超速离心-高效液相色谱测定血清高密度脂蛋白和低密度脂蛋白胆固(精)
临床化学脂代谢及高脂蛋白血症练习题
临床化学脂代谢及高脂蛋白血症练习题一、A11、以下叙述错误的是A、不同组织的LDL受体活性差别很大B、VLDL受体在肝内大量存在C、VLDL受体与VLDL具有较高的亲和性D、LDL受体在肝内大量存在E、VLDL受体在脂肪细胞中多见2、血浆置于4℃冷藏10h，可见上层为奶油样，下层浑浊的标本是A、Ⅱa型B、Ⅱb型C、Ⅲ型D、Ⅳ型E、Ⅴ型3、血清电泳图谱上出现深β带和深前β带的高脂血症是A、Ⅰ型B、Ⅱa型C、Ⅱb型D、Ⅲ型E、Ⅴ型4、血清电泳图谱上出现宽β的高脂血症为A、Ⅰ型B、Ⅱa型C、Ⅱb型D、Ⅲ型E、Ⅴ型5、Ⅰ型高脂蛋白血症不表现为A、奶油样表层，下层透明B、可能是由于LPL活性减低所致C、CM明显增高D、电泳时出现深βE、血清ApoB-48升高6、以下叙述错误的是A、通常测定LDL中胆固醇的含量来表示LDL的水平B、常用聚乙烯硫酸盐法测定HDL-CC、当TG水平大于4.52mmol/L时就不能采用Friedewald公式计算LDL-C含量D、Friedewald公式为LDL-C=TC﹣HDL﹣TG/2.2E、用自动分析仪测定LDL-C时采用直接测定均相法7、血脂异常预防的首要靶标为A、TCB、TGC、HDLD、LDLE、Lp（a）8、流行病学研究发现以下检测指标与冠心病发生呈负相关的是A、TCB、Lp（a）C、HDLD、LDLE、VLDL9、以下叙述正确的是A、甘油三酯水平的个体内和个体间变异都比胆固醇大B、血中CM的半寿期为2～4hC、目前常用检测甘油三酯的方法为化学法D、甘油三酯不是冠心病的独立危险因素E、甲亢患者甘油三酯常升高10、载脂蛋白的功能错误的是A、构成和维持脂蛋白结构B、是一些酶的辅助因子C、参与脂蛋白受体的识别D、调节脂蛋白代谢关键酶的活性E、不能由肾脏合成11、不由肝脏合成的脂蛋白为A、HDLB、VLDLC、CMD、ApoAE、Lp（a）12、在没有CM存在的血浆中甘油三酯的水平主要反映A、HDL水平B、IDLC、LDLD、VLDL水平E、VLDL和LDL水平13、正常人空腹时与血浆中胆固醇结合的主要脂蛋白为A、CMB、VLDLC、LDLD、IDLE、Lp（a）14、蛋白质含量最高的脂蛋白是A、HDLB、CMC、VLDLD、LDLE、Lp（a）15、脂肪消化的主要部位是A、胃B、食管C、小肠D、结肠E、直肠16、运输内源性胆固醇的脂蛋白主要是A、HDLB、VLDLC、LDLD、CME、Lp（a）17、运输内源性甘油三酯的脂蛋白主要是A、CMB、VLDLC、LDLD、HDLE、La（a）18、经超速离心法血浆脂蛋白自下而上分别为A、CM，VLDL，IDL，LDL，HDLB、HDL，LDL，IDL，VLDL，CMC、CM，VLDL，LDL，IDL，HDLD、HDL，IDL，LDL，VLDL，CME、HDL，LDL，IDL，CM，VLDL19、以下有关胆固醇功能叙述错误的是A、是所有细胞膜的重要成分B、是所有亚细胞器膜的重要成分C、是胆汁酸的唯一前提D、并非所有类固醇激素的前体E、是肾上腺激素的前提20、胆固醇含量最少的脂蛋白是A、HDLB、CMC、VLDLD、LDLE、IDL21、下列关于脂酶与脂质转运蛋白的叙述，哪项是错误的（）。
血浆脂蛋白密度由低到高的顺序
问题：[单选] 正常血浆脂蛋白按照密度由低到高顺序的排列为（）A . VLDL-IDL-LDL-HDLB . CM-VLDL-IDL-LDLC . VLDL-CM-LDL-HDLD . VLDL-LDL-IDL-HDLE . CM-VLDL-LDL-HDL参考答案：E●参考解析由于脂蛋白的蛋白质和脂质的组成、比例不同，它们的颗粒大小、表面电荷及密度均有差异。
因此可用电泳法和超速离心法将它们分离。
用电泳法后，按迁移率的快慢依次分为。
α-脂蛋白、前β-脂蛋白、β-脂蛋白和位于点样原点的乳糜微粒四种。
α-脂蛋白最快，CM最慢。
用超速离心法，按密度高低依次分为高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)和乳糜微粒(GM)四种。
血浆脂蛋白：是指哺乳动物血浆（尤其是人血浆）中的脂蛋白复合物。
血浆脂蛋白可以将脂质（甘油三酸酯，磷脂，胆固醇）从一个器官转运到另一个器官。
血浆脂蛋白根据密度分类：（1）乳糜微粒（<0.95 g / cm3），密度非常低，可将甘油三酸酯和胆固醇酯从小肠运输到组织，肌肉和脂肪组织。
（2）VLDL（0.95-1.006g / cm3）在肝脏中产生，并将脂质转运至组织。
当VLDL转运至全身组织时，它会分解为三酰基甘油，载脂蛋白和磷脂。
最终，VLDL被转化为低密度脂蛋白。
（3）低密度脂蛋白（LDL，1.006-1.063g / cm3）将胆固醇运输到组织。
经过一系列复杂的过程，LDL与LDL受体结合并被细胞吞噬。
（4）肝脏中还会产生高密度脂蛋白（HDL，1.063-1.210 g / cm3），可能负责清除细胞膜上多余的胆固醇。
当血浆中的卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）将脂肪酸残基从卵磷脂转移至胆固醇形成胆固醇脂质时，HDL将这些胆固醇脂质转运至肝脏。
肝脏将多余的胆固醇转化为胆汁酸。
组成结构脂蛋白中的脂与脂之间没有共价键。
它们中的大多数受脂质的非极性部分与蛋白质成分之间的疏水相互作用的束缚。
极低密度脂蛋白胆固醇检测原理
极低密度脂蛋白胆固醇检测原理极低密度脂蛋白胆固醇（Very Low Density Lipoprotein Cholesterol，简称VLDL-C）是一种血液中的脂质，它在人体内主要负责运输三酰甘油和胆固醇。
