流式荧光法检测多肿瘤标志物的方法学评价
流式细胞术及其应用(1)
血小板检测指标：
质膜糖蛋白：CD41/CD61（gpⅡb/Ⅲa）、
CD42b(GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ)
颗粒膜糖蛋白：CD62P、CD63、TSP。
活化：gpⅡb/Ⅲa复合物—活化早期标志物
CD62P—活化后期的表面标志
血小ห้องสมุดไป่ตู้抗体（PAIgG）。
网织血小板计数：常用染料为TO。
应用 血小板无力症诊断：
而现代流式细胞术，更是由于结合 了单克隆抗体技术、定量细胞化学和定 量荧光细胞化学的应用，使其在生物学、 临床医学、药物学等众多研究领域的应 用将会越来越广泛。
五、流式样品的制备中应注意的几个问题
㈠荧光素和抗体的选择
⒈荧光素的选择：现在国内引进的大多数流式 细胞仪只装有一个激光光源，即488nm光源，所以 我们在选择荧光素时要选择能被488nm激光激发的 荧光素，常用的荧光素有：
选择纯度高的抗体、用同型对照抗 体或双标记排除非特异荧光
在细胞生长状态良好时测试、避 免反复吹打
彻底消化、在用酒精固定细胞时 加入终浓度为1.5-3％的小牛血清
一、 流式细胞术的概念
流式细胞术（FCM）就是对在高速 流动的鞘液包括下的细胞、粒子进行分 析和分选的技术，这种细胞或粒子是经 过特异荧光标记的。其特点是测量速度 快，每秒钟能测数千个乃至上万个细胞， 且可进行多参数测量，另一特点是在分 析的同时可把具有指定特征的细胞分离 出来，这就是分选技术。
FCM(Flow Cytomytry 流式细胞术)
流式样品制备过程中常见的问题及解决对策
常见问题
原因
解决对策
细胞密度低 制备过程中细胞损失 增加离心时间、吸弃上清
非特异荧光强 碎片多
细胞聚集
荧光弱
流式荧光技术
流式荧光技术又称液态芯片技术(Luminex xMAP技术)，其整和了荧光编码微球、激光分析、应用流体学及高速数字信号处理等多项最新科技，是美国Luminex公司于上世纪末开发出的新一代高通量发光检测技术。
目前该技术已被广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别等领域，并得到各权威机构和医学界的高度认可。
2005年，该技术荣获Frost&Sullivan颁发的“年度国际临床诊断技术革新大奖”。
目前，由Luminex技术平台获得实验数据发表的科研文献已超过12000篇。
每年有数千篇引用流式荧光技术的文献，其中数百篇为Pubmed收录的高质量研究文献。
我国也已有不少厂家将先进的流式荧光技术平台用于临床检验领域高端的体外诊断试剂开发和生产，如国内的透景生命（股票代码：300642）、益善生物及协和洛克等。
其中，透景生命是国内最早引入流式荧光技术的体外诊断试剂公司，也是Luminex公司在国内最大的开发型合作伙伴，在国内最早获得CFDA批准将流式荧光技术用于临床检验试剂的生产。
流式荧光技术特点及原理流式荧光平台的突出特点在于其可进行高速高效的多指标联检、既可对蛋白也可对核酸进行分析、既适用于临床检验也适用于科研、高灵敏度荧光发光可进行定性或定量分析，而且检测时对样本需求量极少，特别适合一些珍贵样本的多指标分析。
此外，平台具有极佳的开放性和拓展性，用户可根据自己的需求来设计和实现对不同目标分子的联合检测。
该技术是以直径5.6μm（约为头发丝直径的十五分之一）、大小均一的荧光微球作为免疫或核酸杂交反应的载体，微球表面包被有特异性抗体或核酸探针，可与样本中待检分子特异性结合。
微球经两种荧光染料染色编码，可获得100种不同特征荧光谱的微球，不同荧光编码微球连接不同抗体或核酸探针并可在同一反应体系内进行反应。
当微球逐颗经过仪器检测时，检测仪发射红色激光识别微球的荧光编码以确定检测项目类型，发射绿色激光读取待检物荧光信号强度进行定性或定量分析。
胃蛋白酶原的定量检测方法及其临床应用的研究进展
胃蛋白酶原的定量检测方法及其临床应用的研究进展何忠发;骆安德;卢彦蕙;俞广全;蒙顺武;罗雪林;覃聪【摘要】胃蛋白酶原(PG)是胃蛋白酶前身,分为PG Ⅰ和PGⅡ.血清PG水平可反映胃黏膜组织的病变情况,如幽门螺杆菌感染和萎缩性胃炎.定量检测血清PG Ⅰ、PGⅡ水平及其比值可用于胃癌高危人群的筛查,过低的PG Ⅰ水平和PGⅠ/PGⅡ比值提示早期胃癌的可能;PG Ⅰ、PGⅡ水平也是监控胃癌术后复发的良好指标.本文从PG的分子结构、定量检测方法学及其临床应用等方面进行综述.【期刊名称】《广西医学》【年(卷),期】2016(038)003【总页数】4页(P398-401)【关键词】胃蛋白酶原;胃癌;萎缩性胃炎;定量检测;临床应用;综述【作者】何忠发;骆安德;卢彦蕙;俞广全;蒙顺武;罗雪林;覃聪【作者单位】广西来宾市人民医院检验科,来宾市546100;广西来宾市人民医院检验科,来宾市546100;广西来宾市人民医院检验科,来宾市546100;广西来宾市人民医院检验科,来宾市546100;广西来宾市人民医院检验科,来宾市546100;广西来宾市人民医院检验科,来宾市546100;广西来宾市中医医院检验科,来宾市546100【正文语种】中文【中图分类】R735.2综述胃癌是全球第5大高发恶性肿瘤，死亡率高居第3。
早期胃癌并无明显临床症状，导致大部分患者错过了最佳治疗时机。
萎缩性胃炎是胃癌非常重要的癌前病变，发展至胃癌的风险是正常人的90倍。
胃蛋白酶原(pepsinogen，PG)是胃蛋白酶前体，主要由胃黏膜主细胞分泌，分为PGⅠ和PGⅡ。
血清PG水平可反映胃黏膜组织的病变情况，如幽门螺杆菌感染和萎缩性胃炎。
