应用SSR技术进行白菜品种纯度鉴定的研究

Ｇ Ｔ Ｇ Ｇ Ｇ Ｔ Ｇ Ｇ Ｇ Ａ一 ’ 下 游 ５ 一 Ｇ Ｃ ＧＧ Ｔ Ｇ ＣＧ Ｇ Ａ Ｔ ３． ’ＣＴ ．
报道 。Ｓ Ｒ技术 ， Ｐ Ｒ为基础 ， 有信 息含量 高 、 Ｓ 以 Ｃ 具 呈
共 显性 遗传 、 易于 分析 等特 点 ， 用 来高 效 准确 地 检 可 测 生物体 中的遗传变 异 。 本研究 旨在 以 Ｓ Ｒ分子标 记 Ｓ
ｂ ｔ ｅ ｎ ｈ ｃ ｍｂ ｎ ｔ ｎ ｆ ｈ ｂ ｉ ｓ ａ ｄ ｒ ａ ｔ ｎ ｙ ｔ ｍ ｗ ｓ ｓａ ｌ ｈ ｄ ｈ ｃ ｗａ ｓ ｉ ｂ ｅ ｏ Ｃ ｉｅ ｅ ａ ｂ ｇ ｅ ｗ ｅ ｔ ｅ ｏ ｉａ ｉ ｏ ｙ ｒ ， ｎ ａ ｅ ｃｉ ｓ ｓｅ ｏ ｄ ｏ ａ ｅ ｔ ｂ ｉ ｅ ｗ ｉｈ ｓ ｓ ｕｔ ｌ ａ ｆｒ ｈ ｎ ｓ Ｃ ｂ ａ ｅ
采 用经典 Ｓ Ｓ法提取 了 ｌ Ｄ ３个 白菜试 验样 品 （ 父母本 及 杂交 种 ） Ｄ Ａ． 的 Ｎ 同时 利用 本研 究 中摸 索 出 的快 速 方 法 提 取 了 白菜 单 粒 干 种 子 、单 株 幼 苗 和 叶 片 的
Ｄ Ａ． Ｎ 采用 １ ％琼脂 糖 凝胶 电泳 检 测 Ｄ Ａ提 取质 量 ． ５ Ｎ
的 白菜基 因组 Ｄ Ａ质量 Ｓ Ｒ扩 增产物跑 ６０ Ｎ Ｓ ． ％变性
聚丙 烯酰胺 凝胶 电泳 。 电泳 ９ ２ ｉ； 预 ０ Ｗ，０ ｍ ｎ 电泳 ９ ０
和北 京新 ３号 ） 为 目前北京 市 白菜 生产 上大 面积 推 均 广使用 的杂交种 ． 代表 了 白菜早 熟 、 晚熟 栽培类 型 。 样 品材料 为 白菜种 子
收稿 Ｅ 期 ： ２ １ — ３ ０ ｔ ００ ０—３
北京农业２１年４ ０ ０ 月下旬刊 【 羽
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栽 培育种
鉴定 等方 面 已成 为更加理 想 的方法 。国内宋顺 华【 ３ ］ 等
白菜是 十字花 科 芸薹属 １ 生草 本植 物 栽 培历 年 史悠 久 ， 域 广泛 ． 地 深受 人 们 的喜 爱 ． 在北 方 俗 称 “ 当
家 菜 ” 同 时 也 是 北 京 市 指 定 的 主 要 农 作 物 之 一 ． 京 在
责任 和义 务 。它对 于提 高种 子 管理 的执 法力 度 ． 厉 严
ｐ ｕ ａ ｉａｉ ． ｏｐ ｌ ｒｚ ｔｏｎ