VLDL-C的检测是评估人体脂质代谢的重要指标之一，有助于了解人体血液中脂质的水平，从而判断是否存在相关的代谢紊乱和心血管疾病的风险。
极低密度脂蛋白（VLDL）是由肝脏合成的一种复合脂质，它主要由三酰甘油、胆固醇和磷脂组成。
与其他脂质一样，VLDL无法直接溶解在血浆中，因此它需要与蛋白质结合形成脂蛋白复合物，以便在血液中进行运输。
VLDL-C是其中的一个组分，它主要负责运输三酰甘油和胆固醇到全身各个组织和细胞，以满足其能量需求和细胞膜的合成。
VLDL-C的检测可以通过血液样本进行，一般采用生化分析仪器进行测定。
测定的原理是利用生化分析仪器对血液样本中的VLDL进行分离和测量。
在测定过程中，首先需要将血液样本离心分离，以得到血浆。
随后，通过添加一定的试剂和反应物，使VLDL与其他脂蛋白分开。
最后，利用生化分析仪器对VLDL中的胆固醇进行测量，从而得到VLDL-C的含量。
VLDL-C的测定结果可以用于评估人体内脂质代谢的情况。
正常情况下，VLDL-C的含量较低，而异常的VLDL-C水平可能会导致血液中脂质的积累，增加心血管疾病的风险。
因此，通过检测VLDL-C的含量，可以及早发现脂质代谢紊乱和心血管疾病的风险，从而采取相应的治疗措施。
除了VLDL-C，人体内还存在其他脂蛋白胆固醇，如低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）。
LDL-C被称为“坏胆固醇”，其过高的含量会导致胆固醇在血管壁上的沉积，增加动脉粥样硬化的风险。
HDL-C被称为“好胆固醇”，它可以促进胆固醇从血管壁上的沉积物中运输出来，减少动脉粥样硬化的风险。
综合考虑这些脂蛋白胆固醇的含量和比例，可以更加全面地评估人体脂质代谢的情况，并判断心血管疾病的风险。
超速离心-高效液相色谱测定血清高密度脂蛋白和低密度脂蛋白胆固
血清脂蛋白胆固醇的体外再分布
脂蛋白的分离方法
• 超速离心法: 各类脂蛋白的定义方法，在分析化学上可能 也是最可靠的脂蛋白分离方法，是一种物理分离方法， 影响因素最少。 • 电泳法: 很难用于精密脂蛋白分析。
• 沉淀法: 沉淀剂和沉淀条件多种多样，影响因素多，
较难实现一致的特异性。
超速离心法（结合精密胆固醇分析）
密度液II: 含0.1脯氨酸和0.05M ME的溴化钠溶液，调节溴 化钠浓度，使密度为1.0666
(两种密度液（0.8 ml）与血清（0.05 ml）混合
后分别给出背景密度1.006 g/ml和1.063 g/ml)
标准46, 1.293, 2.586 , 5.172 , 7.758 mmol/L 豆甾醇乙醇溶液: 浓度5.17 mmol/L，作内标溶液
美国疾病控制与预防中心(CDC)
定量法
D=1.006 超速离心分离极低密度脂蛋白（VLDL），
制备底部组分（BF）( 包括IDL, LDL, HDL和Lp(a)等） 用肝素-锰离子试剂沉淀BF中的脂蛋白，制备HDL组分
分别用AK胆固醇参考方法测定BF 胆固醇(BFC)和HDLC，
自BFC中减去HDLC得LDL-C (包括IDL和Lp(a))
（r = 0.414, P<0.005）
bias vs lp(a)-pr 0.10 0.05 0.00 0.0 (0.05) (0.10) (0.15) 20.0 40.0 60.0 80.0
脯氨酸可以解离Lp(a)与其他脂蛋白的非共价键结合
• Lp(a)可与 脂蛋白发生非共价键结合 • 此种结合不能被超速离心完全解离 • 脯氨酸可以消除Lp(a)与其他脂蛋白的非共价结合
Lp(a)
《生理学》第八章血浆脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验练习题及答案
第八章血浆脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验练习题及答案一、学习目标1.掌握：血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的常规测定方法的原理、方法学评价和生理意义；血浆载脂蛋白的检测原理和临床意义。
2.熟悉：血浆脂代谢相关酶检测的临床意义和应用评价；高脂蛋白血症的WHO分型。
3.了解：血脂及脂蛋白的概念；脂蛋白的分类。
二、习题（一）名词解释1.高脂蛋白血症（hyperlipoproteinemia）2.代谢综合征（metabolic syndrome）（二）填空题1.超速离心将脂蛋白分为、、和（密度从小到大填写）。
2.WHO高脂血症分型中，CM升高的两型分别为和，血清静置试验现象为透明的为。
3.根据脂蛋白在电场中迁移速率可将脂蛋白分为、、和。
4.载脂蛋白AI主要存在于中，与冠心病发生危险性呈相关；载脂蛋白B主要存在于中，与冠心病发生危险性呈相关。
5.载脂蛋白E主要由产生，血液中的apo E存在三种异构体，分别是apo Eε2、ε3和ε4，携带等位基因者，其血液中apo E浓度高，apo B浓度低，胆固醇含量也低，对动脉粥样硬化有防护作用；而携带等位基因者，则血液中apo E浓度低，apo B浓度高，是动脉粥样硬化的潜在危险因素。
6.检测血浆LPL活性时，一定要静脉注射。
7.LCAT由合成，在发挥催化作用。
