酶活性和质量测定方法及其评价
生物化学检验中酶的测定综述
定时法
通常是酶作用一段时间后，加入强酸、强碱、
蛋白沉淀剂等终止酶促反应，测定这段时间内 底物的减少量或产物的生成量，计算酶促反应 的平均速度。
定时法中酶促反应的过程
注意事项
用定时法测定酶活性浓度， 必须了解不同酶促反应速率和时间的关系， 应先做预试验找出酶促反应速率恒定的时期，
CK-MB
这些方法适用于临床自动化分析，具有测定时
间短（最快仅需7min）、灵敏性高（最低检测 限<µg/L）和准确性好的特点，明显优于其他 分析测定CK-MB的方法，1990年后逐渐被广泛 接受。 为使CK-MB质量分析标准化，AACC成立了专门 的标准化委员会，最近已研制成功采用重组基 因技术的CK-MB参考材料（Rck-2）。
由于同工酶（及其亚型同工型）一级结构的不
同，导致其在理化性质、催化性质、生物学等 方面有明显的性质差异，这些差异为同工酶的 分析和鉴定提供了理论基础。 临床同工酶的分析大致可分为两步，即首先精 确地分离出某酶的各同工酶组分，然后测定酶 的总活性和各同工酶组分的活性。
电泳法
在研究同工酶的所有方法中，电泳法的使用最
CK-MB
是诊断AMI、测定心肌梗塞面积的重要指标。 近年来，国外对AMI诊断效率评价时多采用测
定CK-MB质量，即测定CK-MB的酶蛋白质量浓度 （Mass）的方法。 CK-MB质量的测定通常是制备抗CK-M抗体和抗 CK-B抗体或采用CK-MB抗体，用CLIA、ELISA、 FEIA等方法测定。
同一种属中由不同基因或等位基因所编码的多
肽链单体、纯聚体或杂化体，具有相同的催化 作用，但其分子构成、空间构像、理化性质、 生物学性质以及器官分布或细胞内定位不同的 一组酶称为同工酶。 凡酶蛋白结构不同的同工酶称为原级同工酶， 而将经加工或修饰后的同工酶称为次级同工酶 或酶的多种形式。
酶活性测定实验室标准操作规程
酶活性测定实验室标准操作规程
1. 引言
本标准操作规程旨在确保酶活性测定实验室操作的准确性和一
致性。
该实验室用于测定酶的活性，以评估其催化反应速率，为进
一步研究和应用提供依据。
2. 实验室准备
- 确保实验室环境清洁整洁，排除干扰因素。
- 准备所需试剂、仪器和设备，并进行校准和验证。
3. 样品准备
- 按照实验要求准备待测酶样品。
- 保持样品的完整性和稳定性，避免污染和损伤。
4. 实验步骤
4.1 样品稀释
- 使用适当的缓冲液稀释待测酶样品，以达到合适的测试范围。
4.2 酶活性测定
- 将稀释后的样品与适当的底物混合，并按照预定的反应时间进行反应。
- 使用光谱仪、荧光仪或其他相关仪器测定反应产物的生成情况。
4.3 数据处理
- 记录实验过程中所有操作的详细信息。
- 根据实验结果计算酶的活性，并进行数据统计和分析。
5. 质量控制
- 定期进行实验室内部质量控制，包括使用质检样品进行标准曲线校准和验证。
- 确保实验操作符合质量管理体系要求。
6. 安全注意事项
- 遵守实验室的安全规定，包括佩戴适当的个人防护装备。
- 确保试剂的正确使用和储存，避免有害物质的暴露和泄漏。
7. 结论
本标准操作规程为酶活性测定实验室提供了一套明确的操作指南，用于确保实验操作的准确性和一致性。
遵循该规程可提高实验结果的可靠性，并为进一步研究和应用提供有力支持。
酶活力测定方法
3批ｒｈＩＬ 11制品的ＲＰ ＨＰＬＣ图谱 完全一致,说明该厂ｒｈＩＬ 11的生产工艺是 稳定的;与ＧＩ公司生产的ｒｈＩＬ 11对照品 比较有20个峰与对照品一致,但第6 峰的峰高和 峰面积均明显较小,且在第9和第10 峰之间多一 个峰,说明该厂ｒｈＩＬ 11蛋白质结构与ＧＩ 公司生产的ｒｈＩＬ 11比较存在细小差别。
2）酶促反应的条件及影响因素 底物的浓度：一般选用底物的浓度[S]=100Km。 pH：选用一个适宜的缓冲离子和离子强度、 适宜的pH值的缓冲系统来控制pH。 温度：酶反应的温度通常选用25℃、30℃或 37℃，实验中温度变动应控制在±0.1℃以内。 辅助因子：有些酶需要金属离子，有些需要 相应的辅酶。
2．酶活力测定法
1）基本原理： 酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。