从幽门螺旋杆菌感染到萎缩性胃炎，最后发展为胃癌的整个过程中，伴随PG的变化。
联合检测血清PGⅠ和PGⅠ/PGⅡ比值(pepsinogen Ⅰ/Ⅱ ratio，PGR)是判别正常胃黏膜或慢性萎缩性胃炎，甚至是胃癌的一种可靠的无创性方法，具备“血清学活检”的作用。
多重微球流式荧光免疫技术检测抗核抗体谱的评价与临床应用分析
多重微球流式荧光免疫技术检测抗核抗体谱的评价与临床应用分析［摘要］目的：探讨抗核抗体谱采用多重微球流式荧光免疫技术检测价值。
方法：选取我院在2019年1月至2020年1月收治的自身免疫病患者83例，设为自身免疫病组，同期选择其它疾病29例，设为其他疾病组，选择健康体检者15例，设为正常组。
应用间接免疫荧光法（IIF）、免疫印迹法（IB）、流式荧光免疫法（MBFFI）对109标本实施检测。
结果：相较单用流式荧光法，间接免疫荧光法和流式荧光免疫法联合，有更高的灵敏度（P<0.05）。
相较单用免疫印迹法，间接免疫荧光法联合免疫印迹法检测，有更高的特异度（P<0.05）。
结论：抗核抗体谱采用多重微球流式荧光免疫技术检测，相较免疫印迹法，有更高的特异度。
关键词：抗核抗体谱；多重微球流式荧光免疫技术；特异度；敏感度就自身免疫病（AID）疾病而言，自身抗体属一项重要特征，为常用诊断和鉴别诊断的方案。
特异性自身抗体包括抗核小体抗体、抗核糖核酸蛋白抗体等，是经基因重组或纯化获取的具特异性的自身抗体[1]。
自身抗体检测方法多样，其中多重微球流式荧光免疫技术（MMFFI）为集合了激光分析、流式细胞术等多种极具代表性技术的检测平台，以灾光编码所具有的微球为技术核心，将之用于临床检测，可对滴度和核型鉴定存在的主观性问题予以防范。
本研究就多重微球流式荧光免疫技术对抗核抗体谱的检测评估价值展开探讨。
1资料与方法1.1 一般资料选取我院在2019年1月至2020年1月收治的自身免疫病患者83例，设为自身免疫病组，男44例，女39例，年龄介于14-79岁之间，平均（42.73±3.85）岁。
同期选择其它疾病29例，设为其他疾病组，男19例，女10例，年龄介于17-78岁之间，平均（42.91±3.97）岁。
同期选择健康体检者15例，设为正常组，其中男8例，女7例，年龄介于19-75岁之间，平均（42.24±3.96）岁。
临床医学检验：流式细胞仪及免疫自动化仪器试题及答案
临床医学检验：流式细胞仪及免疫自动化仪器试题及答案1、单选分选得率与下列哪项因素密切相关()A．分选速度相关B．分选目的细胞总量相关C．不选细胞总量相关D．分选细胞的生物学性质E．不选细胞的生物学（江南博哥）性质正确答案：A2、单选假三维等高图中的一维表示()A．细胞B．细胞数C．线性D．对数E．峰值正确答案：B3、判断题荧光染料浓度较稀时，荧光强度与溶液成反比。
()正确答案：错4、单选流式细胞仪测定时，激发光与稳态单细胞液柱成哪种相交() A．方向一致B．平行C．垂直D．成45度角E．成30度角正确答案：C5、单选线性放大器中输入信号放大10倍，输出信号放大()A．1倍B．2倍C．3倍D．10倍E．100倍正确答案：D6、单选前向散射光(FS)信号的强弱与细胞的哪项成正比()A．体积大小B．细胞性状C．颗粒多少D．位移速度E．荧光强弱正确答案：A7、名词解释能量传递复合染料正确答案：主要用化学法将两种不同激发波长的染料结合一起，在488nm波长激发光照射下，通过一个荧光染料被激发后产生的发射波长激发另一荧光染料产生荧光信号，从而检测到该特定荧光信号。
8、单选流式细胞仪的绝对计数的校准，选择的质控品是()A．FlowcountB．Immuno-TrolCellsC．Flow-SetFluoropheresD．Flow-checkFluoropheresE．以上均不对正确答案：A9、单选面积脉冲信号是指()A．电压脉冲曲线内外区域的大小B．电压脉冲曲线外区域的大小C．电压脉冲曲线内区域的大小D．电压脉冲的高度E．以上都不是正确答案：C10、填空题流式细胞术是对__________________的理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。
正确答案：单个细胞11、单选免疫透射比浊分析应保证()A．抗原过量B．抗体过量C．抗体与抗原处于最适比D．抗原与抗体比例为1:1E．抗原与抗体比例为2:1正确答案：B12、问答题免疫透射比浊分析有何实验要求?正确答案：免疫透射比浊分析的实验要求如下：⑴溶液中存在的抗原抗体复合分子应足够大，分子太小则阻挡不了光线的通过；⑵溶液中抗原抗体复合物的数量要足够多；⑶检测中仍需较长的抗原抗体反应温育时间；⑷检测用抗体一般应选择亲和力高的抗体。
流式荧光指数-概述说明以及解释
流式荧光指数-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述流式荧光指数是一种用于表征细胞或颗粒物的荧光强度的标准化指标。
在细胞生物学和免疫学领域，流式荧光指数广泛应用于细胞分析、蛋白质定量和荧光探针的评价等方面。
随着流式细胞术的快速发展，研究人员需要能够对复杂的细胞样品进行高通量的分析，并获得准确、可靠的数据。
然而，由于荧光信号的强度受到许多因素的影响，例如细胞数量、荧光染料浓度和仪器参数等，直接比较不同样品的荧光强度是困难的。
为了解决这个问题，流式荧光指数被引入。
它是通过将感兴趣的荧光信号与一个参考信号进行比较来计算得出的。
这个参考信号可以是内标，如细胞或颗粒物中存在的共表达荧光标记物，也可以是人工添加到样品中的标准物质。
通过使用流式荧光指数，研究人员可以消除实验条件和仪器参数的影响，从而得到更加准确和可比较的结果。
这对于比较不同样品之间的荧光信号强度，或者用于定量分析和更深入的数据挖掘是至关重要的。
流式荧光指数的应用领域非常广泛。
在免疫学研究中，它被用于表征细胞亚群的分布和活性，从而对免疫应答进行深入研究。
此外，在药物筛选、疾病诊断和检测等领域，流式荧光指数也发挥着关键的作用。
然而，流式荧光指数也存在一些局限性。
首先，选择适当的参考信号对结果的准确性至关重要。
错误的选择可能会导致结果的误差。
其次，流式荧光指数对实验设计和数据分析的严格要求，需要研究人员具备一定的专业知识和技能。
在未来，流式荧光指数将继续发展和完善。
新的计算方法和算法将被引入，以更精确地表征荧光信号强度和亮度。
同时，更多的应用领域将受益于流式荧光指数的应用，推动科学研究和临床诊断的进一步进展。
文章结构是指文章的组织和布局方式，它决定了文章内容的呈现方式和逻辑顺序。
本文将按照以下结构进行论述：1. 引言：- 1.1 概述：介绍流式荧光指数的背景和意义，引出本文的研究对象。
- 1.2 文章结构：说明本文的组织结构和各章节内容安排。
- 1.3 目的：明确本文的目标和写作意图，阐述对流式荧光指数的研究意义。
流式荧光法检测多肿瘤标志物性能评估及临床应用
流式荧光法检测多肿瘤标志物性能评估及临床应用杨恩环;周宇琼【摘要】目的建立检测人血清多种肿瘤标志物的流式荧光法并评估方法学性能.方法将抗AFP、CEA、CA125、CA242、NSE、free-3-hCG、cyfra 21-1、F-PSA、T-PSA、CA15-3、SCC、CA72-4、CA19-9抗体包被于Luminex荧光编码微球,用流式荧光法检测血清中上述标志物,并进行方法学与临床应用评价.结果与ELISA 试剂盒相比,建立的流式荧光法线性范围较宽,灵敏度与电化学发光法较一致.各个指标的批内变异系数(CV)为(6.10±2.35)％,批间CV为(6.61±2.41)％；平均回收率均＞90％.干扰实验结果表明,200 mg/mL三酰甘油、10 mg/mL胆红素和10mg/mL血红蛋白对各指标检测均无显著影响且不受类风湿因子(RF)、异嗜性抗体、人抗动物抗体(HAAAs)及补体等干扰；有效指示AFP高浓度样本、避免hook效应导致的假阴性；临床实验结果表明,该法与电化学发光、ELISA法相关性良好.结论流式荧光法可实现多肿瘤标志物并行测试,方法学性能良好,可以提高检测效率.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2012(030)012【总页数】4页(P960-963)【关键词】流式荧光法;肿瘤标志物;方法学性能评价【作者】杨恩环;周宇琼【作者单位】上海透景生命科技有限公司,上海201203;上海透景生命科技有限公司,上海201203【正文语种】中文【中图分类】R730.4流式荧光是基于荧光编码微球和流式技术的一种临床应用型高通量发光检测技术［1］，具有通量高、配套试剂多、应用领域广、重复性好、既能检测蛋白质又能检测核酸等优点［2-6］。
利用该技术开发的多肿瘤标志物定量检测试剂盒具有多指标、批量标本联合检测的特点，且其速度快，定量准确。
本研究应用流式荧光技术对多种肿瘤标志物进行检测，并对多肿瘤标志物定量检测试剂盒进行性能分析及诊断价值评估，报告如下。
肿瘤分子生物标志物的相关流式定量分析
肿瘤分子生物标志物的相关流式定量 分析
肿瘤分子生物标志物的相关流式定量 分析
• 还有一些作者研究了膀胱癌、结直肠癌等细胞 的P53表达，也证实了P53与肿瘤病理分级相关， 随病理分级的增高而P53表达增强。P53的表达 与肿瘤的复发、生存率亦有关，过量表达的肿 瘤患者生存期短，易复发，预后差。
肿瘤分子生物标志物的相关流式定量 分析
• 应用FCM检测肿瘤P53基因蛋白的异常表达提供 了客观的量化参量，为判断肿瘤的恶性度、预 后以及指导临床治疗，提供新的肿瘤标志物。
• 近年来的研究发现，在人类大多数恶性肿瘤中均存在 P53突变基因，而且不同的致癌物可引起不同的特异性 突变谱。因此P53基因的突变已引起肿瘤研究者极大关 注。
• 研究认为，癌基因致癌作用是通过其效应分子 的癌基因蛋白来发挥其对细胞的转化作用的。 因此，检测癌基因蛋白 的表达量是一种极有效 的研究方法。
肿瘤分子生物标志物的相关流式定量 分析
• 作者对208例石蜡包埋组织、和1000 多例食管 脱落细胞的癌前病变细胞流式 DNA 倍体分析 (见表15)，并指出如下诊断标准，供参考。
1.出现DNA异倍体峰位诊断阳性。 2.S期细胞大于15%，G2M期大于10%(突出的四
倍体峰位)诊断为阳性。 3.S期细胞大于 10-15%， 并有突出四倍体峰位，
肿瘤分子生物标志物的相关流式定量 分析
三、癌基因蛋白产物
㈠ ras P21蛋白
• 自八十年代发现ras原癌基因以来，肿瘤研究人员 对其在肿瘤发生、发展中的作用进行了深入的研 究，发现多种人类肿瘤中存在ras癌基因的激活， 认为ras基因在肿瘤发生的生物机制中起着十分重 要的作用，并发现与人类肿瘤的早期发生和预后 有关，所以ras癌基因的激活和其蛋白P21的表达研 究已成为目前研究的热点之一。
液芯技术应用在肿瘤标志物检测中的应用
液芯技术应用在肿瘤标志物检测中的应用恶性肿瘤会对人体健康造成巨大危害，及早诊断、及早治疗有利于肿瘤的防治。
随着科技的发展，肿瘤标志物的检测方法不断更新，在放射免疫酶联免疫化学发光固态芯片后，现在较常用的是液芯片。