（三）单项选择题A型题1.下列各种脂蛋白中，脂质含量最多的脂蛋白是A.CMB.VLDLC.IDLD.LDLE.HDL2.下列各种脂蛋白中，密度最大的脂蛋白是A.CMB.β-脂蛋白C.前β-脂蛋白D.α-脂蛋白E.前α-脂蛋白3.下列各种脂蛋白中，能够抑制纤溶酶活性的脂蛋白是A.VLDLB.LDLC.HDLD.CME.Lp(a)4.主要存在于HDL中的载脂蛋白是A.apo AB.apo B100C.apo CD.apo EE.Lp(a)5.LDL中存在的最主要载脂蛋白是A.apo AB.apo B100C.apo CD.apo EE.Lp(a)6.肝脏中胆固醇清除的主要方式为A.在肝细胞内转变成胆汁酸B.转变成维生素DC.转变成类固醇D.合成低密度脂蛋白E.异生为糖类7.下列关于Lp(a)的叙述，错误的是A.Lp(a)是心血管疾病的独立危险因子B.Lp(a)在脂蛋白电泳时属于前p一脂蛋白部分C.apo(a)与纤溶酶原具有高度同源性D.apo(a)可从Lp(a)上脱落下来，剩下不含apo(a)仅含apo Bl00的颗粒称LDLE.apo(a)的基因定位于6号染色体8.可将肝脏合成的内源性胆固醇运转至肝外组织的是A.CMB.VLDLC.LDLD.HDLE.LDL受体9.下列哪种脂蛋白参与胆固醇的逆向转运A.CMB.VLDLC.LDLD.HDLE.Lp(a)10.人群中apo E可有几种不同的表型A.4种B.5种C.6种D.7种E.8种11.正常人空腹12小时后一般不会出现A.CMB.TCC.TGD.HDL-CE.FFA12.下列关于载脂蛋白的描述错误的是A.构成并稳定脂蛋白的结构B.修饰并影响与脂蛋白代谢有关的酶的活性C.作为脂蛋白受体的配体D.不参与脂蛋白代谢过程E.脂蛋白中的蛋白部分13.在血液中降解CM和VLDL的主要酶是A.磷脂酶B.胰脂酶C.裂解酶D.蛋白酶E.脂蛋白脂肪酶14.下列具有抗动脉粥样硬化作用的脂蛋白是A.LDLB.HDLC.CMD.VLDLE.FFA15.下列能够激活LPL的载脂蛋白是A.apo AB.apo BC.apo CⅡD.apo DE.apo E16. apo AI的功能之一是A.激活HLB.激活LCATC.识别LDL受体D.激活LPLE.促进CM合成17. apo AⅡ的主要生理功能是A.促进胆固醇酯的生成B.促进LDL代谢C.稳定脂蛋白结构，促进胆固醇的运输D.调节HDL代谢E.促进CM和VLDL代谢18. LCAT的功能是A.促进血浆脂蛋白中胆固醇的酯化B.水解胆固醇酯C.参与胆固醇生物合成D.促进卵磷脂转变为胆固醇E.抑制胆固醇合成19. LPL的抑制剂是A.apo AIB.apo AⅡC.apo B100D.apoCⅢE.apo CⅡ20. LPL的辅助激活剂是A.apo AIB.apo AⅡC.apoCID.apo CⅡE.apo AIV21.清道夫受体有广泛的配体谱，其配体的共同特点是A.都为多阴离子化合物B.都含有apo AC.都含有apo B100D.都含有apo EE.都含有apo H22. 2001年发布的ATPⅢ中划定的血浆总胆固醇的最适值为A.<5.17mmol/LB.<5.70mmol/LC.<6.17mmol/LD.<6.70mmol/LE.< 10.0mmol/L23. 2001年发布的ATPⅢ中划定的血浆LDL-C的最适值为A.<2.6mmol/LB.<3.3mmol/LC.<3.8mmol/LD.<4.1mmol/LE.< 10. 0mmol/L24.对于有高脂血症或动脉粥样硬化家族史的儿童应从多大开始进行血脂监测A.2岁B.7岁C.10岁D.14岁E.28岁25.V型高脂蛋白血症时，患者的血清外观特征是A.血清浑浊B.血清上层“奶油样”，下层浑浊C.血清澄清D.血清上层“奶油样”，下层澄清E.血清“奶油样”26.血清脂蛋白电泳与血清蛋白电泳在操作过程中最大的不同在于A.所用的电泳槽不同B.支持介质相同C.电泳支持介质不同D.电泳缓冲液不同E.所用的染料不同27.能用于全自动生化分析仪上测定血浆脂蛋白的方法为A.超速离心分离法B.沉淀分离法C.电泳分离法D.遮蔽直接测定法E.免疫分离法28.能用于全自动生化分析仪上测定血浆载脂蛋白的方法为A.免疫扩散法B.免疫透射比浊法C.免疫火箭电泳法D.脂质抽提法E.离心法29.apo E的哪种等位基因对冠状动脉粥样硬化的发展有防护作用A.ε4B.ε3C.ε2D.ε1E.ε730.下列哪种染料能用于血清脂蛋白电泳分析实验中A.丽春红B.考马斯亮蓝C.苏丹黑BD.氨基黑10BE.酸蓝B型题（l～3题共用备选答案）A.TCB.FFAC.HDL-CD.LDL-CE.LCAT1.主要与白蛋白结合存在的是B2.认为对人体有保护作用的脂蛋白为C3.属于脂代谢相关酶类检测的是E（4～6题共用备选答案）A.酶法B.抗原抗体反应C.色谱与质谱法( GC/MS)D.匀相法E.超速离心4.血脂检测参考方法多为C5.Lp(a)检测方法为B6.临床自动化检测血脂常用方法为A（7～11题共用备选答案）A.CM升高，VLDL均升高B.IDL升高C.VLDL升高D.LDL升高E.CM升高7.Ⅳ型高脂血症的特征是C8.Ⅱa型高脂血症的特征是D9.I型高脂血症的特征是E10.V型高脂血症的特征是A11.Ⅲ型高脂血症的特征是B（12～13题共用备选答案）A.apo A IB.apo A IIC.apo B100D.apo C lIE.apo CⅢ12.识别LDL受体的是C13.抑制IPL和肝apo E受体的是E（14～16题共用备选答案）A.LPLB.LCATC.HLD.HMG-CoA合成酶E.LDL中甘油三酯及磷脂水解的是C14.催化HDL215.催化胆固醇酯生成的是B16.催化CM及VLDL中甘油三酯水解的是A（四）简答题1.血脂检测一般样本的采集和处理有什么基本的要求？2.脂蛋白由电泳和超速离心如何分类？3.简述如何使血脂项目检测更加准确。
血清低密度脂蛋白胆固醇测定及临床意义.