酶活力测定实质上是测定一个被酶所催化的化 学反应速度。酶反应速度越快所表示的酶活力 越高。
酶反应速度可以用单位时间反应底 物的减少或产物的增加来表示。
通常酶活力测定时，先制备酶反应 进程曲线和酶浓度曲线。通过酶反应速 度的测定，求得酶的浓度或含量。
1。酶切条件
取浓度为3ｍｇ·ｍＬ-1的样品0 4ｍＬ对1%Ｎ Ｈ4ＨＣＯ3充分透析,然后取透析样品250μＬ至 微量进样瓶,加0 3ｍｇ·ｍＬ-1ＴＰＣＫ处理的胰 蛋白酶10μＬ混匀,于37℃温控自动进样器酶切, 每80ｍｉｎ进样一针,进样量6μＬ,用Ｍｉｌｌ ｅｎｎｉｕｍ32色谱软件选择214ｎｍ进行分析, 直至ｒｈＩＬ 11完全酶解。按此方法摸索最佳 酶切时间,在第14针后ｒｈＩＬ 11已被完全酶切, 酶切时间在18～22ｈ范围内肽图图谱基本一致, 即确定最佳酶切条件为37℃保温20ｈ。
酶反应进程曲线 纵坐标为底物或产物的变化 量，横坐标为反应时间，曲线斜率表示反应速 度。从酶反应进程曲线求得反应的初速度。 酶浓度曲线 纵坐标为反应速度，横坐标为酶 量。通过酶浓度曲线检验反应测定系统是否适 宜。
酶学与酶工程重点总结
酶学与酶⼯程重点总结第⼆章酶学基础⼀、酶的活性中⼼(active center，active site)（⼀）活性中⼼和必需基团1、与酶活性显⽰有关的，具有结合和催化底物形成产物的空间区域，叫酶的活性中⼼，⼜叫活性部位。
2、活性中⼼可分为结合部位和催化部位。
3、结合部位决定酶的专⼀性，催化部位决定酶所催化反应的性质。
4、酶结构概述（1）活性中⼼是⼀个三维实体。
（2）是有⼀些⼀级结构上可能相距较远的氨基酸侧链基团组成，有的还包含辅酶或辅基的某⼀部分基团。
（3）在酶分⼦表⾯呈裂缝状。
（4）酶活性中⼼的催化位点和结合位点可以不⽌⼀个。
（5）酶活性中⼼的基团都是必需基团，但必需基团还包括活性中⼼以外的基团。
5、酶分⼦中的氨基酸残基或其侧链基团可以分为四类1．接触残基2．辅助残基3．结构残基4．⾮贡献残基（⼆）酶活性中⼼中的化学基团的鉴别1．⾮特异性共价修饰：某些化学试剂能使蛋⽩质中氨基酸残基的侧链基团反应引起共价结合、氧化或还原修饰反应，使基团结构和性质发⽣变化。
如果某基团修饰后不引起酶活⼒的变化，就可初步认为此基团可能是⾮必需基团；反之，如修饰后引起酶活⼒的降低或丧失，则此基团可能是酶的必需基团。
2．亲和标记共价修饰剂是底物的类似物，可专⼀性地引⼊酶的活性中⼼，并具有活泼的化学基团(如卤素)，可与活性中⼼的基团形成稳定的共价键。
因其作⽤机制是利⽤酶对底物类似物的亲和性⽽将酶共价标记的，故称为亲和标记。
3．差别标记在过量底物或可逆抑制剂遮蔽活性中⼼的情况下，加⼊共价修饰剂，使后者只修饰活性中⼼以外的有关基团；然后去除底物或可逆抑制剂，暴露活性中⼼，再⽤同位素标记的向⼀修饰剂作⽤于活性中⼼的同类基团；将酶⽔解后分离带有同位素的氯基酸，即可确定该氨基酸参与活性中⼼。
4．蛋⽩质⼯程这是研究酶必需基闭和活性中⼼的最先进⽅法，即将酶蛋⽩相应的互补DNA(cDNA)定点突变，此突变的cDNA表达出只有⼀个或⼏个氨基酸被置换的酶蛋⽩，再测定其活性，可以知道被置换的氨基酸是否为活⼒所必需。
第五章诊断酶学 - 酶活性浓度的测定技术
ALT双试剂法测定中，首先使血清与缺
此时反应的方向少由αN-酮A戊DH二转酸的变底为物N溶A液D混，合随，反37应°进C保行，A 应随之而下降，通过温检5m测，反将应样产品中物所A含在的34内0源nm性处α-酮A的酸消变化速 率，可以检测指示酶耗反完应。。然后再加入α-酮戊二酸启动ALT
即POD催化下， H2O2氧化芳香族胺色素原生成有色色 素，此类色素原供氢体包括：OT、DAB、ODA、TMB。
34
2. NAD(P)+或NAD(P)H偶联的脱氢酶及其指示反应
许多氧化还原反应，尤其是作为工具酶如LD、GLD、 G6PD等参与时，常将底物的H去除后传递给NAD (P)+形成 NAD(P)H。借助NAD(P)H340nm处特征性的光吸收，借此用 分光光度法检测。
通过测定被加速化学反
应的反应速率，来间接
反映酶的浓度
S
E
P
E+S
ES
E+P
V＝
ds dt
或
