细胞工程

名解：
1.细胞工程(Cell Engineering)是指应用细胞生物学和分子生物学的方法，通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或一定细胞产品的一门综合性科学技术。

2.细胞融合又称细胞杂交，是指两个或两个以上的细胞融合形成一个细胞的过程。

3.干细胞（stem cell）是动物体内具有分化潜能，并能自我更新的细胞，分为胚胎干细胞和组织干细胞。

4.胚胎干细胞来自囊胚期的细胞团，属于全能干细胞，每个细胞可以发育成为完整的个体。

5.组织干细胞存在于成体组织中，属单能或多能干细胞，可以定向分化为一种或几种不同的组织。

全能干细胞: 具有形成完整个体的分化潜能。

包括：胚胎干细胞（ES细胞）生殖干细胞（EG 细胞）
多能干细胞: 具有分化出多种细胞和组织的潜能，但却失去了发育成完整个体的能力。

专能干细胞: 它是由多能干细胞进一步分化而成的。

专能干细胞只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化。

成体干细胞:成体组织内具有更新及分化能力的未成熟细胞. 如造血干细胞, 神经干细胞, 皮肤干细胞等
胚胎干细胞:又称ES细胞, 是一种全能干细胞,是指从胚胎内细胞团或原始生殖细胞筛选分离出的具有多能性或全能性的细胞。

6.胚胎培养是指使胚或具胚器官在离体无菌条件下发育成幼苗的技术。

7.胚培养：在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离出来，置于培养基上进行离体培养的方法
8、悬浮培养：将单个游离细胞或小细胞团悬浮在液体培养基中进行培养增殖的技术。

分批培养：在一个培养过程中，一次性加入培养液，在一定条件下培养一段时间后，一次性放出培养液的培养方式
连续培养：在培养过程中，不断向反应器中加入新鲜培养基，同时以相同的流量从系统中取出培养液，从而维持培养系统内在细胞密度、产物浓度以及物理状态相对平衡，这种方式即称为连续培养。

半连续培养：这是一种介于成批培养和连续培养之间的培养方式，其基本方法是在完成上述成批培养的一个周期后，只从反应器中取出大部分细胞悬液，保留小部分细胞悬液作为下一培养周期的种子细胞，然后加入新鲜培养基进行培养。

9、最低有效密度：在悬浮细胞培养中，使悬浮培养细胞能够增殖的最少接种量称为最低有效密度或者临界的起始密度。

10、细胞同步化是指同一悬浮培养体系的所有细胞都同时通过细胞周期的某一特定时期。

11、原生质体：指除去细胞壁的细胞或是说一个被质膜所包围的裸露细胞
亚原生质体：在原生质体分离过程中，有时会引起细胞内含物的断裂而形成一些较小的原生质体就叫做亚原生质体。

它可以具有细胞核或没有细胞核。

核质体：由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的小原生质体。

也称为微小原生质体。

12、试管动物：将供体的精子和卵子在体外受精、体外培养胚胎，然后将发育到一定程度的胚胎移植入受体，可以得到各种动物。

由于体外受精一般都在试管内进行，所以称为“试管动物”。

也有称为“体外受精动物”。

13、克隆动物：遗传上完全相同的分子、细胞或来自同一祖先的生物个体的无性繁殖群体。

关键技术——核移植。

简答
1、悬浮培养细胞数目的增殖变化
答：滞后期（延迟期）、对数生长期、直线生长期、缓慢期、静止期
A、滞后期的长短主要取决于在继代时原种培养细胞所处的生长期和转入细胞数量的多少。

B、加入条件培养基可以缩短滞后期。

条件培养基：曾培养过一段时间组织或细胞的培养基。

C、缩短两次继代时间间隔，则可使悬浮培养的细胞一直保持对数生长期。

D、如果使处在静止期的细胞悬浮液保持时间太长，则会引起细胞的大量死亡和解体
2、人工种子体细胞胚标准?
答：所需体细胞胚的标准：其一，形态正常，具有完整的胚结构；其二，与母体植物的基因型基本相同；其三，具有较好的成熟性，能耐一定程度的脱水。

3、种质保存的方法
按保存的地理位置分为：
•原地保存：是在原来的生态环境条件下, 就地保存, 自我繁殖品种资源。

一般野生品种资源采用这种方式保存。

•异地保存：是将种子或植株保存于该品种资源原产地以外的地区。

这种保存可采用植物园、种质园、种质库等形式或采用试管保存形式。

按照保存的具体方法, 可分为：
•种植保存：每隔一定时间播种一次，种植条件尽可能与原产地相似，避免或减少天然杂交和人为混杂，播种和收获时取样要有代表性，来自自然条件悬殊地区的品种资源, 可分别在不同生态地点异地种植保存。

•贮藏保存：贮藏保存就是用控制贮藏条件( 主要是温度和湿度) 的方法, 来保持品种资源种子的生活力。

技术关键是低温和干燥。

贮藏保存种质资源采用种质库, 种质库分三种：长期库、中期库和短期库
•试管保存：常温下试管保存------可利用试管苗继代培养保存，但需要经常更换培养基。

常温抑制生长保存-------在培养基中添加生长抑制剂，提高培养基渗透压也可以延缓生长。

中低温调控生长保存----在试管苗继代培养过程，适当降低温度，也能延缓生长，延长继代时间。

常温抑制生长保存与中低温调控生长保存相结合-------培养基中添加生长抑制剂或提高渗透压，培养温度降低，使继代时间延长。

•基因文库保存：利用DNA重组技术，将种质材料的总DNA或染色体所有片断随机连接到载体上，然后转移到寄主细胞中，通过细胞增殖，构成各个DNA片断的克隆系。

4、贴附型细胞的种类：
答：①成纤维细胞型细胞，胞体呈梭形，核卵圆形，胞质向外伸出２～３个长短不齐的突起。

细胞在生长时呈放射状火焰状或旋涡状走行
②上皮型细胞，呈扁平不规则多角形，核圆形。

细胞彼此紧密相连成单层膜，生长时呈膜状移动
③游走型细胞，一般不连接成片，细胞质经常伸出伪足或突起，呈活跃的游走或变形运动
④多形型细胞，难以确定规律和稳定的形态的细胞，可归入多形细胞型。

5、贴壁培养技术优点
答:（1）容易更换培养基。

（2）容易采用灌注培养技术。

（3）更有利于表达同一产品。

（4）方便调节培养液和细胞的比例。

（5）易于观察细胞生长情况。

6、灭菌的方法。

答：（1）干热灭菌----适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。

（2）湿热灭菌----适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。

（3）过滤灭菌-----溶液
（4）射线灭菌-----适合实验室空气、操作台等
（5）火焰灭菌-----适用于接种器皿的灭菌。

（6）消毒剂----------长期不用的培养室或接种室要进行熏蒸。

方法：甲醛、高锰酸钾熏蒸。

7、无菌操作流程
答：①、实验器具和材料的准备
②、紫外灯杀菌超净工作台
③、关紫外灯、打开风机
④、酒精拭擦台面并消毒双手
⑤、消毒并清洗外植体
⑥、接种
⑦、进行下一轮操作
8、优秀悬浮培养体系：
答：一个成功的悬浮细胞培养体系必须满足三个条件
•分散性良好，细胞团较小
•大小均一性好
•细胞生长迅速。