血清低密度脂蛋白胆固醇测定及临床意义【关键词】胆固醇血清总胆固醇（TC）升高是动脉粥样硬化的主要危险因素之一。
TC升高几乎都是由于低密度脂蛋白（LDL-C）升高所致，可见LDL-C是动脉粥样硬化的重要致病因素;而高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）则被认为可以从动脉壁清除胆固醇，因而对动脉粥样硬化形成起到拮抗作用，是一种防御保护因素，LDL-C/HDL-C称为动脉粥样硬化指数，是判定动脉硬化的重要参数。
LDL-C测定方法除经典的超速离心沉淀法和各种电泳方法，还没有简单易行的分析方法（全自动生化分析仪测定成本较高）。
我们采用肝素-柠檬酸钠沉淀酶法测定胆固醇。
报告如下。
1 LDL-C测定的材料和方法1.1 材料 LDL-C沉淀剂称柠檬酸钠（天津化学试剂―厂生产，分析纯）18.8g，加蒸馏水溶解，加入肝素（液体肝素为天津市生物化学制药厂生产，每支12500U，加4支，若改用固体肝素则使用国产肝素钠140U/mg，共用0.357g，调pH至5.04±0.05，最后定容至1L。
1.2 原理血清在不含有Mg 2+ 、Ca 2+ 、Mn 2+ 等离子情况下，在特定的pH值时，可由加入定量的肝素使LDL-C被选择性沉淀下来，而VLDL-C和HDL-C仍存留在上清液中，用酶法测定血清TC和上清液中VLDL-C与HDL-C之和，通过下式求得LDL-C=TC-（VLDL-C+HDL-C）。
1.3 操作方法准确吸取100μl血清加至1ml LDL-C沉淀剂中，混匀并在室温静置10min后在3000r/min离心10min，取上清液200μl按酶法测定TC 程序，测定上清液胆固醇含量。
2 超速离心沉淀法测定LDL-C的材料及操作方法（1）NaCl-KBr贮存液分别称取153g的NaCl和354g KBr，以蒸馏水溶解后定容至1L;（2）1.0036g/ml的密度液，将1700ml的生理盐水于5.0ml NaCl-KBr贮存液混合;（3）吸取2ml新鲜血清加到5ml离心管内，加入3ml的上述密度液，盖好离心管帽，将内容物混匀，于BcckmanL8-80M型超速离心机5000r/min离心14h后，吸取最上层不透明带中的VLDL，并用生理盐水冲洗管帽上残留的VLDL，二者合在一起定容至5ml;（4）VLDL-C测定取上述定溶液0.1ml用酶法测定其胆固醇含量;（5）吸出VLDL后将离心管内溶液混匀定容至10ml，取20μl用酶法测定其胆固醇含量;（6）HDL-C测定取上述溶液0.1ml，用磷钨酸-氯化镁法测定HDL-C含量。
检验科生化高密度脂蛋白胆固醇HDL测定的标准操作规程
高密度脂蛋白胆固醇测定的标准操作规程【目的】体外检测血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL)含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理本试剂采用化学修饰酶法，其反应原理如下：CHER表面活性剂HDL-胆固醇^胆固醇+游离脂肪酸胆固醇+O2™D(化学修饰)胆甾烯酮+H2O22H 2O2 + 4-AA+TOOS+H 3+O POD红色苯醍色素+5H2OTOOS: N-己烷基-N-硫羟基-丙烷基-M-二甲苯胺钠盐在上述反应中，红色苯醍色素的生成量与样本中高密度脂蛋白胆固醇浓度成正比，通过在6nm处测定吸光度的变化值，即可测得样本中高密度脂蛋白胆固醇的浓度。
二、试剂1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司HDL-C试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：试剂1（R1）TOOS0.3g/L过氧化物酶0.65KU/LMES 缓冲液0.05mol/L试剂2（R2）胆固醇氧化酶2.1KU/L胆固醇酯酶3KU/LMES 缓冲液0.05mmol/L4-氨基安替比林0.6g/L2.校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征高低密度脂蛋白胆固醇校准品对测定进行校准。
脂蛋白代谢的生物化学检验
脂蛋白代谢的生物化学检验一、血浆脂质测定(一)总胆固醇(TC)是血液中各脂蛋白所含胆固醇之总和，分为酯化型胆固醇(CE)和游离型胆固醇(FC)，其中CE占60%～70%， FC占30%～40%，两种类型的比例在健康个体或个体之间是恒定的。
【测定方法】目前常规应用酶法测定，快速精确。
【参考范围】 2022年《中国成人血脂异样防治指南》规定成人TC水平：①在5.18mmol/L(200mg/dl)以下为合适范围;②在5.18～6.19mmol/L(200～239mg/dl)范围属于边缘上升;③在6.22mmol/L(240mg/dl)以上为TC上升。
【临床意义】1、TC浓度增高，冠心病等心血管疾病发生的危急性增高。
影响TC水平的因素：①年龄与性别：新生儿TC很低，哺乳后很快接近成人水平，之后常随年龄而上升，但到70岁后不再上升甚或有所下降。
中青年期女性低于男性，女性绝经后TC水平较同年龄男性高。
②饮食习惯：长期高胆固醇、高饱和脂肪酸摄入可造成TC上升。
③种族：黑人的总胆固醇水平要高于白人。
④遗传因素。
2、TC并不是越低越好，讨论显示：①TC水平降低时增加心衰时的死亡率，而增高时可增加生存率;②在冠心病中，低血总胆固醇会增加死亡率;③TC水平上升可能可以防止痴呆。
(二)总脂质主要包括FC、CE、PL和TG等。
所采纳的测定方法不同，正常参考值有肯定的差异【测定方法】脂质抽提法和径直测定法【参考范围】成人4.0～7.5g/L;儿童3.0～6.0 g/L。
【临床意义】1、上升：高脂血症、动脉粥样硬化、糖尿病、糖原贮积病、肾小球肾炎、肾病综合征、甲状腺功能减退、高血压等。
2、降低：甲状腺功能亢进症、急性肝炎、肝硬化、恶病质、汲取不良综合征等。
二、甘油三酯(TG)构成脂肪组织，参加TC、CE合成及血栓形成。
【测定方法】建议酶法(如GPO-PAP法)作为临床试验室测定血清TG的'常规方法。