液态芯片液态芯片又称为流式荧光技术液相芯片悬浮阵列，是基于后基因时代而发展起来的，它可以将高速数字信号处理器和计算机运算法则进行有机的整合，具有高通量、高速度、成本低、灵敏度高、线性范围广等优点，可广泛应用于免疫分析核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析等研究，得到了权威机构及医学界共同认可［１］。
1997年，《临床化学》对多功能流式点阵仪及其技术有过专门介绍，并称其为“真正的临床应用型生物芯片”。
随着其研究与应用，许多关于多功能流式点阵仪及其技术的文章，发表在《临床化学》、《临床与免疫诊断学》、《临床微生物》及《癌症》等国际权威的学术杂志上。
2011年7月27日，inova公司的ena系列流点式阵试剂率先通过美国fda严格认证，表明多功能流点式阵仪及其技术得到了美国官方的高度认证。
2005年6月9日，基于xmap技术的论文刊登在《自然》上，这是学术界认可的一项技术所能给予的最高荣誉。
2005年11月，-frost＆sullivan-授予xmap技术“2005年度国际临床诊断技术革新大奖”，表明其在国际临床诊断技术领域已有权威的认证。
液态芯片在肿瘤标志物检测中的应用肿瘤是一个多因素、多阶段及多基因变异的复杂病变过程。
目前临床上常用的肿瘤标志物都是肿瘤相关抗原，一种或几种肿瘤标志物异常可表明同一种肿瘤或不同类型的肿瘤，且不同的肿瘤可能会出现同一种肿瘤标志物，为提高肿瘤标志物辅助肿瘤的诊断，并确定哪种标志物可作为治疗后随访的检测指标。
近年来，越来越多的专家建议选择几种灵敏度且特异性能够互补的肿瘤标志物，组成最佳组合进行联合检测。
液芯出众的高通量检测性能正好契合了临床肿瘤标志物应用的需求。
其基本原理：在不同荧光编码的微球上进行抗原-抗体反应，通过两束激光分别检测荧光信号和微球编码，实现对多种肿瘤标志指标的联合检测。
流式荧光免疫微球分析技术的原理与特征
Sci ,1991 ;32 :336.
[7 ] Grant MB , Khaw PT , Schultz FS , et al. Effects of
epidermal growt h factor ,fibroblast growt h factor and trandforming growt h factor - βon corneal cell chemo2
taxis[J ] . Invest Opht halmol Vis Sci ,1992 ;33 :3292.
[ 8 ] Pastor J C , Calonge M. Epidermal growt h factor and
corneal wound healing : A multicenter study [ J ] .
包括: 以荧光准质微球校定流式细胞仪 ( FCM) ;吸入反应后标本 ;通过在前向 、侧向散 射图上做在机选择 ,选定最佳测试信号区域 ;在 荧光二维 (多维) 散射图上分析荧光信号的强度 (charnel ,道数) ; 以选定的方式分析 、显示及记 录实验结果 。 1. 2 主要技术特点 l. 2. 1 以单个微球作为独立分析单位
反应方式 间接法 FFIA
表 1 FFIA 的主要反应方式与特点
主要反应步骤
技术特点
封闭 、待检血清反应及洗涤 、第一抗体 (抗 反应步骤多 、操作烦琐 、结果的稳定性差
AFP) 反应及洗涤 、荧光标记第二抗体反应 及洗涤 、上机检测分析
直接法 FFIA
封闭 (或不封闭) 、待检血清反应及洗涤 、荧 反应步骤较多 、操作仍烦琐 、结果的稳定性 光标记抗体 (抗 AFP) 反应及洗涤 、上机检 优于间接法 测分析
流式荧光免疫法检测多肿瘤标志物的方法学评价
ｉ ｍｍｕ ｏ ｓａ ｔｏ Ｘ ｉ ｘ Ｌ ｉ ｏｇ ， Ｈ Ｎ ｏｇ ｉ ． （． ｅａｔ ｅｔｆＣｉ ｃｌ ａ ｏ ｔｙ Ｐ ｋｎ ｎ ａｓｙｍｅｈ ｄ ＵＪ ｇ ｉ ，ＵＪ ｓｎ Ｚ Ａ Ｇ Ｈ ｎ ｙ ｎ ｎ ｎ ｎ １Ｄｐ ｒ ｎ ｌ ｉ ｂｒ ｏ ， ｅｉ ｍ ｏ ｎａＬ ａ ｒ ｇ Ｕ ｉ ｒｔ Ｈ ｓｉ ｌ Ｂ ｉ ｇ １０ ７ ， ｈｎ ； ． ｅｉ ｅ ａｏａｏ ｆ Ｍｅｉ ｌＰ ｙｉ ｎ ｎ ｉ ｅ ｎ Ｂ ｉ ｇ ｎ ｅ ｉ ｏ ｔ ， ｅｉ ０ ８ １ Ｃ ｉ ２ Ｂ ｉｎ Ｋｙ Ｌ ｂｒｔｒ ｏ ｄｃ ｈｓ ｓａ ｄ Ｅ ｇｎ ｒ ｇ， ｅｉ ｖ ｓｙ ｐ ａ ｊ ｎ ａ ｊｇ ｙ ａ ｃ ｅｉ ｊ ｎ
标志物 单 抗 联 接 于 不 同微 球 上 （ 球 种 类 可 达 微 １０种 ） 即理 论上最 多 可 以同 时检 测 １ ０种 肿 瘤 ０ ， ０
作者简介 ： 昕， ， ６ 年生 ， 主任技师 ， 徐京 女 １ ６ ９ 副 主要从事临床检验工作。
通讯作者： 张宏 印 ， 系 电 话 ：１￣２ ５ ００。 联 ００ ７９１
为评 价指 标 。 材 料和 方法
一
化学 发光 等技术 ， 而我 们 这 次 方法 学 评 价使 用 的
是上 海透景 生命科 技有 限公 司开 发 的多肿瘤 标 志 物定量 检 测试 剂 盒 （ 式 荧 光 免 疫 法 ） 流 。该 试 剂
盒基 于 Ｌ ｍｎｘ液 相 芯 片技 术 平 台 ， 相 应 肿 瘤 ｕ ｉｅ 将
肿 瘤标 志物在 肿瘤 临床辅 助诊 断 、 疗监 测 、 治 追 踪肿瘤 的复 发和 转移方 面具 有重要 的意义 。临 床 应用 中 ， 常进行 多项肿 瘤标 志物 联检 ， 常 所使 用 的检测 方 法历 经 放射 免 疫 、 酶联 免 疫 、 固相 芯 片 、
上海地区多个肿瘤标志物正常参考值的初步确定
