鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的初步表达-http_...

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Exendin-4基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

ｐａｅｗｅｅｔａｓｌｔｄｔ８ｐａｅｗｉｎｒａｉｇｇａｉｎＯｇｔｔｅｍｕｃｐｅｏｌｔｒｒｎｐａｅＯＧ４ｌｔｔｉｃｅｓｎｒｄｅｔｔｅｈｈｉｏｙｒｃｍｂｎｎ．Ｍｕｃｏｅｃｅｎｄｏ１ｈｉａｔｔｌｎｓｓｒｅｅｎＭＭｎＤｌｔｓｗｅｅｉｄｃｄｂｔａｏｘｒｓｉｇｆｒ６ｄｙ．Ｓｍｐｅｒｏｖｒ４．Ｔｒｃｎ — ＳａｄＭｐａｅｒｎｕｅｙｍｅｈｎｌｅｐｅｓｎｏａｓａｌｓｗｅｅｇｔｅｅｙ２ｈｉｉｅＤＳ— ＰＡＧＥｉｄｃｔｄｔａｈｉｈｓｅｅｆｅｐｅｓｏｐｅｒｄａｔｒ６ｄｙ ’ｉｄｃｉｎｎｉａｅｈｔｔｅｈｇｅｔｌｖｌｏｘｒｓｉｎａｐａｅｆｅａｓｎｕｔ．ｏ
中图分类号：３．Ｑ９９９
文献标识码：Ａ
文章编号：０８３１（０２０ — ０１一Ｏ１０ — ｌ１２１）１０２４
ＭｏｅｕａｌｎｅａｄｅｐｒｓｉｎｏｌｃｌｒｃｏｎｘｅｓｏｆＥｘｅｄｉ＿４ｉｃａｐａｓｏｉｎｎ‘ ｎＰｉｈｉ＿＿ — — ｔｒｓ
ａ－ｆｃｏＯｃｓｒｃｅｏｍｂｉｎｅｒｔｎｘｅｓｎｇｐｌｓｉＰＩＫ — Ｅ４．ｈｅｐＣ９ — Ｅ４ｗａｉａｉｅｎａａｔｒｔｏｎｔｕｔｒｃｎａｔｓｃｅｉｇｅｐｒｓｉａｍｄｏｆｐＣ９ＴＰＩＫｓｌｎｅｒｚｄｂｙＳａｎｄｔｅｔａｓｏｒｅｎｔｃａｐａｔｉＧＳ１１ｖａｅｅｔｏＤｏａｔｏｃＩａｈｎｒｎｆｍｄｉｏＰｉｈｉｓｏｒｓｉｌｃｒ５ｒｉｎ．ＴｈｅｐｏｉｉｅｔａｆｍａｔｃｅｎｅＤｓｔｖｒｎｓｏｒｎｓｓｒｅｄｏｎＭ

黑龙江地区鲤春病毒血症病毒的分离与基因型分析

分装保存于–80℃冰箱中。 1.3 SVCV 分离株的 PCR 鉴定
取 1.2 中出现细胞病变的病毒悬液, 利用 SV Total RNA Isolation system 试剂盒提取病毒总 RNA。以提取的 RNA 为模板, 进行一步法 RTPCR 扩增[14], F1/R2 为引物扩增 G 蛋白基因中的 714 bp 片段, 引物 F1/R4 再从该片段中扩增 606 bp 的片段, 同时设无病变的 EPC 细胞提取的 RNA 为阴性照组。 1.4 病毒滴度的测定
取病鱼肝、脾、肾等组织加磷酸盐缓冲液研磨, 离心除去沉淀, 将所得到的组织悬液用 0.22 μm 滤器过滤后置于–80℃冰箱保存。吸除细胞培养板中培养液, 用磷酸缓冲液(PBS)洗涤 EPC 细胞单层 2~3 次。利用细胞维持液(含有 2%胎牛血清的 MEM 培养液)将组织滤液稀释 100 倍后接种于 EPC 致密单层细胞, 在 20℃低温二氧化碳细胞培养箱中孵育 1.5 h, 吸去孵育液, 加入新的细胞培养液(含有 10%胎牛血清的 MEM 培养液)继续培养。每日定时观察记录细胞的病变情况并拍照。约 80%的细胞出现细胞病变后无菌收集病毒悬液,
1. 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所, 黑龙江哈尔滨 150070; 2. 上海海洋大学水产与生命学院, 上海 201306
摘要: 对 2015—2016 年黑龙江不同地区的 40 个养殖场送检的鲤(Cyprinus carpio)进行鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus, SVCV)的细胞培养分离、PCR 鉴定、病毒滴度测定、病毒表面糖蛋白(glycoprotein, G)氨基酸序列聚类分析及基因分型研究。细胞培养结果显示, 来自 4 个不同养殖场的鲤组织样本能够感染鲤上皮细胞(epithelioma papulosum cyprini, EPC)产生典型细胞病变(cytopathic effect, CPE), 收集病毒悬液分别称为 Shlj1~Shlj4。PCR 鉴定结果表明, 该 4 株病毒均为 SVCV。病毒滴度实验测算出 SVCV Shlj 1~Shlj 4 的滴度分别为 106.28、106.88、107.57 和 106.38 TCID50/mL。Shlj 的糖蛋白基因核苷酸序列的聚类分析和遗传进化分析结果显示, Shlj 1~Shlj 4 与 GenBank 收录的中国参考株 A2、BJ0505-2 和美国参考株 USA、212364 聚为一簇, 同源性为 98.4%~99.8%; Shlj 1~Shlj 4 毒株之间的糖蛋白核苷酸序列相似性在 98.6%~99.8%, 其中 Shlj 3 与美国 SCVC 毒株 USA、212364 具有最高的核苷酸相似性(99.8%), Shlj 2 与英国参考毒株 880163 具有最低的相似性(88.0%)。糖蛋白氨基酸序列比对结果显示, Shlj 4 中氨基酸突变最多, 与另 3 个毒株差异较大。基因型分析结果显示, Shlj 1~Shlj 4 均为基因 Ia 型。本研究结果表明, 黑龙江地区 2015—2016 年间的 SVCV 检出率约为 10%, 并且来源于不同养殖场的病毒分离株的核酸序列呈现不同程度的差异, 该结果进一步证明 SVCV 毒株在中国不同的鲤养殖环境中正在不断地进化。