【参考范围】目前《中国成人血脂异样防治指南》仍沿用1997年《血脂异样防治建议》的标准规定我国成人TG水平：①在1.7mmol/L(150mg/dl)以下为合适范围;②1.7～2.25mmol/L(150～199mg/dl)为边缘上升;③2.26mmol/L(200mg/dl)以上为上升。
初级检验技师考试2017年《临床化学》练习 脂代谢及高脂蛋白血症
2017 第三章脂代谢及高脂蛋白血症一、A11、血浆置于4℃冷藏10h，可见上层为奶油样，下层浑浊的标本是A、Ⅱa型B、Ⅱb型C、Ⅲ型D、Ⅳ型E、Ⅴ型2、血清电泳图谱上出现深β带和深前β带的高脂血症是A、Ⅰ型B、Ⅱa型C、Ⅱb型D、Ⅲ型E、Ⅴ型3、血清电泳图谱上出现宽β的高脂血症为A、Ⅰ型B、Ⅱa型C、Ⅱb型D、Ⅲ型E、Ⅴ型4、Ⅰ型高脂蛋白血症不表现为A、奶油样表层，下层透明B、可能是由于LPL活性减低所致C、CM明显增高D、电泳时出现深βE、血清ApoB-48升高5、以下叙述错误的是A、通常测定LDL中胆固醇的含量来表示LDL的水平B、常用聚乙烯硫酸盐法测定HDL-CC、当TG水平大于4.52mmol/L时就不能采用Friedewald公式计算LDL-C含量D、Friedewald公式为LDL-C=TC－HDL－TG/2.2E、用自动分析仪测定LDL-C时采用直接测定均相法6、血脂异常预防的首要靶标为A、TCB、TGC、HDLD、LDLE、Lp（a）7、流行病学研究发现以下检测指标与冠心病发生呈负相关的是A、TCB、Lp（a）C、HDLD、LDLE、VLDL8、以下叙述正确的是A、甘油三酯水平的个体内和个体间变异都比胆固醇大B、血中CM的半寿期为2～4hC、目前常用检测甘油三酯的方法为化学法D、甘油三酯不是冠心病的独立危险因素E、甲亢患者甘油三酯常升高9、载脂蛋白的功能错误的是A、构成和维持脂蛋白结构B、是一些酶的辅助因子C、参与脂蛋白受体的识别D、调节脂蛋白代谢关键酶的活性E、不能由肾脏合成10、不由肝脏合成的脂蛋白为A、HDLB、VLDLC、CMD、ApoAE、Lp（a）11、在没有CM存在的血浆中甘油三酯的水平主要反映A、HDL水平B、IDLC、LDLD、VLDL水平E、VLDL和LDL水平12、正常人空腹时与血浆中胆固醇结合的主要脂蛋白为A、CMB、VLDLC、LDLD、IDLE、Lp（a）13、蛋白质含量最高的脂蛋白是A、HDLD、LDLE、Lp（a）14、脂肪消化的主要部位是A、胃B、食管C、小肠D、结肠E、直肠15、运输内源性胆固醇的脂蛋白主要是A、HDLB、VLDLC、LDLD、CME、Lp（a）16、运输内源性甘油三酯的脂蛋白主要是A、CMB、VLDLC、LDLD、HDLE、La（a）17、经超速离心法血浆脂蛋白自下而上分别为A、CM，VLDL，IDL，LDL，HDLB、HDL，LDL，IDL，VLDL，CMC、CM，VLDL，LDL，IDL，HDLD、HDL，IDL，LDL，VLDL，CME、HDL，LDL，IDL，CM，VLDL18、以下有关胆固醇功能叙述错误的是A、是所有细胞膜的重要成分B、是所有亚细胞器膜的重要成分C、是胆汁酸的唯一前提D、并非所有类固醇激素的前体E、是肾上腺激素的前提19、胆固醇含量最少的脂蛋白是A、HDLB、CMC、VLDL20、酶法测定血清胆固醇中用到的酶有A、甘油激酶、过氧化物酶B、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶C、胆固醇氧化酶、甘油激酶D、胆固醇氧化酶、甘油氧化酶E、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、甘油氧化酶21、胆固醇酯是胆固醇与下列哪种物质结合A、氨基酸B、氨基醇C、磷脂甘油D、三酰甘油E、脂肪酸22、空腹时血液中的甘油酯类主要是以什么形式进行转运的A、与清蛋白结合的形式B、游离形式C、VLDL的形式D、LDL的形式E、HDL的形式23、对LDL描述正确的是A、运输内源性胆固醇B、运输外源性胆固醇C、运输内源性三酯甘油D、运输外源性三酯甘油E、既有内源性胆固醇，又有外源性胆固醇24、下列关于三酰甘油与冠心病关系的叙述中错误的是A、富含三酰甘油脂蛋自在动脉粥样硬化病变中起重要作用B、三酰甘油增高反映了CM和（或）VLDL水平增高C、血浆三酰甘油升高是冠心病发生的一个独立危险因素D、高三酰甘油血症常同时伴HDL-C水平升高E、三酰甘油以VLDL循环于血液中，VLDL如转变为小而密LDL，则致动脉粥样硬化能力增加25、催化胆固醇酯生成作用的酶主要是A、卵磷脂胆固醇酯酰转移酶B、肉毒碱脂肪酰转移酶C、脂蛋白脂肪酶D、磷脂酶E、过氧化物酶26、LDL受体可识别血浆LDL颗粒的A、ApoCB、ApoDC、ApoAD、ApoBE、ApoB4827、对清道夫受体的叙述，错误的是A、清道夫受体分布于胎盘、肝、脾等处的单核巨噬细胞系统B、对氧化型LDL具有高亲和力C、促使脂蛋白之间转移胆固醇D、是LDL受体途径以外的脂质摄取途径E、受体具有跨膜结构域28、高脂蛋白血症血浆中升高的是A、CMB、VLDLC、LDLD、HDLE、以上均升高29、将乳糜血浆放置4℃环境中过夜，次晨血浆出现“奶酪”上层，说明下列何种脂蛋白增多A、CMB、VLDLC、LDLD、HDLE、LP（a）30、合成VLDL的场所主要是在A、肾脏B、血浆C、脂肪组织D、小肠黏膜E、肝脏31、与动脉粥样硬化发生率呈负相关的脂蛋白是A、HDLB、VLDLC、CMD、LDLE、IDL32、将胆固醇从肝外组织转运至肝进行代谢的是哪一种脂蛋白A、HDLB、CMC、VLDLD、LDLE、LpA33、LDL主要载脂蛋白是A、ApoB100B、ApoB48C、ApoCⅠD、APpoAⅠE、ApoAⅡ34、关于脂蛋白描述错误的是A、中心为极性物质B、中心为非极性物质C、载脂蛋白位于脂蛋白表面D、三酰甘油位于脂蛋白中心E、脂蛋白为可溶性35、ⅡA型高脂蛋白血症的血清检查特点是A、血清透明，胆固醇明显增加，三酯甘油正常B、血清透明，胆固醇明显增加，甘油稍高C、血清浑浊，胆固醇稍高，三酯甘油增高D、血清浑浊，胆固醇正常，三酯甘油稍高E、血清乳白色，胆固醇正常或稍高，三酯甘油明显增加36、与血清呈乳糜样关系最大的脂蛋白是A、VLDLB、HDLC、CMD、LDLE、IDLB37、脂蛋白各组分中密度最低的是A、LDLB、HDLC、VLDLD、CME、IDL38、目前常规检验方法中通常测定下述何种物质来反映人体内HDL的含量A、HDL中的三酯甘油B、HDL中的胆固醇C、HDL中的磷脂D、HDL中的载脂蛋白E、HDL中的脂蛋白（α）39、高脂蛋白血症分型的依据是A、血浆外观B、总胆固醇C、三酰甘油D、血清脂蛋白E、以上均对40、脂蛋白各组分中密度最大的是A、LDLB、HDLC、CMD、VLDLE、IDL41、密度离心分离血浆脂蛋白时，上浮和下沉的是A、CM和VLDLB、CM和HDLC、CM和LDLD、HDL和LDLE、HDL和VLDL42、1970年以后世界卫生组织把高脂蛋白血症分为6型（）类。