Ｋ ｙ ｒｓ Ｃ ｉ ｓ ａｂｇ ； ｈｂｉ； Ｄ Ａ ｅｔ ｃｉ ； Ｓ Ｒ ｐ ｍ ｒ ｐｒｙ ｉ ｎ ｆ ａｏ ｅ ｗｏｄ ｈｎ ｅＣ ｂ ａｅ ｅ ｙｒ ｄ Ｎ ｘ ａｔ ｎ Ｓ ｒ ｅ ； ｕ ｔ ｄ ｔ ｅｔ ｎ ｒ ｏ ｉ ｉ ｅｉ ｉ ｉ
为 技术 手段 ． 探索适 合室 内白菜种 子纯度 的快速 鉴定
方法 。
Ｇ Ｔ Ｇ Ｔ Ｃ Ｔ Ａ Ｃ Ｔ Ｇ 一 ’ Ｐｉ ｒ Ｉ Ａ Ｃ Ａ Ｔ Ａ Ａ Ｃ Ｇ Ａ Ａ ３ 。 ｒ ２弓 物序列 ： ｍｅ
上游 ５ 一 Ｔ Ｃ Ａ Ｃ Ｆ Ｇ Ｇ Ｃ Ｃ Ａ Ａ 一 ’ ’ Ａ Ａ Ａ Ｔ Ｔ Ｃ Ｔ Ａ Ｔ Ｔ Ｃ Ｇ ３ ．下游
ｗ， 。氢 氧化 钠一 酸银染 色 ，２ ｌｈ 硝 ７ ０万像 素数 码相 机
拍照 ． 获得杂 交种和 亲本 的指 纹 图谱 。
１ 研 究方法 ． ２
１ ． 白菜单粒 干种 子及 单株 幼苗 ＤＮＡ 快速提 取方 ．１ ２
２ 试 验 结 果 与分 析
２ 白菜样品基 因组 Ｄ Ａ的提取 ． １ Ｎ 利用 白菜叶片 。
物 的 产 量 和 产 品 品 质 在 白菜 种 子 生 产 和 销 售 过 程
植 鉴 定 ． 这 一方 法 易 受环 境 的影 响 ． 问 长且 费 工 但 时
占地 近 年 来 ． 子 牛 化 鉴 定 技 术 的 应 用 对 种 子 纯 度 种 检 验 的 准 确 、 速 和 实 用 性 起 了 很 大 推 动 作 用 。 国 内 快
ｖ ｒｅｉｓ ａ ｔｅ ｐｕ ｉｙ ｓｎｇ ＳＲ ｍ ｏｅ ｕ ａ ｍａ ｋｅ ． Ｔｈ ｒ ｓ ｌｓ ｎｄ ｃ ｔｄ ｈａ ｔ ｅ ｅ ｅ ｉｎ ｉ ｒｔ ｕ ｉ Ｓ ｌｃ ｌｒ ｒ ｒ ｅ ｅ ｕ ｔ ｉ ｉ ａｅ ｔ ｔ ｈ ｄ ｔｃｔ ｍｅｈｏ ｃ ｕ ｄ ｏ ｔ ｄ ｏｒｏ ｏ ｍ ｉ ｅ ｔｆｃ ｔｏ ｏ Ｃｈｉ ｓ Ｃａ ｂａ ｅ ｄ ｎ ｉ ａｉ ｎ ｆ ｉ ｎｅ ｅ ｂ ｇ ｈｙ ｒｄ ｕｒｔ ｂ ｐ ｉｙ， ａ ｄ ｏ ｕ ｅ ａ ｉｒ ｂ ｓ ｆ ｒ ｔ ｎ ｈ ｆ ｕｒ ａ ｐｌｃ ｔｏ ａ ｉ ｎ ｆ ｎｄ ｄ ｆ ｍ ａ ｅ ｏ ｉ ｉ ｔ ｅ ｕｔ ｅ ｐ ｉ ａｉｎ ｎｄ
Ａｂ ｔ ｃ Ｕ ｉｇ Ｃｈ ｎ ｓ Ｃ ｂ ａ ｅ ｙ ｒ ｓ ｎ ｔ ｅ ｒ ａ ｅ ｔ ａ ｅ ｐ ｒｍｅ ｔ ｌ ｓｒ ｔ ａ ｓｎ ５ ｉ ｅ ｅ ａ ｂ ｇ ｈ ｂ ｉ ａ ｄ ｈ ｉ ｐ ｒ ｎ ｓ ｓ ｘ ｅ ｄ ｉ ｎ ａ ｍａｅ ａ ， ａ ｔ ｒ ｌ ｍｅ ｈ ｄ ｆ ａ ｉ ＤＮＡ ｉ ｔ ｏ ｏ ｒｐ ｄ
