾 源 液 质 联 用 接 口 ! 采用由三组四极杆 H I 组成 ) 可有效调制离子束的离子光学系统 ! 采用正负双脉 冲 推 斥 和 垂 直 引 入 方 式 ! 采用经优化设计的二级有 网反射器 ’ 该仪器分辨本领优于 % $ & 质量测定精度优于% %" " " P C 5 5Q 4 D 9 <3 9R 3 5 BH 3 S 4 2 C 2& PQRH% "T 最低检测限低于 ,B * % "U’ & 2 : 5 V’ 可作为高效液相色谱优良的质谱检测器 ’ # 关键词 ! 飞行时间质谱 ! 电喷雾 ! 高效液相色谱检测器 中图分类号 ! $ % O ’ # (= ’ ,! O ’ 0 0"" 文献标识码 ( *"" 文章编号 ( % " " 0 $ ! + + ( ! " " ’ " , $ % ! + $ " ’
超高效液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱法快速筛查乳制品中磺胺类与氟喹诺酮类药物
DOI :10.11895/j.issn.0253-3820.140299超高效液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱法快速筛查乳制品中磺胺类与氟喹诺酮类药物孟哲1,2 石志红1 吕运开1 孙汉文*11(河北大学化学与环境科学学院,河北省分析科学技术实验室,保定071002)2(宁夏大学能源化工重点实验室,银川753200)摘 要 利用超高效液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱联用技术,建立了一种快速筛查乳制品中8种氟喹诺酮5种磺胺类药物及其4种乙酰化代谢物的新方法㊂采用乙腈-20%三氯乙酸溶液(100∶1,V /V ,pH 2.0)作溶剂和Oasis HLB 固相萃取载体作吸附剂,实现了牛奶样品中17种目标物的同时提取和有效净化㊂利用MassLynx Chromlynx 软件建立了这17种分析物的数据库㊂以Full Scan /MS E 进行定性筛查和定量检测㊂4种代谢物在10~2000μg /L 范围内和其它分析物在0.5~100μg /L 范围内,其基质匹配内标校准曲线呈现良好的线性(R 2>0.983)㊂氟喹诺酮的定量限为0.5~0.8μg /kg,磺胺类药物及代谢物的定量限为0.5~13.0μg /kg㊂在3个添加水平分析物的平均回收率(69%~92%)在职业分析化学家协会(AOAC)提出的允许范围之内,相对标准偏差均小于15%㊂本方法快速而灵敏,成功用于乳制品中抗生素及其代谢物的筛查㊁确认和定量分析㊂所研究的每种药物及代谢物残留均低于有关的最高残留限量(MRLs),但某些乳制品中其总残留量已超过最高残留限量㊂关键词 氟喹诺酮类;磺胺类;超高效液相色谱;高分辨质谱;乳制品2014-04-01收稿;2014-07-04接受本文系国家自然科学基金项目(No.21375032)资助*E-mail:hanwen@1 引 言磺胺类(Sulfonamides,SAs)和氟喹诺酮类(Fluoroquinolones,FQs)同属合成抗菌药物,广泛用于畜牧业中㊂由于抗生素的联合用药,导致多种抗生素在动物组织㊁器官或可食性产品(如蛋㊁奶)中的残留和代谢㊂牛奶中抗生素及其代谢物的残留已引起人们的关注㊂SAs 代谢物乙酰化磺胺在尿中溶解度低,析出结晶质对肾脏损害较大㊂FQs 药物对人体也有一定副作用㊂许多国家和国际组织制定了SAs 和FQs 的最大允许残留限(Maximum residue limits,MRL)[1~3]㊂我国规定牛奶中磺胺二甲嘧啶不得超过0.025mg /kg [3]㊂但关于抗生素代谢物的残留问题还未引起足够重视㊂食品中兽药残留检测已从单一化合物向多种类㊁多化合物及其代谢物的同时定性和定量分析发展[4]㊂测定动物性食品中SAs 或FQs 残留的液相色谱-质谱分析方法[5~7],已经不适用实际样品快速筛查的需要㊂超高效液相色谱,具有更强的分离能力㊁样品通量和灵敏度㊂电喷雾离子源高分辨飞行时间质谱在MassLynx 软件的支持下,可以提供母离子和碎片离子的精确质量数,准确推算可能的分子式,从而进一步对化合物的结构和裂解规律加以确证㊂超高效液相色谱与高分辨-四级杆-飞行时间质谱联用,不仅提高了抗生素及其代谢物残留快速定性筛查的可靠性,同时可以获得较高灵敏度的定量结果[8,9]㊂目前采用该技术进行快速筛查的研究已有报道[10~12],但关于牛奶中抗生素及其代谢物同时筛查及确认的研究报道较少㊂本研究以8种FQs 和5种SAs 及其4种代谢物为对象,利用高分辨四级杆-飞行时间质谱,旨在建立牛奶中FQs 和SAs 及其代谢物快速筛查的方法㊂2 实验部分2.1 仪器与试剂超高效液相色谱仪和高分辨-四级杆-飞行时间质谱仪(美国Waters 公司);TGL-16M 高速冷冻离心第42卷2014年10月分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告Chinese Journal of Analytical