喂食甘草甜素对点带石斑鱼非特异性免疫力的影响
饵料维生素C对青石斑鱼的非特异性免疫调节作用
高达 95 %以上 ,大大高于对病原性创伤弧菌的杀灭率 。添加饵料维生素 C 对血清的杀菌 活性无明显作用 ( p > 0. 05)
2 结 果
2. 1 维生素 C 含量对血液白细胞的影响 各实验组鱼血液白细胞总数及其不同种类亚群 (包括淋巴细胞 、嗜中性粒细胞及单核
细胞) 的组成比例见表 1 。由表 1 可见 ,各维生素 C 添加组青石斑鱼的白细胞总数稍高于 非添加组 。各组鱼的白细胞亚群组成比例稳定 ,添加量为 1 000 mg·kg- 1实验组鱼的各种 白细胞比例稍高于其他组 。经 t 检验得知 ,各维生素C添加组和对照组相比无显著性差
白细胞总数
/ ×103·mm - 3
34. 13 ±8. 59 35. 32 ±8. 27 37. 40 ±10. 90 37. 80 ±8. 65 37. 88 ±9. 82
淋巴细胞
/%
74. 10 ±9. 57 75. 22 ±9. 24 79. 7 ±7. 24 73. 10 ±7. 95 74. 62 ±10. 66
衷心感谢广东省饶平县柘林镇人民政府及镇水产技术推广站赖镇安先生对于本项研究所给予的大力支持 、协 助 。感谢中山医科大学免疫学教研室宁波博士 、汕头大学广东省海洋生物重点实验室余刚哲教授和陈会波副教授所 给予的帮助 。
中药药理学全套习题及答案
中药药理学习题答案第一章绪论一、选择题(一)A1型题(单项选择题)1、中药药理学的学科任务是()A 研究中药产生药效的机理B 分离有效成分C 鉴定有效成分的化学结构D 研究有效成分的理化性质E 鉴定中药的品种2、下列哪项不是中药药动学的研究内容()A 生物膜对药物的转运B 药物在体内的分布C 药物的生物转化(代谢)D 药物的排泄E 药物的作用强度3、国内对何种中药最早进行现代药理研究工作()A 黄连B 黄芩C 金银花D 麻黄E 人参(二)X型题(多项选择题。
从每小题5个备选答案中选出2~5个正确的答案)1、中药药理作用的研究思路有()A 植物药研究B 中药复方的整体研究C 有效成分研究D 作用机理研究E 化学成分的合成工艺2、中药药理学的学科任务有()A 促进中医药理论的进步B 参与中药新药的开发C 促进中西医结合D 阐明中药药效产生的机理E 阐明中药药效产生的物质基础二、问答题:简述中药药理学的学科任务绪论答案一、(一)1.A2。
E3。
D(二)1。
AB 2.ABCD问答题答案:(要点)(1)阐明中药药效产生的机理和物质基础(2)要与中药临床研究密切结合(3)促进中医药理论的进步(4)参与中药新药的开发(5)促进中西医结合第二章中药药性理论的现代研究(一)A1型题(单项选择题)1、寒凉药石膏、知母长期给药,可使下列哪种中枢神经介质含量降低()A AchB 5-HTC NAD GABAE 以上均非2、长期给药可使中枢NA和DA含量增加的中药是()A 附子、干姜B 黄连、黄柏C 茯苓、白术D 石膏、知母E 以上均非3、寒凉药长期给药,可引起动物机体的变化是()A 痛阈值降低B 惊厥阈值升高C 脑内兴奋性神经递质含量升高D 心率加快E 血清甲状腺激素水平升高4、温热药长期给药,可引起动物机体的变化是()A 痛阈值降低B 惊厥阈值升高C 脑内兴奋性神经递质含量降低D 心率加慢E 血清甲状腺激素水平降低5、寒凉药长期给药,可引起动物机体的变化不包括()A 痛阈值降低B 脑内兴奋性神经递质含量降低C 心率减慢D 血清甲状腺激素水平降低E 体温降低6、温热药长期给药,可引起动物机体的变化不包括()A 痛阈值降低B 体温降低C 心率加快D 血清甲状腺激素水平升高E 脑内兴奋性神经递质含量升高7、许多寒凉药具有的药理作用是()A 兴奋中枢神经系统B 兴奋交感神经系统C 促进内分泌系统功能D 加强基础代谢功能E 具有感染作用8、温热药的药理作用不包括()A 兴奋中枢神经系统B 兴奋交感神经系统C 促进内分泌系统功能D 加强基础代谢功能E 具有抗感染作用9、辛味药所含的主要成分是()A 氨基酸B 有机酸C 挥发油D 生物碱E 皂苷10、与辛味药健胃、化湿、行气、开窍功效无明显关系的药理作用是()A 促进消化功能B 使神志昏迷病人苏醒C 抗心绞痛D 扩张冠状动脉E 抗感染11、酸味药所含的主要成分是()A 挥发油B 皂苷C 有机酸和鞣质D 生物碱E 糖类12、酸味药所含鞣质的主要药理作用是()A 镇静B 镇咳、祛痰C 利尿消肿D 止泻、止血E 降低血压13、甘味所含的主要成分是()A 挥发油B 皂苷C 有机酸和鞣质D 生物碱E 氨基酸和糖类14、补虚药的药味主要为()A 辛B 酸C 甘D 苦E 咸15、苦味药所含的主要成分是()A 挥发油B 蛋白质C 有机酸D 生物碱E 鞣质16、在有毒中药的五味中占有比较高比例的味道为()A 辛B 酸C 甘D 苦E 咸17、咸味药所含主要成分是()A 挥发油B 无机盐C 有机酸D 生物碱E 鞣质18、咸味药主要分布在下列哪类药物中()A 清热药B 温里药C 祛风湿药D 理气药E 温肾壮阳药19、寒凉药常具有的药理作用是()A 强心B 平喘C 升高血压D 抗肿瘤E 抗休克20、马钱子的中毒症状主要表现在()A 消化系统B 心血管系统C 泌尿系统D 中枢神经系统E 呼吸系统(二)B1型题(每组题的备选答案在前,试题在后。
复方中草药对大菱鲆非特异性免疫力的影响_李华
第28卷第2期大连海洋大学学报Vol.28No.2 2013年4月JOURNAL OF DALIAN OCEAN UNIVERSITY Apr.2013文章编号:2095-1388(2013)02-0115-06复方中草药对大菱鲆非特异性免疫力的影响李华,张太娥,李强(大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室,辽宁大连116023)摘要:将牛膝、板蓝根、甘草、陈皮、肉桂、麦芽、神曲7味中草药,粉碎后经80目筛网过滤,按一定比例混匀,以2%、4%和6%的质量分数添加于基础饲料中连续投喂体质量为(29.00ʃ1.82)g的大菱鲆Scophthalmus maximus,对照组投喂不添加中草药的基础饲料,试验共进行28d,试验结束后测定大菱鲆的非特异性免疫指标及抗病力。
结果表明:在整个试验周期内,4%浓度组大菱鲆血清溶菌酶活力和抗菌活力均比对照组有显著升高(P<0.05);试验前2周4%和6%浓度组鱼血清抗蛋白酶活力较高,后2周2%浓度组鱼血清抗蛋白酶活力逐渐升高,并显著高于其他组(P<0.05);试验前3周4%浓度组鱼血清补体C3含量与对照组相比显著升高(P<0.05);在整个试验周期内,2%、4%、6%浓度组鱼血清NBT阳性细胞数与对照组相比均显著升高(P<0.05),且4%和6%浓度组升高更为明显;在整个试验周期内,4%和6%浓度组头肾白细胞吞噬活性均呈现先降低后升高的趋势,均在第4周达到峰值,且显著高于对照组和2%浓度组(P<0.05);攻毒试验表明,各组的存活率从大到小依次为4%浓度组>2%浓度组>6%浓度组>对照组。
本研究表明,该复方中草药可以显著提高大菱鲆的非特异性免疫力和抗病力,2%浓度组在一定水平上有促进作用,4%浓度组效果更为显著。
关键词:大菱鲆;复方中草药;非特异性免疫力;抗病力中图分类号:S941.42文献标志码:A大菱鲆Scophthalmus maximus是中国北方地区的主要海水养殖品种之一,随着养殖业不断向集约化、规模化发展,给鱼类疾病防治提出了新的课题。
2023届辽宁省县级重点高中联合体高三第二次模拟考试生物答案
高三生物考试参考答案
!%&解析本题主要考查溶酶体的结构与功能考查学生的理解能力高尔基体主要是对来 自内质网的蛋白质进行加工分类和包装以及形成囊泡运输蛋白质溶酶体内的酸性水解 酶最初是在核糖体上合成的&项符合题意
'%(解析本题主要考查基因表达考查学生的理解能力细胞质基质中的)*$+ 通过核孔 逆行进入细胞核不会穿过磷脂分子层+ 项错误)*$+ 在细胞核和细胞质之间穿梭会直接 影响翻译过程&项错误)*$+逆行运回细胞核会减少细胞质基质中)*$+ 的含量从而降 低细胞内蛋白质合成速率(项正确在翻译的过程中细胞内)*$+ 与其搬运的氨基酸的种 类不是一一对应的一种氨基酸可以被多种)*$+ 转运,项错误
浓度胰岛素处理组肝细胞的葡萄糖消耗量较少"细胞对胰岛素的敏感度降低"因此胰岛素受 体可能减少了"+ 项错误$高浓度胰岛素组的细胞消耗葡萄糖较少"生成的丙酮酸较少"&项 错误$该实验的自变量为是否加入高浓度胰岛素及处理的时间"( 项错误$对照组细胞的葡 萄糖消耗量更高"因此细胞内肝糖原的合成量会更多", 项正确# !!%&解析本题主要考查种群的特征考查学生的理解能力在近岸石区域"大黄鱼与其他 鱼类的食性!生存空间等相同"生态位有重叠"&项符合题意# !'%+解析本题主要考查生态位考查学生的理解能力生物的生态位是经长期的协同进 化形成的"受其他物种及环境因素的共同影响"而不是完全取决于竞争能力"+ 项错误# !-%,解析本题主要考查细胞的生命历程考查学生的理解能力缺氧诱导因子 0@>1!是 在缺氧条件下存在于人体内的转录因子"是血管瘤形成的关键因素#0@>1!在缺氧条件下 可促进血管内皮生长因子的表达"+ 项错误$糖蛋白减少可导致血管瘤细胞迁移"而不是其 无限增殖的原因"&项错误$缺氧诱导因子 0@>1!不是激素分子"(项错误$根据题意"使用 0@>1!抑制剂可抑制诱导因子的转录"从而避免血管瘤形成"所以可能为癌症病人临床治疗 提供新思路", 项正确# !.%,解析本题主要考查植物激素的调节考查学生的理解能力根部细胞对生长素敏感" 生长素浓度高时抑制根细胞的生长"浓度低时促进根细胞的生长"光照一侧的细胞内的生长 素被 A@$'运出"细胞内生长素浓度低"生长速度会作出相应的改变"+ 项错误$光照下" A@$'集中分布在细胞膜上"生长素被运出细胞"细胞中生长素含量降 低"& 项 错 误$生 长 素 含量升高到一定程度会促进乙烯合成"( 项错误$植物感光依靠光敏色素", 项正确# !"%(解析本题主要考查细胞分裂与变异考查学生的理解能力#图示细胞为体细胞"含有 -对同源染色体"'个染色体组"+ 项错误$该动物的基因型为 +B且图示细胞为体细胞"因 此号染色体上的基因发生了突变"&项错误$该细胞产生的子细胞的基因型为 ++!+B或 +B!BB"(项正确$正常情况下"该动物产生的精细胞中有!''含有 5染色体",项错误# !/%,解析本题主要考查自由组合定律和伴性遗传考查学生的理解能力亲本杂交组合 为无眼雌蝇C白眼雄蝇"若基因 D'E位于 5 染色体上"则亲本的基因型为 5E5E!5D2"子代 雌蝇表现为有眼"雄蝇表现为无眼"和杂交实验不相符"+ 项正确$分析杂交实验可知"亲本 的基因型组合为EE5*5FCDE5F2"因此亲本雄蝇能产生.种基因型的配子"而雌蝇能产生' 种基因型的配子"&项正确$>! 的白眼雌!雄果蝇随机交配"所得子代果蝇只要有眼(D)*则
饲料中添加甘草酸对刺参生长、免疫及抗病力的影响
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水
生
生
物
学
报
34 卷