鲤春病毒血症病毒基质蛋白基因的原核表达及多克隆抗体的制备

ｃｒｎｅｇｎｍｅｕｎｅｏＳＣａａｌｉｅＢｎＮ０８３，ｄｔｅｌｅｔｔＭ９ＴｖｃｒｆｒｅｏｉｇｔｔｅｏｅｓｑｅｃＶＶａｉｂｅｎＧｎａｋ（Ｃ０２０）ａｎｃｎｄｉｏｈｐＤ１一ｅｔ．Ａｔ－ｄｏｈｆｖｌｎｈｏｎｅｏｅｒ
且ｅｌｕｒｓｎｅｔｎ．ｐｒｆａｏｆｉｃｕｉｎｂｄｅｎ — ＴＨｉ・ｉｄＲｓｎｐｒｃｔｎｏｉｈａｏａｏｉｉｕｉｃｔｎｏｌｓｏｏｉｓａｄＮｉＮＡｓｂｎｅｉｕｉａｏ．Ｐｒｅｐｏｅｎｗａｅｍ－ｉｉｎｉｆｉｕｉｄＭｒｔｉｓｕｄｔｉｉｆｓｏ
福建福州３００；．５０３３深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心，东深圳５８０）广１０１
摘要：根据鲤春病毒血症病毒（ＶＶ）因组序列（ｅＢｎ：Ｃ０２０）人工合成Ｍ基因开放阅读框序列，ＳＣ基ＧｎａｋＮ＿０８３，克隆至原核
ｓｒｔｎｄｇｓｏｄｓｑｅｃｅｉｃｔｎ，ｔｅｆａｍｅｔｏｐｏｔｘｒｓｉｎｖｃｏＥｔｃｉｉｅｔｎａｅｉｏｉｎｕｎｅｖｒｉａｏｈｒｇｎｆＭｒｔｉｅｅｗｓｃｏｅｎｏｔｒｋｒｏｉｅｐｓｅｔｒｐＴ－ｆｉｈｃｅｏ
ＡａｅｙｏｇｉｕｕａＳｉｎｅ，Ｆｚｏ，ｕｉ５０３ｈｎ；．ｅａｔｎｆｕｅｖｉｎｏｎｍｎｌｔｃｄｍｆｒｌｒｅｃｓｕｈｕＦｊｎ３００，Ｃｉａ３ＤｐｒＡｃｔｌｃａｍｅｔｐｒｉｏｎＡｉａａｄＰａｏＳｓｌｎ

一种新颖的毕赤酵母酸性蛋白酶基因的克隆和异源表达以及酶学性质研究

一种新颖的毕赤酵母酸性蛋白酶基因的克隆和异源表达以及酶学性质研究马纳纳;徐冬冬;黄伟谦;游子娟;罗晓春【摘要】采用基因克隆方法获得酸性蛋白酶基因,在毕赤酵母KM71表达系统中进行表达,并将重组酵母酸性蛋白酶rPrA经过浓缩后研究其酶学性质,初步探究了rPrA对大豆蛋白和酪蛋白的水解情况.结果表明:经过异源表达后的重组毕赤酵母酸性蛋白酶分子量约为44 ku,在pH3.0的发酵条件下酶活最高,可达46.92U/mL.该酸性蛋白酶的最适pH值为3.0,最适温度为35℃.Mn2+对该酶活性有激活作用,多种金属离子对该酶有抑制作用;0.1 mmol/L的Pepstain A即可完全抑制酶活,说明此重组酶的活性中心有天冬氨酸残基.对大豆蛋白和酪蛋白的初步水解试验可知,当E/S为4 000 U/g时,此重组酶对大豆分离蛋白和酪蛋白的水解度分别为9.0％和8.34％.优化发酵条件以及与多种蛋白酶进行复配,该重组蛋白酶将在蛋白水解中有很好的应用前景,有望应用到畜禽饲料加工行业.【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2015(042)012【总页数】6页(P141-146)【关键词】毕赤酵母;重组酵母酸性蛋白酶;酶学性质;蛋白水解【作者】马纳纳;徐冬冬;黄伟谦;游子娟;罗晓春【作者单位】华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州510006;华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州510006;华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州510006;华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州510006;华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】S188蛋白酶是水解蛋白质肽链的一类酶的总称，广泛应用于食品加工、酒精发酵以及皮革工业等多个领域。

按其作用的最适pH可分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。

其中酸性蛋白酶又称天冬氨酸蛋白酶，最适pH为3.0～5.0，活性中心有两个天冬氨酸残基，活性可被胃酶抑素抑制。

鲤春病毒血症病毒SYBR Green I荧光定量RT—PCR方法的建立

ＤｅｖｅｌｏｍｐｍｅｎｔｏｆａＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩｂａｓｅｄｒｅａｌ－－ｔｉｍｅＲＴ－・ＰＣＲ
ａｓｓａｙｆｏｒｒａｐｉｄｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｓｐｒｉｎｇｖｉｒｅｍｉａｏｆｃａｒｐｖｉｒｕｓ
ｖｉｒｕｓ（ｓｖｃｖ）ｗｉｔｈａｐａｉｒｏｆｐｉｒｍｅｒｓｄｅｓｉｇｎｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅＮｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＳＶＣＶ．Ｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｅｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅ
ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄ．ＴｈｅａｓｓａｙｗａｓｓｐｅｃｉｉｆｃｏｒｆｄｅｔｅｃｔｉｎｇＳＶＣＶｗｉｔｈａｌｉｍｉｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ１０。ＴＣＩＤ５加Ｌｗｈｉｃｈｗａｓ１００ｔｉｍｅｓ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ａＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩｂａｓｅｄｒｅａｌ－ｔｉｍｅＲＴ — ＰＣＲａｓｓａｙｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｓｐｉｒｎｇｖｌｒｅｍｉａｏｆｃａｒｐ
合征病毒为阴性，特异性强；该方法对ＳＶＣＶ检测下限为１０。ＴＣＩＤ￣／ｍＬ，

Hepcidin20基因克隆及在毕赤酵母中的表达的开题报告

Hepcidin20基因克隆及在毕赤酵母中的表达的开题报告摘要：本文旨在开展Hepcidin20基因的克隆及在毕赤酵母中的表达。

为此，采用PCR技术从人类肝细胞中获得Hepcidin20基因，将其克隆至质粒pYES2中，并将构建出的重组质粒转化至毕赤酵母中完成表达。

通过Western blot检测，确认在表达的毕赤酵母中可以检测到Hepcidin20蛋白的存在。

本研究为进一步研究Hepcidin20的生物学功能提供了可靠的实验基础。

关键词：Hepcidin20；PCR；克隆；毕赤酵母一、研究背景和意义Hepcidin20是一种由底物诱导的多肽激素，由20个氨基酸残基组成，主要在肝脏细胞中合成并分泌。