Chemistry第10期1493~15004941分析化学第42卷机;MX-F涡流混合器(美国SCILOGEX,LLC公司);SZ-97自动三重水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)㊂沙拉沙星(Sarsfloxacin,SAR)㊁加替沙星(Gatifloxacin,GAT)㊁氧氟沙星(Ofloxacin,OFL)㊁恩诺沙星(Enrofloxacine,ENR)㊁洛美沙星(Lomefloxacin,LOM)㊁环丙沙星(Ciprofloxacin,CIP)㊁依诺沙星(Enoxacin,ENO)㊁诺氟沙星(Norfloxacine,NOR)㊁磺胺嘧啶(Sulfadiazine,SD)㊁磺胺甲噁唑(Sulfamethox-azole,SMX)㊁磺胺甲基嘧啶(Sulfamerazine,SMR)㊁磺胺二甲嘧啶(Sulfamethazine,SMZ)㊁磺胺甲氧嘧啶(Sulfameter,SMT)㊁N4-乙酰磺胺嘧啶(N4-Acetylsulfadiazine,N4-ASD)㊁N4-乙酰磺胺甲噁唑(N4-Acetylsulfa-methoxazole,N4-ASMX)㊁N4-乙酰磺胺甲嘧啶(N4-Acetylsulfamerazine,N4-ASMR)㊁N4-乙酰磺胺二甲嘧啶(N4-Acetylsulfamethazine,N4-ASMZ)标准品和内标物甲苯达唑(纯度>99.0%,美国Sigma-Aldrich公司和加拿大TRC公司);乙腈㊁甲醇㊁乙酸㊁甲酸(HPLC级)和乙酸铵(纯度>99.0%,Dikma公司)㊂正己烷㊁三氯乙酸㊁EDTA(分析纯,国药试剂有限公司)㊂Oasis HLB固相萃取小柱(3mL/60mg,美国Waters公司)㊂2.2 样品前处理取牛奶30mL于50mL具塞离心管,添加0.2mL1.0mol/L EDTA溶液,漩涡混匀,静止10min㊂于6℃以8000r/min离心10min,除去脂层㊂移取3mL牛奶样品于10mL离心管并加入10μL3mg/L内标甲苯达唑,再加入1mL乙腈-20%三氯乙酸(100∶1,V/V,pH2.0)溶液,漩涡混匀1min,以10000r/min离心5min,收集上层清液用正己烷再次除脂㊂提取液转移至已活化的Oasis HLB固相萃取柱,用3mL水淋洗,3mL甲醇洗脱,收集洗脱液于40℃水浴下,氮气吹至近干㊂用甲醇-水(50∶50, V/V)溶解至1mL,过0.22μm滤膜至自动进样瓶,待UPLC-Q-TOF-MS分析㊂2.3 色谱-质谱分析条件UPLC色谱条件:流动相A为0.1%(V/V)甲酸的水溶液,B为0.1%(V/V)甲酸-甲醇溶液㊂梯度洗脱:0~6min,5%B;6~7min,70%B;7~8min,100%B;8~10min,5%B㊂进样量:3μL;流速:0.45mL/min;柱温:40℃;样品温度:10℃;Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(50mmˑ2.1mm,1.7μm)㊂质谱条件:正离子采集模式;毛细管电压3kV;锥孔电压35V;脱溶剂气温度350℃;离子源温度120℃;脱溶剂气流650L/h;锥孔气流50L/h;扫描模式Full Scan/MS E,采集范围m/z100~1000;参比溶液:2μg/L亮氨酸脑啡肽;采集时间0.5s;采集间隔时间10s;扫描精确质量数556.2771(ESI+)㊂3 结果与讨论3.1 色谱-质谱条件的优化3.1.1 色谱条件实验选用UPLC BEH C18色谱柱分析,考察了5mmol/L甲酸胺-甲醇㊁5mmol/L甲酸胺-乙腈㊁0.1%甲酸-甲醇和0.1%甲酸-乙腈4种流动相对FQs㊁SAs及其代谢物的分离㊁离子化效率和峰形的影响㊂甲酸胺体系可以获得较低的背景值,但是SAs及其代谢物响应很低,严重影响检测灵敏度㊂采用甲酸体系时,背景值有所升高,但是17种目标分析物的响应显著增强㊂与乙腈相比,甲醇作为流动相可以获得更好的分离度㊂实验采用0.1%甲酸-甲醇与0.1%甲酸-水作为流动相进行梯度洗脱,4min内实现17种目标分析物的基线分离㊂比较目标分析物在溶剂和在基质溶液中的总离子流色谱图(图1),基质对每一个目标物的离子化信号均有较大的抑制㊂但对保留时间影响很小,偏差为小于0.1min㊂3.1.2 质谱条件FQs和SAs均含有易于和H+结合的带有孤对电子的N或O原子,适合在ESI源的正离子模式下离子化,其准分子离子为[M+H]+㊂考察了毛细管电压㊁锥孔电压㊁碰撞能及脱溶剂气温度等因素的影响㊂毛细管电压为3.0kV㊁锥孔电压为35V及脱溶剂气温度350℃时,目标化合物的响应较强㊂高分辨Q-TOF质谱在Full Scan/MS E模式下能同时完成在低能量通道以母离子为定量离子,又能实现在高能量通道全范围二级质谱的扫描,有助于样品的快速筛查和定量分析㊂3.2 样品前处理方法的选择样品处理前,低温高速离心除脂及EDTA释放残留抗生素同步进行㊂EDTA的加入可以有效地释放牛奶中富含Ca2+和Mg2+络合的残留药物[13]㊂分别以乙腈㊁20%乙酸㊁乙腈-10%三氯乙酸溶液和乙图1 17种目标化合物及其代谢物在标准溶液(a)和基质匹配溶液(b)中的总离子流色谱图Fig.1 Total ion chromatograms monitored with full-scan acquisition for 17analytes in solvent(a)and matrix(b)在溶剂中的出峰顺序(the order of the peaks in solvent)保留时间(Retention time,min):磺胺嘧啶SD (1.49),磺胺甲基嘧啶SMR(1.93),N 4-乙酰磺胺嘧啶N 4-ASD (2.15),磺胺甲氧嘧啶SMT (2.26),磺胺二甲嘧啶SMZ (2.35),氧氟沙星OFL (2.44),依诺沙星ENO (2.46),N 4-乙酰磺胺甲嘧啶N 4-ASMR (2.49),诺氟沙星NOR (2.53),环丙沙星CIP (2.62),恩诺沙星ENR (2.72),磺胺甲噁唑SMX (2.74),洛美沙星LOM (2.79),N 4-乙酰磺胺二甲嘧啶N 4-ASMZ (2.82),沙拉杀星SAR(2.98),加替沙星GAT (3.13),N 4-乙酰磺胺甲噁唑N 4-ASMX (3.44)㊂腈-20%三氯乙酸溶液进行样品提取㊂漩涡混匀1min,高速离心5min,收集上层清液用正己烷再次除脂后,过Oasis HLB 柱㊂4种提取方法对各目标化合物的加标回收率见表1㊂乙腈为提取剂时,大部分目标化合物的回收率高于100%,但重现性较差;20%乙酸为提取剂时,多种化合物的回收率低于50%,且重现性较差;乙腈-20%三氯乙酸溶液(100∶1,V /V ,pH2.0)为提取剂时,所有目标化合物均有较好表1 牛奶基质中,4种提取方法中17种目标化合物的加标回收率(加标水平:50μg /L)Table 1 Recoveries of four extraction methods for seventeen target compounds with spiked level of 50μg /L in milk化合物Compound回收率Recoveries (%)乙腈Acetonitrile20%乙酸20%Aqueous acetic acid 乙腈-10%三氯乙酸Acetonitrile-10%trichloroacetic acid乙腈-20%三氯乙酸Acetonitrile-20%trichloroacetic acid沙拉沙星Sarsfloxacin(SAR)108.3(23)*69.6(17)74.0(14)91.7(12)加替沙星Gatifloxacin(GAT)159.0(16)85.0(21)71.3(16)102.3(10)氧氟沙星Ofloxacin(OFL)105.6(33)47.4(21)56.5(17)87.3(15)恩诺沙星Enrofloxacine(ENR)106.8(28)50.4(14)57.5(14)93.3(10)洛美沙星Lomefloxacin(LOM)88.5(24)41.3(17)58.2(11)85.2(9)环丙沙星Ciprofloxacin(CIP)114.1(25)54.3(18)73.5(10)88.6(11)依诺沙星Enoxacin(ENO)106.2(30)81.8(20)60.0(13)99.4(13)诺氟沙星Norfloxacine(NOR)105.1(21)40.1(18)52.2(14)89.2(9)磺胺嘧啶Sulfadiazine(SD)113.2(17)41.7(15)67.5(9)83.1(11)磺胺甲噁唑Sulfamethoxazole(SMX)155.3(31)65.4(17)64.5(11)118.8(14)磺胺甲基嘧啶Sulfamerazine(SMR)93.5(22)37.9(19)61.1(13)86.1(9)磺胺二甲嘧啶Sulfamethazine(SMZ)103.6(19)53.6(22)63.5(14)102.0(10)磺胺甲氧嘧啶Sulfameter(SMT)125.0(20)81.4(19)65.0(12)115.1(12)N 4-乙酰磺胺嘧啶N 4-Acetylsulfadiazine(N 4-ASD)124.6(17)75.5(24)64.3(17)97.4(11)N 4-乙酰磺胺甲噁唑N 4-Acetylsulfamethoxazole(N 4-ASMX)116.7(15)66.7(13)74.0(13)114.0(9)N 4-乙酰磺胺甲嘧啶N 4-Acetylsulfamerazine(N 4-ASMR)154.5(22)114.9(19)80.6(14)125.3(10)N 4-乙酰磺胺二甲嘧啶N 4-Acetylsulfamethazine(N 4-ASMZ)138.7(16)95.7(18)83.5(11)90.5(12)*注:相对标准偏差(Relative standard deviation (%,n =6))㊂5941第10期孟哲等:超高效液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱法快速筛查乳制品中磺胺类与氟喹诺酮类药物的回收率,并且高于以乙腈-10%三氯乙酸溶液(100∶1,V /V ,pH 3.0)为提取剂时的回收率,且重现性较好㊂实验不仅考察了除脂和用EDTA 释放被分析物对回收率的影响,还进一步考察了利用固相萃取柱净化对所有分析物回收率的影响㊂结果表明,被净化的样品中17种目标化合物的回收率均略高㊂不被净化的样品存在基质干扰,尤其对目标分析物的二级质谱信号干扰较大,不利于阳性化合物的确认㊂最终采用乙腈-20%三氯乙酸溶液(100∶1,V /V ,pH 2.0)为提取剂的固相萃取净化样品前处理方法㊂3.3 线性关系、精密度和回收率采用基质匹配内标法进行定量分析,基质匹配标准溶液和样品溶液具有相似的离子化环境,有利于消除基质效应㊂绘制基质匹配标准曲线,13种抗生素在0.5~100μg /L㊁4种代谢物在10~2000μg /L 范围内呈良好的线性关系,相关系数R 2>0.983㊂方法的检出限(LODs)和定量限(LOQs)范围分别为0.05~3.3μg /kg 和0.5~13.0μg /kg(表2),其远低于欧共体最高残留限(MRL)㊂在一日内不同时间点和不同日期(5日内)测定的日内精密度均小于7.2%,日间精密度均小于13.7%㊂表2 目标分析物的线性方程㊁定量限和精密度Table 2 Linear equation,limit of quantitation (LOQ)and precision of analytes名称Compound 线性范围Linear range (μg /L)线性方程Linear equation 