问题 , 严重影响海参产业的健康发展。为了解决养 殖病害和食品安全等诸多问题 , 寻找绿色环保的抗 生素替代品是目前的研究热点。 棘皮动物的防御机制是通过细胞免疫反应和体 液免疫反应完成的。变形细胞、球形细胞、纺锤细 胞、结晶细胞、透明细胞和淋巴样细胞等体腔细胞 形成了棘皮动物免疫效应的细胞系统 [3]; 体液免疫 反应决定于体腔液中存在的多种免疫因子 (溶菌酶、 活性氧、超氧化物歧化酶、酸性磷酸酶等 ) ; 其中 体液免疫反应是棘皮动物抵抗微生物入侵的主要防 御反应 。 免疫增强剂是指单独或同时与抗原使用均能增 强机体免疫应答的物质 , 其通过提高养殖动物的非 特异性免疫力来提高机体对病原的抵抗力 , 这种免 由于免疫增强 疫是没有记忆的 , 且持续时间不长 [7]。 剂具有比抗菌素更安全 , 比疫苗作用范围广等优点 , 越来越受到重视 , 特别是对于提高以非特异性免疫 为主的无脊椎动物 ( 对虾、贝类及海参 ) 的免疫力尤 为重要。目前水产养殖中常用的免疫增强剂主要有 细菌提取物 (如脂多糖、葡聚糖等 )、动植物提取物、 化学合成物质、多糖及维生素类。 甘草酸 (Glycyrrhizin) 又名甘草皂甙 , 是从中草 药甘草中提取的一种有效药用成分 , 在哺乳动物中 , 甘草酸可有效的提高动物对疾病的抵抗力 。甘草 酸具有免疫调节等多种生物活性 , 如类皮质激素作 用、抗瘤作用、抗炎作用、抗病毒作用和抑菌作用 等。甘草酸的这些作用在临床药学中已经被应用于 疾病的治疗与预防 。在鱼类当中甘草酸也具有类 似的作用 , Edahiro, et al. 研究报道 , 五条 (Seriola quinqueradiata) 口服甘草酸后 , 可显著提高其对链 状球菌 (Enterococcus seriola)抵抗力。同时体外实验 证明甘草酸可以显著提高虹鳟鱼巨噬细胞的呼吸爆 发活性 。 目前 , 关于海参免疫增强剂研制与应用只有零 星报道。 Sun, et al.[8]体外实验表明 , 脂多糖可以提 高刺参体腔 细胞的吞噬 及呼吸爆发 活性。马跃 华 等 [9]在海参幼体饲料中添加 3%的免疫多糖 , 结果显 示试验组成 活率和平均 体重比对照 组分别提高 了 15%和 13%。 Wang, et al.[10]在海参饲料中添加不同 梯度的维生素 C, 结果表明饲料中添加维生素 C 可 显著提高刺参体腔细胞的吞噬活性、呼吸爆发活性
酵母多糖、壳聚糖、甘草酸对草鱼非特异性免疫功能的影响
酵母多糖、壳聚糖、甘草酸对草鱼非特异性免疫功能的影响作者:张涛来源:《河北渔业》 2017年第9期张涛(辽宁省淡水水产科学研究院,辽宁辽阳 111000)摘要:将草鱼放入网箱中,在基础饲料中分别添加不同剂量的酵母多糖、壳聚糖和甘草酸后,进行投喂,研究其对草鱼血清中菌酶(LSZ)、过氧化氢酶(CAT)及补体C3活性的影响。
结果表明:投喂添加中药免疫添加剂的饲料49 d 后,与对照组比较,酵母多糖添加剂各组、壳聚糖高剂量组草鱼血清LSZ活性显著提高(P<0�05);酵母多糖低剂量组、中剂量组和壳聚糖高剂量组草鱼血清CAT含量显著提高(P<0.05);酵母多糖中剂量组草鱼血清补体C3活性显著提高(P<0.05),说明中药免疫添加剂对增强草鱼免疫活性具有一定的作用。
关键词:中药免疫添加剂;草鱼;LSZ;CAT;补体C3基金项目:国家农业部“现代农业产业技术体系建设专项-大宗淡水鱼沈阳综合试验站建设—大宗淡水鱼出血性疾病综合防治技术集成示范”项目(CARS-46-28)。
作者简介:张涛(1981-),男,高级工程师,研究方向:鱼病学。
E-mail:zhangyuntao8888@。
DOI:10.3969/j.issn.1004-6755.2017.09.003草鱼俗称鲩鱼、鲩,东北俗称草根子,属鲤形目,鲤科,雅罗鱼亚科,草鱼属,为中国东部广西至黑龙江等平原地区特有经济鱼类;其生长迅速,饲料来源广,肉质鲜美,是中国淡水养殖的四大家鱼之一。
近年来,随着我国淡水养殖业的发展,人工养殖草鱼受到水环境、饲料及养殖管理等条件变化因素影响,常常发生疾病而造成大量死亡,严重损害了我国淡水养殖业的发展。
因此,研制草鱼免疫添加剂,促进鱼体的疾病抵抗能力,对人工养殖草鱼技术的发展具有极其重要的意义。
免疫添加剂因为具有高效、毒副作用少、无污染等特点,是抗生素和化学药物的最佳替代品,因此受到水产工作者的亲睐。
近年来,由国内外的研究报道可知,水产动物饲料中添加免疫添加剂可促进水产动物体的非特异性免疫指标的提高[1-5],从而增强水生动物的免疫能力;曹振杰等[6]在草鱼饲料中添加不同剂量的免疫多糖明显增强了鱼体的免疫能力,提高了SOD活力。
几种饲料对斜带石斑鱼消化酶活性的影响
几种饲料对斜带石斑鱼消化酶活性的影响陈度煌;林建斌;黄种持;梁萍;林克冰;朱庆国【摘要】Effect of different feeds on activity of digestive enzymes in Epinephelus coioides was examined in this article.1500 Epinephelus coioides were randomly divided into three groups that two were replicated in each group,and were fed with three different feeds for 50 days,and then five Epinephelus coioides were randomly selected from each control to detect digestive enzyme activity.The results showed that different types and ingredients of feeds had significant effect on the digestive enzymes activity of Epinephelus coioides.In this experiment,No.2 feed had the highest amylase activity,No.3 feed had the highest overall protease activity,and fat was digested mainly in the intestine,three lipase activities in the intestine were not different obviously.%本文分析了不同饲料对斜带石斑鱼消化酶活性的影响。
饵料中蛋白质、糖类、脂类对点带石斑鱼生长的影响
至鏖奎量;堡塾主墨鱼堕:蕉耋:塑差壁:兰鲎歪堡垒皇篓丝墅堕查主鱼圈图1特定生长率的等值线斑鱼幼鱼『(3.79_+0.1)gl对蛋白质的营养需求,维持幼鱼最大增蕈所需的蛋白质含量为47.8%;Shiau等(1996)发现要使点带石斑龟幼鱼[(9.22:t-0.1)g】生长最快,饵料中蛋白质最适含量为50.2%。
以上试验数据均是用单因素研究方法得出,饵料中最适蛋白水平稍低于本试验结果(56%)。
本试验结果是采用均匀设计法得到,与点带右斑鱼对饵料中实际蛋白质需求量更为接近。
3一点带石斑鱼对饵料中糖类的需求糖类不仅是一种廉价的能源,而且是鱼类某些生理活动必需的能源,同时具有节约蛋白质的作用;此外一些糖类还可以作为粘合剂,增加饲料在水中的稳定性。
减少其他成分的溶失。
因此,人们对水产动物糖类的营养生理和营养需求也越来越关注。
Shiau等(2001)研究点带石斑鱼对糖类的利用及糖类节约蛋白质效应,结果表明,淀粉在低蛋白质含量条件下具有节约蛋白质的效应。
Shiau(2001)发现,点带石斑鱼对淀粉的利用比葡萄糖更好。
本试验的回归方程中糖类对生长的影响不显著而被剔除。
考虑到实际生产,建议饲料中淀粉的含量为6%一8%。
3.3点带石斑鱼生长对饵料中脂类营养的需求脂类是维持石斑鱼的生长、发育、存活、健康和繁殖的能源物质和营养因素,在其生命活动过程中发挥着重要的作用,且具有节约蛋白质的效应。
但不同种类和同一种类不同生长发育阶段的石斑龟对脂类、脂肪酸的营养需求不同,不同脂肪源和饲料组成也会影响石斑鱼脂类的营养需求量。
周屯红等(1996)发现,点带石斑鱼配合饲料中脂类适宜含量为9.87%,而马平报道饲料中粗脂肪含量为3.0%--4.0%时,点带石斑鱼幼鱼的增重较快。
Lin等(2003)报道,点带石斑鱼幼鱼饵料中粗脂肪4%.12%时增重最快。
陈学豪等(1996)报道,适当提高粗脂肪含量能提高石斑鱼对饵料中蛋白质的利用效率,起到节约蛋白质的效应。
甘草甜素对CYP1A2酶体外活性影响研究
甘草甜素对CYP1A2酶体外活性影响研究摘要】目的:研究甘草甜素(glycyrrhizin)体外对细胞色素P450酶亚型CYP1A2活性的影响。
方法:以咖啡因为探针药,采用高效液相色谱法测定探针药与相应代谢产物的浓度,研究甘草甜素在人肝微粒体孵化体系和重组酶体系中对CYP1A2活性的影响。
结果:在人肝微粒体反应体系中,0.1,0.2,0.4,0.8mmol?L-1甘草甜素使咖啡因的代谢产物的生成分别降低了31±15%(p=0.007)、43±8%(p=0.012)、48±6%(p=0.037)、49±4%(p=0.029);在体外重组酶反应体系中,0.1,0.4mmol?L-1甘草甜素使咖啡因的代谢产物的生成分别降低了48±9%(p=0.012)、82±8%(p=0.004)。
结论:甘草甜素对CYP1A2酶体外活性有较明显的抑制作用;随着甘草甜素浓度的增高,抑制作用也相应增强。
【关键词】甘草甜素肝微粒体重组酶 CYP1A2【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2014)11-0273-02【Abstract】Objective: To investigate the effect of glycyrrhizin on CYP1A2activityin vitro.Method:Caffeine(a CYP1A2 substrate) was used as probe. The concentrationsof the probe drug and its metabolite were determined by HPLC. The effect of glycyrrhizin on activity of CYP1A2 was detected through human microsomes and recombinant enzyme reaction system in vitro. Results:Glycyrrhizin inhibited theactivity of CYP1A2in vitro. In human liver microsome, 0.1mM, 0.2mM, 0.4mM,0.8mMglycyrrhizin decreased the activities of CYP1A2by 31±15%(p=0.007), 43±8%(p=0.012), 48±6%(p=0.037), 49±4%respectively. In recombinant enzyme reaction system, 0.1mM, 0.4mM,glycyrrhizin decreased the activities of CYP1A2by48±9%(p=0.012)、82±8%(p=0.004).Conclusion:Glycyrrhizin inhibited the activity of CYP1A2in a dose-dependent fashion in vitro .【Key words】glycyrrhizin human microsomes recombinantenzyme cytochrome 1A2甘草甜素是从甘草中分离得到的三萜类成分,又称甘草酸(glycyrrhezic acid),分子式为C42H62O16。
三种免疫添加剂对草鱼非特异性免疫功能的影响
分 别 于试 验 开 始 后 的第 l 、8 42 、