Hepcidin20的主要作用是调节体内铁代谢，抑制肠道吸收铁和储存铁，从而维持体内铁平衡。

近年来的研究表明，Hepcidin20在很多生理过程中都发挥着重要的作用，如抵御微生物感染、调节免疫系统和神经系统功能等，因此，Hepcidin20的研究具有重要的生物学和医学意义。

在Hepcidin20的研究中，克隆Hepcidin20基因并在合适的表达系统中进行表达是非常关键的。

很多研究采用大肠杆菌作为表达系统，但是Hepcidin20的多肽结构和动态平衡使得其在大肠杆菌中的表达难以实现。

毕赤酵母是一种已广泛使用的表达系统，具有较高的蛋白质合成能力和良好的重复性，同时还具有优异的翻译后修饰能力，成为了克隆和表达复杂蛋白质的理想表达系统。

因此，本研究旨在克隆Hepcidin20基因，并在毕赤酵母中完成表达，为Hepcidin20的生物学功能研究提供可靠的实验基础。

二、研究方法和流程1. PCR扩增Hepcidin20基因采用人类肝细胞总RNA作为PCR扩增模板，设计Hepcidin20特异性引物，利用PCR技术扩增Hepcidin20基因。

PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测，分离出目标条带并纯化。

2. 重组质粒构建将PCR扩增得到的Hepcidin20基因片段克隆至表达质粒pYES2中，构建出重组质粒pYES2-Hepcidin20。

鲤春病毒血症病毒糖蛋白的高效表达和纯化

ＧＬＹＣｏＰＲｏＴＥＩｏＦＳＲＩＮＰＮＧＲＥＭＩｏＦＣＡＲＰＶＩＶＩＡＲＵＳ（ＶＣＶ）Ｓ
ＬＮＷｅ — ｅｇＬＵＨｎ，ＡＯＬｎ —ｉｇＳＩｉ－ｅＡｎｓｎ，ＩｏｇＧｏｇｙｎ，Ｈｕｊ，ｈＸｉ
ＡｓａｔＧｙｏｒｔｎｇｎｓｅｇｆｐｉｉｍａｏｃｒｉｓ（ＶＶ）ｗｓｌｎｄｆｍｉｌｅＳＣ－４．ＴｅＳＣｇｂｔｃ：ｌｐｏｉｅｅ（ｖ— ）ｏｒｇｖｅｉｆａｐｖｕＳＣｒｃｅＳｎｒｒａｃｏｅｏｏａＶＶ７１ｈＶ— ｒｓｔ
兰文升，刘荭，高隆英，史秀杰，晓聪，俊强，郑何卢体康
（深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心深圳市外来有害生物检测技术研发重点实验室，深圳５８１）１００
摘要：本研究从鲤春病毒血症病毒（ｐｎｉｍａｏａｐｖｕ，ＶＶ）ＶＶ７１株克隆鲤春病毒血症病ＳｒｇｖｅｉｆｒｉｓＳＣＳＣ一４毒ｉｒｃｒ
ＺＨＥＮＧａ — ｏｇ，ＨＥｕｑａＸｉｏｃｎＪｎ— ｉｎｇ，ＬＵ・ｎＴｉｋａｇ
（ｈｅｎａｅｔｎｍｌｎｌｎＩｓｃｏｎｕｒｎｉ，ｈｎｈｎＥｔＴｅＴｃｉｌｎｒｆＡｉａａｄＰａｔｎｅｔｎａｄＱａａｎＳｅｚｅｎｒＥｉＩｐｃｏｎｈｃＣｅｏｐｉｔｅｙ＆ｘｅｔｎａｄｔｎｉｓＱａａｔｕｕＳｅｚｅｅａｏａｏｙｏ＆ｎＤｔｔｎＴｃｎｌｙｏｘｔｅｔ，ｈｎｈｎ５８１，Ｃｉ）ｕｒｎｉＢｍａ，ｈｎｈｎＫｙＬｂｒｔｒＤｏｅｃｏｅｈｏｇＥｏｃｓＳｅｚｅ１００ｈｎｅｎｒｆＲｅｉｏｆｉＰｓａ

phyA基因在毕赤酵母中的表达以及表达产物的检测

ｐｈｙＡ基因在毕赤酵母中的表达以及表达产物的检测摘要对获得的植酸酶基因PhyA进行TA克隆，获质粒pTA-phyA，酶切后，使其在连接体系中连接到酵母表达载体pPIC9K-InS片段上，随后将重组质粒转化给大肠杆菌，验证其成功后，再将重组质粒转化给毕赤酵母，诱导其表达，通过测定植酸酶活性，得出其表达量。

关键词phyA基因；克隆；毕赤酵母；表达；检测植酸酶是一类能将植酸(六磷酸肌醇)降解为肌醇和无机磷酸的磷酸酶。

在饲料中添加植酸酶，不但能促进动物对饲料中磷的利用，使植物性饲料中磷的利用率提高60％，粪便中磷的排出量减少40％，同时还能降低植酸的抗营养作用，对提高畜牧生产效益和降低环境中的磷污染有重要意义。

因此，植酸酶引起了研究领域和饲料行业的普遍关注。

基因表达真核系统，利用较多的是巴氏毕赤酵母表达系统。

我们将植酸酶基因与pPIC9K连接构建成为酵母表达载体pPIC9K-phyA，导入酵母细胞，获得了表达，测定植酸酶酶活的结果显示表达处于较高水平。

1 材料与方法1．1 材料1．1．1 菌株与质粒。

含有植酸酶基因的pT-phyA质粒，EcoliDH5α，毕赤酵母GS115，pPIC9K。

1．1．2 试剂。

EcoRI、NotI内切酶，胶回收试剂盒(V-Gene)，T4-DNALigase。

1．1．3 主要培养基。

LB培养基(蛋白胨／酵母粉培养基)、YEPD培养基(YeastExtractPeptoneDextroseMedium)，酵母浸出粉／胰蛋白胨／右旋葡萄糖培养基。