上海地区多个肿瘤标志物正常参考值的初步确定李鼎;陆云;刘兴党【摘要】目的通过回顾分析初步建立上海地区健康人群多个肿瘤标志物的参考区间,可为临床应用肿瘤标志物提供依据.方法选择2012年3月至2013年4月期间在复旦大学附属华山医院进行健康体检样本共计604例,采用流式荧光发光法检测血清中甲胎蛋白(AFP)、糖类抗原125(CA125)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)癌胚抗原(CEA)、神经元烯醇化酶(NSE)、糖类抗原19-9(CA19-9)、总前列腺特异性抗原(tPSA)浓度值,对浓度值做统计分析.结果 AFP参考值:男性＜10.32ng/mL,女性＜8.12ng/mL;CA125参考值:＜27.02U/mL;CEA参考值:男性＜4.3ng/mL,女性＜3.74ng/mL;NSE参考值:女性青年组(＜45岁)＜11.64ng/mL,女性中老年组(≥45岁)＜15.20ng/mL,男性青年组(＜45岁)＜18.47ng/mL,男性中老年组(45岁)＜20.04ng/mL;CA199参考值:＜20.73U/mL;tPSA参考值:＜1.48ng/mL.结论已经初步建立上海地区各个肿瘤标志物参考区间.【期刊名称】《标记免疫分析与临床》【年(卷),期】2014(021)005【总页数】3页(P593-595)【关键词】流式荧光技术;肿瘤标志物;参考区间【作者】李鼎;陆云;刘兴党【作者单位】复旦大学附属华山医院核医学科,上海200040;复旦大学附属华山医院核医学科,上海200040;复旦大学附属华山医院核医学科,上海200040【正文语种】中文肿瘤标志物(tumor marker，TM)是指恶性肿瘤发生和发展过程中，由肿瘤细胞合成分泌或是由机体对肿瘤细胞反应而产生和(或)升高的，可预示肿瘤存在的一类物质。
存在于血液、体液、细胞或组织中［1］。
肿瘤标志物是肿瘤辅助诊断、预后判断、疗效观察、复发检测的重要指标［2］。
十二项细胞因子检测（流式法）的临床意义与检验须知
十二项细胞因子检测（流式法）的临床意义与检验须知为提高我院疾病诊断技术水平，从即日起，检验科利用流式高通量检测技术开展十二项免疫功能相关细胞因子联合检测项目。
本项目将为感染、肿瘤、自身免疫病、妇产科和生殖医学科相关疾病等多种临床疾病的诊治提供重要依据，为前来医院就诊的临床患者提供更为优质全面的检验服务。
细胞因子是由免疫细胞（如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等）及某些非免疫细胞（内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等）经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质，参与机体免疫反应和炎症反应，包括白介素、干扰素、肿瘤坏死因子等。
不同患者在感染过程中反应不同，如感染流感后，机体免疫反应过强，促炎性细胞因子过度释放，引起严重免疫病理损伤称之为“细胞因子风暴”。
“细胞因子风暴”的目标是清除病毒，但也可能导致患者自身的机体损伤。
在流感发展成重症前，采取临床干预至关重要，因此需监测细胞因子，及早识别并监测过度炎症反应，能够为临床的诊疗提供有力帮助。
细胞因子监测范围主要包括感染、肿瘤、自身免疫性疾病、手足口病、胰腺炎或不明原因发热患者；抗生素、免疫调节剂、激素用药前、用药后；手术后；ICU患者等。
一、适用科室：肿瘤科、ICU、呼吸科、感染科、风湿免疫科、血液科、器官移植科、放化疗科、外科、皮肤科、肾内科、眼科、妇科等科室均可以开展，其结果可以为疾病的辅助诊断、指导用药、监测疗效及预后提供参考。
细胞因子12项包括：IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-17、TNF-α、IFN-γ、IFN-α。
方法学：流式免疫荧光法二、收费标准：513元∕人（甲类医保）三、医嘱：医生工作站直接搜索“细胞因子12项”四、抽血要求及报告时限：1-2ml EDTA抗凝血浆（紫管）×1管，无需空腹，随时送检，当日或次日下午4点发出检验报告。
五、临床意义：细胞因子临床意义IL-1β可促进成纤维细胞增殖和胶原合成，参与纤维化；对胰岛β细胞有毒性，与Ⅰ型糖尿病有关；可刺激神经胶质细胞增生，形成瘢痕，与癫痫发病有关；有抗肿瘤作用，能协同IL-2、IFN-γ诱导CTL和NK细胞的杀伤活；与自身免疫病和抑制排斥有关。
流式荧光法检测细胞因子的优缺点分析
流式荧光法检测细胞因子之优势分析细胞因子是由免疫细胞（如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等）和某些非免疫细胞（内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等）经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。
具有调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长、APSC 多能细胞以及损伤组织修复等多种功能。
细胞因子可被分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子、生长因子细胞因子在体内具有重要的病理指示作用，在感染、炎症、自身免疫病、免疫缺陷疾病等状态下，很多细胞因子的表达水平会发生显著变化。
通过对体液中细胞因子浓度的检测可以对疾病诊断和治疗做出相应评价,具有重要的研究及临床应用价值。