V＝
dp dt
14
3. 酶活性浓度
即酶所催化的化学反应的反应速率，用 酶促反应中单位时间内底物的减少量或产物 的生成量来计算。
注意：只有当酶所催化的反应速度仅与 [E] 成正比，而不受其它因素影响时，即在酶促 反应的零级期，才能根据酶所催化的化学反 应速率来确切表示酶活性浓度的大小。
A Ex B Ei P
始发反应
指示反应 辅助酶
A Ex B Ea C Ei P
辅助反应
被测酶 始发反应 指示反应 指示酶 辅助酶 辅助反应 酶偶联体系
酶活性测定方法
酶活性测定方法磷酸酶是一类涉及重要生命过程的酶，研究它们在许多生理病理过程中的功能及其调控机制对了解细胞代谢，发育和信号转导的重要意义。
磷酸酶的活性可以通过测定其反应中形成的产物的数量来评价。
该测定可以为研究它们在特定环境中的活性变化提供重要的信息，因此，磷酸酶活性测定方法对于生物学研究显得尤为重要。
磷酸酶活性测定可以采用多种方法完成，其中，最常用的色谱法、光度法、EC法等。
一、色谱法色谱法是一种测定磷酸酶活性的常用方法，它采用磷酸酶催化把被测物质（典型的指磷酸核苷等）水解后形成可见的特异物质，其吸光度可以被检测和测定。
实施此方法的具体流程是：（1）振荡：将磷酸酶、被测样本、受体者和调节剂等组分，按照一定比例配制在离心管中，在一定温度下振荡混匀；（2）定量：经过一定时间的反应，取样经过色谱检测，测定经磷酸酶催化水解后形成的特异物质的吸光度，以计算出磷酸酶活性；（3）统计处理：比较样本和标准曲线，对测定磷酸酶活性做出统计处理，得出最终结果。
二、光度法光度法是直接测定磷酸酶反应中受体者的吸光度来计算磷酸酶活性的方法，其具体原理是：当受体者发生磷酸酶催化水解反应时，会形成有明显吸光度的特定产物，其吸光度及得数可以用来计算磷酸酶活性。
三、EC法EC法是用电导率检测磷酸酶引起受体物质离子化的方法，它是一种快速精确、方便有效的测量磷酸酶活性的方法；其原理是：当受体物质在磷酸酶的作用下水解发生时，电导率会发生显著增加，根据其程度及电导率值变化程度，可以直接由测试数据计算磷酸酶的活性。
以上就是磷酸酶活性测定的三种常用分析方法，它们各自具有自身的优缺点，实验者可以根据自身需求选择适合的分析方法，从而更直观的分析和了解磷酸酶活性的变化情况。
酶活性测定的数据计算公式
酶活性测定的数据计算公式酶活性测定是生物化学实验中常用的一种方法，用来测量酶在特定条件下的活性水平。
酶活性的测定对于研究酶的功能和特性，以及对酶的应用具有重要意义。
在进行酶活性测定时，需要根据实验数据计算酶活性的值，这就需要用到酶活性测定的数据计算公式。
酶活性测定的数据计算公式是根据酶活性的定义和测定方法来推导的。
酶活性通常是以单位时间内酶催化反应所产生的产物的量来表示的，常用的单位包括国际单位（U）和摩尔/分钟（mol/min）。
在测定酶活性时，通常需要测量酶催化反应产生的产物的量，然后根据测量数据计算酶活性的值。
酶活性测定的数据计算公式通常包括以下几个参数，反应产物的浓度、反应时间、反应体积、酶的载体蛋白量等。
根据不同的酶活性测定方法，这些参数可能会有所不同。
下面我们将介绍几种常用的酶活性测定方法及其相应的数据计算公式。
一、比色法测定酶活性。
比色法是一种常用的酶活性测定方法，通过测量酶催化反应产生的产物的吸光度来确定酶活性。
在比色法测定酶活性时，通常需要测量反应产物的吸光度，并根据吸光度的变化来计算酶活性的值。
比色法测定酶活性的数据计算公式如下：酶活性（U）=（ΔA/min）/ε×V。
其中，ΔA为单位时间内吸光度的变化量，ε为产物的摩尔吸光系数，V为反应体积。
通过测量单位时间内吸光度的变化量，然后根据吸光度的变化量、摩尔吸光系数和反应体积来计算酶活性的值。
二、酶标记法测定酶活性。
酶标记法是一种通过标记酶的载体蛋白来测定酶活性的方法，通过测量标记物的放射性或荧光强度来确定酶活性。
在酶标记法测定酶活性时，通常需要测量标记物的放射性强度或荧光强度，并根据强度的变化来计算酶活性的值。
酶标记法测定酶活性的数据计算公式如下：酶活性（U）=（ΔC/min）/ε×V。
其中，ΔC为单位时间内标记物的强度变化量，ε为标记物的摩尔放射性或荧光强度系数，V为反应体积。
