细胞培养的设施与基本条件 (2)优秀课件
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细胞培养技术
细胞培养技术
一、细胞培养基本概念
细胞培养是指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使期生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物为单个细胞或细胞群。
在医学遗传学研究中应用最广泛的是外周血淋巴细胞、皮肤或纤维细胞和各种能在体外长期生长的细胞系。外周血淋巴细胞培养具有时间短、技术简便、可反复取材等优点，它在临床染色体分析中使用最广泛。体外培养细胞株可在培养过程中发生自发的或在外界作用下的转化，成为永久细胞系，也可直接建成永久细胞系，永久细胞系能在体外无取制的传代和生长。永久细胞系通常具有非整倍体细胞和各个细胞的核型不完全相同特性。但细胞克隆的细胞系其这一特性可以不明显。
二、细胞培养的环境
细胞在体外培养中所需的条件与体内细胞基本相同。
1、无污染环境
培养环境无毒和无菌是保证细胞生存的首要条件。当细胞放置于体外培养时，与体内相比细胞丢失了对微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代谢物质积累等，可导致细胞死亡。因此在进行培养中，保持细胞生存环境无污染、代谢物及时清除等，是维持细胞生存的基本条件。
2、恒定的温度
维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃，偏离这一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。培养细胞对低温的耐受力较对高温强，温度上升不超过39℃时，细胞代谢与温度成正比；人体细胞在39-40℃1小时，即能受到一定损伤，但仍有也许恢复；在40-41℃1小时，细胞会普遍受到损伤，仅小半数有也许恢复；41-42℃1小时，细胞受到严重损伤，大部分细胞死亡，个别细胞仍有恢复也许；当温度在43℃以上1小时，细胞所有死亡。
(新教材)高中生物人教版选择性必修三 第2章 细胞工程 全章课件(共9讲)
课堂检测·素养达标
【概念·诊断】 1.植物细胞工程技术主要包括植物组织培养和植物体细胞杂交,下列有关植物 细胞工程技术的描述合理的是________________。 ①离体的植物组织在一定的培养条件下分化出根和芽的过程属于脱分化 ②愈伤组织是未分化的细胞 ③植物体细胞杂交利用了植物组织培养技术 ④获得植物原生质体常用的化学方法是聚乙二醇融合法、高Ca2+-高pH融合法 ⑤植物体细胞杂交的目的是获得杂种植株
【素养·探究——母题追问】 (1)科学思维——分析与推理 胡萝卜根尖的形成层细胞和组织培养获得的植株根细胞中都没有叶绿素,为什 么叶肉细胞却合成了叶绿素? 提示:胡萝卜根尖的形成层细胞、植株根细胞和叶肉细胞中都含有合成叶绿素的 相关基因,但该基因只在叶肉细胞中进行了表达即基因的选择性表达。 (2)科学思维——批判性思维 植物组织培养的脱分化过程中,植物细胞如何获得生长发育所需的营养物质? 提示:植物细胞主要以主动运输的方式从培养基中获取营养物质。
【解析】选B。植物体细胞杂交过程中,诱导原生质体融合常用的诱导剂是PEG; 由杂种细胞→杂种植株,要通过有丝分裂、脱分化和再分化才能形成;植物体细 胞杂交克服了远缘杂交不亲和的障碍。杂种细胞经组织培养形成的愈伤组织,自 身不含叶绿素无法进行光合作用,其营养物质来自培养基,代谢类型是异养需氧 型。
【课堂回眸】
(5)在植物组织培养过程中,只涉及有丝分裂,不涉及有性生殖细胞的生成,该方式 可以保证母细胞和子细胞遗传物质的稳定,保持原品种的遗传特性,所以这种繁殖 方式属于无性繁殖。
第二章细胞工程第1节植物细胞工程 教学课件人教版高中生物选择性必修3
3.植物组织培养技术 (1)概念:将离体的植物器官、组织或细胞等,培养在人工配制的培养基上, 给予适宜的培养条件,诱导其形成__完__整__植__株__的技术。 (2)过程 ①脱分化:在一定的激素和营养等条件的诱导下,已经分化的细胞经过脱分 化,即失去其特有的结构和功能,转变成__未__分__化____的细胞。 ②再分化:脱分化产生的愈伤组织,在一定的培养条件下,重新分化出 __芽__、__根____等器官。
形态学上端朝上
↓
接种:在酒精灯火焰旁,将外植体的1/3~1/2插入诱导_愈__伤__组__织___的培养基中。
用封口膜或瓶盖封盖瓶口,并在培养瓶上做好标记。
↓
培养:将接种了外植体的锥形瓶或植物组织培养瓶置于18~22 ℃的培养箱 中培养。在培养过程中,定期观察和记录愈伤组织的生长情况。
↓ 转移培养:培养15~20 d后,将生长良好的愈伤组织转接到诱导__生__芽______ 的培养基上。长出芽后,再将其转接到诱导___生__根_____的培养基上,进一步 诱导形成试管苗。