3 5和 4 2天取样 ,每箱取 3 尾鱼 ,尾静脉采血 , 于 4 3 0 m n ℃, 0 0r i 离心 ,0mn 收集血清备用。 / 1 i,
c lsdit u) 干 粉 为 底 物 (im yoeki s冻 c Sg a公 司产 品 ) ,
在 正式 实验 前 ,草 鱼 放 入暂 养 池 驯养 二 周 , 以
适应试验环境 , 其后移人 网箱中。 每天投喂 3 , 次 分 别为 63 、1 0和 l :0 投 饵量 为 鱼体 重 的 4 :0 1: 3 63 , %~ 5 并根据水温 、 %, 摄食情况调整 。试验从为 2 1 年 00
挑选规格整齐 、 体质健壮的鱼 30尾 , 5 平均体 质量
18 / ,用 3 0 尾 g %的食盐水溶液消毒后 ,随机分成 7 组, 每组 2 尾 , 5 每组 2 重复 , 个 放入 1 网箱 中. 4个
网箱为 1 x . rx . m。设 2个对 照组 。网箱 放 . m 1 05 0 0e
后 , 即置 于 冰浴 中 1 nn终 止 反 应 , 其 光 密 度 立 0一 i 测 的溶菌 酶活 性在 试验后 期 ( 3 第 5和 4 2天 ) 于对 照 高
组, 但与对照组差异不显著( O 5 。 .) 0
表 1 3种 免 疫 添 加 剂 对 草 鱼 血 清 溶 菌 酶 活性 的影 响
效 、 用 的方法 l1 实 】。 _ 2
相 容性 , 可被 溶 菌酶 等溶 解 , 毒副 作 用 , 无 其代 谢 物
也无毒 , 能被生物体完全吸收【。研究表明 , n J 壳聚糖 既可 以提高 出于正常生理 条件下鱼体 的非特异性
饥饿和再投喂对点带石斑鱼幼鱼生长_生化组成和行为的影响
第31卷第2期海洋渔业V o.l 31,No .22009年05月M ari n e Fis heri esM ay , 2009文章编号:1004-2490(2009)02-0146-08饥饿和再投喂对点带石斑鱼幼鱼生长、生化组成和行为的影响收稿日期:2009-01-19资助项目:国家八六三项目(92006AA 10A 414-3);浙江省科技厅面上项目(2007B32020)作者简介:柳敏海(1979-),男,湖南邵阳人,研究方向:水产动物繁育及病害防治。
E m a i:l okso1125@yahoo .co m.cn通讯作者:陈 超.E m a i:l ysfr ichenchao @柳敏海1,彭志兰1,施兆鸿2,罗海忠1,傅荣兵1,毛志增1,陈 超3(1.浙江省舟山市水产研究所,浙江省海洋开发研究院水产养殖技术研究推广中心,舟山 316000;2.中国水产科学研究院东海水产研究所,农业部海洋与河口渔业重点开放试验室,上海 200090;3.中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛 266071)摘 要:以点带石斑鱼幼鱼为试验动物,进行短期饥饿和再投喂对其生长、生化组成及行为的影响试验。
对照组(S0)持续投喂30d ,饥饿组S2、S4、S6、S8和S10分别饥饿2d 、4d 、6d 、8d 和10d 后再分别恢复投喂28d 、26d 、24d 、22d 和20d ,试验设3平行。
结果表明:随着饥饿时间的延长,点带石斑鱼幼鱼全长、湿重、粗蛋白、粗脂肪、糖类的含量和能值均逐渐减少,粗蛋白、粗脂肪和糖类的相对损失率顺序为糖类>粗脂肪>粗蛋白。
再投喂后,S2湿重超过S0(P >0.05);各试验组粗蛋白含量除S10外,均与S0差异不显著(P >0.05);S2粗脂肪含量超过S0组,且差异显著(P <0.05),S4粗脂肪含量与S0组差异不显著(P >0.05);S2糖类含量达到了S0组(P >0.05)。
中草药在水产养殖中应用的研究进展
64 《中国水产》2007年第4期 责任编辑 叶佳林中草药以其成本低,较少的残留和毒副作用,日益成为替代化学合成药物的新一代水产用药。
本文概述了中草药的有效成分和作用机理,及以此为基础在水产养殖业中的应用,讨论了应用中存在的问题和注意事项。
一、中草药的有效成分和作用机理中草药由于结构复杂,成分多样,因此不同的中草药其作用亦不同。
研究表明,中草药不但含有大量的生物碱、挥发油、苷类、有机酸、鞣质、多糖及多种免疫活性物质和一些未知的促生长活性物质,还含有一定量的蛋白质、氨基酸、糖类、矿物质、维生素、油脂、植物色素等营养物质。
这些成分可以促进机体代谢和蛋白质及酶的合成,从而加速水产动物的生长发育,提高饵料转化率,增强体质,降低发病率和死亡率。
1.多糖多糖是主要的免疫活性物质,从中草药中提取分离出的多糖种类繁多,其中研究较多的有人参多糖、黄芪多邢跃楠 赵 文 大连水产学院辽宁省省级高校水生生物学重点实验室 116023糖、香菇多糖、猪苓多糖、茯苓多糖、党参多糖、刺五加多糖、淫羊藿多糖。
一些研究发现黄芪多糖能明显促进机体抗体的生成, 可使实验小鼠血清IgA、IgM、IgG、的水平提高,抗体分泌细胞及T、B淋巴细胞和NK细胞明显增强,增强正常小鼠和免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞数及功能。
用茯苓多糖进行腹腔注射可增强实验小鼠的巨噬细胞吞噬功能,其体外实验的研究发现能使T细胞的毒性增强20倍 ̄28倍。
研究证实巨噬细胞中存在特异性识别酵母β(1,3)-葡聚糖的受体,当活性多糖与受体结合后激活此类细胞,释放大量具有杀菌能力的活性氧,吞噬细胞内溶酶体各种活性酶如碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和溶菌酶等活性增强,即吞噬细胞吞噬能力增强。
另外活性多糖提高酚氧化酶的活性。
2.生物碱生物碱是一类具有复杂的氮杂环结构,并具有碱性。
是人类最早利用的植物杀虫剂,如百部、藜芦、苦参、烟草、雷公藤,它们作用于昆虫的乙酰胆碱受体或乙酰胆碱酯酶起倒杀虫作用。
草甘膦暴露对斑马鱼胚胎发育的毒性效应及机制
生态毒理学报Asian Journal of Ecotoxicology第18卷第4期2023年8月V ol.18,No.4Aug.2023㊀㊀基金项目:福建省自然科学基金面上项目(2019J01825);南平市科技计划项目(N2020Z005)㊀㊀第一作者:吴玉琼(1973 ),女,硕士,教授,研究方向为环境毒理㊁食品安全,E -mail:****************㊀㊀*通信作者(Corresponding author ),E -mail:****************DOI:10.7524/AJE.1673-5897.20221019003吴玉琼,许祯毅,尚亚明,等.草甘膦暴露对斑马鱼胚胎发育的毒性效应及机制[J].生态毒理学报,2023,18(4):429-438Wu Y Q,Xu Z Y ,Shang Y M,et al.Developmental impact of glyphosate exposure on zebrafish embryos and mechanism involved [J].Asian Journal of Ecotoxicology,2023,18(4):429-438(in Chinese)草甘膦暴露对斑马鱼胚胎发育的毒性效应及机制吴玉琼*,许祯毅,尚亚明,徐晓斌,范俐,齐佳鹏,沈章聖武夷学院茶与食品学院,武夷山354300收稿日期:2022-10-19㊀㊀录用日期:2022-12-31摘要:为了探究环境中草甘膦的毒性效应及致毒机理㊂将斑马鱼(Danio rerio )胚胎暴露于草甘膦(1㊁10㊁100μg ㊃L -1)72h ,观察并记录胚胎孵化率㊁存活率㊁畸形率㊁心率,测定ATPase 活性及胚胎发育相关基因(Tbx5㊁Nkx2.5㊁Tnnt2㊁Bmp2b ㊁Ihh ㊁Shh )表达水平㊂结果显示,高浓度组(10μg ㊃L -1和100μg ㊃L -1)中斑马鱼胚胎存活率和孵化率显著降低,心包水肿率㊁脊柱弯曲率和卵黄囊肿率显著升高;胚胎发育相关基因的转录水平发生了改变,在1μg ㊃L -1组中,Nkx2.5mRNA 水平无明显变化,但Tbx5㊁Tnnt2㊁Bmp2b ㊁Shh 水平明显升高,而Ihh 水平明显降低;在10μg ㊃L -1和100μg ㊃L -1组中,Tbx5㊁Nkx2.5㊁Bmp2b ㊁Ihh ㊁Shh 的mRNA 表达显著降低;在10μg ㊃L -1和100μg ㊃L -1暴露组Na +/K +-ATP 酶和Ca 2+-ATP 酶活性均受到显著抑制㊂较高浓度的草甘膦对于鱼类具有显著的发育毒性,毒性效应机制与胚胎发育相关基因转录水平变化及酶活性抑制有关㊂依据试验结果,草甘膦LOEC 为10μg ㊃L -1,NOEC 为1μg ㊃L -1,环境中的草甘膦残留量达到一定浓度(ȡ10μg ㊃L -1)时对鱼类构成潜在威胁,在实际应用中应全面考察环境草甘膦可能残留的浓度㊂关键词:草甘膦;斑马鱼;发育毒性;毒性机制文章编号:1673-5897(2023)4-429-10㊀㊀中图分类号:X171.5㊀㊀文献标识码:ADevelopmental Impact of Glyphosate Exposure on Zebrafish Embryos and Mechanism InvolvedWu Yuqiong *,Xu Zhenyi,Shang Yaming,Xu Xiaobin,Fan Li,Qi Jiapeng,Shen ZhangshengCollege of Tea and Food Science,Wuyi University,Wuyishan 354300,ChinaReceived 19October 2022㊀㊀accepted 31December 2022Abstract :In order to explore the toxic effects of glyphosate and underlying mechanism,zebrafish (Danio rerio )embryos were exposed to glyphosate at 1,10and 100μg ㊃L -1for 72h,and embryonic hatching rate (48h post -fer -tilization),survival rate,malformation rate,heart rate,ATPase activity and the transcription of development -relatedgenes (Tbx5,Nkx2.5,Tnnt2,Bmp2b,Ihh,Shh )were examined.Both survival rate and hatching rate were signifi -cantly reduced in the high concentration groups (10μg ㊃L -1and 100μg ㊃L -1),the rates of pericardial edema,spine curvature and yolk sac edema were all significantly increased.The transcriptional levels of development -related genes were altered,in the 1μg ㊃L -1group,Nkx2.5mRNA levels showed no significant change,the mRNA levels of Tbx5,Tnnt2,Bmp2b,Shh were significantly increased,while the transcription of Ihh were significantly de -430㊀生态毒理学报第18卷creased.Significantly decreased mRNA levels of Tbx5,Nkx2.5,Bmp2b,Ihh,Shh were observed in the10μg㊃L-1 and100μg㊃L-1groups.The activities of Na+/K+-ATPase and Ca2+-ATPase were significantly inhibited in the10μg㊃L-1and100μg㊃L-1groups.Higher concentrations of glyphosate showed significant developmental toxicity for zebrafish,and the mechanisms underlying toxic effect might be related to the changes in the transcription level of genes related to embryonic development and the inhibition of the enzyme activities.Based on the results of this study,the LOEC of glyphosate is10μg㊃L-1and NOEC is1μg㊃L-1.Thus,glyphosate residue in the environment at a certain concentration(ȡ10μg㊃L-1)would pose a potential threat to fish.In practical application,the residual concentration of glyphosate in the environment should be fully investigated.Keywords:glyphosate;zebrafish;developmental toxicity;mechanism㊀㊀草甘膦(glyphosate)是1971年由Monsanto公司开发的一种内吸传导的非选择性芽后除草剂,其原理是通过抑制植物莽草酸(shikimic acid)途径中关键酶的合成,从而影响植物芳香族氨基酸(aromatic a-mino acid)的生物合成,使蛋白质合成受到抑制,导致植物死亡㊂由于这条生化途径在高等生物中并不存在,通常认为草甘膦对包括人类在内的哺乳动物是安全的,美国环境保护局(United States Environ-mental Protection Agency,US EPA)将草甘膦列为第三类有毒物质(低毒性)[1]㊂草甘膦因具有高效㊁低毒㊁广谱的特点,成为世界上应用最广㊁使用量最大的农药品种,年销售值一直居农药之首[2]㊂除草剂多为有一定残效期(1~5年)的化合物,可在生物机体内富集,对水体中的鱼类构成严重威胁[3]㊂在中国,每年有145万t的各种类型农药被使用[4],仅有1%农药有效作用于标靶生物[5],其余大部分通过沉降㊁雨水冲刷等途径进入土壤和农田水环境㊂水环境中草甘膦分布较广,在河流㊁饮用水源水㊁海水㊁地下水和雨水中都曾检测到草甘膦的存在㊂2011年范瑾煜等[6]测定太湖中草甘膦含量为0.113μg㊃L-1㊂在美国的河流中检测到草甘膦质量浓度达到了2.2μg㊃L-1[7];在加拿大南部的安大略湖的最高浓度达40.8μg㊃L-1[8],在德国的江河中检出最高浓度3.2μg㊃L-1[9];在法国雨水管道中检出最高浓度75~90μg㊃L-1[10]㊂草甘膦及制剂对生物及人体的危害不可忽视[11],越来越多的研究表明,草甘膦及其制剂对多种水生生物和哺乳动物都具有毒性作用[12-14]㊂草甘膦及其制剂低浓度暴露显示出对鲫鱼(Carassius auratus)的生态毒性[15];不同浓度的草甘膦对鲫鱼染毒后,血红蛋白和血红细胞形成受抑制[16];泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)暴露于草甘膦后,外周血淋巴细胞和粒细胞均升高[17];草甘膦制剂对银鲶鱼(Rhamdia quelen)的新陈代谢和酶活性产生显著影响[18];草甘膦可导致银鲶鱼机体自由基增加㊁天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)活力升高和线粒体损伤[19];将金鱼暴露于低剂量(2.5~20mg㊃L-1)草甘膦96h后,金鱼组织中超氧化物歧化酶(superoxidase dismutase,SOD)㊁谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GST)㊁谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G-6-PD)活力受到抑制[20-21]㊂草甘膦对青鳉(Oryzias latipes)暴露显出肝脏毒性[22];罗非鱼(Oreochromis mossam-bicus)暴露于浓度为15mg㊃L-1的草甘膦后可导致其肾脏病变[23];草甘膦暴露可导致虹鳟(Oncorhynchus mykiss)幼鱼出现损害,且表现时间-效应关系[24];成年雌性斑马鱼(Danio rerio)暴露于65μg㊃L-1草甘膦15d后可使类固醇生成因子-1(steroidogenic factor, SF-1)表达升高[25]㊂随着草甘膦及其代谢物在水环境中的残留量逐年增加,生物富集作用使其影响更加长期,对水环境造成严重威胁,其潜在致毒作用有必要长期关注㊂研究显示,草甘膦对草鱼(Ctenopharyngodon idella)㊁鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)㊁鲫鱼(Carassiusauratus auratus)和斑马鱼(Danio rerio)的96h-LC50分别为0.2518㊁0.2588㊁0.2599和0.879mg㊃L-1[26-27],依照毒性分类标准属于高毒农药㊂斑马鱼与人类基因同源性高达85%[28],且具有发育周期短㊁体外受精㊁胚胎透明易观察㊁单次产卵数高等优势,已成为研究环境污染物对水生生物影响的良好模型[29-31]㊂研究表明,斑马鱼的胚胎发育受多种基因调控,心脏及骨胳发育在胚胎至仔鱼阶段可初步完成,而胚胎时期心脏及骨骼发育与相关基因表达量直接相关,Tbx5是心肌细胞分化与心脏系统传导功能重要因子[32];Nkx2.5是触发初始心肌细胞分化的关键因素,Tnnt2编码心肌肌钙蛋白[33];第4期吴玉琼等:草甘膦暴露对斑马鱼胚胎发育的毒性效应及机制431㊀Bmp2b是骨骼发育中背板早期形成的重要因子; Shh㊁Ihh与早期软骨组织形成关系密切[34]㊂本课题根据环境中检测出的草甘膦浓度范围[6-10]设置浓度梯度,研究其对斑马鱼胚胎的毒性效应,并以Tbx5㊁Nkx2.5㊁Tnnt2㊁Bmp2b㊁Shh㊁Ihh等为目标基因,采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)初步分析其分子机制,对草甘膦的生态风险评估以及水体污染的生物监测提供指导,期望为进一步制定草甘膦的毒性判断标准提供参考数据㊂1㊀材料与方法(Materials and methods)1.1㊀主要试剂草甘膦(纯度≧99%,山东西亚化学股份有限公司),先以纯水配制浓度为1mg㊃L-1储备液,4ħ避光保存㊂蛋白含量测定㊁ATP酶活性测定㊁RNA提取㊁逆转录㊁荧光定量PCR等试剂盒均购于南京建成生物工程研究所,引物由福州擎科生物技术有限公司合成;其他试剂均为分析纯试剂㊂1.2㊀主要仪器体视显微镜(尼康,SMZ745T),光照培养箱(上海一恒,THZ-100),酶标仪(上海闪谱生物科技有限公司,ReadMax-1200),实时荧光定量PCR仪(Archimed,TMX4),全自动数码凝胶成像分析仪(培清科技,JS-2012),琼脂糖凝聚电泳仪(北京六一生物科技有限公司,DYY-8C),低温高速离心机(SCILO-GEX,CF1524R)㊂1.3㊀实验用鱼斑马鱼(AB品系,购于福州百维斯生物科技有限公司),根据Westerfield[35]的方法饲养于武夷学院圣农实验中心的斑马鱼养殖循环系统(上海海圣)㊂循环养殖水(曝气除氯并经活性炭过滤的自来水),水温(26ʃ1)ħ,光照周期为14h光照/10h黑暗,喂食新鲜孵化的丰年虫(Artemia nauplii),日常每天早晚喂2次,计划配鱼前一周,每天早中晚喂3次㊂1.4㊀胚胎收集实验前1天晚上,将雌雄鱼按照1ʒ1比例放置在孵化槽中,并用隔板将雌雄分开,第2天早上约9点打开隔板,开灯给予光照刺激使其交配产卵㊂0.5 ~1h内收集鱼卵,用斑马鱼养殖液清洗并在显微镜下观察,选取受精胚胎用于暴露实验㊂1.5㊀暴露试验设置终浓度为1㊁10㊁100μg㊃L-13个试验组,1个空白对照组,每组设3个平行(n=3)㊂实验前将草甘膦用培养液(3.5g㊃L-1NaCl,0.05g㊃L-1NaHCO3, 0.05g㊃L-1KCl,0.05g㊃L-1CaCl2)配制染毒液,分别置于直径90mm培养皿(暴露培养液30mL,50枚斑马鱼胚胎)㊂暴露期间(28ʃ0.5)ħ恒温培养,每隔12h更换等量等浓度的培养液并清理死亡胚胎,72 hpf(hours post-fertilization)收样㊂1.6㊀相关形态学指标统计及计算于斑马鱼胚胎12㊁24㊁36㊁48㊁72hpf时,观察胚胎的存活情况(肉眼观察胚胎变白或者显微镜下观察胚胎絮状凝结㊁心脏不跳动即可判定死亡),统计存活率㊂48hpf时,统计孵化率(胚胎出膜并能游动视为已孵化),72hpf时统计畸形率(主要指心包水肿㊁卵黄囊水肿和脊柱弯曲),并测量心率(heart rate,HR)㊂存活率=存活胚胎数/总胚胎数ˑ100%;孵化率=已孵化胚胎数/总胚胎数ˑ100%;畸形率=畸形胚胎数/存活胚胎数ˑ100%㊂心率的统计方法:每个处理组设3个平行,每个平行随机测5条仔鱼㊂在40倍焦距光学显微镜下,计算不同实验组的心跳速率,显微镜下对心房和心室的搏动次数进行记录并摄影,记录胚胎20s内心跳次数,计算1min心率[36]㊂1.7㊀ATP酶活性测定采用暴露72hpf的仔鱼以超纯水荡洗后用液氮速冻,保存于-80ħ冰箱㊂实验前将样品于冰盒上解冻,按1ʒ9的比例加入生理盐水,在匀浆器内仔细研磨㊂准备好的匀浆液在冷冻离心机上,在4ħ下,以4000r㊃min-1离心10min,取上清液测定蛋白含量和酶活性㊂蛋白含量测定㊁Na+/K+-ATP酶活性㊁Ca2+-ATP 酶活性的测定均按试剂盒说明进行操作㊂计算酶活力时,定义每小时每毫克组织蛋白的组织中ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个ATP酶活力单位(μmol㊃mg-1㊃h-1)㊂1.8㊀荧光定量PCR测定RNA提取㊁逆转录㊁荧光定量PCR测定均使用试剂盒㊂内参基因选择ef1α,各基因引物采用prim-er5软件自行设计(表1),经Basic Local Alignment Search Tool(BLAST)比对后,送由福州擎科生物技术有限公司合成㊂荧光定量PCR的结果采用相对定量法计算,基因的表达量F=2-әәC T㊂1.9㊀数据分析结果采用平均值ʃ标准误差(MeanʃSE)表示,应用SPSS软件对数据进行单因素方差分析(one-way432㊀生态毒理学报第18卷ANOV A),组间数据用Duncan 法进行显著性水平分析,设定P <0.05表示差异显著㊂2㊀结果(Results )2.1㊀草甘膦暴露对斑马鱼胚胎存活率及孵化率的影响㊀㊀斑马鱼胚胎经草甘膦暴露48h ,胚胎存活率与空白对照组(94%)比较,100μg ㊃L -1暴露组显著降低,降低至82%(图1)㊂胚胎孵化率空白对照组为82%,经草甘膦暴露后1μg ㊃L -1组无显著差异,10μg ㊃L -1㊁100μg ㊃L -1组孵化率显著降低,分别降至42%和37%(P <0.05)(图2)㊂图1㊀暴露48h 对斑马鱼胚胎存活率的影响注:数据表示为平均值ʃ标准误差,n =3;上标字母不同的组间具有显著性差异(P <0.05)㊂Fig.1㊀Mortality rate in zebrafish embryos exposed for 48hNote:Data are presented as mean ʃS.E.,n =3;means of the treatment notsharing a common letter are significantly different (P <0.05).