通过测量单位时间内标记物的强度变化量，然后根据强度的变化量、摩尔放射性或荧光强度系数和反应体积来计算酶活性的值。
2017年临床检验技师考试生化检验第五章重要考点(1)
2017年临床检验技师考试生化检验第五章重要考点（1）诊断酶学本章考点：1.血清酶(1)分类、生理变异与病理生理机制(2)酶活性与酶质量测定方法及其评价(3)同工酶及其亚型测定的临床意义2.血清酶活性检测技术(1)酶活性概念和表示方法(2)酶活性测定方法分类、原理、优缺点及应用(3)影响酶作用的因素(4)工具酶的概念、代谢物测定中常用的指示反应3.常用血清酶及同工酶测定的参考值及临床意义(1)肌酸激酶及同工酶和其亚型(2)乳酸脱氢酶及同工酶(3)氨基转移酶及同工酶(4)碱性磷酸酶及同工酶(5)谷氨酰基转移酶及同工酶(6)淀粉酶及同工酶(7)酸性磷酸酶及同工酶4.代谢物酶法测定第一节血清酶一、血清酶的分类根据酶的来源及其在血清中发挥催化功能的情况，可将血清酶分为两大类。
(一)血浆特异酶在血浆中发挥特定催化作用的酶。
如凝血酶、胆碱酯酶(CHE)、脂蛋白脂肪酶、铜氧化酶等。
它们大多数在肝内合成，在血浆中的浓度甚至超过器官细胞内浓度。
有的可以作为肝功能试验的一部分。
血浆特异酶活性的改变，除了反映血液功能外，还反映来源器官的功能。
(有少部分酶在细胞合成后分泌到血液中行使其功能，如凝血因子及有关的纤溶因子。
它们以酶原状态分泌人血，在一定的条件下被激活，引起相应的生理或病理变化。
)(二)非血浆特异酶在血浆中浓度很低，且无功能，分为两种。
1.分泌酶：来源于消化腺或其他外分泌腺的酶。
如α-淀粉酶(AMY)、前列腺酸性磷酸酶(ACP)、脂肪酶(LPS)、胃蛋白酶原、胰蛋白酶原、ALP等。
正常体液中外分泌酶活性低而稳定，不发生催化作用。
在血液中的浓度和其分泌腺体的功能活动和疾病有关，来源增加或排泄受阻时，血浆中此类酶活性增高。
例如，急性胰腺炎时，血淀粉酶就会升高。
2.代谢酶：(细胞酶)在细胞内发挥催化功能的酶。
正常时这些酶存在于组织细胞中，血浆中酶活性很低。
细胞内、外浓度差异悬殊。
当酶来源的组织细胞发生病变，细胞膜通透性增加或细胞坏死时，细胞内酶大量进入血浆，导致血浆酶活性显著增高。
酶学分析方法及酶活性测定复习与练习
酶学分析方法及酶活性测定复习与练习复习和练习1。
酶的基本理论知识1。
酶浓度和酶反应速度之间有什么关系？2、底物浓度和酶促反应速率之间的定量关系是什么？3.影响酶促反应速度的主要因素是什么？4、Km和Vm的意义及其在临床酶活性测定中的应用和意义二、酶活测定的基本知识1，酶活的概念以及如何表达酶活的单位2，目前酶活的单位有-？3.解释酶活性的国际单位和卡达尔的概念，并比较它们之间的关系？4.酶活单位的计算:几种类型的计算公式需要理解和熟练的应用。
1)通用公式2)常用单位的计算公式(确定产品生成类别的计算公式；用于确定底物消耗的计算公式)3)**连续监测方法根据摩尔吸收率计算酶活性浓度；**连续监测法(全自动生化仪通常用k表示)f因子值的计算及应用？三、酶活的测定方法1，酶活测定的基本原则是什么？2，酶反应时间过程曲线有三个周期-，-，-酶活性测定是在-周期内，这个周期的反应速度不受-连续监测法的影响-4分为-直接法有哪些类型？5，什么是酶偶联反应？写下酶偶联反应的基本模式？要测试的酶是什么，辅助酶和指示酶？6.什么是工具酶？当酶在临床生化试验中用作工具时，哪两种指标系统通常可用于酶活性测定或代谢物浓度(底物)测定？什么是-Trinder反应？Trinder反应的主要缺点或影响因素是什么？7，什么是同工酶？同工酶分析的共同原则是什么？同工酶检测的临床意义是什么？举个例子？8，酶活性的测定条件和影响因素是什么？9，从几种酶活性测定(如AMY、ALT、LD、ALP|)的实验操作，讨论了酶活性测定中应注意的问题。
10。
影响血清酶的生理变化是什么？11、酶活性测定、样品采集、处理、储存和样品试剂的比例有什么要求？四.体液酶的测定:1。