高、低密度脂蛋白胆固醇的匀相测定
高、低密度脂蛋白胆固醇的匀相测定法及技术要求『摘要』：近些年来，国内外相继研制开发出一些新型高、低密度脂蛋白胆固醇（HDL-C/LDL-C）HDL-C、LDL-C的直接匀相测定法（homogeneous methods）试剂。
如测定HDL-C用的选择性抑制法（PPD 法），PEG修饰酶法（PEGME法），清除法（Clearance method）包括反应促进剂-过氧化物酶清除法（SPD法）和过氧化氢酶清除法（CAT法），免疫分离法（IS法）包括PEG/抗体包裹法（IRC法）和抗体免疫分离法（AB法）；测定LDL-C用的表面活性剂清除法（SUR法），过氧化氢酶清除法（CAT法），杯芳烃法（CAL法），可溶性反应法（SOL法）和保护性试剂法（PRO法）。
这些方法因其简便、快速，易于自动化，已引起关注并广泛应用于临床常规分析。
本文对HDL-C、LDL-C的测定方法进行了回顾，并重点介绍了各种匀相测定法的检测原理，以及临床测定时的技术要求。
『关键词』：高密度脂蛋白胆固醇低密度脂蛋白胆固醇匀相测定法众多流行病学与临床研究证实，动脉粥样硬化、冠心病的发生率与血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平呈负相关，而与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平呈正相关。
近年来国内外相继研制开发出一些新型HDL-C、LDL-C的直接测定方法即匀相测定法(homogeneous methods)试剂，因其简便、快速，易于自动化，已引起关注并广泛应用于临床常规分析。
1 HDL-C检测方法1.1 概述测定血清HDL-C通常需根据各种脂蛋白的密度、颗粒大小、电荷等应用超速离心法、色谱法、电泳法、化学或免疫沉淀法将HDL与其他脂蛋白分离开，测定HDL组分中胆固醇含量。
美国疾病控制与预防中心(CDC)测定HDL-C的参考方法为超速离心法，也为NCEP所推荐。
CDC胆固醇参考方法实验室网络(CRMLN)近来选用了一种“指定的比较方法”(DCM法)作为转移CDC参考方法准确性的适用方法—硫酸葡聚糖-镁(DS50-Mg2+)沉淀结合ALBK法。
低密度脂蛋白胆固醇(LDL)的检测
低密度脂蛋白胆固醇(LDL)的检测摘要】低密度脂蛋白胆固醇是血清中携带胆固醇的主要颗粒，主要由极低密度脂蛋白胆固醇分解而来，低密度脂蛋白直接向组织和细胞内运输胆固醇，因此LDL增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素，其血清水平越高，发生动脉粥样硬化的危险性越大。
【关键词】低密度脂蛋白胆固醇血清检测直接测定血清(或血浆)LDL-C的经典方法是超速离心分离 LDL，或超速离心(去除VLDL)结合沉淀法，均非一般实验室所能采用。
电泳分离LDL的方法也不够简单。
十多年来发展起来的简单方法有两类：一类是用化学法分离VLDL，然后测定HDL与 LDL部分的胆固醇，减去HDL-C得LDL-C；另一类是选择沉淀 LDL法。
该法在LDL沉淀后，可测出上清液的HDL+VLDL部分的胆固醇，然后计算出LDL-C，或直接取沉淀物测定LDL-C，这类方法有3种沉淀剂：①肝素-枸橼酸；②聚乙烯硫酸；③多环表面活化阴离子(法国试剂盒，未具体指名化学名称)。
目前多用PVS沉淀法，美国LRC各实验室也统一采用此法(Boehringer试剂盒)。
但国内还很少用LDL-C直接测定，而是用Friedewald公式用TC、 TG、HDL-C 3项测定计算LDL-C，不如直接测定法可靠。
新近，中华医学会检验学会已推荐匀相法作为临床实验室测定LDL-C的常规方法。
1 临床资料一般资料 48份血脂测定标本为本院的血脂门诊病人标本，早晨空腹采血，室温自行凝固后经离心分离血清，当天完成总胆固醇（TC）、HDL-C和甘油三酯（TG）测定，48份标本的TC平均浓度为5.93±1.37(3.40～9.03)mmol/L，TG的平均浓度为2.04±1.04(0.45～5.88)mmol/L，HDL-C的平均浓度为1.56±0.46(0.68～2.52)mmol/L。
2 聚乙烯硫酸沉淀法2.1 原理用聚乙烯硫酸(PVS)选择沉淀血清中LDL，测出上清液中的胆固醇代表HDL-C与VLDL-C之和，所以TC减去上清液胆固醇即得LDL-C值。
《临床生物化学检验》第四章练习题及答案