3.诱导愈伤组织期间一般不需要光,后续培养过程中,为什么每日要给予适 当时间和强度的光照?愈伤组织在诱导生根的培养基中未形成根,但分化 出了芽,其原因可能是什么? 提示 给予适当时间和强度的光照的目的是诱导叶绿素的形成,进一步形成 叶绿体进行光合作用。培养基中生长素用量与细胞分裂素用量的比值偏 低。 4.尝试用箭头和文字总结植物组织培养技术的基本流程。
细胞培养的基本方法 PPT课件
Biblioteka Baidu胞培养的条件
（1）适宜的温度和PH 37℃，pH7.2~7.4。 （2）气体环境 95%空气+5% CO2; 适宜的湿度（无菌水不能干掉）。 （CO2：细胞生长所必需的成分, pH值维持，最低不能低于1%。） （3）营养物质 N 源、C源、无机盐、维生素、H2O，细胞培养基中含有。 常用的细胞培养基：DMEM，RPMI-1640，BME，M199 等。 （4）无菌条件 紫外消毒、空气过滤、无菌滤头，高压灭菌、严格操作。
原代消化培养法
（1）处理组织：用Hanks液漂洗组织2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先 置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 （2）剪切：将组织切成2~3毫米大小的块，加入胰蛋白酶液，然后一并倒入培养皿中。 （3）消化：置于37℃温箱消化，每隔20分钟摇动一次。消化时间依组织块的大小和 组织的硬度而定。 （4）分离：用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞， 立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速 （500~1000转/分）离心收集细胞，弃上清。
细胞培养主要的设施器材
设施：超净台、恒温培养箱、倒置显微镜、液氮储存罐、冰柜、恒温 水浴槽、离心机、压力蒸汽消毒器。 器材： 一、玻璃器材 玻璃培养皿、刻度吸管、离心管、培养瓶等，（现已较少使用）。 二、塑料器材 多孔培养板（ 6,12,24,48,96）、培养皿、培养瓶、离心管、冻存管。 2 三、橡皮器材 橡皮制品（最好是硅制品）做各种瓶或试管的塞子、盖子。 四、金属器材 剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头 五、其他物品 纱布、注射器、针头、滤头
[课件]动物细胞体外培养知识PPT
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二、基本条件
1、无菌无毒的培养环境。
2、恒定适宜的培养温度。
3、合适的气体环境和pH。
4、充足的营养，包括多种氨基酸、维生素、辅酶、 核酸、嘌呤、嘧啶、生长因子。
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细胞培养基介绍
天然培养基---血清 无血清培养基---人工合成化合物，成分确定的培养基， 例如CHO325。 无蛋白培养基---不添加蛋白， 但可能包含动物或植物来源的成分。
液氮中长期保存。
温度降低原则：达到4度，然后达到-20度冷冻状态，再转移 到-70度，18h后，在液氮中保持。
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2、细胞复苏操作 （1）登记要取用的细胞。 （2）快速取出细胞放于准备好的37度水浴中，快速溶解 。
（3）将溶解的冻存管细胞离心，根据细胞特性，选择合 适的离心强度。
（4）酒精棉擦拭冻存管后放于超净台，将细胞沉淀用新 鲜培养基重悬后臵于离心管中进行离心。洗涤步骤，去除 DMSO。 （5）细胞用新鲜培养基传入培养瓶中。
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一、基本概念
1、细胞培养：动植物细胞在体外条件下存活和生长，此 时细胞不再形成组织，主要是指用来生产次生代谢产物为 目的的大规模细胞培养技术。 2、动物细胞体外培养的生长类型：贴附型和悬浮型。 3、动物细胞大规模培养技术：是建立在贴壁培养法和悬 浮培养法的基础上，融合了固定化培养、流式细胞术、生 物反应器技术等而发展起来的。主要包括悬浮培养、微载 体培养、微囊化培养、中控纤维培养等。
王金发《细胞生物学》课件第2章(PPTminimizer)
成功源于不懈的努力，人生最大的敌人是自己怯懦
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2、
。1 9:54:04 19:54:0 419:541 0/25/2 020 7:54:04 PM
每天只看目标，别老想障碍
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3、
。20.1 0.2519: 54:041 9:54Oct-2025-Oct-20
宁愿辛苦一阵子，不要辛苦一辈子
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4、
。19:5 4:0419: 54:041 9:54Sunday, October 25, 2020