选择培养基：在上述相应培养基中加入抗生素，用于转化子的筛选或重组菌株的培养。

各抗生素使用浓度分别为氨苄青霉素100μg／mL、红毒素25μg／mL、新霉素5μg／mL。

1．2 方法1．2．1 植酸酶phyA基因的pPIC9K表达载体的构建。

挑取含有植酸酶基因的pT-phyA质粒的大肠杆菌种DH5α，接种于2mL的LB培养基中，37℃摇床培养过夜，碱裂解法抽提质粒。

一株鲈鲤源鲤春病毒血症病毒的分离鉴定及其病理观察

中国水产科学 2019年5月, 26(3): 569-576 Journal of Fishery Sciences of China研究论文收稿日期: 2018-01-15; 修订日期: 2018-05-22.基金项目: 四川省淡水鱼产业技术体系创新团队建设项目(2017SICAD002); 雅砻江流域水电开发有限公司鱼类疾病防控体系建设项目(JPDC-D2017050).作者简介: 郑李平(1994–), 女, 硕士研究生, 研究方向为水生动物病原学与病理学. E-mail: zlping14@ 通信作者: 耿毅, 教授, 主要从事动物病原学与病理学的教学与研究工作. E-mail: gengyisicau@ DOI: 10.3724/SP.J.1118.2019.18024一株鲈鲤源鲤春病毒血症病毒的分离鉴定及其病理观察郑李平1, 耿毅1, 余泽辉1, 雷雪平1, 曹师琪1, 欧阳萍1, 黄小丽2, 陈德芳2, 邓龙君3, 甘维熊3, 夏文萍11. 四川农业大学动物医学院, 四川温江 611130;2. 四川农业大学动物科技学院, 四川温江 611130;3. 雅砻江流域水电开发有限公司, 四川西昌 615000摘要: 2016年4月, 四川某鲈鲤(Percocypris pingi )养殖场流行一种以鳃、鱼鳔和内脏器官出血为临床特征的传染病。

组织病理学观察发现, 患病鲈鲤全身多组织器官均发生明显的病理损伤, 尤其是肝、脾、肾、鳃和肠表现为明显的出血、变性、坏死以及炎症细胞浸润。

取病鱼组织匀浆滤液接种鲤上皮瘤细胞(epithelioma papulosum cyprini, EPC), 盲传3代出现典型的细胞病变(cytopathic effects, CPE)。

将自然发病鱼组织匀浆滤液和细胞培养病毒液分别接种健康鲈鲤, 实验鱼出现与自然发病鱼相同的症状, 死亡率分别为60%和50%, 而对照组未见异常。

锦鲤疱疹病毒-CJ株ORF81基因的克隆及生物信息学分析

锦鲤疱疹病毒-CJ株ORF81基因的克隆及生物信息学分析周井祥;李新伟;王好;吕文亮;朱霞【摘要】To study its structure and function, the ORF81 gene was amplified by PCR from koi herpes virus China's Jilin strains (KHV-CJ) infected. Mirror carp primary fin cells were then cloned into the vector pMD18-T to construct the recombinant plasmid. The structure and function of the gene were studied by means of bioinformatics software, including phylogenetic tree analysis compared with other three KHV strains published in GenBank. The results showed that the length of the 0RF81 gene,encoding 256 aa,was 771 bp. The molecular weight was 28 246. 50 u and the isoelectric point was 8. 404. The protein is hydrophobic. The most likely signal peptide cut was in 29 bit( Ser). ORF81 has four transmembrane regions. The antigenicity of ORF81 was good. According to the protein structure analysis, there may be no N-glycosylation sites,6 O-glycosylation sites and 11 phosphorylation sites. Phylogenetic analysis showed that he ORF81 gene of KHV-CJ was in the same branch with the Israel strain. Above all, ORF81 gene may have good immunogenicity. The study established the foundation for genetic background information, pathogenesis, molecular epidemiology and genetic engineering vaccine research of koi herpes virus.%为了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ) ORF81蛋白的结构特征和进化关系,用框镜鲤尾鳍原代细胞增殖KHV-CJ,提取其DNA,经PCR扩增,获得ORF81基因,将其克隆到pMD18-T载体中,构建重组质粒.应用生物信息学方法初步分析KHV-CJ ORF81基因的结构和功能,并与GenBank上已公布的3株KHV构建系统进化树.结果显示,获得了长771 bp的ORF81基因,编码256个氨基酸；预测ORF81基因的理论分子量为28 246.50 u,等电点为8.404；疏水性大于亲水性；信号肽切割部位最可能位于29位的S(丝氨酸)；有4个跨膜区；抗原表位预测显示抗原性良好；结构预测显示,不存在N-糖基化位点、存在6个O-糖基化位点和11个磷酸化位点；系统进化树分析显示,与锦鲤疱疹病毒以色列株属同一分支.【期刊名称】《水产学报》【年(卷),期】2011(035)012【总页数】7页(P1780-1786)【关键词】锦鲤疱疹病毒;ORF81基因;克隆测序;生物信息学分析【作者】周井祥;李新伟;王好;吕文亮;朱霞【作者单位】吉林农业大学动物科技学院,动物生产及产品质量安全教育部重点实验室,吉林长春130118;吉林农业大学动物科技学院,动物生产及产品质量安全教育部重点实验室,吉林长春130118;吉林农业大学动物科技学院,动物生产及产品质量安全教育部重点实验室,吉林长春130118;吉林农业大学动物科技学院,动物生产及产品质量安全教育部重点实验室,吉林长春130118;吉林农业大学动物科技学院,动物生产及产品质量安全教育部重点实验室,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S917;Q785锦鲤疱疹病毒病(koi herpesvirus disease,KHVD)是由锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV)感染锦鲤(Cyprinus carpio koi)、鲤(Cyprinus carpio carpio)及其普通变种如框镜鲤等而导致的一种具有高度传染性和致死性的疾病。