《临床生物化学检验》第四章练习题及答案第四章脂质和脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验[A型题]1.经超速离心法，血浆脂蛋白自下面上分别是（）A. CM，VLDL，IDL，LDL，HDLB.HDL，LDL，IDL，VLDL，CMC .CM，VLDL，LDL，IDL，HDL D.HDL，IDL，LDL，VLDL，CME. HDL，LDL，IDL，CM，VLDL2.乳糜微粒中主要的载脂蛋白是（）A. Apo B48B. Apo B100C. Apo C IID .ApoE E. Apo(a)3. Apo B100的生理功能叙述正确的是（）A.是VLDL的结构蛋白B.是LDL受体的配体C.可作为HDL受体的配体D.参与合成装配和分泌富含胆固醇的VLDLE.不能调节LDL从血浆中的清除速率4.抗动脉粥样硬化的因子是（）A .CM B. VLDL C. LDL D. HDLE. Lp(a)5.血清ApoA- I水平可以直接反映（）A. CMB. LDLC. VLD LD. Lp(a)E. HDL6.血清Apo B水平可以直接反映（）A .CMB .LDL C.VLDL D. Lp(a) E .HDL7.可作为动脉粥样硬化独立的危险因素是（）A. CMB. LDLC.VLDLD. Lp(a) E .HDL8.有关ApoA -I错误的是（）A.是HDL的主要结构蛋白 B组织浓度最高C.与冠心病发病事呈正相关D.可直接反映HDL水平E.与ApoA-II 之比为3:19.富含胆固醇的是（）A. CMB.LDLC. VILDLD. Lp(a)E. HDL10.下列血浆脂蛋白运输内源性甘油三酯的是（）A. CMB. LDLC. VLDLD. Lp(a)E. HDL11. 下列哪项比值降低表示心血管疾病危险度加大（）A. ApoA-I/Apo A- II B .ApoA-I/Apo BC. Apo B/ApoC-ID. Apo A- II /ApoC-IIIE. ApoA- II /Apo B12. 下列脂蛋白中密度最低的是（）A.LDL B VLDL C. CM D. Lp(a) E HDL13. 下列脂蛋白中密度最高的是（）A. CM B . β-脂蛋白 C.前β-脂蛋白D. Lp(a) E .α-脂蛋白14.以下富含甘油三酯的脂蛋白是（）A. CM和VLDLB. LDL和HDLC. VLDI. 和HDLD. Lp(a)和CME.CM和HDL15. HDLC测定的参考方法是（）A.电泳法B.超速离心结合ALBK法C.匀相测定法D.聚乙烯硫酸沉淀法E.磷钨酸镁沉淀法16.下列运输外源性TG的血浆脂蛋白是（）A. CMB.LDLC.VLDLD. Lp(a)E. HDL17. 脂蛋白电泳时向正极迁移速度最快的是（）A. LDLB. CMC. VLDLD. Lp(a)E. HDL18. IV型高脂蛋白血症是指空腹血浆中（）A. CM升高B. LDL升高C. VLDL升高D. CM及VLDL同时升高E.HDL升高19. LDL受体可识别血浆LDL颗粒的（）A. Apo B48B. ApoA-IC. ApoB100D. ApoCE. Apo A- II20. 酶法测定胆固醇通常采用的波长是（）A. 540nmB. 630nm C:.280nm D.500nmE. 260nm21. 能活化脂蛋白脂肪酶的载脂蛋白是（）A. Apo A-IB. Apo A-IIC. Apo B100D. Apo B48E.Apo- II22. 血浆静置实验中观察上呈奶油状，下层透明，电泳呈原点深染的是（）A.I型高脂血症B. II型高脂血症C.III 型高脂血症D.IV刑高脂血症E.V型高脂血症23. .III 型高脂血症是指指空腹血浆中（）A. CM升高B. LDL升高C. VLDL 升高D. IDL升高 E .CM及VLDL升高24. 催化胆固醇酯化生成作用的酶主要是（）A.过氧化物酶B.卵磷脂胆固醇酰基转移酶C.肉毒碱脂酰转移酶D.脂蛋白蛋白脂肪酶E胆固醇酯酶25. 血清中的胆固醇在下列那种脂蛋白中含量最多（）A.CMB.LDLC.VLDL.D. Lp(a)E.HDL26.血清脂蛋白电泳与血清蛋白电泳在操作过程中的最大不同在于（）A.所用的电泳槽不同B.支持介质相同C.电泳支持介质不同D.电泳缓冲液不同E.所用的染料不同27.新生HDL不断接受何种脂类进人其内部从而转变为成熟型HDL（）A.磷脂B.脂蛋白C.游离脂肪酸D.甘油三酯E.胆固醇酯28.某患者的血标本检查结果为：TG 3. 78mmol/L，Chol 4.91mmol/L，前β-脂蛋白增高，β-脂蛋白正常,乳糜微粒阴性,血清乳状化,高脂蛋白血症分型为（）A. I 型高脂血症B. II 型高脂血症C.III型高脂血症D. IV型高脂血症E.V型高脂血症29. VLDL受体的配体是（）A.含Apo B100的脂蛋白B.含Apo E的脂蛋白C.含Apo C的脂蛋白D.含Apo A的脂蛋白E.含Apo J的脂蛋白30. I型清道夫受体的SRCR区域富含下列哪种氨基酸（）A.组氨酸B.半胱氨酸C.赖氨酸D.色氨酸E.胱氨酸31.清道夫受体有广泛的配体谱，其配体的共同特点是（）A.都为阴离子化合物B.都含有Apo AC.都含有Apo B100D.都含有Apo EE. 都含有Apo H32. LPL 在发挥其酶活性时所必需的辅因子是（）A. ApoA- IB. ApoA-IIC. ApoC-ID. ApoC-IIE. IDL33.能用于全自动生化分析仪上测定血浆脂蛋白的方法为街（）A.超速离心分离法B.沉淀分离法C.电泳分离法D.遮蔽直接测定法E.免疫分离法34. 能用于全自动生化分析仪上测定血浆载脂蛋白的方法为（）A.免疫扩散法B.免疫投射比浊法C.免疫火箭电泳法D.脂质抽提法E.离心法35. Apo E的哪种等位基因对冠状动脉硬化的发展有防护作用（）A. E4B.E3C. E2D. E1E. E736. 下列哪种染料能用于血清脂蛋白电泳分析实验（）A.丽春红B.考马斯亮蓝C.苏丹黑BD. 氨基黑10BE.油红[x型题]1.正常人空腹12小时后抽血做血清脂蛋白电泳，会出现哪几条电泳谱带（）A.CMB. β-脂蛋白C.前β-脂蛋白D. a-脂蛋白E. Lp(a)2. 下列哪几项是载脂蛋白的功能（）A. 构成并稳定脂蛋白的结构B.修饰并影响与脂蛋白代谢有关的酶的活性C.作为脂蛋白受体的配体D. 参与脂蛋白代谢过程E.引起AS3. Apo E具有基因多态性，常见的异构体有招电幼家会（）A. E1B.E2.C.E3D.E4E.E74. 下列哪几项是Apo E的生理功能（）A.是LDL受体的配体和肝细胞CM残粒受体的配体B.具有基因多态性，与个体血脂水平及动脉粥样硬化发生发展密切相关C.参与激活水解脂肪的酶类,参与免疫调节及神经组织的再生D.参与胆固醇的逆向转运E.参与TG转运5. 