相关系数Correlation coefficient (R 2)定量限Limit of quantitation (μg /kg)日内精密度Intra-day RSD (%)日间精密度Inter-day RSD (%)沙拉沙星Sarsfloxacin 0.5~100Y =3.0525X +0.76890.99430.5 5.410.8加替沙星Gatifloxacin 0.5~100Y =3.6131X +2.02380.99270.5 2.812.0氧氟沙星Ofloxacin 0.5~100Y =4.2581X +10.8130.98300.5 3.411.0恩诺沙星Enrofloxacine 0.5~100Y =4.8419X –0.18030.99470.53.69.8洛美沙星Lomefloxacin 0.5~100Y =7.0632X +4.6690.99400.5 2.911.2环丙沙星Ciprofloxacin 0.5~100Y =3.4397X +2.05160.99270.5 5.09.8依诺沙星Enoxacin 0.8~160Y =3.0704X +1.50730.98750.87.213.7诺氟沙星Norfloxacine 0.8~160Y =2.9253X +0.57800.98950.8 5.211.8磺胺嘧啶Sulfadiazine 0.5~100Y =1.4776X +1.07240.97910.5 3.18.9磺胺甲噁唑Sulfamethoxazole 0.5~100Y =2.5267X +2.86160.98960.5 3.87.5磺胺甲基嘧啶Sulfamerazine 0.5~100Y =4.1818X +4.4070.99110.5 3.7 6.8磺胺二甲嘧啶Sulfamethazine 0.5~100Y =6.7245X +9.9580.99590.5 2.67.2磺胺甲氧嘧啶Sulfameter 0.5~100Y =2.8641X +3.1240.98970.5 5.39.2N 4-乙酰磺胺嘧啶N 4-Acetylsulfadiazine0.5~100Y =1.6299X +0.02220.99220.5 5.38.0N 4-乙酰磺胺甲噁唑N 4-Acetylsulfamethoxazole 13~2600Y =0.1568X +3.30790.992513.0 3.3 6.8N 4-乙酰磺胺甲嘧啶N 4-Acetylsulfamerazine10~2000Y =0.2310X +2.86860.994110.0 2.18.1N 4-乙酰磺胺二甲嘧啶N 4-Acetylsulfamethazine10~2000Y =0.2769X +7.18200.993210.01.66.7利用空白牛奶样品进行加标回收率实验,分别对低(2μg /L)㊁中(20和50μg /L)㊁高(100μg /L)3个添加水平按照2.2节方法处理,每个浓度水平做6份平行样品㊂高㊁中加标水平,FQs 和SAs 及其代谢物的平均回收率>80.0%,相对标准偏差(RSD)<6.6%;低加标水平,FQs 的平均回收率>75%,RSD<10%,而SAs 及其代谢物的平均回收率>60%,RSD<15%㊂表明磺胺类及其代谢物在低浓度水平受基质干扰较大㊂3.4 数据库的建立及筛查在最佳的质谱条件下,源内裂解电压从5V 增至45V,对每一种目标化合物的标准品进行MS /MS 扫描,基于UPLC-QTOF-MS 的高通量筛查研究,采用MassLynx Chromlynx 软件建立了喹诺酮类㊁磺胺类及其代谢物的高通量筛查数据库,其包含目标化合物的保留时间㊁精确分子量㊁同位素峰形匹配度等信息㊂通过空白牛奶样品对17种目标化合物进行加标实验,验证筛查方法的可靠性㊂加标水平为10μg /L 远低于欧盟规定SAs 和FQs 的MRL [1~3]㊂通过比对保留时间㊁精确分子量㊁同位素峰形匹配度等信息结果如表3所示㊂图2为筛查到的17种目标化合物的提取离子色谱图㊂所有17种目标化合物6941 分析化学第42卷的保留时间偏差均小于±0.05min,质量偏差为±5.0mDa,同位素峰形匹配度大于92%㊂利用化合物的特征碎片离子的分子式和精确分子质量,进一步对可疑化合物的结构加以确证,定性准确性很高,准确度达到100%㊂表3 实际牛奶样品的定性筛查结果Table 3 Qualitative screening results of milk sample评分Score 名称Compound 理论质量数Theoretical mass [M+H]+精确质量数Accurate mass [M+H]+误差Error (mDa)保留时间Retention time (min)溶剂Solvent 样品Sample 同位素峰形匹配度Degree of isotope pattern match(%)+++沙拉沙星Sarsfloxacin 386.1315386.1310-0.5 2.98 2.9999.2++加替沙星Gatifloxacin 376.1673376.1631-4.2 3.13 3.1397.4+++氧氟沙星Ofloxacin362.1516362.15200.4 2.44 2.4596.5+++恩诺沙星Enrofloxacine 360.1720360.1740 2.0 2.72 2.7096.2+++洛美沙星Lomefloxacin 352.1473352.1465-0.8 2.79 2.8097.8+++环丙沙星Ciprofloxacin 332.1410332.1425 1.5 2.62 2.6398.7++依诺沙星Enoxacin321.1363321.1413 