用RT—PCR法快速检测鲤春病毒血症病毒基因

鱼类弹状病毒如ＩＮ传染性造血器官坏死病毒）ＶＳ病毒性出血性败血症病毒）ＨＶ（，ＨＶ（等
有交叉反应，响了鉴定的可靠性。随着分子生物学技术的发展，Ｃ多聚酶链式反应）影ＰＲ（为检测病毒核酸提供了一种快速，敏和特异的检测方法Ｌ５，文报道了用Ｒ — Ｃ灵ｌ』本一ＴＰＲ技术扩增ＳＣＶＶ糖蛋白基因（ｌｏｒｅｅｅ的片段，而达到检测和鉴定ＳＣ目的的诊Ｇｙｐｏｉｇｎ）ｃｔｎ从ＶＶ断方法。
收稿１期：０１１ — １修订日期：０１１－０５ｔ２０．０２；２０ — １３
基金项目：家出入境检验检疫局科研项目（０９１９）淡水生态与生物技术国家重点实验室开放基金资助项国Ｋ４ —９９；
（鱼卵巢细胞）ＦＭ（鱼上皮细胞）Ｃ引物：试验选用ＳＣ病毒的糖蛋白基因草，Ｈ鲤。ＰＲ该Ｖ（基因）作为ＰＲ的模板，所选用的引物有３条。Ｆ：一Ａ１ＡＣＡ１ＧＧＣ１５’ ＴＴＧＧＴＴＴＧＧ
维普资讯
第２６卷
第５期
水
生生
物学报
Ｖｏ２６．Ｎｏ．１．５Ｓｅ．２０２ｐ，０
２年９月００２

鲤春病毒血症病毒截短糖蛋白的原核表达及抗体制备

鲤春病毒血症病毒截短糖蛋白的原核表达及抗体制备林婧楠;赵景壮;徐黎明;刘淼;任广明;卢彤岩【摘要】以鲤春病毒血症病毒(Spring Virernia of Carp Virus,SVCV)shlj1分离株基因组RNA为模板,利用RT-PCR扩增获得SVCV糖蛋白(Glycoprotein,G)部分基因序列(420 bp),克隆至pET-32a原核表达载体,构建重组质粒pET-32a-G;将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta表达菌株,利用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)对截短G蛋白的表达及纯化情况进行检测;将纯化的G蛋白免疫小鼠制备鼠抗血清,采用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和细胞间接免疫荧光抗体试验(Indirect fluorescent antibody test,IFAT)对抗血清进行鉴定.SDS-PAGE结果显示该重组截短G蛋白与预期大小相符(约为35 kDa),以包涵体的形式表达;ELISA结果显示,制备的鼠抗截短G蛋白血清效价为1:80000;IFAT 结果显示,抗血清能够识别不同地区的SVCV分离株(黑龙江省3株,辽宁省2株),在FITC标记的羊抗鼠IgG作用下,呈特异性绿色荧光.结果表明,制备的截短SVCV G 蛋白具有良好的免疫原性,利用其所制备的抗体能够识别我国不同SVCV分离株病毒表面天然结构的糖蛋白.【期刊名称】《淡水渔业》【年(卷),期】2019(049)005【总页数】7页(P44-50)【关键词】鲤春病毒血症病毒;糖蛋白;抗血清制备;细胞免疫荧光【作者】林婧楠;赵景壮;徐黎明;刘淼;任广明;卢彤岩【作者单位】上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心, 上海201306;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所, 哈尔滨150070;上海海洋大学国家水生动物病原库, 上海201306;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所, 哈尔滨150070;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所, 哈尔滨150070;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所, 哈尔滨150070;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所, 哈尔滨150070;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所, 哈尔滨150070【正文语种】中文【中图分类】S941.41鲤春病毒血症(spring virernia of carp，SVC)是当前国际动物卫生组织(Office International Des Epizooties，OIE)必报的重要疫病之一，也是2008年我国颁布的动物疫病名录中的一类动物疫病[1]。

鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因在毕赤酵母中的分泌表达

鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因在毕赤酵母中的分泌表达王树云;武勇;张利峰;李江宇;高志强;谷强;蒲静;任彤;张伟;张旻;江育林【摘要】根据GenBank中鲤春病毒血症病毒（ SVCV）糖蛋白全基因序列设计特异性引物，以SVCV欧洲株病毒核酸为模板，通过RT-PCR方法获得欧洲株SVCV-G基因，克隆至pPICZαA，构建pPICZαASVCV1540表达质粒。

以限制性内切酶SacI线性化pPICZαASVCV1540后通过化学法转化毕赤酵母感受态细胞X33和GS115，添加1％甲醇进行诱导表达， SDS-PAGE电泳分析表达产物显示其分子质量为70 ku。

WesternBlot分析显示该蛋白可以被SVCV山羊多抗识别，表明目的蛋白具有反应原性。

%A DNA fragment, which encoded the glycoprotein of spring viremia of carp virus ( SVCV) European strain, was amplified using designed specific primers by RT-PCR.The complete glycop rotein gene then was cloned into pPICZαA. The linearized recombinant plasmid pPICZαASVCV1540 digested by SacI was integrated into the Pichia pastoris comptent cells X33and GS115 by chemical approaches respectively.The 70 ku secreting protein were found by SDS-PAGE analysis when the recombinant yeast colonies were induced with 1% methanol.The reactinogenicity of induced protein was deter-mined with goat polyclonal antibodies against SVCV by Western Blot analysis.【期刊名称】《淡水渔业》【年(卷),期】2015(000)004【总页数】5页(P31-35)【关键词】鲤春病毒血症病毒;糖蛋白;毕赤酵母【作者】王树云;武勇;张利峰;李江宇;高志强;谷强;蒲静;任彤;张伟;张旻;江育林【作者单位】北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心，北京 100026;北京海森通科技有限公司，北京 100083;北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心，北京100026;北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心，北京 100026;北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心，北京 100026;北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心，北京 100026;北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心，北京 100026;北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心，北京 100026;北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心，北京 100026;中国检验检疫科学研究院，北京 100176;中国检验检疫科学研究院，北京 100176【正文语种】中文【中图分类】S917.4鲤春病毒血症病毒是鲤春病毒血症(spring viremia of carp，SVC)的病原，最早由 Fijan 等［1］分离出来。

鲤春病毒血症病毒糖蛋白的截短表达及其免疫原性分析

中国水产科学 2016年3月, 23(2): 352-358 Journal of Fishery Sciences of China研究论文收稿日期: 2015-06-23; 修订日期: 2015-08-18.基金项目: 现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目(CARS-46-11).作者简介: 徐进(1982–), 男, 副研究员, 从事水生动物疾病研究. E-mail: xujin@ 通信作者: 曾令兵, 研究员. E-mail: zlb@DOI: 10.3724/SP.J.1118.2016.15240鲤春病毒血症病毒糖蛋白的截短表达及其免疫原性分析徐进, 周勇, 陈倩, 曾令兵中国水产科学研究院长江水产研究所, 湖北武汉 430223摘要: 为了揭示鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus, SVCV)糖蛋白编码基因的主要免疫原性决定区域, 本研究对SVCV 的糖蛋白基因进行截短表达, 并用纯化的重组蛋白作为免疫原制备了兔抗血清以分析其免疫原性。