表1㊀荧光定量PCR 序列Table 1㊀Sequences of forward and reverseprimers used for RT -PCR目标基因Target gene引物序列(5 ~3 )Primer sequences (5 ~3 )扩增片段长度/bp Primer size/bpef1αF :CTTCTCAGGCTGACTGTGC R :CCGCTAGCATTACCCTCC 358Nkx2.5F :AGCATCCAACC TTCACAGTCC R :AAAAACATCCCAGCCAAACC 173Tbx5F :ATTCGCCGATAACAAATGG R :CGCCTTGACGATGTGGAT 138Tnnt2F :GGAAATCATCAGCCTCAAAGAC R :CATGTAACCGCCGAAGTGCA 141Ihh F :GCTCACGCCGAACTACAA R :GCCGTCTTCATCCCAAC 190Shh F :GGCTGTTTCCCAGGTTC R :GGTTCTTGCGTTTCTATGAC 149Bmp2bF :AAAAGCCGAGGAGAAAGCAC R :TGGGAATGTTGGAGTTGACC2222.2㊀草甘膦暴露对斑马鱼仔鱼脊柱弯曲率及卵黄囊水肿率的影响㊀㊀斑马鱼胚胎在空白组及1μg ㊃L -1暴露组末出现脊柱弯曲㊂10μg ㊃L -1㊁100μg ㊃L -1组出现脊柱弯曲,且随着草甘膦暴露浓度增大,脊柱弯曲率显著上升,10μg ㊃L -1㊁100μg ㊃L -1暴露组分别为6.6%㊁7.3%㊂卵黄囊水肿发生率随着草甘膦暴露浓度增大而显著增大,10μg ㊃L -1㊁100μg ㊃L -1暴露组分别增大26.5%㊁33.3%(P <0.05)(图3~图6)㊂图2㊀暴露48h 对斑马鱼胚胎孵化率的影响注:数据表示为平均值ʃ标准误差,n =3;上标字母不同的组间具有显著性差异(P <0.05)㊂Fig.2㊀Hatching rate in zebrafish embryos exposed for 48hNote:Data are presented as mean ʃS.E.,n =3;means of the treatment notsharing a common letter are significantly different (P <0.05).图3㊀暴露72h 斑马鱼仔鱼脊柱弯曲Fig.3㊀Spinal curvature in zebrafish larvae exposed for 72h2.3㊀草甘膦暴露对斑马鱼仔鱼心率及心包水肿率的影响㊀㊀由图7~9可知斑马鱼仔鱼心率及心包水肿情况㊂草甘膦暴露72h 斑马鱼仔鱼心率与空白对照组相比,仅100μg ㊃L -1组显著上升12.2%(P <0.05)(图8)㊂由图9可知,空白对照组及1μg ㊃L -1暴露组中未出现心包水肿,在10μg ㊃L -1及100μg ㊃L -1暴露组出现心包水肿,但发生率均不高,分别仅为0.6%和2.6%,且由图7可知,10μg ㊃L -1组心包水肿程度较100μg ㊃L -1组轻微㊂第4期吴玉琼等:草甘膦暴露对斑马鱼胚胎发育的毒性效应及机制433㊀图4㊀暴露72h 斑马鱼仔鱼卵黄囊水肿Fig.4㊀Yolk cyst in zebrafish larvae exposed for 72h图5㊀暴露72h 对斑马鱼仔鱼脊柱弯曲率的影响注:数据表示为平均值ʃ标准误差,n =3;上标字母不同的组间具有显著性差异(P <0.05)㊂Fig.5㊀Spinal curvature rate in zebrafish larvaeexposed for 72hNote:Data are presented as mean ʃS.E.,n =3;means of the treatment notsharing a common letter are significantly different (P <0.05).图6㊀暴露72h 对斑马鱼仔鱼卵黄囊水肿率的影响注:数据表示为平均值ʃ标准误差,n =3;上标字母不同的组间具有显著性差异(P <0.05)㊂Fig.6㊀Yolk cyst rate in zebrafish larvae exposed for 72hNote:Data are presented as mean ʃS.E.,n =3;means of the treatment notsharing a common letter are significantly different (P <0.05).图7㊀暴露72h 斑马鱼仔鱼心包囊水肿Fig.7㊀Pericardial cyst in zebrafish larvae exposed for 72h图8㊀暴露72h 对斑马鱼仔鱼心率的影响注:数据表示为平均值ʃ标准误差,n =3;上标字母不同的组间具有显著性差异(P <0.05)㊂Fig.8㊀Heart rates in zebrafish larvae exposed for 72hNote:Data are presented as mean ʃS.E.,n =3;means of the treatment notsharing a common letter are significantly different (P <0.05).图9㊀暴露72h 对斑马鱼仔鱼心包囊肿率的影响注:数据表示为平均值ʃ标准误差,n =3;上标字母不同的组间具有显著性差异(P <0.05)㊂Fig.9㊀Pericardial cyst rate in zebrafish larvae exposed for 72hNote:Data are presented as mean ʃS.E.,n =3;means of the treatment notsharing a common letter are significantly different (P <0.05).434㊀生态毒理学报第18卷2.4㊀草甘膦暴露对斑马鱼仔鱼ATP酶活性的影响斑马鱼胚胎经草甘膦暴露72h,在1μg㊃L-1暴露组仔鱼组织Na+/K+-ATP酶活性及Ca2+-ATP酶活性都与空白对照组无差异;而在10μg㊃L-1及100μg㊃L-1暴露组均显著降低(P<0.05)(图10)㊂2.5㊀草甘膦对斑马鱼仔鱼相关基因表达的影响斑马鱼胚胎暴露72hpf后相关基因表达量如图11所示,草甘膦暴露对仔鱼的多个基因产生了不同程度的影响㊂其中,在低浓度(1μg㊃L-1)暴露组中,Bmp2b㊁Tbx5㊁Tnnt2和Shh等4个基因表达量上升(上升量分别为28%㊁45%㊁87%和86%,P <0.05),而Ihh表达水平降低(下降量为25%,P <0.05),Nkx2.5表达水平与空白组无差异㊂但当草甘膦浓度增大时,在10μg㊃L-1及100μg㊃L-1暴露组中各相关基因表达水平均出现下调,且存在剂量-效应关系,Nkx2.5表达量下调比例最大,达82%(P<0.05)㊂3㊀讨论(Discussion)鱼类毒性试验是评价污染物环境风险的主要方法之一,斑马鱼胚胎毒性检测实验中常出现的毒性反应是心包水肿㊁脊柱弯曲㊁卵黄囊水肿等发育畸形[37]㊂有研究表明,水肿会引起生物体代谢障碍,损害器官功能,是生物体抵御外界有毒物质入侵的一种反应[38]㊂实际上,脊柱弯曲㊁心包水肿㊁心脏形态和功能缺陷在暴露于杀菌剂和杀虫剂等化学物质的鱼类胚胎中相当常见[39-42]㊂本试验中,斑马鱼胚胎经草甘膦暴露后仔鱼有出现心包水肿㊁卵黄囊水肿及脊柱弯曲等反应,显示草甘膦对斑马鱼胚胎具有显著的发育毒性㊂心脏作为胚胎发育过程中最早发挥功能的器官,也是鱼类胚胎试验的重要毒理学终点[43-44],完善的循环功能对于胚胎的正常发育起着关键作用[45]㊂对于斑马鱼胚胎发育而言,正常生长条件下,48hpf 时主要的器官系统完成形态发生并开始破膜孵化,这是发育进程的一个重要转折点㊂当生物体内能量供给不足时,心脏的正常工作会受到影响[46]㊂有研究表明污染物的暴露会使斑马鱼胚胎心率上升或下降以适应心脏对能量的供给[47]㊂本试验中,斑马鱼胚胎经草甘膦暴露后仔鱼心率升高,可推测此表现是为了满足心脏发育进程中能量需要的适应性反应㊂ATP酶在细胞内维持离子平衡和渗透压稳态方面具有重要作用[48]㊂Na+/K+-ATP酶是组成Na+/K+泵的主要部分,Ca2+-ATP酶是质膜上钙离子转运系统中最重要的部分㊂有研究分析,受污染物低浓度暴露时,鱼体为了使机体免受氧化损伤,抗氧化酶会被激活,清除自由基;但当污染物浓度超过机体耐受阈值,产生的自由基过多会使细胞衰老加速,导致酶活性降低[49],这也能反映能量代谢的变化[50]㊂本试验结果显示低浓度(1μg㊃L-1)草甘膦暴露中仔鱼的Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶的活性无显著变化,但在高浓度(10μg㊃L-1㊁100μg㊃L-1)组中2种ATP 酶活性均下降㊂有研究认为ATP酶的作用是水解高能化合物ATP而释放供生命活动所需的能量[51],造成胚胎发育异常的原因可能与ATP酶的活性抑制有关㊂本试验结果提示草甘膦暴露引起Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性的降低也是影响斑马鱼胚胎心脏发育畸形的原因㊂图10㊀暴露72h对斑马鱼仔鱼Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性的影响注:数据表示为平均值ʃ标准误差,n=3;上标字母不同的组间具有显著性差异(P<0.05)㊂Fig.10㊀Activity of Na+/K+-ATPase and Ca2+-ATPasein zebrafish larvae exposed for72hNote:Data are presented as meanʃS.E.,n=3;means of the treatment not sharing a common letter are significantly different(P<0.05).图11㊀暴露72h对斑马鱼仔鱼基因表达的影响注:数据表示为平均值ʃ标准误差,n=3;上标字母不同的组间具有显著性差异(P<0.05)㊂Fig.11㊀The transcription of genes in zebrafishlarvae exposed for72hNote:Data are presented as meanʃS.E.,n=3;means of the treatment not sharing a common letter are significantly different(P<0.05).