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2.1.3 常用光学显微镜
◆倒置显微镜
■物镜与照明系统的位置颠倒。 ■集光器与载物台之间的工作距离提
高,可以放置培养皿、培养瓶等容器, 直接对培养的细胞进行照明和观察。
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倒 置 显 微 镜
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2.2 电子显微镜
(Electron microscope)
1932年德国学者Max Knolls和 Ernst Ruska用波长比光短得多的 电子作光源,发明了第一台电子显微 镜，大大提高了显微镜的分辨率， 开拓了超微世界。
流式细胞器 (Flow cytometer,FCM)
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流 式 细 胞 术
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细 胞 分 选
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细 胞 标 记
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染 色 体 分 选
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染 色 体 标 记
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植物细胞工程(第二课时)高二生物课件(人教版2019选择性必修3)
方法
（1）物理方法： ①电融合法 ②离心法等
（2）化学方法： ①聚乙二醇(PEG)融合法 ②高Ca2+—高pH融合法
B细胞
B原生质体 原理: 细胞膜具有流动性
一、植物体细胞杂交技术
（二）过程： 3.再生细胞壁：
去壁
融合
(1)植物细胞融合完成的标志:
融合的原生质体重新产生细胞壁， 形成杂种细胞。
(2)直接参与细胞器:
（二）过程：
脱分化
4.植物组织培养：
去壁
融合
A细胞
A原生质体
杂种细胞 再生出
愈伤组织
细胞壁 植物组织培养
细胞的全能性
去壁
正在融合的 原生质体
B细胞
植物细胞融合
B原生质体 细胞膜的流动性
杂种植株
一、植 物 细 胞 工 程 的 基 本 技 术
合作探究一：请同学们自主阅读教材P34-35，小组合作思考讨论完成问题。
第2章 细胞工程
第1节 植物细胞工程
（第二课时）
学习目标
目标
简述植物组织培养和植物体细胞杂交的原 01 理和过程（生命观念）
结合“菊花的组织培养”的实验操作， 尝试设计植物组织培养技术的流程简图 02 （科学探究）
查阅资料，尝试探究植物生长素和细胞分 03 裂素使用比例对植物组织培养的影响
（社会责任、科学探究）
植物细胞工程的基本技术(课件)高二生物(人教版2019选择性必修3)
提示 克服了不同种植物远缘杂交不亲和的障碍，使不同种植物杂交成为可能。
5.科学家采用植物体细胞杂交的方法得到了“番茄—马铃薯”杂种植株，但这种植株并没有地上结番茄、地下长马铃薯。如何解释这一现象？
提示 基因之间、基因与基因产物之间、基因与环境之间存在着复杂的相互作用，两种生物的基因结合到一个细胞中后，不能按照原来的顺序表达了。
（3）再分化：愈伤组织重新分化成⑫________等器官的过程。
3.前提：离体的植物器官、组织或细胞。
4.条件：人工配制的培养基、适宜的培养条件。
全能性
愈伤组织
激素和营养
结构和功能
未分化
愈伤组织
不定形的薄壁组织
芽、根
四、植物体细胞杂交技术
1.原理：细胞膜的流动性和植物细胞一般具有全能性。
2.酶：纤维素酶和果胶酶。
（5）铁皮石斛是我国的名贵中药，生物碱是其有效成分之一。应用植物组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎（简称 ，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程如下：
在固体培养基上， 质量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如下图所示，请回答下列问题：
选用新生营养芽为外植体的原因是_________________。据图分析，与黑暗条件下相比， 在光照条件下生长的优势体现在生长起始较快、快速生长时间较长、_______________等方面。 脱落酸 能提高生物碱含量，但会抑制 的生长。若采用液体培养，推测添加适量的 可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案时探讨了以下问题：
5.科学家采用植物体细胞杂交的方法得到了“番茄—马铃薯”杂种植株，但这种植株并没有地上结番茄、地下长马铃薯。如何解释这一现象？