通过SOSUI 以及DNAStar 6.0软件对SVCV 糖蛋白基因的跨膜区、亲水性以及抗原表位进行分析后, 采用RT-PCR 对该基因主要抗原决定区域编码片段进行扩增, 并构建重组表达质粒pGEX-Gtr, 对其进行诱导表达后获得截短的SVCV 糖蛋白的重组蛋白。

将表达的重组蛋白进行纯化复性后, 作为免疫原制备兔抗血清, 采用ELISA 法检测其效价, 采用免疫印迹以及间接免疫荧光技术检测该重组蛋白的免疫原性。

研究结果显示, 截短表达的糖蛋白编码基因长1317 bp, 编码439个氨基酸(29~467), 推测分子量为49.6 kD 。

利用该重组蛋白制备的兔抗血清, 其与重组蛋白的反应效价为1∶64000, 。

免疫印迹及间接免疫荧光结果显示, 该兔抗血清与SVCV-HN 株能发生特异性反应, 表明该重组蛋白与天然的病毒表面糖蛋白的免疫原性无差异。

鲤春病毒单克隆抗体的制备

鲤春病毒单克隆抗体的制备邴国霞;张利峰;张鹤晓;吴清民;江育林;高隆英【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2007(43)3【摘要】鲤春病毒血症（Spring Viraemia of Carp，SVC）是鲤科鱼类的一种急性、高致死率的传染病，被国际动物卫生组织（OIE）列为必须申报的疫病之一。

1971年欧洲人首先报道了鲤春病毒血症，有资料记载，该病曾给欧洲中部和东部的鲤鱼养殖业造成巨大的经济损失。

2002年4月美国北卡罗来纳州某养殖场的135000尾锦鲤暴发传染病，发病率达10％，同年6月美国威斯康星州的野生鲤鱼也大量发病。

随后确认两起疫病病原均为鲤春病毒（SVCV），经OIE设在英国的OIE参考实验室鉴定表明，该病毒株与1998年英国从中国进口的金鱼中分离到的SVC病毒株一致，并称之为“中国株”。

此举直接把美国SVC病毒株的来源指向中国，对中国活鱼尤其是观赏鱼的出口构成了重大威胁。

【总页数】3页(P56-58)【作者】邴国霞;张利峰;张鹤晓;吴清民;江育林;高隆英【作者单位】中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100094;中国动物疫病预防控制中心,北京,朝阳,100026;北京出入境检验检疫局,北京,朝阳,100026;北京出入境检验检疫局,北京,朝阳,100026;中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100094;深圳出入境检验检疫局,广东,深圳,518000;深圳出入境检验检疫局,广东,深圳,518000【正文语种】中文【中图分类】S858.39【相关文献】1.鲤春病毒血症病毒糖蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备 [J], 张家林;李强;叶仕根;李华;2.鲤春病毒血症病毒糖蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备 [J], 张家林;李强;叶仕根;李华3.鲤春病毒血症病毒单克隆抗体制备及鉴定 [J], 李月红;葛晨霞;王龙涛;张培军;张林波4.鲤春病毒血症病毒单克隆抗体的制备及其特性鉴定 [J], 张朋;何俊强;贾鹏;申斯思;朱家增;刘荭;陈孝煊;吴志新;余剑敏;杜娟;兰文升;史秀杰;郑晓聪5.鲤春病毒血症病毒核蛋白原核表达及单克隆抗体制备 [J], 王方;彭俊杰;王业大;刘学芹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鲤春病毒血症病毒(SVCV)糖蛋白DNA疫苗的构建及免疫效果的评估的开题报告

鲤春病毒血症病毒（SVCV）糖蛋白DNA疫苗的构建及免疫效果的评估的开题报告一、研究背景鲤春病毒血症病毒（SVCV）是一种高度传染性的鱼病毒，能够感染多种淡水和海水鱼类，并可引起严重的经济损失。