第4期吴玉琼等:草甘膦暴露对斑马鱼胚胎发育的毒性效应及机制435㊀斑马鱼胚胎发育由多种基因控制,Tbx5是心脏发育的重要调节剂[32,52],在心肌细胞的分化[53]以及心脏传导系统功能[54]中起着至关重要的作用㊂有研究表明,Tbx5表达异常导致小鼠严重畸形[55],人类Tbx5基因的突变导致心脏发育缺陷[56]㊂本试验结果显示较高浓度草甘膦暴露后仔鱼出现Tbx5基因表达量下降,这可能是心包发育异常的主要机制㊂骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein, BMP)在脊椎动物中是骨骼形成的关键调节因子, Bmp2是转化生长因子-β(TGF-β)超家族中的一员㊂在斑马鱼生长发育过程Bmp2直接参与了背板的早期形成[34]㊂Nkx2.5是触发初始心肌细胞分化的关键因素[57],可定性和定量确定心室的特征[58-59]㊂心肌肌钙蛋白(由Tnnt2编码)参与心脏收缩功能,是斑马鱼心肌分化所必需的[33]㊂本课题组前期研究表明,环境污染物通过干扰斑马鱼胚胎的转录会导致斑马鱼胚胎心脏发育和功能缺陷[41-42]㊂本试验显示,高浓度组(100μg㊃L-1)中Nkx2.5表达量下调且比例最大,而Bmp2b㊁Tnnt2表达量上调㊂Bmp2b是Nkx2.5的上游基因[51],Nkx2.5表达量降低表明草甘膦可能会阻止心肌细胞的发育,从而引起心脏发育畸形[34],由图7可知,高浓度组出现极大程度的心包水肿,推测此畸形出现与Nkx2.5表达量受抑制关系最大㊂Hh(Hedgehog)基因家族在胚胎发育中对软骨形成起着重要作用,Shh(Sonic hedgehog)㊁Ihh(Indian hedgehog)是Hh基因家族2个重要成员,早期胚胎发育中这2个基因在内胚层的正确表达与软骨组织相关[33]㊂课题组前期的研究表明污染物暴露干扰斑马鱼Shh㊁Ihh和Bmp2的转录水平从而引起骨发育缺陷[60]㊂本试验结果显示草甘膦暴露出现脊柱弯曲,尤其是高浓度组发生率最高(7.3%)且弯曲程度最大(图3)㊂高浓度组仔鱼Bmp2b㊁Nkx2.5的表达量受抑制,表明草甘膦暴露导致心脏发育紊乱,进而影响骨骼的发育㊂环境浓度的草甘膦暴露导致斑马鱼胚胎明显的胚胎毒性,包括存活率下降㊁脊柱弯曲㊁心包水肿㊁卵黄囊肿;酶活性测定显示,心包水肿和骨骼畸形与Na+/K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性的降低有关;荧光定量PCR分析显示,草甘膦暴露改变了与胚胎心脏发育(Tbx5㊁Nkx2.5㊁Tnnt2)㊁骨骼发育(Bmp2b㊁Shh㊁Ihh)相关基因的转录㊂值得注意的是,不同浓度的草甘膦对斑马鱼胚胎发育毒性强弱有差异,较低浓度(1μg㊃L-1)对斑马鱼胚胎相对安全,但浓度达10μg㊃L-1,甚至100μg㊃L-1时出现显著毒性效应㊂可以认为,环境中的草甘膦残留量达到一定浓度(ȡ10μg㊃L-1)时对环境生物构成潜在威胁㊂依据本试验结果,以斑马鱼胚胎为对象,草甘膦的最低观察效应浓度(lowest observed effect concentration,LOEC)可表示为10μg㊃L-1,无观察效应浓度(no observed effect concentration,NOEC)可表示为1μg㊃L-1㊂该指标可为草甘膦风险评估提供参考值,在草甘膦的实际应用中应全面考察环境可能残留浓度㊂参考文献(References):[1]㊀孙克.全球十大除草剂的市场与展望[J].农药,2013,52(5):317-322Sun K.Market and outlook of the top ten herbicides in theworld[J].Agrochemicals,2013,52(5):317-322(in Chi-nese)[2]㊀Williams A L,Watson R E,DeSesso J M.Developmentaland reproductive outcomes in humans and animals afterglyphosate 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中草药对草鱼机体免疫力的影响
第43卷㊀第1期2024年2月黑龙江水产Northern Chinese FisheriesVol.43No.1February 2024文章编号:1674-2419(2024)01-0030-03作者简介:方进林(1972.8-),男,汉族,浙江开化人,本科学历,开化佳艺家庭农场工程师㊂研究方向:淡水鱼养殖㊂E -mail:948581537@㊂中草药对草鱼机体免疫力的影响方进林1,钱㊀涛2(1.开化佳艺家庭农场,浙江衢州324305;2.开化县水产技术推广站,浙江衢州324300)摘㊀㊀要:为研究中草药对草鱼(Ctenopharyngodon idella )机体免疫力的影响,且确定中草药在草鱼饲料中的最适添加水平,选择120尾体重约为100g 的健康草鱼,按照单因素试验设计,均分4个处理,每个处理3个重复,每个重复10尾草鱼㊂各组草鱼分别投喂含有0%(对照组)㊁1%㊁2%和4%的中草药的饲料,饲养8周㊂试验结束后,每个重复组挑选4尾草鱼采集血液,检测血液免疫指标㊂结果显示,在草鱼饲料中添加2%的中草药可以提高血清中溶菌酶活力(P <0.05);添加1%和2%的中草药可以显著提高血清中超氧化物歧化酶活力(P <0.05),显著降低了丙二醛水平(P <0.05)㊂研究表明,在草鱼饲料中添加适量的中草药可以提高机体的非特异性免疫力,且综合成本及各项指标数据确定中草药的最适添加水平为2%㊂关键词:中草药;免疫力;草鱼(Ctenopharyngodon idella )中图分类号:S965.112文献标志码:A㊀㊀草鱼(Ctenopharyngodon idella )是中国四大家鱼之一,由于其营养丰富㊁肉质鲜美,养殖量巨大,经济效益可观㊂但随着草鱼养殖业的规模化发展,导致草鱼养殖过程中疾病频发㊁幼鱼成活率低㊁机体免疫力下降,严重影响草鱼养殖的经济效益[1]㊂因此,如何提高草鱼机体的免疫力对草鱼养殖的生产效益至关重要㊂中草药作为一种安全㊁绿色㊁低残留㊁无耐药性等特点,在水产中可以替代抗生素的使用,在畜禽㊁水产生物养殖中应用比较广泛[2-3]㊂相关研究发现,在动物养殖中使用适量的中草药可以增强机体的抗应激能力及抗病力,提高机体免疫功能,进而改善生长性能[4-5]㊂在水生动物养殖中,中草药应用取得非常不错的效果㊂杨政高[6]研究了复方中草药对珍珠龙胆石斑鱼免疫力㊁生长性能㊁肠道菌群及血液代谢组学的影响,试验结果表明,饲料中添加1.5%的复方中草药可以提高添加血清代谢㊁机体非特异性免疫力及肠道中有益菌的丰富度,改善珍珠龙胆石斑鱼的生长性能㊂路晶晶等[7]研究了复方中草药对大菱鲆幼鱼生长及机体免疫力的影响,发现2%的复方中草药可以降低血清甘油三酯及胆固醇水平,调节血脂代谢;提高血清中溶菌酶及抗氧化酶活力,提高机体的非特异性免疫力,通过提高机体健康,促进幼鱼生长㊂谭娟等[8]研究了复方中草药对草鱼生长性能㊁免疫力及肌肉成分的影响,发现饲喂60d 后,3%的复方中草药可以提高草鱼的增重率,增强血清中溶菌酶和超氧化物歧化酶活性,提高舒张因子含量㊂因此,该试验在以往研究的基础上,进一步研究中草药对草鱼机体非特异性免疫力的影响,并确定中草药的最优添加水平,为规模化㊁集约化养殖的草鱼提高机体免疫力提供理论数据支撑㊂1㊀材料与方法1.1㊀中草药和试验草鱼试验中使用的中草药由金银花㊁甘草㊁杜仲㊁当归㊁板蓝根㊁肉桂等组成㊂首先上述中草药在60ħ烘箱中烘干48h 后,使用普通粉碎机粉碎后,将上述中草药粉末等比例混匀,备用㊂试验草鱼购自当地水产鱼种场,选择体重100g 左右㊁体质良好的草鱼120尾㊂㊃03㊃1.2㊀试验设计试验选择120尾体重约为100g的健康草鱼,按照单因素试验设计,均分4个处理,每个处理3个重复,每个重复10尾草鱼㊂各组草鱼分别饲喂含有0%(对照组)㊁1%㊁2%和4%的中草药的饲料,投喂8周㊂试验结束后,每个重复挑选4尾草鱼采集血液,检测血液免疫指标㊂试验分组见表1㊂表1㊀试验分组及处理Table1Test grouping and treatment组别处理对照组基础饲料1%组基础饲料+1%中草药2%组基础饲料+2%中草药4%组基础饲料+4%中草药1.3㊀试验饲料该试验草鱼的基础饲料主要以鱼油㊁豆油为脂肪源㊁以豆粕㊁菜籽粕为蛋白源,以玉米为能量,其具体的原料组成及营养成分含量见表2㊂将配方中的各种原料粉碎后,逐级混匀,添加适量的水,制成直径2mm的颗粒饲料,风干,备用㊂表2㊀试验草鱼基础饲料配方(风干基础) Table2Basic feed formula of Ctenopharyngodon idella(air-dried basis)原料含量/%营养成分含量/%豆粕20.5粗蛋白32.18鱼粉8粗脂肪 5.02麸皮13粗灰分7.18棉籽粕13磷 1.03菜籽粕12钙 1.16米糠10面粉20鱼油 1.5豆油1预混料1注:1.预混料为1kg饲料提供:I0.6mg,Co0.6mg,Cu15mg,Zn 100mg,Fe80mg,Mn18mg,Mg85mg,Se0.20mg,VA12000IU,VD3 350IU,VE40IU,VK153mg,VB110mg,VB216mg,VB120.06mg,生物素0.2mg,叶酸10mg㊂2.营养成分含量为计算值㊂1.4㊀养殖管理将试验鱼放在12个帆布池中(5mˑ5mˑ1.35m)饲养,每个帆布池中放10尾草鱼㊂每日草鱼投喂2次(9:00和16:00),当日投喂量约为草鱼体重的2.5%~3.5%,根据草鱼体重㊁天气情况随时调整饲喂量㊂每日晨饲前,排污管要及时排出残饵及粪便㊂水温控制在26ħ左右,pH值约7.5,溶解氧含量大于5.5mg/L㊂1.5㊀免疫指标检测试验第56d,草鱼晨饲前,每个重复挑选4尾草鱼采集血液约10mL,离心收集血清㊂主要检测血清中的溶菌酶㊁超氧化物歧化酶㊁丙二醛㊁碱性磷酸酶等,检测方法参考试剂盒说明书,试剂盒购买于上海酶联生物科技有限公司㊂1.6㊀数据分析各组草鱼血清免疫指标使用SPSS24分析差异显著性,LSD方法分析组间多重比较,P>0.05表示差异不显著,P<0.05表示差异显著㊂结果用各数据的平均值表示㊂2㊀结果中草药对草鱼机体免疫指标的影响见表3㊂表3㊀中草药对草鱼机体免疫指标的影响Table3Effects of Chinese herbal medicine on immuneindexes of Ctenopharyngodon idella指标溶菌酶(U/mL)碱性磷酸酶(U/L)超氧化物歧化酶(U/mL)过氧化氢酶(U/mL)丙二醛(nmol/mL)对照组14.31b19.38 3.28b 1.63 3.74a 1%组15.73ab19.19 4.63a 1.77 3.08b 2%组16.59a20.04 5.04a 1.79 2.52c 4%组15.80ab20.17 4.21ab 1.68 3.27ab SEM 1.10 2.740.620.130.42 P值0.0430.6170.0380.7160.027注:同列数据被标注不同的小写字母表示差异显著(P<0.05),被标注含有一样的字母或者未标注字母表示无差异(P>0.05)㊂从表3中可见,在草鱼饲料中添加2%的中草药可以提高血清中溶菌酶活力(P<0.05);添加1%和2%的中草药可以显著提高血清中超氧化物歧化酶活力(P<0.05),显著降低了丙二醛水平(P< 0.05);而中草药对草鱼血清中的过氧化氢酶和碱性磷酸酶活力未产生显著性影响(P>0.05)㊂3㊀讨论陈密等[9]研究了中草药芦丁对草鱼生长性能㊁免疫力及消化酶活力的影响,发现芦丁显著提高了草鱼血清中溶菌酶㊁过氧化氢酶㊁超氧化物歧化酶活力,且显著降低了丙二醛水平,效果呈剂量效应,芦丁最适添加量为97.4mg/kg,不宜过高添加㊂谭娟等[8]也研究发现,适量的中草药可以提高草鱼血㊃13㊃清中溶菌酶活力,降低谷草转氨酶和谷丙转氨酶活力,增强了机体的非特异性免疫力㊂该试验中选用的金银花㊁甘草㊁杜仲㊁当归㊁板蓝根㊁肉桂等中草药具有健脾㊁开胃㊁味甘㊁温性,可以提高动物机体的消化功能和免疫功能㊂试验得出的结果显示,添加2%的中草药可以提高草鱼血清中溶菌酶活力;添加1%和2%的中草药可以显著提高血清中超氧化物歧化酶活力,显著降低了丙二醛水平,表明适量的中草药组方改善了草鱼机体的免疫功能㊂中草药提高草鱼机体免疫力可能是因为中草药为草鱼机体提供了一些维生素㊁微量元素㊁氨基酸等营养物质;同时超微粉碎的中草药生化效价更高,可以使中草药的活性物质,如多糖㊁黄酮㊁有机酸等物质大量溶出,可以很好地调节机体的免疫力㊂4㊀结论该试验条件下,草鱼饲料中添加2%的中草药比较适宜,可以有效提高草鱼机体的免疫功能㊂参考文献:[1]侯松伟,石义元,普家勇,等.