提示 基因之间、基因与基因产物之间、基因与环境之间存在着复杂的相互作用，两种生物的基因结合到一个细胞中后，不能按照原来的顺序表达了。
（3）再分化：愈伤组织重新分化成⑫________等器官的过程。
3.前提：离体的植物器官、组织或细胞。
4.条件：人工配制的培养基、适宜的培养条件。
全能性
愈伤组织
激素和营养
结构和功能
未分化
愈伤组织
不定形的薄壁组织
芽、根
四、植物体细胞杂交技术
1.原理：细胞膜的流动性和植物细胞一般具有全能性。
2.酶：纤维素酶和果胶酶。
（5）铁皮石斛是我国的名贵中药，生物碱是其有效成分之一。应用植物组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎（简称 ，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程如下：
在固体培养基上， 质量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如下图所示，请回答下列问题：
选用新生营养芽为外植体的原因是_________________。据图分析，与黑暗条件下相比， 在光照条件下生长的优势体现在生长起始较快、快速生长时间较长、_______________等方面。 脱落酸 能提高生物碱含量，但会抑制 的生长。若采用液体培养，推测添加适量的 可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案时探讨了以下问题：
人教版选修三专题二《细胞工程》课件 (共81张PPT)
植物细胞表现全能性的必要条件：
离体培养 提供营养物质、激素及其他适宜条件 那么要如何把植物的一个花瓣培育成 完整的植株呢？
植物的组织培养
三、植物的组织培养
1、实验原理：
离体的植物器官、组织或细胞 脱分化 一定的营养物质、激素 外植体：从活植物体 上切下进行培养的那 愈伤组织 部分组织或器官 再分化 含有不同激素的分化培养基 胚状体或丛芽
植物组织培养就是在无菌和人工控 制条件下，将离体的植物器官、组织、 细胞，培养在人工配制的培养基上，给 予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组 织、丛芽，最终形成完整的植株。
这幅番茄—马铃薯图 利用传统有性杂交方法能 实现吗？为什么？ 因为不同种生物之间存在 着生殖隔离，所以用传统 的有性杂交方法是不可能 做到这一点的。
小结
植 所采用技术 物 的理论基础 细 胞 通常采用的 工 技术手段 程
植物细胞的全能性
植物组织培养
植物体细胞杂交
愈 伤 脱 组 分 织 化
再 分 化
杂 种 植 株
过程：原生质体融合 + 组织培养
植物A细胞
原生质体A 原生质体融合 去壁 原生质体B 植物B细胞 再分化 脱分化 杂种植株 愈伤组织 融合体 再 生 壁 杂种细胞
去壁的常用方法：酶解法（纤维素酶、果胶酶等） 原生质体融合 化学法：聚乙二醇（PEG） 方法： 物理法：离心、振动、电刺激等
2-2-1动物细胞培养(课件)——高中生物人教版(2019)选择性必修三
动物细胞培养的条件
保证无菌、无毒的环境
无菌
①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理
②在无菌环境下进行操作
定期更换培养液。
无毒
③添加一定量的抗生素
目的：方便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成伤害。
动物细胞培养的条件
温度、PH和渗透压
(1)适宜的温度：哺乳动物多以__________ ℃为宜。(2)适宜的pH：多数细胞生存的适宜pH为_________。(3)适宜的渗透压。
ES细胞
成体干细胞
成体组织或器官内
造血干细胞（骨髓、外周血和脐带血中）神经干细胞（神经系统中）精原干细胞（睾丸中）
具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力
治疗神经组织损伤和神经系统退行性疾病（如帕金森病、阿尔茨海默病等）
治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的造血系统、免疫系统功能障碍等疾病
（1）取材:
一般取材于动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。
（2）取材原因:
细胞分化程度低，分裂能力强，容易培养
动物细胞培养的过程
取动物组织 → 制成细胞悬液 → 生长增殖
（1）将组织分散成单个细胞
①方法
机械法
用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间
（2）用培养液将细胞制成细胞悬液。
思考：用胰蛋白酶分散细胞，说明动物细胞间的物质主要是什么成分？
保证无菌、无毒的环境
无菌
①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理
②在无菌环境下进行操作
定期更换培养液。
无毒
③添加一定量的抗生素