目前，对于SVCV的主要防控方式为疫苗接种。

然而，传统的疫苗制备技术存在着传染病毒污染、免疫效果不佳等问题。

因此，开发新型的SVCV疫苗是十分必要的。

二、研究内容本研究旨在构建一种基于SVCV 糖蛋白（G protein）的DNA疫苗，并评估其在斑马鱼中的免疫效果。

具体内容包括：1.构建SVCV G protein的表达载体：从SVCV病毒基因组中克隆出G protein基因序列，构建表达载体并进行验证。

2.斑马鱼注射和检测：将所构建的表达载体注射至斑马鱼体内，通过RT-PCR和 Western blot等技术检测其在鱼体中的表达情况。

3.免疫试验：将经过疫苗接种的鱼类暴露于SVCV病毒下，观察其抗病毒能力和存活率，并比较其与传统疫苗的免疫效果。

三、研究意义本研究通过构建基于SVCV G protein的DNA疫苗，为SVCV的防控提供了一种全新的思路。

与传统疫苗相比，该疫苗具有制备简单、免疫效果好等优点，有望广泛应用于SVCV的预防和控制。

四、研究方法1.从SVCV病毒基因组中获取G protein基因序列，并进行限制酶切和连接，构建表达载体。

2.将所构建的表达载体经电击或注射等方法转染至斑马鱼体内，通过RT-PCR和Western blot等方法检测其表达情况。

3.将致病剂量的SVCV病毒接种至经过疫苗接种的鱼类体内，观察其存活率和抗病毒效果。

五、研究预期结果通过本研究，预计能够成功构建SVCV G protein的表达载体，并实现该疫苗在斑马鱼体内的表达。

同时，该疫苗在斑马鱼中的抗病毒效果和存活率也将得到评估，为后续SVCV疫苗的应用提供基础数据支持。

α-1,6-葡聚糖酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

α-1,6-葡聚糖酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达钟丽娟;Bwegendaho Damien;陈龙军;凌雪萍;何宁;卢英华【期刊名称】《厦门大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(050)001【摘要】The α-1,6-dextranase gene was amplified from a synthetic α-1, 6-dextranase gene derived from Penicillium minioluteum HI-4 and was inserted into plasmid pPICZαA. The recombinant plasmid named pPICZαA-Dex was identified by PCR and enzyme digestion,and was then electrotransformed into Pichia pastoris X33. The recombinant Pichia pastoris X33 was induced to express the dextranase using methanol. The enzyme activity reached 29. 2 U/mL after 120 h of induction. The size of the recombinant α-1 ,6-dextranase is approximately 67 ku analyzed by SDS-PAGE,which is consistent with the theoretical molecular weight.%根据朱黄青霉(Penicillium minioluteum HI-4)α-1,6-葡聚糖酶的基因序列,人工合成α-1,6-葡聚糖酶基因并将其插入毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPICZαA,PCR和双酶切验证结果均表明成功构建了重组质粒pPICZαA-Dex.重组质粒经SacⅠ线性化后整合到毕赤酵母X33基因组中进行表达.摇瓶发酵表明,重组毕赤酵母经甲醇诱导120 h产酶活力达到最高值29.2 U/ mL,SDS-PAGE结果显示在67 ku附近有明显的条带,与α-1,6-葡聚糖酶理论分子质量相符合.【总页数】4页(P93-96)【作者】钟丽娟;Bwegendaho Damien;陈龙军;凌雪萍;何宁;卢英华【作者单位】厦门大学化学化工学院,福建,厦门,361005;厦门大学化学化工学院,福建,厦门,361005;厦门大学化学化工学院,福建,厦门,361005;厦门大学化学化工学院,福建,厦门,361005;厦门大学化学化工学院,福建,厦门,361005;厦门大学化学化工学院,福建,厦门,361005【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.朱黄青霉α-1,6-葡聚糖酶在毕赤酵母GS115中的异源表达 [J], 王赟;章晓庆;王风清2.绿色木霉LTR-2β-1,3-葡聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 [J], 高雯;吴远征;杨合同3.草酸青霉外切葡聚糖酶基因(cbh1)克隆及其在毕赤酵母中的表达和重组外切葡聚糖酶特性分析 [J], 赵萱;顿宝庆;顾金刚;王智;田谷;许修宏;路明;李桂英4.匍枝根霉内切葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的克隆及表达 [J], 张莹莹;汤斌;5.匍枝根霉内切葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的克隆及表达 [J], 张莹莹;汤斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

抗虫基因在毕赤酵母中的表达及其在G75体系的遗传分析的开题报告

抗虫基因在毕赤酵母中的表达及其在G75体系的遗传分析的开题报告1. 研究背景和意义在农作物种植中，虫害是一个需要解决的关键问题。

化学农药虽然能控制虫害，但会污染环境和食品，同时也可能对人体健康造成危害。

因此，利用基因工程技术改善植物的抗虫性，成为了一个备受关注的研究领域。

毕赤酵母作为一个单细胞真菌模型生物，在研究抗虫性状的基因功能、表达和调控机制方面具有重要意义。

本研究将以毕赤酵母为模拟系统，探究基因在该模型生物中的表达以及在遗传体系中的作用，以期改善对虫害的抵抗力，为农作物的生产提供新的途径。

2. 研究内容和方法本研究将针对抗虫基因的功能分析以及在毕赤酵母中表达的机制进行研究，具体内容包括：（1）抗虫基因在毕赤酵母中的表达情况分析。

采用聚合酶链式反应（PCR）技术，检测抗虫基因在毕赤酵母中的表达情况，分析其表达水平受到哪些因素的影响。

（2）抗虫基因在毕赤酵母中的功能研究。

运用基因敲除技术和基因过表达技术，分析抗虫基因对毕赤酵母自身虫害的影响。

（3）抗虫基因在G75体系中的遗传分析。

采用交叉配种等基本遗传实验方法，研究抗虫基因在G75体系中的遗传模式和遗传机制，为今后的育种提供理论基础。

3. 预期结果通过以上的方法和内容，本研究预期取得以下结果：（1）建立毕赤酵母中抗虫基因的表达模式；（2）探究抗虫基因在毕赤酵母自身虫害防御方面的作用；（3）分析抗虫基因在G75体系中的遗传模式和遗传机制。

4. 研究意义和应用价值本研究将为解决农作物虫害防治提供重要的理论支撑和实践指导，同时也拓展了利用毕赤酵母模型生物研究抗虫性状的途径。

具体应用价值包括：（1）为农作物育种提供新的基因资源，用于提高农作物的抗虫性；（2）提高农作物抗虫能力，减少农药的使用量，保护环境和人体健康；（3）深入探究抗虫基因的调控机制和功能，为今后研究提供理论基础。