由于血清、细胞培养上清、积液中的细胞因子含量低，不容易检测，加上样本数量少，传统的方法无法满足多细胞因子检测。
如传统ELISA方法，一次只能检测一种细胞因子，如果需要检测10种细胞因子，需要的样本量ⅹ10，且需要进行多次重复操作，耗费了大量的样本量和人力成本。
流式编码微球芯片技术（Cytometric Bead Array，CBA），是用流式细胞仪对多重蛋白进行定量检测的方法，能够同时对样本中的多个指标进行定性、定量检测，可应用于细胞因子检测。
目前CBA 检测系统采用聚苯荧光编码微球（有磁性/非磁性）连结特定的捕获抗体，捕捉待测物，同时再加入待测物的荧光抗体，三者形成夹心复合物，通过流式细胞仪进行检测。
流式细胞术的优点是同时可以进行多参数检测，快速并且信息量大，其优势体现在：（1）能够同时对单个样本进行多种检测血清Th1／Th2／Th17 相关细胞因子是实验中经常会用到的检测指标，然而实验室常用的模式动物小鼠的血清量少，很难运用传统的方法如ELISA法进行多因子检测，而CBA 法正好能解决这一问题。
碧芯生物的Beadstar-mPlex TM系列的多细胞因子检测试剂盒是基于CBA 技术的细胞因子检测试剂盒，只需要一份样品，就能同时定量检测小鼠血清中的10种细胞因子（IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、MCP-1、IFN-γ、TNF-α、IL-12p70、IL-1β），可满足大多数研究的需求。
应用流式细胞仪检测CD34+细胞方法学评价(全文)
应用流式细胞仪检测CD34+细胞方法学评价(全文)应用流式细胞术(FACS)测定动员后的外周血及采集的自体外周血造血干细胞(APBSC)中的CD34+细胞及其亚群，操作简单、快速、重复性好，对及时掌握最佳采集时机，准确判断采集的干/祖细胞数量具有重要指导意义。
为准确检测外周血及APBSC中的CD34+细胞，本文比较了几种FACS检测CD34+细胞方法的异同。
1 材料与方法1.1 外周血造血干细胞APBSC采集自经环磷酰胺（CTX）＋重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）动员后的实体瘤患者（淋巴瘤、乳腺癌），采集使用CS3000-Plus血细胞分离机（Baxter公司，美国）。
1.2 CD34+细胞的标记对10份APBSC分别进行2种不同再处理与CD34标记。
1.2.1 溶血法APBSC与CD34-PE荧光单克隆抗体（Immunotec，法国）室温暗处反应15min，然后用细胞裂解液溶解红细胞，待测。
1.2.2 分离单个核细胞法经Ficoll（相对密度1.007）梯度离心，收集界面层单个核细胞，与CD34-PE标记的单抗室温孵育15min，待测。
1.3 FACS检测CD34+细胞上述标记细胞悬液分为2管，其中一管6h内使用流式细胞仪（EPICSELITEESP，COULTER公司）测定CD34+细胞占单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的百分率，另一管经1％多聚甲醛固定，4℃冰箱保存72h后，FACS测定CD34+细胞数。
1.4 荧光标记的CD34单克隆抗体33份APBSC同时分别用表达第2类抗原表位QBEnd10（ClassⅡ,Immunotec）和表达第3类抗原表位8G12（HPCA2，classⅢ，BectonDickinson）的单抗进行标记，比较2组CD34+细胞百分率之间的差异。
1.5 双标记CD34/CD45 APBSC中同时加入抗CD45-FITC（J33）和抗CD34-PE（HPCA2），用溶血法处理细胞，FACS测定CD34+细胞。
流式荧光素标记效率
流式荧光素标记效率一、引言流式荧光技术是一种高效、快速、可高通量的检测方法，被广泛应用于生物学、医学和生物工程领域。
该技术通过将荧光标记的抗体或染料与细胞或其他生物样本结合，以检测特定的蛋白质、核酸或其他生物分子。
其中，流式荧光素标记效率是衡量流式荧光技术应用效果的重要指标之一。
本文将对流式荧光素标记效率进行详细介绍，分析其评估方法、影响因素和优化策略，并对其应用前景进行展望。
二、流式荧光素标记效率的评估流式荧光素标记效率的评估主要通过计算标记阳性细胞的比例或标记强度的百分比来实现。
具体评估方法如下：1.标记阳性细胞比例：通过流式细胞仪检测经过荧光素标记的细胞样本，将结果输出为散点图或直方图，并设定一定的阈值来区分阳性细胞和阴性细胞。
阳性细胞比例越高，标记效率越好。
2.标记强度百分比：通过测量标记细胞的荧光强度，并将其与未标记细胞的荧光强度进行比较，计算出标记强度百分比。
标记强度百分比越高，标记效率越好。
三、影响流式荧光素标记效率的因素影响流式荧光素标记效率的因素有很多，主要包括以下几个方面：1.抗体或染料的选择：不同的抗体或染料与目标分子的结合能力不同，选择高亲和力的抗体或染料可以提高标记效率。
2.抗体或染料的浓度：抗体或染料浓度过低会导致标记效率低下，浓度过高则可能引起非特异性结合，导致假阳性结果。
3.标记条件：标记温度、时间和pH值等条件也会影响标记效率。
一般来说，低温、长时间和中性pH条件下进行标记可以提高效率。
4.细胞状态：细胞状态对标记效率也有影响。
活细胞和固定细胞的标记效率不同，凋亡细胞和非凋亡细胞的标记效率也不同。
因此，在实验过程中需要保持细胞状态的一致性。
5.其他因素：样本中杂质、内源性荧光物质和仪器性能等因素也可能影响标记效率。