目的：方便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成伤害。
动物细胞培养的条件
温度、PH和渗透压
(1)适宜的温度：哺乳动物多以__________ ℃为宜。(2)适宜的pH：多数细胞生存的适宜pH为_________。(3)适宜的渗透压。
ES细胞
成体干细胞
成体组织或器官内
造血干细胞（骨髓、外周血和脐带血中）神经干细胞（神经系统中）精原干细胞（睾丸中）
具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力
治疗神经组织损伤和神经系统退行性疾病（如帕金森病、阿尔茨海默病等）
治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的造血系统、免疫系统功能障碍等疾病
（1）取材:
一般取材于动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。
（2）取材原因:
细胞分化程度低，分裂能力强，容易培养
动物细胞培养的过程
取动物组织 → 制成细胞悬液 → 生长增殖
（1）将组织分散成单个细胞
①方法
机械法
用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间
（2）用培养液将细胞制成细胞悬液。
思考：用胰蛋白酶分散细胞，说明动物细胞间的物质主要是什么成分？
细胞培养技术 ppt课件
PPT课件 21
二、培养细胞相关条件
• 血清分类
• 3、普通进口胎牛血清
• 如Hyclone南美胎牛血清（SV30087）
• 4、国产的各种系列胎牛血清 国产的胎牛血清，国内没有严格意义的胎牛血 清，胎牛血清本身是需要穿刺取血的，而国内都是 剖腹产出胎牛，8小时左右取血，然后，进行过滤 分装。
• 5、其他血清 PPT课件 新生牛血清，小牛血清，一般国产的。
PPT课件
49
三、培养细胞技术 贴壁细胞传代操作流程：
（1）弃去培养液。
（2）加入胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。 （3）消化时间约为1 ～ 3分钟。倒置镜下观察细胞。 原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，细胞间出现空隙，细胞 未漂起时弃去胰酶，同时用Hanks或培养液终止消化。
（4）制作细胞悬液，细胞计数（有经验者可省）， 根据细胞数目和细胞生长特点，按1:2 ～1:6进行传代， 置37℃下继续培养。
44
• 潜伏期
•
此时细胞有生长话动，而无细胞分裂。细 胞株潜伏期一般为6～24小时。
ห้องสมุดไป่ตู้
PPT课件
45
• 对数生长期：
•
细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳， 最适合进行实验研究。
PPT课件
46
• 停止期（平台期）：
•
细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分 裂。
二、培养细胞相关条件
• 血清分类
• 3、普通进口胎牛血清
• 如Hyclone南美胎牛血清（SV30087）
• 4、国产的各种系列胎牛血清 国产的胎牛血清，国内没有严格意义的胎牛血 清，胎牛血清本身是需要穿刺取血的，而国内都是 剖腹产出胎牛，8小时左右取血，然后，进行过滤 分装。
• 5、其他血清 PPT课件 新生牛血清，小牛血清，一般国产的。
PPT课件
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三、培养细胞技术 贴壁细胞传代操作流程：
（1）弃去培养液。
（2）加入胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。 （3）消化时间约为1 ～ 3分钟。倒置镜下观察细胞。 原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，细胞间出现空隙，细胞 未漂起时弃去胰酶，同时用Hanks或培养液终止消化。
（4）制作细胞悬液，细胞计数（有经验者可省）， 根据细胞数目和细胞生长特点，按1:2 ～1:6进行传代， 置37℃下继续培养。
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• 潜伏期
•
此时细胞有生长话动，而无细胞分裂。细 胞株潜伏期一般为6～24小时。
ห้องสมุดไป่ตู้
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• 对数生长期：
•
细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳， 最适合进行实验研究。
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• 停止期（平台期）：
•
细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分 裂。