临床诊断中常用的血浆酶是什么？用于帮助诊断心肌损伤、肝病、胰腺疾病、骨骼肌、前列腺疾病等的常用血清酶是什么？常用的临床诊断酶谱是什么？2.分析和总结测定血清酶活性的方法学原理，并请总结有哪些主要反应基础3.写出AMS和ALP(化学比色法，连续监测法)和ALT、AST、GGT、LDH和CK酶测定法(连续监测法)的反应原理、主要试剂成分和功能？影响结果准确性的因素有哪些？评价低密度脂蛋白反应和低密度脂蛋白反应试剂盒的优缺点？4、血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、GGT、AMS、CK、LD等酶测定的临床意义？5，选择题:A 1，K m指A底物浓度b酶浓度c活化剂浓度D温度e抑制剂浓度D 2。
酶制剂的理化指标分析
黏度法： 黏度法： 根据酶能够降低一定浓度的标准底物的黏度的能力来确定酶 的活性。
三、酶活测定方法及其影响因素
影响酶促反应的因素
温度 pH值 值 酶浓度 底物 激活剂与抑制剂 作用时间
三、酶活测定方法及其影响因素
120 100 80 活力% E1 60 40 E2 20 0
30 37 45 50 55 60 65 70 75 80
温度℃
温度对酶活性的影响
三、酶活测定方法及其影响因素
120 100 80 E1 活力 活力% 60 40 20 0
3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7
E2
pH值
pH值对酶活性的影响
三、酶活测定方法及其影响因素
纤维素酶活力测定方法
1、纤维素酶 纤维素酶是催化水解纤维素，生成葡萄糖的酶的总称。 2、纤维素酶组分 β—1，4—内切葡聚糖酶 β—1，4—外切葡聚糖酶 β—葡萄糖甘酶
并催化底物化学反应的部位 。 结合部位 催化部位
一、酶的基础知识
酶的催化特性
1）催化效率高 2）高度的专一性 3）反应条件温和
二、酶制剂技术指标
理化指标：
酶活力、pH值、容重、水分、感观、粒度、酶活保存率
卫生指标：
铅、砷、镉、细菌总数、霉菌总数、大肠菌群、沙门氏菌、 黄曲霉毒素
三、酶活测定方法及其影响因素
三、酶活测定方法及其影响因素
3、活力测定方法 、 滤纸法：滤纸崩溃法、滤纸糖化法 CMC法：CMC粘度法、CMC糖化法（DNS法） 蓝色底物法
三、酶活测定方法及其影响因素
★DNS法测定纤维素酶 法测定纤维素酶
1、酶活定义： 、酶活定义： 在50℃，pH为4.80条件下，每分钟从浓度为5mg/mL的羧甲 基纤维素钠溶液中降解释放1µmol还原糖所需要的酶量为一 个活力单位（IU），还原糖以葡萄糖等量。
医学检验--血清酶基本知识
血清酶（一）血清酶的分类（二）血清酶生理变异及其病理生理机制（三）酶活性和质量测定方法及其评价（四）酶活力测定的影响因素（五）工具酶（六）标本采集要点及酶活性表示法（七）同工酶和亚型测定的临床意义血清酶的分类根据酶的来源及其在血清中发挥催化功能的情况，可将血清酶分为两大类。
1.血浆特异酶在血浆中发挥特定催化作用的酶。
如凝血酶、纤溶酶、胆碱酯酶（CHE）、脂蛋白脂肪酶、铜氧化酶等。
特点：（1）大多在肝内合成；（2）以酶原状态分泌入血，在一定的条件下被激活；（3）有的可以作为肝功能试验的一部分。
血浆特异酶活性的改变，除了反映血液功能外，还反映来源器官的功能。
2.非血浆特异酶在血浆中浓度很低，且无功能，又可分为两种。
（1）分泌酶：指来源于外分泌腺的酶。
如α-淀粉酶（AMY）、前列腺酸性磷酸酶（ACP）、脂肪酶（LPS）、胃蛋白酶、胰蛋白酶、ALP等。
在血液中的浓度和其分泌腺体的功能活动和疾病有关，来源增加或排泄受阻时，血浆中此类酶活性增高。
例如，急性胰腺炎时，血淀粉酶就会升高。
（2）细胞酶：存在于细胞内，参与细胞内新陈代谢的酶。
正常时这些酶存在于组织细胞中，随细胞的不断更新和破坏经常释出极少量进入血液，血浆中酶活性很低。
细胞内、外浓度差异悬殊。
当酶来源的组织细胞发生病变，细胞内酶大量进入血浆，导致血浆酶活性显著增高。
这一类酶临床应用较多，如转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶等，它们在肝病、心脏疾病时都可能出现变化。
血清酶生理变异及其病理生理机制1.生理变异：（1）性别：多数酶无性别差异，CK和GGT都是男性高于女性，因此不能以一个参考值作为判断标准。