四、流式荧光素标记效率的优化策略针对影响流式荧光素标记效率的因素，可以采取以下优化策略：1.选择高亲和力抗体或染料：通过比较不同品牌和来源的抗体或染料，选择与目标分子结合力强的品种。
肿瘤分子生物标志物的流式定量分析
总结词
乳腺癌肿瘤分子生物标志物的流式定量分析有助于乳腺癌的早期诊断、治疗和预后评估。
详细描述
乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，早期诊断和治疗对于提高治愈率和生存率至关重要。通过流式定量分析技术，可以检测乳腺癌患者血液或组织样本中肿瘤分子生物标志物的表达水平，如癌抗原15-3（CA15-3）、癌抗原125（CA125）和组织多肽抗原（TPA）等。这些标志物水平的异常升高可能提示乳腺癌的发生或复发，有助于早期发现乳腺癌。此外，流式定量分析还可以评估乳腺癌患者的病情进展、治疗效果和预后，为临床医生制定治疗方案提供重要依据。
肿瘤分子生物标志物定义
根据其来源和功能，肿瘤分子生物标志物可分为肿瘤细胞自身产生的标志物和机体对肿瘤反应产生的标志物两类。
肿瘤分子生物标志物分类
通过检测肿瘤分子生物标志物，有助于早期发现肿瘤，提高诊断的准确性和可靠性。
诊断
通过检测肿瘤分子生物标志物，可以评估肿瘤的恶性程度、转移风险和患者的预后情况。
随着科学技术的发展，新的肿瘤分子生物标志物不断被发现和验证，为肿瘤的早期诊断、预后评估和治疗提供了更多的选择和可能性。
流式定量分析技术原理
CATALOGUE
02
流式定量分析是一种基于流式细胞术的定量检测技术，用于对细胞或亚细胞结构进行多参数、快速、高通量的检测。
该技术通过将待测样本制成单细胞悬液，与荧光标记的抗体结合，利用荧光信号的强度和特异性对目标分子进行定量分析。
抗体和荧光标记物的质量对结果影响较大；样本制备过程可能影响检测结果；物的流式定量分析方法
CATALOGUE
03
采集肿瘤组织或体液样本，确保样本新鲜且无污染。
样本收集
细胞分离
细胞洗涤与固定
雅培ARCHITECTi2000化学发光仪测定6种肿瘤标记物项目的方法学性能评价
DOI: 10. 3969/ j. issn. 1673 4130. 2011. 04. 028
文献标识码: A
文章编号: 1673 4130( 2011) 04 0488 03
随 着 ISO 15189 实验 室认 证工作 在国 内大中 型医 院的 开 展, 使生化、免疫和血细胞等 检验仪 器检验项 目测定 的重要 性 日趋突出, 关于检验项目的方法学性能评价问 题已提到日程上 来, 特别是肿瘤标志物测 定的灵 敏度问 题特别 突出, 现在就 本 科室采用雅培 A RCHI T ECT i2000 型 化 学发 光仪 测 定 AF P、 CEA 、t PSA 、CA125、CA 153 和 CA19 9XR 等 6 种肿瘤 标志 物 的方法学性能评价报道如下。 1 材料与方法 1. 1 仪器与试剂 雅 培 A RCH IT ECT i2000 型 化学发 光仪, 配套试剂、校准品和质控品。 1. 2 评价方案和实验方法[ 1 4] 1. 2. 1 精密度评价实验 按照仪器的作业指导书对仪器进 行 维护保养, 选择雅培 公司生产的 综合质控血 清的低、高 2 个 质 控品( 批号: 2221 11258A ) 作 为 精密 度评 价 的样 本, 按 照 NC CL S EP 5 A [ 1] , 常规 IQ C 在控后按标本 检测程 序进行 测定, 分 别进行批内、批间精密度, 计算均值( x ) 、标准差( s) 和变异系 数 ( C V) 。 1. 2. 2 准 确度评价实 验 按照 方法比对 试验[2] 完成: 用校 准 品校准 检 测 系 统, 6 种 肿 瘤 标 志 物 校 准 品 的 批 号 为 A FP ( 75454L F00) ; CEA ( 62370L F00) ; t P SA ( 73273L F00) ; CA125 ( 42K14209) ; CA153( 41K 14209) 和 CA 19 9XR( 43K 15308) ; 再 对同一批号和不同批号的校准品进行检测, 对 各自检测结果与 靶值进行比对, 计算检测值与靶值的相对偏倚( % ) , 计算公式: Bias= ( 测定值- 靶值) / 靶值 100% 。 1. 2. 3 分 析 测 量 线 性 范 围 ( analytical measurement rang, AM R) 评价 实验 按 照 N CCL S EP6 P2[ 3] 文 件, 选 择 低 浓 度 ( L ) 和高浓度( H) 患者标 本各 1 份, 浓度覆盖 仪器给 定的线 性 范围, H 和 L 按 5L 、4L + 1H, 3L + 2H, 2. 5L + 2. 5H , 2L + 3H, 1L + 4H , 5H 的关系配制成 7 个 浓度系 列血清, 将实 测值与 预 期值 作 比 较, 计 算 回 归 方 程 Y = bX + a, 确 定 检 测 项 目 的 AM R。 1. 2. 4 生物参考区间的验证 按照 N CCLS EP 6 P2[ 3] 推荐 方 法要求进行验证。采取经体检排除血压异常, 肝、胆疾病, 溶 血 性疾病和各种原因所致疾病, 肝胆 B 超, 肝、肾 功能检 验, 乙 肝 表面抗原、丙肝抗体、抗梅毒螺旋体抗体和抗 H IV 均阴性的血 清标本。CEA 需要找部 分吸烟检 测者。采 取常规 条件测 定 6 项检验项目, 要求 20 个检测 数据只允 许有 1 个数 据在给定 的
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及配套 肿 瘤标 志物 检测试 剂 （ 氏公 司） 罗 。