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还应配置落水架、干燥箱、超声波清洗器、纯水制备等。 地面应耐湿并排水良好。
超
声 波 清 洗
洗 瓶 机
机
电
热
纯
干
水
燥
仪
箱
1.2 制备室
主要用于有关培养用液体、培养基母液和培养基的配制等。 面积60 m2左右，配备的主要仪器设备有：冰箱、实验台、药品柜、 器械柜、天平、微波炉、pH计、玻璃棒、烧杯、磁力搅拌器、培养基 分装器、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管（器）、 烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱以体积180~200 L为宜，用于储 存培养基母液、激素、维生素等贵重药品、彩色胶卷及保存植物材料。 天平应有不同感量。
为了最大限度的创造既适合于细胞生长又可防治污染的环 境，在培养过程中对细胞培养的设施、操作规程和检测方 法等制定了严格的规范要求。
细胞工程实验室与其他一般实验室的主要区别在 于，要求保持严格无菌环境，避免微生物及其他 有害因子的影响。
一般来讲，它应能进行六方面的工作：无菌操作、 培养、制备、清洗、消毒灭菌处理和储藏。
具
基本原理：将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱， 再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的、均匀 的断面风速通过无菌区，形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
超 侧流式（或垂直式）超净工作台：净化后的空气气流由左侧（或
净
右侧）通过工作台面流向对侧，也有从上向下（或从下向上）流
工
室内应配有超净工作台、紫外灯、酒精灯、解剖镜、各种接种器 械等。
离心机
超净工作台
1.5 培养室
为了控制培养室的温度和光照，培养室的房间不要窗户，但应当 留一个通气窗，并安上排气扇。天花板和内墙最好用塑料钢板装修， 地面用水磨石或瓷砖铺设，一般要分两间，一为光照培养室，一为暗 培养室。培养室外应有一预备间或走廊。室内温度由空调控制，光照 时间及其强度由日光灯和自动定时开关控制。
离心机、酶联免疫检测仪、天平、PCR仪等
显微镜
PCR 酶标仪
2.2 温室
为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。
1.2 常用仪器与设备
基本设备：水纯化装置、 冰箱、天平、酸度计、电炉、培养基分 装器、搅拌器、离心机及离心管、移液器（管）、吸管等。
灭菌设备： 蒸汽压力灭菌锅、电热干燥箱、过滤除菌装置、喷雾 消毒器、紫外灯。
培养室应配有若干培养架，上面固定日光灯、转床、摇床、光照 培养箱、生化培养箱、自动控时器等。
2、辅助实验室
细胞学鉴定室
2.1 鉴定室
其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、 干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。
应配置各种显微镜、照相系统等
生化分析室
在以培养细胞产物为主要目的实验室中，应建立相应的生化分 析实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。
外界气流流动的影响而引起不洁空气混入。
用于细胞培养中的有些器械、器皿烘干使用、玻璃器皿干燥消毒
温度范围：50~300℃
实验室常用：鼓风式电热干燥箱
电 优点：温度均匀、效果较好；
缺点：升温过程较慢
向对侧，形成气流屏障以保持工作区无菌；在净化气流和外边气
作
体交界处可因气流的流动出现负压，使少许未净化气体混入，有
台
发生污染的可能性
外流式（或水平层流式）超净工作台：使净化后的空气面向操作
者流动，外方气流不致混入操作区；不能进行有害物质实验操作；
因多为开放式，没有防护挡板，操作和拿取物品方便，但可能受
植物细胞工程实验室的设置
有其特殊的设置，如具有光照条件的培 养室，试管苗培育所需的温室和移植驯化室 等。
基本实验室
1.1 清洗间
根据工作量的大小决定其大小，一般面积控制在30~50 m2。在实 验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿、用具和培养材 料等。中央实验台还应配置2个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工 作量大，可以购置一台洗瓶机。准备1~2个洗液缸，专门用于洗涤对洁 净度要求很高的玻璃器皿。
1.4 无菌操作室