大规格草鱼养殖技术要点[J].渔业致富指南,2023,592(04):30-33. [2]潘雪男,王晶晶,李红.中草药的生物学功能及其在家禽养殖生产中应用的研究进展[J].饲料研究,2022,45 (13):137-140.[3]蔡艳,陈婷,刘红.中草药在水产养殖中的应用及研究[J].现代畜牧科技,2023,94(03):48-50.[4]蹇勇.中草药饲料添加剂在水产养殖中的运用[J].饲料博览,2021,347(03):60-61.[5]彭苏,崔艺燕,尹福泉,等.中草药废弃物的营养价值㊁活性物质与生物学功能及在猪生产上的应用研究进展[J].中国畜牧杂志,2023,59(03):33-39.[6]杨政高.复方中草药对珍珠龙胆石斑鱼生长㊁肠道菌群㊁免疫功能和血清代谢组学的影响[D].湛江:广东海洋大学,2022.[7]路晶晶,郭冉,齐国山,等.复方中草药对大菱鲆幼鱼生长性能及非特异性免疫指标的影响[J].大连海洋大学学报,2018,33(06):722-728.[8]谭娟,邓雨飞,曹宇舰,等.饲料中添加复方中草药对草鱼幼鱼生长㊁肌肉成分及免疫相关酶活性的影响[J].广东农业科学,2015,42(10):109-113.[9]陈密,付国香,董娟娥,等.芦丁对草鱼生长性能㊁体成分㊁非特异性免疫力和肠道消化酶活性的影响[J].动物营养学报,2019,31(10):4868-4876.Effects of Chinese herbs on organismal immunity of Ctenopharyngodon idellus FANG Jinlin1,QIAN Tao2(1.Kaihua Jiayi Family Farm,Quzhou324305,Zhejiang China;2.Kaihua County Aquatic Technology Promotion Station,Quzhou 324300,Zhejiang China)Abstract:In order to study the effects of Chinese herbs on the immunity of Ctenopharyngodon idella and to deter-mine the optimum level of Chinese herbs in Ctenopharyngodon idella feed.In this study,120healthy grass carp weighing about100g were selected and divided into four treatments with three replicates of10fish each according to a one-way experimental design.Ctenopharyngodon idella in each group were fed with diets containing0%(con-trol),1%,2%and4%of Chinese herbs for8weeks.At the end of the experiment,four Ctenopharyngodon idella from each replicate group were selected for blood collection and blood immunity indexes were tested.The results showed that the addition of2%of the herbs to the Ctenopharyngodon idella feed increased the serum lysozyme activ-ity(P<0.05);the addition of1%and2%of the herbs significantly increased the serum superoxide dismutase ac-tivity(P<0.05),and significantly reduced the malondialdehyde level(P<0.05).The study showed that the addi-tion of appropriate amount of Chinese herbs to Ctenopharyngodon idella feed can improve the non-specific immunity of the organism,and the optimum level of addition of Chinese herbs was determined to be2%by combining the cost and data of various indexes.Keywords:Chinese herbs;immunity;Ctenopharyngodon idella㊃23㊃。
2021年甘草甜素药理作用研究论文
2021年甘草甜素药理作用研究论文AdvancesinPharmacologicalActionofGlycyrrhizinAbstract:ObjectiveToreviewtheprogressinthestudyofpharmacologicaleffectsofglycy rrhizinforitsreasonableutilizationandfurtherdevelopment.MethodsDocu mentsofexperimentalandclinicalstudyonglycyrrhizinwithinrecentyearswer econsultedandsummarized.ResultsandConclusionBeacuseglycyrrhizinh asmanygoodpharmacologicaleffectsandhasbeenbeingusedformanyyearsin Chinesemedicine,GlycyrrhizauralensisFisch,isavaluableplantforhealthcare productsandmedicine.Keywords:GlycyrrhizauralensisFisch;G`lycyrrhizin;Pharmacologicaleffect 甘草GlycyrrhizauralensisFisch,又名美草、蜜甘、蜜草、国老、灵通、甜草、粉草等,为豆科植物,是我国医药宝库中应用最广的一种药材,素有“中草药之王”的美誉。
甘草在欧亚两地均有分布,我国主产内蒙古,甘肃;其次为陕西、山西、辽宁、吉林、黑龙江、河北、新疆、青海等地。
《中药大辞典》记载甘草有如下功能:和中缓急、润肺、解毒、调和诸药。
炙用:治脾胃虚弱,食少,腹痛便溏,劳倦发热,肺痿,咳嗽,心悸,惊痫;生用:治咽喉肿痛,消化性溃疡,痈疽疮疡,解药毒及食物中毒[1]。
当归多糖对点带石斑鱼非特异性免疫力的影响
04
当归多糖对点 带石斑鱼非特 异性免疫力的 影响结论
当归多糖对点带石斑鱼 01 非特异性免疫力的影响
概述
当归多糖的简介
当归多糖:从当归 中提取的多糖类物 质
主要成分:葡萄糖、 半乳糖、阿拉伯糖 等
功能:增强免疫功 能,提高机体抵抗 力
应用:在医学、食 品、化妆品等领域 有广泛应用
点带石斑鱼的简介
实验过程
实验材料:点带石斑鱼、当归多糖、对照药物
实验分组:设置对照组、实验组、阳性对照组
实验方法:通过注射或口服方式给点带石斑鱼喂食当归多糖或对照药物
观察指标:记录点带石斑鱼的非特异性免疫力变化,如抗病能力、免疫细胞数量 等 数据分析:对实验数据进行统计分析,得出当归多糖对点带石斑鱼非特异性免疫 力的影响结果
当归多糖对点带石斑鱼 非特异性免疫力的影响
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汇报人:abc
目录 /目录
01
当归多糖对点 带石斑鱼非特 异性免疫力的 影响概述
02
当归多糖对点 带石斑鱼非特 异性免疫力的 影响实验设计
03
当归多糖对点 带石斑鱼非特 异性免疫力的 影响实验结果
实验方法
实验材料:点带石斑鱼、当归多糖、 对照组
实验周期:持续一段时间,观察点 带石斑鱼的非特异性免疫力变化
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实验设计:设置实验组和对照组, 实验组喂食当归多糖,对照组喂食 普通饲料
实验指标:通过检测点带石斑鱼的 免疫细胞数量、免疫因子水平等指 标来评估非特异性免疫力的变化
物种名称: 点带石斑 鱼
所属分类: 鲈形目、 石斑鱼科
复方中草药对大菱鲆非特异性免疫力的影响
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水平上有促进作用 ,4 %浓度组效果更为显著。
关键 词 : 大菱鲆;复方中草药;非特异性免疫力; 抗病力
中图分类 号 : ¥ 9 4 1 . 4 2
文 献标志 码 :A
大菱鲆 S c o p h t h a l m u s m a x i m u s 是 中国北方地 区 的主要海水养殖品种之一,随着养殖业不断向集约
明 ,中草药免 疫增强 剂可 明显增 强水 产动 物 的抗 病 能力 ,国外 学 者 R a o等 _ 3 】 、C h r i s t y b a p i t a等 以单 方 中草药 牛膝 和旱莲 草分别 投 喂露 斯塔 野鲮 和罗 非
试验用大菱鲆购 自大连双龙海产品有限公 司 , 规格整齐 ,体质健壮 ,体 质量为 ( 2 9 . 0 0 ± 1 . 8 2 ) g , 体长为 l O~ 1 4 c m, 共1 0 0尾。试验鱼饲养于农 业
均能有效地提高机体 的非特异性免疫力。大菱鲆是 近年来推广的养殖品种 ,有关 中草药对它的作用效
化、规模化发展 ,给鱼类疾病 防治提 出了新 的课 果及 作用 水平 等 尚未见 报道 。本研究 中作者通 过 在 题。在养殖生产中由于抗生素等药物长期使用或用 饲料中添加不 同质量分数的中草药投喂大菱鲆,测 药不 当 ,不 仅使微 生物产 生抗药 性 ,耐药 菌株不 断 定其非特异性免疫指标以及机体 的抗病力 ,研究其 增 加 ,水产 动物免疫 功能下 降 ,同时也造 成 了巨大 对大菱鲆的免疫效果 ,进而为在大菱鲆养殖中推广 的经济损失 ,如 “ 多宝鱼药残事 件”使 整个 大菱 应用中草药免疫增强剂提供科 学依据 。