（2）年龄：如新生儿的CK和LD活性常为成人的2～3倍，ALP和GGT到老年时可能有轻度升高。
（3）进食：酗酒可引起GGT明显升高。
（4）运动：剧烈运动可引起血清中多种酶升高，如CK、LD、AST等。
（5）妊娠与分娩：妊娠时ALP（因有胎盘ALP同工酶）升高，分娩时可能有CK、CK-BB、LD升高。
消化酶的测定方法
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d-葡萄糖底物uv分光光度法 酶活测定方法
葡萄糖底物UV分光光度法是一种用于测定酶活的常见方法。
本文将介绍葡萄糖底物UV分光光度法的原理、步骤及其在生物化学和生物医学研究中的应用。
一、原理1. 葡萄糖酶（也称葡萄糖氧化酶）能够催化葡萄糖与氧气在水溶液中发生氧化反应，生成葡萄糖内酯和过氧化氢。
这个氧化反应是可以通过UV分光光度法测定的。
2. 葡萄糖底物UV分光光度法的原理是通过测定在酶催化下葡萄糖与氧气反应所产生的过氧化氢的浓度变化来间接测定酶的活性。
二、步骤1. 样品处理：将待测样品中的葡萄糖与底物混合，使底物的浓度在一定范围内，以确保底物的过量不会影响酶的活性测定。
2. 加入酶液：将一定量的葡萄糖酶加入混合液中，并在一定温度下孵育一段时间，使酶与底物发生反应。
3. 反应停止：加入一种化学试剂使反应停止，同时转化过氧化氢形成一种有色产物。
4. 测定吸光度：使用紫外-可见分光光度计测定产生的有色产物的吸光度，根据标准曲线计算出反应体系中的过氧化氢的浓度。
5. 计算酶活：根据过氧化氢的浓度变化和所加的酶的蛋白质含量等数据，计算出酶的活性。
三、应用1. 生物化学研究中的应用：葡萄糖底物UV分光光度法广泛应用于酶动力学研究中，可以用来测定各种酶的活性及其对底物的亲和力。
2. 生物医学研究中的应用：在生物医学研究中，葡萄糖底物UV分光光度法可以用来研究酶与疾病的关联性，例如糖尿病患者血清中的葡萄糖酶活性与血糖水平的关系。
结论葡萄糖底物UV分光光度法是一种简单、敏感、精确的酶活测定方法，具有广泛的应用前景和重要的科研意义。
通过对葡萄糖底物UV分光光度法的原理、步骤及应用进行了解和掌握，可以更好地指导实验操作并推动生物化学和生物医学领域的研究进展。
近年来，随着生物技术的不断发展，葡萄糖底物UV分光光度法在生物医学研究中的应用越发广泛。
除了用于酶动力学研究和疾病相关性分析外，葡萄糖底物UV分光光度法还在其他领域展现出了巨大的潜力。
1. 新药研发在新药研发过程中，葡萄糖底物UV分光光度法被用于筛选潜在的药物候选化合物。
化学合成药物的生物活性评价
化学合成药物的生物活性评价化学合成药物的生物活性评价是药物研究和开发的重要环节之一，旨在评估药物分子在活体内的生物效应及其对特定靶点的亲和力。
准确的生物活性评价对于药物疗效的预测和药物设计具有至关重要的意义。
本文将介绍化学合成药物的生物活性评价的方法和重要性。
一、体外评价方法1. 细胞毒性评价细胞毒性评价主要用于评估化合物对细胞的杀伤效应。
常用的细胞毒性评价方法包括MTT法、SRB法和流式细胞仪分析法。
通过测量细胞的存活率、增殖能力和凋亡等指标，可以初步判断化合物的毒性程度。
2. 酶抑制活性评价酶抑制活性评价用于评估化合物对靶酶的抑制效果，通过测定酶活性的变化来评估化合物的抑制能力。
常用的酶抑制活性评价方法包括酶活性测定法、酶动力学研究和荧光共振能量转移（FRET）技术等。
3. 受体结合活性评价受体结合活性评价用于评估化合物与特定受体之间的相互作用。
常用的受体结合活性评价方法包括放射性配体结合法、荧光共振能量转移技术和表面等离子共振技术等。
通过测定化合物与受体的结合亲和力，可以初步判断其生物活性。
二、体内评价方法1. 动物实验动物实验是评估新药物安全性和疗效的重要手段之一。
常用的动物模型包括小鼠、大鼠、猪和非人灵长类动物等。
通过给动物口服或注射药物，观察药物在体内的药代动力学变化和生物效应，评估药物的药效和毒性。
2. 组织培养组织培养是一种体外模拟体内环境的评价方法，常用于评估药物对特定组织或细胞的作用。
通过培养组织或细胞，并观察药物对其生长、增殖、分化和凋亡等方面的影响，可以初步评估药物的生物活性。