5.0 2.46 2.4790.6++诺氟沙星Norfloxacine 320.1410320.1387-2.3 2.53 2.5494.8+++磺胺嘧啶Sulfadiazine251.0603251.0617 1.4 1.49 1.5093.7++磺胺甲噁唑Sulfamethoxazole 254.0599254.0638 3.9 2.74 2.7592.6+++磺胺甲基嘧啶Sulfamerazine265.0759265.0740-1.91.931.9591.0++磺胺二甲嘧啶Sulfamethazine 279.0916279.0958 4.22.35 2.3695.2++磺胺甲氧嘧啶Sulfameter 281.0708281.0756 4.8 2.26 2.2796.4+++N 4-乙酰磺胺嘧啶N 4-Acetylsulfadiazine 293.0701293.0689-1.2 2.15 2.1798.3+++N 4-乙酰磺胺甲噁唑N 4-Acetylsulfamethoxazole 296.0705296.0687-1.8 3.44 3.4599.2++N 4-乙酰磺胺甲嘧啶N 4-Acetylsulfamerazine 307.0865307.0892 2.7 2.49 2.5095.8++N 4-乙酰磺胺二甲嘧啶N 4-Acetylsulfamethazine321.1021321.10735.22.822.8398.6评分标准:+++保留时间偏差≤0.1min,质量偏差≤3mDa,同位素峰形匹配度≥90%;++保留时间偏差≤0.5min,质量偏差≤5mDa,同位素峰形匹配度≥85%㊂Score standard:+++Deviation of retention time≤0.1min,deviation of mass≤3mDa,degree of isotope pattern match≥90%;++Deviation of retention time≤0.5min,deviation of mass≤5mDa,degree of isotope pattern match≥85%.3.5 实际样品的分析对市场购买的8个品牌两个批次的16个牛奶样品和2个散装牛奶样品进行了UPLC-Q-TOF-MS E 扫描及数据采集㊂按照3.4节方法进行筛查,在低能量通道的总离子流色谱图中输入目标化合物的精确分子量,以提取这些化合物㊂结果表明,阳性样品中均发现多种FQs㊁SAs 及其代谢物的残留㊂利用喹诺酮类㊁磺胺类及其代谢物的高通量筛查数据库进行定性筛查,可观察到阳性样品中被筛查出目标化合物的提取离子色谱图(图3)㊂被筛查出的目标化合物ENO(m /z 321),OFL(m /z 362),CIP(m /z 332),ENR(m /z 360),SMX(m /z 254),SMR (m /z 265),N 4-ASMR(m /z 307)和N 4-ASMZ(m /z 321)的保留时间偏差均小于0.05min,分子量偏差均小于5mDa,而且同位素峰形匹配度均大于80%㊂在高能量通道中通过比对母离子和多个碎片离子的精确质量数进行再次确认㊂以筛查出的OFL(m /z 362)和CIP (m /z 332)为例(图4),除母离子m /z 362外,有4个碎片离子m /z 318,303,261和232,同样除母离子m /z 332外,有3个碎片离子m /z 314,245和231,而且碎片离子分子量的偏差均小于30mDa㊂根据欧盟2002/657/EC 的规定[14],本方法的定性准确度很高㊂所有18个牛奶样品中均检测出OFL,ENR 和SMX;部分样品中检测出磺胺类的代谢物N 4-ASMX,N 4-ASMR 和N 4-ASMZ㊂利用本研究建立基质匹配标准曲线对阳性样品中被确认的目标化合物进行定量分析,在研的每种药物及代谢物残留均低于有关的最高残留量(MRL),但是,有5个牛奶样品中其总残留量范围为107~650μg /kg,已经超过MRL [1~3]㊂7941第10期孟哲等:超高效液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱法快速筛查乳制品中磺胺类与氟喹诺酮类药物图2 从牛奶考核样品中定性筛查到的17种目标分析物的提取离子色谱图Fig.2 Extracted ion chromatograms of 17target compounds from the milksample图3 牛奶样品中被筛查出的8种抗生素及其代谢物的提取离子色谱图Fig.3 Extracted ion chromatograms of 8antibiotics and related metabolites from real milk sample8941 分析化学第42卷图4 氧氟沙星与环丙沙星在溶剂(a)中和在牛奶样品中(b)的MS /MS 质谱Fig.4 MS /MS spectra of ofloxacin and ciprofloxacin in solvent (a)and real milk sample (b)References1 Commission Regulation (UE)No 37/2010of 22nd December 2009on Pharmacologically Active Substances and Their Classifi-cation Regarding Maximum Residue Limits in Foodstuffs of Animal mun.,2010,L15:1-722 Balizs G,Hewitt A.Anal.Chim.Acta ,2003,492:105-1313 The Ministry of Agriculture Animal Husbandry and Chief Veterinary Officer.Chinese Journal of Veterinary Drug ,2003,37(4):15-20农业部畜牧兽医局.