匀 。离心管 中加入 １滴石蜡 油 ， 放入 Ｐ Ｒ仪 中 ． 行 Ｃ 执 ９ ℃加 热 １ ｉ ．℃ｌ ｎ程序一 个循环 ５ ０ ｍ ｎ ４ ０ ｍｉ 循环结 束
１ ％琼脂糖 凝胶 电泳检 测 Ｄ Ａ提 取质量 的结果 ． ５ Ｎ 显示 ：利 用 白菜 叶片 ．采 用经典 Ｓ Ｓ法 提取 的 １ Ｄ ３个 白菜 基 因组 Ｄ Ａ． １条 清 晰 完 整 的 Ｄ Ａ 带 ， 有 Ｎ 为 Ｎ 没
Ｒｅ ｅ ｒ ｈ ｎ Ｃｈｎ ｓ ｓ ａ ｃ ｏ ｉｅ ｅ Ｃａ ｂ ｇ ｒ ｔ ｓ Ｐｕ ｉ Ｉｅ ｔ ｉａ ｉｎ ｂ ａ ｅ Ｖａ ｉ ｉ ｒｙ ｄ ｎ ｉｃ ｔ Ｕｓｎ ｅｅ ｔ ｆ ｏ ｉｇ ＳＳＲ Ｍａ ｋ ｒ ｒｅ
Ｔｉｎ Ｌ ｉ Ｐｅ ｇ ａ ｅ ｎ Ｒｕｄ Ｗ ａ ｇ ｉｉ ｎ Ｈｕ Ｊａ Ｘｉａ ｉ ｉ ｈ ｉ
栽培 育种
应用 Ｓ Ｒ 技术进 行 白菜 品种纯 度鉴定的研 究 Ｓ
田 雷 彭瑞 迪 王 辉 贾希 海
（北 京 市 种 子 管 理 站 ， 北 京 １ ０ ８ ） ００８
摘 要 以 ５个 白 菜 杂 交种 和 ８个 亲本 为试 验 材 料 。 用 白菜 单 粒 干 种 子 Ｄ Ａ 快 速 提 取 方 法 ． 利 Ｎ 筛选 出能 够 区 分 ５个 杂 交种 与 双 亲 ， 具 有 互 补 带 型 的 Ｓ Ｒ 引 物 ， 立 适 于 Ｓ Ｒ 分 子 标记 检 测 白 菜种 子 品 种 纯度 的反 应 体 系 试 验 结 果证 明这 并 Ｓ 建 Ｓ
种 子案 件 时有发 生 ． 给农 业生 产 造成 了不可 弥补 的损
失 因此 ， 白菜杂 交种 子纯 度进 行快 速 、 确 、 对 准 有效 地 鉴定 显得 十分 必要 ． 是种 子 管理 部 门义不 容 辞 的 也
作者 简 介 ： Ｅ￣ （９ ５ ）高级 农 艺 师 ， Ｈ －１ ６ 一， 主要 从 事 种 子 检 验 工 作 。
套检 测技 术体 系可 用于 白菜 杂 交种 品种 纯度 室 内快 速 鉴 定 ．从 而 为 Ｓ Ｒ 分子 标 记 技 术 在 白 菜种 子 纯 度 鉴 定 中的 应 用 和 Ｓ
推 广 打 下 了 坚 实 的 基 础
关键 词 白 菜 ； 杂 交种 ； ＤＮＡ提 取 ； Ｓ Ｒ 引 物 ： 纯 度 鉴 定 Ｓ 中 图分 类 号 Ｓ ３． ３ ９５ 文献 标 志 码 Ｂ