２ ２ 标 本 来 源 ．
２ ０ 年 ５月 ～ ６月 本 院 ２ ０名 患 者 空 腹 静 脉 ０７ ０ 血， 每人 采 集 ４ｍＬ， 血样 分 别 置 于 美 国 Ｂ 公 司分 Ｄ 离胶试 管 中 ， ２ ￣ 保存待 检 。 一 ０Ｃ下
一
致 性 。方 法 ： Ｌ ｍｉ ｘ０ 在 ｕ ｎ ２０多功 能 流 式 荧光 分 析 仪 上评 价 了本 法 的灵 敏 度 、 干 扰 性 、 密 度 、 性 ， 本 法 与 电 ｅ 抗 精 线 对
化 学 发 光法 检 测 结果 的相 关性 作 了线 性 回归 分 析 。结果 ： 测 定 范 围 内 ， 在 流式 荧光 法测 定 Ａ Ｐ、 Ｙ Ｒ ２ １ Ｃ Ａ 和 Ｆ Ｃ Ｆ Ａ １、Ｅ ＮＳ Ｅ等 指标 的线 性 良好 。批 内变 异 系 数 在 ２ ４ ～９ ２ 之 间 ， 间 变 异 系数 在 ４ ７ ～ ９ ８ 之 间 。２ ０ 标 本 ．３ ．３ 批 ．６ ．４ ０ 份
透 景生命 科技 有 限 公 司） Ｅ ７ ； １ ０电化 学发 光 分析 仪
２ ３ 操 作 与 评 价 方 法 ．
试 剂 盒测定 参数 设置 和仪 器操 作严 格按 厂家 规
能较早 发 现肿瘤 的线 索 。流式荧 光技 术 （ 体芯 片） 液
是一 种新 的检测 肿 瘤 标 志物 的 生 物 芯片 技 术 平 台 。
定进行 。采 用 Ｓ Ｓ Ｉ ． Ｐ Ｓ Ｏ ０统 计 分 析 软件 进 行 统 计 分
关 键 词 流 式荧 光 法 肿 瘤标 志 物
ｌ 前 言
恶性 肿瘤是 危 害人体 健康 的重要 原 因 。防治肿 瘤 的基本 方针是早 期 发现 、 早期 诊断 、 早期 治疗 。Ｉ 临
床研 究证 实 ， 肿瘤 标 志 物 的检 测 能 比 Ｃ 核 磁 共 振 Ｔ、 等物 理检 查手段 更早 地发 现 肿 瘤 ， 临床 治疗 赢 得 为 宝 贵时 间 。对 于无 症 状 的病 人 ， 瘤 标 志物 是 唯 一 肿
按 照 ＮＣ Ｌ Ｃ Ｓ评价 方 案 对试 剂 的 精 密 度 、 性 线 等 指标 进行 评价 。测定 结 果与 电化学 发光 法进 行相
关 性 比较 。
３结 果
３ １ 灵 敏 度 （ 出 限 ） 验 ． 检 试
（ Ｅ 和神经元 特异 性烯 醇 化 酶 （ Ｓ ） 多 肿瘤 标 ｃ Ａ） Ｎ Ｅ等 志物的浓度水 平 ， 就该 检测 技术进 行 了方法 学 评价 ，
的检测 结 果 表 明 ， 式荧 光 法 与 电化 学 发光 法 相 关 性 良好 ， 测 Ａ Ｐ Ｃ Ｆ Ａ １ 、 Ｅ 和 ＮＳ 的相 关 系 数 分 别 为 ０ 流 检 Ｆ 、 Ｙ Ｒ ２ １Ｃ Ａ Ｅ ． ９ ６ 、．２ ８０ ９２ ７ ００ ９ ６ 、． ７７和 ０８ ９ 。结 论 ： ． ９２ 本方 法 测 定 结果 准确 可 靠 ， 作 简便 ， 操 值得 推 广 使 用 。
流 式荧 光法 检 测 多肿 瘤 标 志 物 的方 法 学评 价
董 振 南 贾 兴 旺 田 亚 平
（ 放 军 总 医 院 生 化 科 ， 京 ，１ ０ ５ ） 解 北 ０ ８ ３
摘 要 目的 ：应 用 流式 荧 光 法检 测 血 清 中 甲胎 蛋 白（ Ｆ ）细 胞 角 质 素 片段 １ （ Ｙ Ｒ ２ １ 癌 胚 抗 原 （ Ｅ ） Ａ Ｐ、 ９ Ｃ Ｆ Ａ １ ）、 Ｃ Ａ 和神 经 元特 异 性 烯 醇化 酶 （ Ｅ 等 多肿 瘤 标 志 物 的浓 度 水 平 ， 比较 本 方 法 与 电化 学 发 光 法 对 同一 样 本 检 测结 果 的 ＮＳ ） 并
并与罗 氏 Ｅ ７ ｌ ０电化学发光法进行 了比较分析 。
对 试剂 盒 的标 准 品 １ Ｓ Ｄ ） 复 检 测 １ （Ｔ ０ 重 Ｏ次 ，
计 算测 定结 果的 平 均值 （ ）与 标 准差 （ Ｄ） 各 指 叉 ｓ 。 标 灵敏 度为 ＋ ２ Ｄ 所对 应 的浓 度 值 ， 果如 表 １ Ｓ 结
析。
它 的基 本原 理是 ， 不 同荧 光 编 码 的 微球 上 进 行 抗 在 原一 体反 应 ， 过 两 束 激 光 分别 检测 微 球 编 码 和 抗 通 荧光 信号 ， 实现 对多种 肿瘤 指标 的联合 检测 。
本文 用 流 式 荧 光 法 检 测 了 血 清 中 甲胎 蛋 白 （ Ｆ ） 细胞 角质 素 片段 １ （ Ｙ Ｒ １ ） 癌胚 抗 原 Ａ Ｐ、 ９ Ｃ Ｆ Ａ２ １ 、
ｄａ ｉ ｎ ｆ ｒ ｐ ｅ ｉ ｔｎｇ ｑ ｌｔ ｎｄ ｃ ｓ ｏ ｓ ｌｎｅ ｔ ｆ ｅ ｅ ｏｍ ｐ ｉｉ ｎ ｃ ｒ ｃ ｅ ｉｔｃ ． ｔｏ ｏ ｒ ｄ ｃ ｉ ｕａｉｙ ｉ ｉ ｅ ｆｇａ ｏ ｉ ｓ ｗｉｈ ｄｉｆ ｒ ｎｔｃ ｏｓｔｏ ｈａ ａ ｔ ｒｓ ｉｓ
维普资讯
２ ２
分 析 仪 器
２０ 年第 １ ０８ 期
ｔ ｒ ｎ ｏ ｍａ ｉ ｎ ｏ ａ ｏ ｉ ｅ ，ｐ ｏ ｉ ｉ ｇ ａ ｎ ｗ ｅ ｈ ｉ ｕ ｏ ａ ｉ ｎ ｌ ｓｓｏ ａ ｏ ｉ ｅｐ ｒ ｕ ｔ ｎ ｏ ｎ ｕ ｅ ｉ ｆ ｒ ｔｏ ｆ ｓ ｌ ｓ ｒ ｖ ｄ ｎ ｅ ｔ ｃ ｎ ｑ ｅ ｆ ｒｒ ｐ ｄ ａ ａ ｙ ｉ ｆｇ ｓ ｌ ｏ ｄ ｃ ｓａ ｄ ａ ｆ ｕ — ｇ ｎ ｎ
所示 。
表 １ 流式荧光法检测灵敏度试验结果 （ ｇ ｍＬ ｎ／ ）
２ 实 验 部 分
２ １ 仪 器 和 试 剂 ．
Ｌ ｍｉｅ ２ ０流 式 荧 光 检 测 仪 （ 国 Ｌ ｍｉｅ ｕ ｎｘ ０ 美 ｕ ｎｘ 公 司 ） 流式荧 光 多肿 瘤 标志 物 联 合 检测 试 剂 （ ； 上海