中国兽药杂志,2003,37(4):5-204 de Brabander H F,Noppe H,Verheyden K,Vanden Bussche J,Wille K,Okerman L,Vanhaecke L,Reybroeck W,Ooghe S,Croubels S.J.Chromatogr.A ,2009,1216:7964-79765 Stolker A A M,Brinkman U A Th.J.Chromatogr.A ,2005,1067:15-536 Li H,Sun H W,Zhang J X,Pang K.Food Control ,2013,31:359-3657 Blasco C,Torres C M,PicòY.Trends Anal.Chem.,2007,26:895-9138 Chen Y S,Schwack W.J.Chromatogr.A ,2013,1312:143-1519 Turnipseed S B,Andersen W C,Karbiwnyk C M,Madson M R,Miller K E.Rapid Commun.Mass Spectrom ,2008,22:1467-148010 YAN Li-Juan,ZHANG Jie,PAN Chen-Song,LIN Li-Yi,ZHANG Xin-Yi,SHEN He-Qing.Chinese J.Anal.Chem.,2013,41(1):31-35严丽娟,张洁,潘晨松,林立毅,张欣怡,申河清.分析化学,2013,41(1):31-3511 Wang J,Chow W,Leung D,Chang J.J.Agric.Food Chem.,2012,60(49):12088-1210412 CHEN Da-Wei,GAO Jie,LÜBing,ZHU Pan,YANG Xin,ZHAO Yun-Feng,MIAO Hong.Chinese J.Anal.Chem.,2014,42(4):579-584陈达炜,高洁,吕冰,朱盼,杨欣,赵云峰,苗虹.分析化学,2014,42(4):579-58413 Herrera-Herrera A V,Hernández-Borges J,Rodríguez-Delgado M A.Anal.Bioanal.Chem.,2008,392:1439-144614 Commission Decision 2002/657/EC Implementing Council Directive 96/23/EC Concerning the Performance of AnalyticalMethods and Interpretation of mun.,2002,L221:8-369941第10期孟哲等:超高效液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱法快速筛查乳制品中磺胺类与氟喹诺酮类药物0051分析化学第42卷Rapid Screening of Fluoroquinolones and Sulfonamides in Dairy Products Using Ultra Performance Liquid Chromatography Coupled to High Resolution Quadrupole Time-of-Flight Mass SpectrometryMENG Zhe1,2,SHI Zhi-Hong1,LÜYun-Kai1,SUN Han-Wen*11(College of Chemistry and Environmental Science,Hebei University,Key Laboratory of AnalyticalScience and Technology of Hebei Province,Baoding071002,China)2(Key Laboratory of Energy Chemical Engineering,Ningxia University,Yinchuan753200,China) Abstract A novel analytical method employing ultra performance liquid chromatography-quadrupole-time-of-flight mass spectrometry(UPLC-Q-TOF/MS)was developed for the rapid screening of eight fluoroquinolones (FQs),five sulfonamides(SAs)and four acetyled metabolites in dairy products.The simultaneous extraction and effective cleanup for seventeen target analytes in dairy product samples were achieved with acetonitrile-20%trichloroacetic acid(100∶1,V/V,pH2)as solvent and Oasis HLB SPE