鱼 ,结果表明能显著提高机体的免疫力 。国内学者 用复方中草药投喂罗非鱼 [ 5 ] 、牙鲆 ] 、草鱼 ’ 等,
草甘膦对鲫鱼肝脏内膜系统和乙酰胆碱酯酶的影响
草甘膦对鲫鱼肝脏内膜系统和乙酰胆碱酯酶的影响张彬彬【摘要】The effect of different concentrations of Glyphosate on ER and AChE of Carassius auratus is studied.The results show that with concentration elevated,mitochondrion swelled and vacuolated,ER vacuolated,heterolysosome grew in the hepatic endomembrane system,different density acetochlor dealing all had inhibition effect on AChE in loach liver.%研究了不同浓度的草甘膦处理液对鲫鱼肝细胞内膜系统以及乙酰胆碱酯酶(AChE)的影响.结果表明,随浓度的增加,肝细胞内膜系统中线粒体肿胀及空泡化、内质网空泡化、异噬型溶酶体增多.不同浓度的草甘膦处理液对泥鳅肝脏中AChE均起抑制作用.【期刊名称】《滨州学院学报》【年(卷),期】2011(027)003【总页数】4页(P93-96)【关键词】鲫鱼;草甘膦;肝脏;内膜系统;乙酰胆碱酯酶【作者】张彬彬【作者单位】滨州学院生命科学系,山东滨州256603;滨州市食品安全重点实验室,山东滨州256603【正文语种】中文【中图分类】X503.2250 引言草甘膦(glyphosate)是一种高效、低毒、广谱、非选择性叶面喷施的芽后除草剂,为当今世界上生产量最大的农药品种,全世界农田与非农田用量合计约67 100 t,而且草甘膦在全球的使用量仍以每年20%的速度递增.然而其大量使用给农业带来巨大效益的同时,草甘膦的使用不当,也对环境造成了较大的污染.越来越多的研究表明,草甘膦对不同的生物及其不同的生育期具有不同程度的不利影响.南旭阳[1]曾报道过草甘膦对鲫鱼外周血红细胞微核及核异常的影响,认为草甘膦对鲫鱼具有一定的毒性,但不具有剂量效应,与染毒时间的长短也无明显相关性.耿德贵等[2]研究了除草剂精克草星、苯磺隆、使它隆和草甘膦单独及联合作用时对中华大蟾蜍蝌蚪红细胞微核及核异常等遗传指标的上升.国内目前尚未追溯到草甘膦对鲫鱼等水生生物生理功能方面影响的报道.草甘膦在水中积蓄到一定量后,将对水生生物产生影响,甚至通过间接作用影响人类的健康.就环境风险评价而言,目前还没有形成完整的评价体系,很多方面的研究工作还没有开展或者很少涉及,如草甘膦在土壤和水体中的行为、转化、归宿及其对环境的影响等方面的研究还较少,也不够全面[3].要逐步搞清草甘膦对人、动物和环境的影响及其机理,使其更好地为人类服务.本试验以5种不同浓度的草甘膦,研究其在不同处理时间对鲫鱼内膜系统和乙酰胆碱酯酶 (AChE)活性的动态变化影响.旨在探索草甘膦对鲫鱼的毒害作用,从而为草甘膦的合理使用、保障渔业生产和生物安全性提供初步的试验依据.1 材料与方法1.1 材料试验用健康鲫鱼购自滨州市六街水产市场,体重(75.5±4.5)g,体长(9.4±2.0)cm.草甘膦(草甘膦异丙胺盐,41%水剂)由上海惠光化学有限公司提供;AChE试剂盒购于南京建成生物工程研究所.日产J EM-140a投射电镜;Gatan-792 CCD数字图像采集系1.2 方法1.2.1给药状态下肝脏AChE活力的测定通过急性中毒试验,用SPSS数据处理软件计算24 h急性中毒试验的半数致死量为128.11 mg/L, 95%置信区间为78.12~210.09 mg/L;48 h中毒试验的半数致死量为48.96 mg/L,95%的置信区间是30.52~53.74mg/L.安全浓度为1.50mg/L.以急性中毒试验为依据,根据24h内鲫鱼不出现死亡和明显异常为标准,确定最高染毒浓度为5.12 mg/L.以此为标准,按1/2浓度梯度递减,分别为2.56、1.28、0.64、0.32、0.16 mg/L共5个浓度组(1~5组),每个浓度设2个平行.另设一不加草甘膦的对照组(CK).每组均投放15尾鲫鱼,每24 h更换一次处理液.在24、48、96 h从每组取出4条鲫鱼,取其肝脏.肝脏匀浆的制备和AChE活力的测定均按照南京建成生物工程研究所提供的测试盒进行制备和测定.1.2.2肝细胞电镜切片的制备在处理后96 h随机抽取对照组和各浓度组鲫鱼1条,取其肝脏,用锋利剪刀剪下1小块组织,迅速放到滴有预冷固定液(2.5%戊二醛)的蜡片上,在固定液中用刀片把组织切成体积约1 mm3小块,用牙签将3~5小块组织转移至含有2~3 mL预冷固定液的干净青霉素小瓶内.然后置于4℃冰箱内保存备用.2 结果与分析2.1 草甘膦对鲫鱼肝细胞内膜系统的影响线粒体是细胞内主要的能量形成所在,是极为敏感的细胞器,内质网参加蛋白质和脂质的合成、加工、包装和运输,是细胞中的重要细胞器之一,所以在生理上或病理上都具有十分重要的意义.草甘膦对鲫鱼肝细胞线粒体、内质网、溶酶体等内膜系统的影响见图1.由图1可以看出,对照组鲫鱼肝细胞中有丰富的粗面内质网和线粒体,线粒体嵴多、明显;1组肝细胞中出现大量的异噬型溶酶体,内质网明显比对照组中丰富;2组肝细胞中出现大量的异噬型溶酶体线粒体肿胀、嵴减少;3组肝细胞中线粒体肿胀、嵴明显减少; 4组肝细胞中内质网有空泡化现象;5组鲫鱼肝细胞中线粒体出现空泡化.图1 不同草甘膦浓度对鲫鱼肝细胞线粒体、内质网、溶酶体等内膜系统的影响a CK;b 1组;c 2组;d 3组;e 4组;f 5组2.2 草甘膦对鲫鱼肝脏AChE活性的影响经24 h、72 h、96 h测定的AChE活性及草甘膦对其活性的抑制率见表1.表1 鲫鱼AChE活性以及草甘膦对其活性的抑制率注:*表示与对照组比较有统计学差异(P<0.05),#表示与对照组比较有统计学差异(P<0.01),无标记表示与对照组比较无统计学差异(P>0.05).△表示同一浓度不同浸泡时间,48 h或96 h与24 h AChE活性比较有统计学意义,□表示同一浓度,96 h与48 hAChE活性比较有统计学意义.24 h 72 h 96 h组别活性/ U·(mg·prot)-1抑制率/ %活性/ U·(mg·prot)-1抑制率/ %活性/ U·(mg·prot)-1抑制率/ % 0 2.1254±0.2946 0.002.1218±1.5111 0.00 2.1254±1.0815 0.00 1 2.0772±2.6632 2.271.8663±0.4679 12.19 1.3619±0.2050 35.93 2 1.8946±1.3721 10.861.2954±1.1229△ 39.05 1.2291±3.9112△ 42.17 3 1.1976±0.5754 43.650.9411±1.8390# 55.72 20.7070±0.8794#△□ 66.74 4 1.2410±4.5220 41.610.9100±1.3300#△ 57.18 0.7713±3.5794#△□ 63.71 5 1.3332±1.7655*37.271.0105±1.1943# 52.46 0.9285±2.0070#△□ 56.31经析因设计的方差分析,不同浓度间(F=108.32,P<0.000 1)、不同时间(F=117.65,P<0.000 1)、浓度与时间交互作用(F=13.41,P<0.000 1)均有统计学意义.经两两比较,各实验组与对照组差异均有统计学意义(P<0.05),各组均有统计学差异.由表1各组抑制率可看出,草甘膦处理液对鲫鱼AChE均呈抑制效应,同一浓度抑制率随时间的延长而增大;同一时间段抑制率呈现先下降而后第5浓度组却上升的趋势.3 结论根据透射电镜观察结果,可以发现与对照组相比,在浓度组鲫鱼肝细胞中出现了一系列的亚细胞结构形态病变.草甘膦处理肝细胞变化主要表现为线粒体肿胀、空泡以及内质网空泡化,这种结构改变大多是细胞不可恢复性损伤的标志,提示活体内细胞死亡或坏死的出现[4].随草甘膦浓度的递增,亚细胞结构损伤程度也呈现渐进的变化.低浓度组,细胞中线粒体、内质网大量增生,说明了肝细胞受到草甘膦的低毒影响时,出现了暂时的应激反应.随浓度的增大,草甘膦中的有机成分被肝细胞吸收后,被溶酶体吞噬,而溶酶体不能对其消化分解掉,因而形成了大量的异噬型溶酶体,此种溶酶体的增多,将影响肝细胞的功能,进而线粒体、内质网出现空泡,最终导致肝细胞的损伤.电镜观察结果显示,草甘膦可以直接作用于试验鲫鱼的肝脏,并引起显著的病理学变化,从而扰乱生物体正常的生理机能,产生显著的中毒症状,甚至导致死亡.乙酰胆碱酯酶(AChE)作为一种由蛋白质分子构成的生物催化剂,其主要功能是将神经系统突触部位的传导神经兴奋化学物质即乙酰胆碱迅速水解为乙酸和胆碱,以维持神经系统的正常生理功能[5]. AChE是能够在神经突触部位清除乙酰胆碱,维护神经正常传导的重要酶类,其活性是衡量生物生理活性的主要指标之一,因此AChE在生理学和毒理学中都得到广泛的研究[6-8].通过实验结果分析可以看出:鲫鱼AChE活性随同一浓度草甘膦污染液暴露时间的延长,呈递减变化,表现为抑制效应[9];同时在同一时间段鲫鱼肝脏AChE活性呈现先下降后上升的趋势,这与翟中和等有关理论相符合,即当细胞长期暴露在某种形式的刺激下,细胞对刺激的反应将会降低,表现为对外界刺激的适应[10].从鲫鱼AChE 酶活性和草甘膦污染液浓度的变化趋势可以看出:AChE酶活性与草甘膦污染液浓度之间存在一定的剂量—效应和时间—效应关系,AChE可以作为监测环境污染的生物标志物,在一定条件下用于水体污染的生物检测.由此看出鲫鱼的AChE活性变化和草甘膦处理液浓度以及暴露时间存在一定的剂量-时间-效应关系.草甘膦在粮食作物中的残留及人体的蓄积都有报道,但草甘膦对水生生物的影响研究不多.本研究为环境保护、渔业生产及合理使用除草剂,提供了一定的参考依据. 参考文献:[1] 南旭阳.除草剂草甘膦对鲫鱼外周血红细胞微核及核异常的影响[J].安徽师范大学学报:自然科学版,2001,12(4):2-5.[2] 耿德贵,刘文.除草剂盖草能对黄鳝外周血红细胞微核和核异常的影响[J].徐州师范大学学报:自然科学版,2000,18(2):53-55.[3] 卢信,赵炳梓,张佳宝,等.除草剂草甘膦的性质及环境行为综述[J].土壤周报,2005,10(5):2-4.[4] 周群芳,傅建捷,孟海珍,等.水体硝基苯对日本青鳉和稀有鮈鲫的亚急性毒理学效应[J].中国科学, 2007,37(2):197-206.[5] 张宗炳,冷欣夫,刘珣,等.杀虫药剂毒理及应用[M].北京:化学工业出版社,1993:68-80.[6] Hulka B S,Wilcosk T C,Griffith J D.Biological markers in epidemiology[M].New York:Oxford Univer Press,1990.[7] 徐晓白.典型化学污染物中的变化及生态效应[M].北京:科学出版社,1998.[8] Krivplutsky D A.Orivatid mite complexe as bioindicators of radio active pollution[J].Recent Advances in Axarology,1979,1:615-618.[9] 张彬彬.乙草胺对泥鳅生理功能影响的研究[D].济南:山东师范大学,2008.[10] 翟中和,王喜忠,丁明孝,等.细胞生物学[M].2版.北京:高等教育出版社,2000:156-157.。