无菌操作室主要用于实验材料的接种操作，所以又叫接种室。通 常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，还有防止污染的 作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启， 以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有水槽、 实验台、鞋帽架、柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或 瓷砖装修，工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。
细胞培养的设施与 基本条件
预防培养细胞受到污染是细胞培养成功 与否的关键
为什么？生物体内的细胞可以通过机体的代谢、调节和保 护等机制而使其营养、环境、生长条件、抵抗有害因子能 力等方面处于最佳状况。而体外培养的细胞由于失去了对 整体的依赖性，对实验室细胞培养的设施条件和人员素质 提出了较高的要求。
1.1 细胞工程实验室的设置
动物细胞工程实验Байду номын сангаас的设置
一般来讲，它应能进行六方面的工作：无菌操作、 培养、制备、清洗、消毒灭菌处理和储藏。各区最好 分别设置于相连的各个房间，特别是无菌操作室最好 能单独设置。如安排在一大实验室内，则无菌操作区 与清洗、消毒灭菌区应分别位于两端，而培养、制备 和储藏区位于此两区之间。
无菌操作设备： 超净工作台 光温控制设备： 时间程序控制器、空调及温度感应器。
细胞培养设备： 培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、 摇床、生物反应器等。
细胞学鉴定设备： 光学显微镜、实体显微镜、倒置显微镜等。 除上述基本设备外，如果有条件和需要还可配制摄影设备、生
化分析设备等。 培养器皿及实验用具：玻璃器皿、新型材料器皿及金属材质用
天平
移液器
pH计
1.3 消毒间
用于培养细胞所用器械、培养基的消毒与灭菌。 配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干燥箱、 消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌 锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可 选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的 卧式灭菌锅。 如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成一个准备间，要求设 备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、 防滑。
超
声 波 清 洗
洗 瓶 机
机
电
热
纯
干
水
燥
仪
箱
1.2 制备室
主要用于有关培养用液体、培养基母液和培养基的配制等。 面积60 m2左右，配备的主要仪器设备有：冰箱、实验台、药品柜、 器械柜、天平、微波炉、pH计、玻璃棒、烧杯、磁力搅拌器、培养基 分装器、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管（器）、 烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱以体积180~200 L为宜，用于储 存培养基母液、激素、维生素等贵重药品、彩色胶卷及保存植物材料。 天平应有不同感量。
为了最大限度的创造既适合于细胞生长又可防治污染的环 境，在培养过程中对细胞培养的设施、操作规程和检测方 法等制定了严格的规范要求。
细胞工程实验室与其他一般实验室的主要区别在 于，要求保持严格无菌环境，避免微生物及其他 有害因子的影响。
一般来讲，它应能进行六方面的工作：无菌操作、 培养、制备、清洗、消毒灭菌处理和储藏。
具
基本原理：将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱， 再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的、均匀 的断面风速通过无菌区，形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
超 侧流式（或垂直式）超净工作台：净化后的空气气流由左侧（或
净
右侧）通过工作台面流向对侧，也有从上向下（或从下向上）流
工
室内应配有超净工作台、紫外灯、酒精灯、解剖镜、各种接种器 械等。
离心机
超净工作台
1.5 培养室
为了控制培养室的温度和光照，培养室的房间不要窗户，但应当 留一个通气窗，并安上排气扇。天花板和内墙最好用塑料钢板装修， 地面用水磨石或瓷砖铺设，一般要分两间，一为光照培养室，一为暗 培养室。培养室外应有一预备间或走廊。室内温度由空调控制，光照 时间及其强度由日光灯和自动定时开关控制。
离心机、酶联免疫检测仪、天平、PCR仪等
显微镜
PCR 酶标仪
2.2 温室
为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。
1.2 常用仪器与设备