三、化学信息学在生物活性评价中的应用化学信息学是一门综合应用化学、生物学和计算机科学的学科，常用于药物研究中的化合物筛选和生物活性评价。
通过分子对接、药效团分析和定量构效关系等方法，可以预测化合物与靶蛋白的相互作用，评估化合物的亲和力和生物活性，加速药物研发进程。
总结化学合成药物的生物活性评价是药物研究和开发中不可或缺的环节。
保健食品中酶制剂的使用与效果评价考核试卷
C.酶制剂的活性
D.酶制剂的价格
（以下为试卷其他部分，因题目要求仅输出第一部分，故省略。）
二、多选题（本题共20小题，每小题1.5分，共30分，在每小题给出的四个选项中，至少有一项是符合题目要求的）
1.酶制剂在保健食品中的作用包括以下哪些？（）
A.促进消化
B.提高营养价值
C.改善食品质地
A.蛋白酶
B.纤维素酶
C.脂肪酶
D.淀粉酶
2.酶制剂在保健食品中的作用主要是？（）
A.增加食品口感
B.提高食品营养价值
C.促进食品消化吸收
D.延长食品保质期
3.下列哪种情况酶制剂活性最高？（）
A.温度过高
B.温度过低
C.酸性过强
D.最适温度和pH值
4.以下哪种酶制剂在乳制品中使用较多？（）
A.蛋白酶
标准答案
一、单项选择题
1. B
2. C
3. D
4. A
5. C
6. C
7. D
8. D
9. C
10. D
11. A
12. D
13. A
14. C
15. D
16. C
17. D
18. C
19. D
20. C
二、多选题
1. ABC
2. ABCD
3. ABC
4. ABCD
5. ACD
6. ABC
7. ABCD
7.以下哪个因素会影响酶制剂的活性？（）
A.食品添加剂
B.食品包装材料
C.食品加工工艺
D.食品保存条件
8.下列哪种食品中不宜使用酶制剂？（）
A.谷类食品
B.肉类食品
应用参考测量程序对酶浓度赋值过程及不确定度评定指南
所涉及常数引起的不确定度 统计学处理 实验室测量精密度
最终显色物质的摩尔消光系数（ ）的不确定度影响测量结果。 测量数据统计处理中的数值修约、异常值（离群值）取舍影响 测量结果。
酶学测量其测量条件比较严格，反应过程中的温度控制、溶液 pH值的下降或上升、样本中分析物特性值的不稳定性直接影响 测量结果，因此，测量精密度是影响测量结果可靠程度的主要 因素。
可忽略的不确定度来源
下列不确定度来源在此文件中予以忽略： a)在酶学测量中，考虑到底物浓度过量，同时称量使 用万分之一天平进行，定容使用至少10mL的容量瓶进 行，质量和体积引起的不确定度非常小，因此，溶液 配制过程中引起的不确定度在此予以忽略。 b) 测量过程中，由于试剂提前加热到37℃且反应在 密闭的环境中进行，试剂蒸发引起的不确定度在此予 以忽略。
文评定方法中不包括该类不确定度的评定。
定义的不完整或测量方法的局限性
对于酶学测量，由于定义的不完整或测量方法的局限 性引起的不确定度主要是分析物的结构不一，绝大多 数的酶存在同工酶，不同的同工酶和反应液具有不同 的反应性。
样本基质不同
当评定不同于人血清基质样本的不确定度时，应考虑 样本的基质效应。
gbt150003标准样品工作则3标准样品的一般原则和统计方法yyt0638体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质中酶催化浓度赋值的计量学溯源性iso18153wst4032012临床生物化学检验常规项目分析质量指标赋值测量不确定度评定测量结果及其不确定度评定结果的报告限值在其他文献或活动中给出的信息酶学参考测量程序信息表ldh赋值过程及不确定度评定方法举例使用灵敏系数进行ldh测量不确定评定举例建立溯源性的途径
第24章 连续监测法测定酶活性浓度
第二十四章 连续监测法测定酶活性浓度
（二）常用方法
GPDA催化底物甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺水解，生成甘氨 酰脯氨酸和黄色的对硝基苯胺，后者在405nm波长下吸光度 的升高，吸光度升高速率与GPDA活性成正比。
甘氨酰脯氨酰对硝基苯 胺 GPDA 甘氨酰脯氨酸 对硝基苯胺
第28页
L-γ-谷氨酰-3-羧 基-4-硝基苯胺为
底物
IFCC推荐方 法
第12页