人 利用 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ技术 ．从 ５ ０个 随机 引 物 中筛选 出 了 ３ 个 引物 ．通 过在北 京 ５ ７号和北 京 １ ６号及 其各 自亲 ０ 本 中检 测到有 别 于双亲 的特殊标 记 ． 而用 于这 ２ 白 个 菜杂交 种品种纯 度的检 测。 到 目前 为止 国内还 未见 但
（ 图 ｌ ２） 见 ～ 。
法
将 白菜单粒 干种 子夹在硫 酸纸 （ 量用 ） ， 小 称 中 用
锤 子砸 碎 ， 放入 ２ ０ Ｌ离心 管 中 ， ０ 每管 加人 １０ ｔ ０ ｘ Ｌ
Ｄ Ａ提取 液 （． Ｍ Ｔｉ Ｈ Ｌ ｐ ．，．％Ｓ Ｓ １ Ｎ ０１ ｒ — Ｃ Ｈ ７ １ ｓ ６ ０ Ｄ ，． ０ Ｍ Ｋ ｃ ． Ｍ Ｎ Ｃ ， 同） 单 株幼 苗 加入 ２ ０ Ｌ Ａ ，１ ａ Ｌ 下 ０ ； ０ Ｄ Ａ提 取 液及 少 量 石英 砂 ．用 尖 头玻 璃棒 碾 碎 ． Ｎ 混
有利 用 Ｓ Ｒ分 子标记 技术 检 测 白菜 品种 纯度 的研 究 Ｓ
环 后 退 火 温 度 降 至 ５ ｏ ７ ￣延 伸 １ ｒｉ；接 着 用 ０Ｃ，２Ｃ ｎ ａ ５ ￣退 火做 ３ ～ ０个 循环 ， ０Ｃ ５４ 变性 与延 伸 的温度 和时 间 同上 ．最后 ７ ｑ延 伸 ７ ｍｉ。Ｐ Ｒ扩增 在 ＭＹ Ｃ ｃ ｒ ２Ｃ ｎ Ｃ ｙｌ ｅ 扩增仪 上进行 １ ． 引物 引物 信息 来 源 于文献 ［ 及 ｈｔ ：ｗ ｗ ．３ ２ ４ ｔ ／ｗ ． ｐ／ ｕ ｃｏ ．ｅ 网站下 载 ．部分 引物 由北京 市农林 科 学 院 ｋ ｒｐｎｔ 生 物技 术 中心 马荣 才老 师提供 ． 上海英 俊 生物技 术有 限公 司进 行引 物 合成 。Ｐｉ ｅｌ引物 序列 ：上 游 ５ 一 ｒ ｒ ｍ ’
后 。 离心管 从 Ｐ Ｒ仪 中取 出 ． 将 Ｃ 放入 离心机 中 １ ０ ２００
ｒ ｉ 心 ５ ｍｎ ／ ｎ离 ｍ ｉ，取上 清 液 ｌ Ｌ ０ ，加 入 一 个新 的 ２ ０ Ｌ离心 管 中 ，里 面预 先放 人 １０ Ｌ １ Ｔ 混 ０ ０ ￣ Ｅ，
５’ ＡＧＣＡＴＣＡＡＣＧＣＣＡＡＣｒ ＡＴＣＣ一 。 一 ｎ ３’
１ 材 料 和方 法
１ 植物材料 ． １ 本实验中所用到的 ５ 白菜杂交种 个
（ 京小 杂 ５ 、 北 ６ 北京 小杂 ６ 、 京新 １ 、 １北 号 北京新 ２号
１ ． 电泳检 测 用 １ ％琼 脂糖 凝 胶 电泳检 测 提取 ．４ ２ ． ５