几种抗氧化剂含量的测定

几种抗氧化剂含量的测定

一、实验目的

1.掌握抗坏血酸（AsA）含量的测定。

二、实验原理

抗坏血酸（AsA）测定的原理：

（1）AsA生理生化作用

抗坏血酸是植物细胞重要的抗氧化剂，通过清除体内的自由基和活性氧（H2O2）等，使机体免受氧化损伤。

（2）AsA含量的测定方法

a、2, 6-二氯靛酚滴定法

b、2, 4-二硝基苯肼分光光度法

c、荧光分光光度法

d、近红外分光光度法

e、电位滴定法

f、钼蓝比色法

g、2,2-联吡啶分光光度法

（3）二联吡啶法测定AsA含量的原理

三、实验材料和主要试剂

实验材料：菠菜叶片

实验试剂：5%TCA溶液、150mmol/L NaH2PO4(PH7.4)溶液、10%TCA溶液、44% H3PO4、4% 2, 2-二联吡啶；3% FeCl3。

四、实验步骤

（一）AsA含量的测定

1、标准曲线的制作

配制浓度为1mmol/L的AsA标准母液，分别配制成0、0.1、0.2 、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mmol/L 的AsA标准液。分别取0.2ml AsA标准液，分别加入0.2ml NaH2PO4（PH7.4）溶液、0.2ml H2O，混匀，30s后，分别加入0.4ml 10% TCA溶液、0.4ml H3PO4溶液、0.4ml 2, 2-二联吡啶溶液，0.2ml 3%FeCl3溶液，37℃，60min，测A525nm。以AsA浓度为横坐标，

以OD值为纵坐标，制作标准曲线。

2、提取

称2.5g菠菜叶片1份，将样品剪碎加入10ml 5% TCA, 研磨，15000xg离心10min，上清液定容至25ml。

3、测定

分别取0.2ml上述制备的上清液和去离子水，分别加入0.2ml NaH2PO4（PH7.4）溶液、0.2ml H2O，混匀，30s后，分别加入0.4ml 10% TCA溶液、0.4ml H3PO4溶液、0.4ml 2, 2-二联吡啶溶液，0.2ml 3%FeCl3溶液，37 ℃，60min，在525nm下测定OD值。

根据标准曲线计算样品中AsA的含量。

五、实验结果

抗氧化剂含量（ug/gFW）＝抗氧化剂浓度（ug/ml）*提取液体积（ml）/样品的重量（g）抗氧化剂浓度（ug/ml）=（3.214*17.613+0.0012）/1.3095=43.23ug/ml

抗氧化剂含量（ug/gFW）43.23*25ml/2.500g=432.3（ug/gFW）

六、分析和讨论

1.抗氧化剂由植物体合成，待植物被破坏易被氧化，在实验中需迅速操作，防止抗氧化剂

被氧化。

2.还原型谷胱甘肽是植物细胞内另一种重要的抗氧化剂。它含有活性的巯基，极易被氧化。

GSH可以预知不饱和脂肪酸生物膜组分及其他敏感部位的氧化分解，防止膜脂过氧化，

从而保持细胞膜系统的完整性，延缓细胞的衰老和增强植物抗逆性。

3.活性氧对许多生物功能分子有破坏作用，包括引起膜的过氧化作用。其中，植物体中也

有防御系统，降低或消除活性氧对膜脂的攻击能力，即为抗氧化剂。这些抗氧化剂是天然的非酶自由基清除剂。