第二十四章 连续监测法测定酶活性浓度
（二）IFCC推荐的测定方法
以色素原GCNA为底物，甘氨酰甘氨酸为受体，GGT催化γ谷氨酰基团从GCNA转移至甘氨酰甘氨酸上，并游离出2-硝基 -5-氨基苯甲酸。后者的生成量与样品中的GGT活性成正比关 系，故测定405nm处的吸光度增量可计算出GGT的活性。
③以L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺（GCNA）为底物，GGT催化生成 的对硝基苯胺在碱性环境下呈黄色。第11页第来自十四章 连续监测法测定酶活性浓度
（一）测定方法概述
γ-L-谷氨酰对硝 基苯胺为底物
L-γ-谷氨酰-α（β） -萘胺为底物
方法灵敏度低， 底物溶解度差， 受溶血干扰较 大
可以连续监 测，有较好 的灵敏度和 准确性，但 底物溶解度 差
布氏法： ALP 作用于β-甘油磷酸钠产生磷酸根，定量磷 测定酶活性。少用 金-阿法：以磷酸苯二钠为底物， 经ALP作用生成酚，定 量酚测定活性。少用 皮-劳法：以4-硝基酚磷酸钠盐为底物，水解生成对硝基 酚，碱性条件下呈黄色，连续监测。
第8页
第二十四章 连续监测法测定酶活性浓度
（二）IFCC推荐的测定方法
GCNA 双甘氨酸 pGHG7T.72 硝基 5 氨基苯甲酸 L 谷氨酰 甘氨酰甘氨酸
酶活测定 原理
酶活测定原理
酶活测定是一种常用的实验方法，用于测定酶在一定条件下的活性。
酶活性是指酶在特定条件下催化底物转化的速率，是衡量酶功能的重要指标。
酶活测定的原理基于酶与其底物之间的专一性反应。
当酶与底物结合形成酶-底物复合物时，酶会使底物发生化学反应，产生产物。
产物的生成量与酶活性成正比，可以作为测定酶活性的指标。
常见的酶活测定方法包括光度法、荧光法、融合法、电化学法等。
其中，光度法是最常用的方法之一。
该方法通过测量底物的某种性质的变化来间接测定酶活性。
例如，可以根据底物的吸光度变化来测定酶活性。
在酶活测定实验中，常使用专一底物来与特定的酶反应，以增强实验的专一性和敏感性。
同时，为了控制实验条件，通常需要对温度、pH值等参数进行调整，以确保实验结果的准确性和可比性。
酶活测定在许多生物学和生物化学研究中起到了重要的作用。
通过测定酶的活性，可以评估酶的功能状态、酶活性的变化以及酶与底物之间的相互作用。
这对于深入理解生物过程、研究酶的功能以及开发新药物等方面具有重要意义。
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1.酶活性测定方法（1）按反应时间分类法：20世纪50年代以前大都使用固定时间法。
这种方法是以酶催化反应的平均速度来计算酶的活性，现多已不用。
50年代中期开始采用连续监测法。
这种方法用自动生化分析仪上完成，可以测酶反应的初速度，其结果远比固定时间法准确，在高浓度标本尤为明显，但本法也受到反应时间，反应温度，试剂等的影响，应加以注意。
1）定时法：通过测定酶反应开始后某一时间段内（t1到t2）产物或底物浓度的总变化量来求取酶反应初速度的方法，称为两点法，其中t1往往取反应开始的时间。
在酶反应一定时间后，往往通过加入强酸、强碱、蛋白沉淀剂等，使反应完全停止，所以也叫中止反应法。
2）连续监测法：又称为动力学法或速率法、连续反应法。
在酶反应过程中，用仪器监测某一反应产物或底物浓度随时间的变化所发生的改变，通过计算求出酶反应初速度。
3）平衡法：通过测定酶反应开始至反应达到平衡时产物或底物浓度总变化量来求出酶活力的方法，又叫终点法。
（2）按监测方法分类法：可分为①分光光度法；②旋光法；
③荧光法；④电化学方法；⑤化学反应法；⑥核素测定法；⑦量热法。
2.酶质量测定法随着免疫技术的发展，出现了利用酶的抗原性，通过抗原、抗体反应来直接测定酶的质量，直接用质量单位ng／ml、μg／L来表示酶含量的高低。
免疫学方法与测定活性方法相比，其优点是灵敏度和特异性高，不受体液中其他物质的影响，特别是抑制剂和激活剂的影响，当血液中有酶抑制剂存在，或因基因缺陷，合成了无活性的酶蛋白时，可以测出灭活的酶蛋白量，有利于疾病诊断和科学研究。
如肌酸激酶同酶MB（CKMB）质量测定较活性测定对疾病的诊断价值高。