cartridges as ing MassLynx Chromalynx Software,a database for17target analytes was established.Qualitatively screening and quantitative analysis were carried out by full scan/MS E mode.The matrix-matched internal standard chalibration curves showed a good linearity(R2>0.983)in the ranges of10-2000μg/L for metabolites and 0.5-100μg/L for other all antibioties.The limits of quantification were in the range of0.5-0.8μg/kg for FQs and0.5-13.0μg/kg for SAs and related metabolites.The average recoveries at three spiked levels were in the range of69%-92%,which is within the acceptable range proposed by Association of Official Analytical Chemists(AOAC).The relative standard deviation was less than15%.This novel approach had high speed and sensitivity,and was successfully applied to the screening,confirmation and quantification analysis of dairy products.The content of each analyte residue was much lower than the maximum residue limits(MRLs),but total content of multiresidue in some dairy product samples were more than the MRLs.Keywords Fluoroquinolones;Sulphonamides;Ultra performance liquid chromatography;High resolution mass spectrometry;Dairy products(Received1April2014;accepted4July2014))This work was supported by the National Natural Science Foundation of China(No.21375032‘实用地质分析标准物质手册“(第二版汉英对照)编者收集整理了当今地质分析所用的标准物质647个,按其特征和不同应用分成6个部分介绍,即元素整体分析标准物质㊁超细粒度标准物质㊁化学物相和元素形态分析标准物质㊁微区原位分析标准物质㊁同位素及地质年代学分析标准物质㊁有机污染物分析标准物质㊂为了适应不同的查找方式,手册中有4种表格提供查找(综合信息表㊁定值信息表㊁定值数据简表㊁特性量值索引)㊂该书信息量大,是从事地质分析㊁环境监测㊁食品安全监督检验人员的重要工具书㊂该书由王毅民㊁顾铁新㊁王晓红㊁高玉淑㊁K P Jochum㊁W E G Müller编著,地质出版社出版,定价100.00元㊂超高效液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱法快速筛查乳制品中磺胺类与氟喹诺酮类药物作者：孟哲， 石志红， 吕运开， 孙汉文， MENG Zhe， SHI Zhi-Hong， L Yun-Kai， SUN Han-Wen作者单位：孟哲,MENG Zhe(河北大学化学与环境科学学院，河北省分析科学技术实验室，保定071002; 宁夏大学能源化工重点实验室，银川753200)， 石志红,吕运开,孙汉文,SHIZhi-Hong,L Yun-Kai,SUN Han-Wen(河北大学化学与环境科学学院，河北省分析科学技术实验室，保定071002)刊名：分析化学英文刊名：Chinese Journal of Analytical Chemistry年，卷(期)：2014(10)mission Regulation(UE)No 37/2010 of 22nd December 2009 on Pharmacologically Active Substances and Their Classifi-cation Regarding Maximum Residue Limits in Foodstuffs of Animal Origin 20102.Balizs G;Hewitt A查看详情 20033.农业部畜牧兽医局查看详情 2003(04)4.de Brabander H F;Noppe H;Verheyden K;Vanden Bussche J Wille K Okerman L Vanhaecke L Reybroeck W Ooghe S Croubels S查看详情 20095.Stolker A A M;Brinkman U A Th查看详情 20056.Li H;Sun H W;Zhang J X;Pang K查看详情 20137.Blasco C;Torres C M;Picò Y查看详情 20078.Chen Y S;Schwack W查看详情 20139.Turnipseed S B;Andersen W C;Karbiwnyk C M;Madson M R Miller K E查看详情 200810.