基本设备：水纯化装置、 冰箱、天平、酸度计、电炉、培养基分 装器、搅拌器、离心机及离心管、移液器（管）、吸管等。
灭菌设备： 蒸汽压力灭菌锅、电热干燥箱、过滤除菌装置、喷雾 消毒器、紫外灯。
培养室应配有若干培养架，上面固定日光灯、转床、摇床、光照 培养箱、生化培养箱、自动控时器等。
2、辅助实验室
细胞学鉴定室
2.1 鉴定室
其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、 干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。
应配置各种显微镜、照相系统等
生化分析室
在以培养细胞产物为主要目的实验室中，应建立相应的生化分 析实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。
外界气流流动的影响而引起不洁空气混入。
用于细胞培养中的有些器械、器皿烘干使用、玻璃器皿干燥消毒
温度范围：50~300℃
实验室常用：鼓风式电热干燥箱
电 优点：温度均匀、效果较好；
缺点：升温过程较慢
向对侧，形成气流屏障以保持工作区无菌；在净化气流和外边气
作
体交界处可因气流的流动出现负压，使少许未净化气体混入，有
台
发生污染的可能性
外流式（或水平层流式）超净工作台：使净化后的空气面向操作
者流动，外方气流不致混入操作区；不能进行有害物质实验操作；
因多为开放式，没有防护挡板，操作和拿取物品方便，但可能受
植物细胞工程实验室的设置
有其特殊的设置，如具有光照条件的培 养室，试管苗培育所需的温室和移植驯化室 等。
基本实验室
1.1 清洗间
根据工作量的大小决定其大小，一般面积控制在30~50 m2。在实 验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿、用具和培养材 料等。中央实验台还应配置2个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工 作量大，可以购置一台洗瓶机。准备1~2个洗液缸，专门用于洗涤对洁 净度要求很高的玻璃器皿。
1.4 无菌操作室
无菌操作室主要用于实验材料的接种操作，所以又叫接种室。通 常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，还有防止污染的 作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启， 以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有水槽、 实验台、鞋帽架、柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或 瓷砖装修，工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。
细胞培养的设施与 基本条件
预防培养细胞受到污染是细胞培养成功 与否的关键
为什么？生物体内的细胞可以通过机体的代谢、调节和保 护等机制而使其营养、环境、生长条件、抵抗有害因子能 力等方面处于最佳状况。而体外培养的细胞由于失去了对 整体的依赖性，对实验室细胞培养的设施条件和人员素质 提出了较高的要求。
1.1 细胞工程实验室的设置
动物细胞工程实验Байду номын сангаас的设置
一般来讲，它应能进行六方面的工作：无菌操作、 培养、制备、清洗、消毒灭菌处理和储藏。各区最好 分别设置于相连的各个房间，特别是无菌操作室最好 能单独设置。如安排在一大实验室内，则无菌操作区 与清洗、消毒灭菌区应分别位于两端，而培养、制备 和储藏区位于此两区之间。
无菌操作设备： 超净工作台 光温控制设备： 时间程序控制器、空调及温度感应器。
细胞培养设备： 培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、 摇床、生物反应器等。
细胞学鉴定设备： 光学显微镜、实体显微镜、倒置显微镜等。 除上述基本设备外，如果有条件和需要还可配制摄影设备、生
化分析设备等。 培养器皿及实验用具：玻璃器皿、新型材料器皿及金属材质用
天平
移液器
pH计
1.3 消毒间
用于培养细胞所用器械、培养基的消毒与灭菌。 配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干燥箱、 消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌 锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可 选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的 卧式灭菌锅。 如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成一个准备间，要求设 备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、 防滑。