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和欧洲参考株同时进行了基因的克隆和表达。而且由于ＳＶ的抗血清效价不高，隆并表达ＳＶ具有抗ＶＣ克ＶＣ原性的糖蛋白片段，于开发ＳＶ疫苗或制备灵敏、异的诊断试剂盒也有着重要的意义。对ＶＣ特本研究选用ＳＶ国内分离株９２株和欧洲参考株糖蛋白基因作为目的基因片段，ＶＣ９导人ｐＰｕＢ表ＧＡＺＡ／
Ｆｉｈｒｅｓａｃｎｔｔｔ，ＣｉｅｅＡｃｄｍｙｏｉｈｒｃｅｃｓｓｅｉｓＲｅｅｒｈＩｓｉｕｅｈｎｓａｅｆＦｓｅｙＳｉｎｅ，Ｑｉｇａ６０１ｎｄｏ２６７）
（ｃａｈｏｎｔｉＵｎｖｒｉｙ，２０ＯｅｎＳｃｏｌｏｆＹａａｉｅｓｔ６４０５）
维普资讯第２８卷来自第４期２０年０７
海
洋
水
产
研
究
Ｖｏ．８，．１２ＮＯ４
Ａｕｇ２７．，００
８月
ＭＡＲＩＥＳＨＥＲＩＥＳＥＡＲＣＨＮＦＩＥＳＲ
鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的初步表达
ａｓｅｔｆｄｔａｈｂｅｔｅｐｏｅｎｗａｘｒｓｅ．ｌｏｔｓｉｅｈｔｔｅｏｊｃｉｒｔｉｓｅｐｅｓｄｉｖ
ＫＥＹＯＲＤＳＷＳｒｎｉｅａｏａｐｖｒｐｉｇｖｒｍｉｆｃｒｉｕｓ
大肠杆菌感受态细胞Ｅｏｉｏｌ．ｃｌＴｐ０Ｆ’（ｅＡ，ｅｄ，ＧＡＺＡ和ｐＡＰｕｒｃｎＡ）ｐＰｕＧＺＢ表达载体、赤酵母菌株毕ＳＭＤ１６ｈｓ，ｅ４均购于Ｉｖｔｏｅ１８（ｉｐｐ）４ｎｉｇｎ公司。限制性内切酶购于大连ＴａＲ，ｑＤＮＡ聚合酶、ＴＡＢｒＫａａＴａＣ、
Ｅｘｐｅｓｏｒｓｉｎ
Ｇｌｃｐｒｔｉｙｏｏｅｎ
Ｃｌｎｅｏ
Ｐｉｈｉｃａｐａｓｏｉｔｒｓ
国家质检总局科研项目（０２Ｋ０３和黄海水产研究所海水养殖生物疾病控制与分子病理学实验室开放课题共同资助２０Ｉ６）
分离到的ＳＶ毒株与欧洲参考株的糖蛋白基因和氨基酸序列进行了比较分析，现存在一定的差异，些ＶＣ发这
差异在引起ＳＶ毒力、清学和致病机理方面所起到的作用，ＶＣ血还有待于进一步确认和分析。为了更好地研究不同地域糖蛋白的抗原决定簇情况，一步研究ＳＶ的致病机理和检测方法，本研究中对国内分离株进ＶＣ在
ＣｈｃｉｇｗｉｈｙａｔｃｌｎｅｋｎｔｅｓｏｏｙＰＣＲｎｉａｅｈａｈｅｇｅ — ｎｇｎｅｉｇｓｒｉｓｗｈｃｏｕｄｅｐｅｓｉｄｃｔｄｔｔｔｎｅｅｉｅｒｎｔａｎｉｈｃｌｘｒｓ
中图分类号
鲤春病毒血症病毒
￥４９
糖蛋白
克隆
毕赤酵母
分泌表达
文献识别码Ａ
文章编号１０ —０５２０）４０７ —５００７７（０７０ —０２０
ＣｌｎｎｏｔｕｔｏｆｔｅｅｐｅｓｏｔａｎｏｃａｐａｔｒｓｆｒｏｅａｄｃｎｓｒｃｉｎｏｈｘｒｓｉｎｓｒｉｆＰｉｈｉｓｏｉｏ
ｐＧＡＰａ５７和ｐＡＰａ一２经线性化后，ＺＡ一１ＧＺＢ５１电击法转化毕赤酵母ｓＭＤ１６１８茵株，建分泌型表达构ｓＶ糖蛋白的重组酵母茵株。酵母茵落ＰＶｃＣＲ法检测表明，已成功构建分泌表达ｓＶ糖蛋白的Ｖｃ酵母基因工程茵株，点印迹法进一步分析表明有目的蛋白的成功表达。斑关键词
（ＴｈｙＬａｆＡｑａｉＡｎｍａＤｉｅｓｓｏｈｎｈｎＥｘｔ￣ＥｔｙＩｓｅｔｎａｄＱｕｒｎｉｅＢｕｅｕ１０１。ｅＫｅｂｏｕｔｉｌｓａｅｆＳｅｚｅｉｃｎｒｎｐｃｉｎａａｔｒａ，５８０）ｏｎ
达载体，构建重组质粒转化毕赤酵母，选得到含有ＳＶ国内株和欧洲参考株糖蛋白基因片段的重组毕赤筛ＶＣ
酵母菌株，采用斑点印迹法检测到有目的蛋白的表达。并
１材料与方法
１１材料．
１１１菌株与试剂．．
＊通讯作者。Ｅｍａｌａｕｉ００ｙｆｉａ．Ｄｉｑｄｓ０＠ｓｒｃｃ：２．收稿日期：０６０ —９接受日期：０６０ —２２０—６０；２０ —８０作者简介：付峰（９９）女，教，要从事水产动物疾病研究。Ｔｌ（５５６５７３１７一，助主ｅ：０３）０８７
（ｅｂａｏｒｏｓａｎａｅＵｔｌｚｔｏｆＭａｒｎｅＦｉｈｒｓｒｅ，ＭｉｓｒｆＡｇｒｃｔｒＫｙＬａｏｒｔｙｆｒＳｕｔｉｂｌｉｉａｉｎｏｉｓｅｙＲｅｏｕｃｓｎｉｔｙｏｉｕｌｕｅ，ＹｅｌｌｏｗａＳｅ
ＳＣＶｙｏｏｅｎｈｄｂｅｏｓｒｔｄｕｃｓｆｌｙＦｕｔｒｒＶｇｌｃｐｒｔｉａｅｎｃｎｔｕｃｅｓｃｅｓｕｌ．ｒｈｅｍｏｅ，ａｌｓｓｏｅｔｒ — ｌｔｎａｙｉｆＷｓｅｎｂｏ
维普资讯
第４期
付
峰等：春病毒血症病毒糖蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的初步表达鲤
７３
鲤春病毒血症病毒（ｐｉｇＶｉｍｉｏａｐＶｉｕ，ＳｒｒａｆＣｒｒｓ简称ＳＶ）ｎｅＶＣ是一种弹状病毒，可以引起鲤科鱼类大它规模暴发鲤春病毒血症（Ｖ，ＳＣ）该病主要在欧洲的鲤鱼养殖中广泛传播，ＶＣ可以感染所有年龄的鲤鱼，ＳＶ在春季暴发时，龄仔鱼死亡率可达７。Ｓ１０ＶＣ被国际兽疫局（Ｅ）为必须申报的疾病，ＯＩ列在我国也被国家农业部列为《中华人民共和国进境动物一、类传染病、生虫病名录》二寄中的二类动物疫病。ＳＶ表面糖蛋白ＧＶＣ由５９个氨基酸组成，有信号肽和跨膜区域，典型的跨膜糖蛋白。糖蛋白位于病毒表面，细胞上的受体０具是与结合，介导病毒的内吞作用它是该病毒最主要的抗原，决定了病毒的血清学特征（ｊｒｌｎｔ１１９）Ｂｏｋｕｄｅａ．９６。糖蛋白基因的编码序列在ＳＶ不同区域分离株的进化关系上是主要的参考序列（ｔｎｔ１２０）ＶＣＳｏｅｅａ．０３。国外对于ＳＶ的研究较早，国的研究才刚刚起步。２０ＶＣ我０３年在天津两个养殖场的观赏鱼中分离到了ＳＶ，ＶＣ这是我国首次报道从无临床症状的锦鲤和鲤鱼中分离出ＳＶ（ｉｅａ．２０）ＶＣＬｕｔ１０４。刘荭等（０５将国内２０）