严丽娟;张洁;潘晨松;林立毅 张欣怡 申河清查看详情 2013(01)11.Wang J;Chow W;Leung D;Chang J查看详情 2012(49)12.陈达炜;高洁;吕冰;朱盼 杨欣 赵云峰 苗虹查看详情 2014(04)13.Herrera-Herrera A V;Hernández-Borges J;Rodríguez-Delgado M A查看详情 2008mission Decision 2002/657/EC Implementing Council Directive 96/23/EC Concerning the Performance of Analytical Methods and Interpretation of Results 2002引用本文格式：孟哲.石志红.吕运开.孙汉文.MENG Zhe.SHI Zhi-Hong.L Yun-Kai.SUN Han-Wen超高效液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱法快速筛查乳制品中磺胺类与氟喹诺酮类药物[期刊论文]-分析化学 2014(10)。
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超高压液相色谱-高分辨飞行时间质谱仪校验方法1 概述
本规程适用于超高压液相色谱-高分辨飞行时间质谱仪周期检定。
2 仪器技术指标
2.1 外观和标志：外观应完好无损；标志应齐全、清晰。
2.2 气源供给：在正常操作条件下，所有气路连接处应无泄漏。
2.3 电源供给：电源供给的电压、频率等技术要求应符合仪器说明书的规定。
2.4 性能指标：见表1。
3 运行检查技术条件
3.1 环境：温度：25℃；相对湿度：20~60%；室内无易燃、易爆和强腐蚀性物质，无强烈的机械振动和电磁干扰。
3.2 安装要求：仪器应平稳而牢固的安装在工作台上，电缆线的接触件应紧密配合，接地良好。
气体管路应使用不锈钢管、铜管、聚乙烯管，禁止使用橡皮管。
3.3 标准溶液
3.3.1确保流动相中使用的水与有机相均符合LCMS级别要求。
3.3.2 标准稀释液：混合500mL超纯水、50uL甲酸、250uL氨水溶液。
混匀并超声。
3.3.3标准样品储备液：Waters（p/n 700008892-4）。
储备液详细参数列于表2
3.3.4 混合标样1（5pg/uL SDM）：将100uL“标准样品储备液”与1900uL流动相A1/A2充分混合，得到“混合标样1”。
3.3.5混合标样2（1pg/uL SDM）：将200uL“标准样品储备液”与800uL流动相A1/A2充分混合，得到“混合标样2”。
3.4 仪器参数
3.4.1 液相系统
3.4.1.1分别使用乙腈、甲醇、异丙醇与含有0.2%甲酸水溶液prime系统。
3.4.1.2准备流动相A与流动相B。
流动相A：100uL甲酸、500uL氨水溶液与1L超纯水混合。
流动相B：50uL甲酸与500mL乙腈混合。
3.4.1.3使用流动相A与流动相B分别清洗流动相管理5分钟。
3.4.1.4将ACQUITY UPLC BEH C18 (2.1 x 50-mm, 1.7-μm)色谱柱安装至液相系统上。
3.4.1.5使用流动相B以0.1mL/min的流速冲洗系统1小时。
3.4.1.6按表3与表4建立液相方法
3.4.2 质谱系统
3.4.2.1依据表5设定质谱参数
表5离子源参数
4 检查项目和方法
4.1正离子分辨率模式
在正离子模式下，分别进样“混合标样1”10次，每次进样10uL。
针对“sulfadimethoxine”进行数据处理。
要求得到表1技术指标。
4.2负离子分辨率模式
负离子模式下，分别进样“混合标样2”10次，每次进样10uL。
针对“sulfadimethoxine”与“chloramphenicol”两种化合物进行数据处理。
要求得到表1技术指标。
5 检查结果处理
5.1全部液相质谱数据得到后，使用ChromLynx软件计算所需结果。
5.2 每次检查后均应填写仪器运行检查报告，谱图和打印结果应附于其后。
5.3 按本规程第4章实施运行检查的所有项目均符合第2章的规定时，结论为“合格”。
5.4 按本规程第4.1~4.2条实施运行检查的项目有一条或一条以上不符合第2章规定的要求时，结论为“不合格”。
应查找原因，并进行复检或维修。
编制：__________________
审核：__________________
批准：__________________
颁布日期：__________________
附页
超高压液相色谱-高分辨飞行时间质谱仪
检定报告
仪器名称：
出厂编号：
内部编号：
检定周期：
_____________超高压液相色谱-高分辨飞行时间质谱仪________________年检定报告
1 环境条件
天气：室温：℃大气压：kPa 相对湿度：%
2 运行检查记录
2.1 外观和标志
2.2气源供给
2.3 电源供给
2.4 调节旋钮、开关、指示灯等
2.5 检测器名称
2.6 检查条件
液相条件
质谱条件
2.8检定结果
2.9对应色谱质谱图编号
3 结论
检定：_______________
审核：_______________
批准：_______________
检定日期：_______________。