目前研究得最详尽的脂蛋白受体有隐项电（）A. LDL受体B. VLDL受体C. HDL受体D.清道夫受体E.激素受体6. LDL受体的配体是（）A.含ApoA的脂蛋白B.含ApoB100的脂蛋白C. 含ApoC的脂蛋白D.含ApoE的脂蛋白E.Lp(a)7. 下列哪些是清道夫受体的配体（）A.修饰的LDLB.某些磷脂C.细菌脂多糖D.某些糖类E.多聚次黄嘌呤核苷酸8.下列哪些酶是HDL代谢中的关键酶，对HDL的产生与转化有重要的作用（）A. LPLB. HLC. ALPD. LCATE. CETP9.根据1970年世界卫生组织对高脂蛋白血症的分型方案,对脂代谢素乱患者血清标本需进行哪些检测，才能确定其分型（）A.测定血清胆固醇浓度B. 测定血清甘油三酯浓度C.血清脂蛋白电泳图谱分析D. PAGEE.血清置于4℃过夜后，观察血清混浊程度10.一个血标本，经离心后上层血清呈云雾状混神，其原因可能是（）A.胆固醇增高B.甘油三酯增高C. 乳糜微粒存在D.磷脂增高E.胆固醇降低11. 下列哪些疾病会引起继发性高脂蛋白血症（）A.糖尿病对B.甲状腺功能低下症C. 库欣综合征D.肾病综合征E.癌症12.引起高HDL血症的主要原因有（）A. CETP活性降低B. CETP活性增高C. HL活性降低D. HL活性增高E. LPL活性降低13.下列哪些脂蛋白能增加动脉壁内胆固醇的内流和沉积（）A. HDLB. LDLC. β-VLDLD. ox-LDLE. Lp(a)14. 下列哪些脂蛋白是致动脉粥样硬化因素（）A.脂蛋白残粒B. 变性LDLC.B型LDLD. Lp(a)E. HDL15.用薄层层析法分析人的冠状动脉样硬化斑块样成分，检查出的脂质主要有（）A .胆固醇 B. 胆固醇酯 C.甘油三酯 D.游离脂肪酸 E.类胆固醇16.下列哪些方法是防治动脉粥样硬化性心脑血管疾病的重要措施（）A.降低血清胆固醇浓度B.降低血清甘油三酯浓度C.降低血清HDL浓度D. 降低血清LDL浓度E.降低血清Lp(a)浓度17.酶法测定血清总胆固醇浓度中用到的酶有（）A.甘油激酶B.胆固醇酯酶C.胆固醇氧化酶D.过氧化物酶E.丙酮酸激酶18. 下列哪些方法能用于检测Lp(a) （）A.免疫投射比浊法B.免疫散射比浊法C.酶联免疫吸附试当D.发射免疫测定法E.离心法19.下列哪几项是代谢综合征的特点（）A.低胰岛素血症B. 高甘油三酯血症C.高密度脂蛋白降低D.癔症E.高血压20.下列哪几项属于变性LDL.（）A.乙酰化LDLB.糖化LDLC. VLDLD. LDL-CE. ox-LDL。
3种高密度脂蛋白胆固醇检测方法的比较
3种高密度脂蛋白胆固醇检测方法的比较郭林潘逸茹v熊菁孙仁勇v v(上海医科大学肿瘤医院检验科上海200032;v华东医院检验科上海200040;v v上海复旦张江生物医学有限公司上海201203)近年来国内外对H DL-C的测定方法均进行了广泛的研究[1~3]。
国内临床上普遍所用的是磷钨酸钠-镁沉淀法或聚乙二醇沉淀法,该方法准确度、稳定性均较好,试剂价格低廉,但操作步骤多,在血清中需加入沉淀剂,使血清LDL和VLDL发生沉淀,然后再用酶法测定血清中的HDL-C。
而酶修饰法、多聚阴离子遮蔽法等避免了沉淀步骤,样品无需处理,可以直接测定血清中的H DL-C,这些方法简便了实验室的常规工作[4~6]。
为了对新的HDL-C方法进行临床评价,我们对磷钨酸钠-镁沉淀法(PAT/MgCl2)、多聚阴离子遮蔽法(PPD)和酶修饰法(PGME)进行了比较,对其准确性、稳定性、线性范围、特异性进行了分析,并对此3种方法对甘油三酯、胆红素和血红蛋白的干扰影响进行了测评。
材料和方法样品临床常规检测血清标本。
血标本在室温中静置1~2h,在室温下离心10min(1500r/ min),收集血清。
试剂总胆固醇和甘油三酯测定试剂、HDL-C磷钨酸沉淀法试剂,由上海复旦张江生物医药有限公司出品;化学遮蔽法H DL-C测定试剂,由日本第一化学株式会社出品;酶修饰法HDL-C测定试剂,由德国宝灵曼公司出品。
仪器日立-7060全自动生化分析仪。
甘油三酯和胆固醇测定方法具体操作按厂家说明书进行(酶法终点法)。
磷钨酸沉淀法取血清200与500L l沉淀剂混合,在室温静置10min,然后以6000r/min离心10 min,取上清液按胆固醇酶法终点法在日立-7060上测定。
酶修饰法该试剂盒为双试剂,试剂1含有表面活性剂和硫酸葡聚糖,能减少乳糜微粒和VLDL 对胆固醇试剂的反应;试剂2含有经PEG修饰过的胆固醇脂酶和胆固醇氧化酶,以及过氧化物酶、4-氨基安替比啉及D H BS。
浅析血脂检验的现状及标本的采集与处理
浅析血脂检验的现状及标本的采集与处理血脂检验对于临床高脂血症和异常脂蛋白血症的诊断及动脉粥样硬化﹙AS﹚性心血管﹙如冠心病﹚的危险评估和防治具有重要意义，并已经渗透应用于其它诸多临床相关专业疾病的研究。
我国血脂、脂蛋白及其与AS关系的研究虽然起步较晚，但改革开放的20多年以来，在血脂的基础与临床研究等方面发展迅速。
血脂检验及其临床应用已越来越受到临床各学科的重视。
本文旨在探讨血脂检验的方法学，试剂的选择原则与血脂测定的技术指标，分析前的变异对血脂检验结果的影响进行浅析。
1 血脂检验的方法学临床血脂检验主要包括血清总胆固醇﹙TC﹚、甘油三酯﹙TG﹚、高密度脂蛋白胆固醇﹙HDL-C﹚、低密度脂蛋白胆固醇﹙LDL-C﹚、载脂蛋白A1、载脂蛋白B、脂蛋白﹙a﹚测定。
1.1血清TC测定血清TC测定一般可分为化学法和酶法两大类。
目前国内建议酶法如胆固醇氧化酶-过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法作为临床实验室测定TC的常规方法。
1.2血清TG测定二氯甲烷-硅酸-变色酸法是美国疾病预防与疾控中心﹙CDC﹚测定TG采用的参考方法。
建议酶法〔如甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶-4氨基安替比林和酚法〕作为临床实验室血清TG的常规方法。
1.3血清HDL-C测定超速离心结合ALBK法为HDL-C测定的参考方法。
建议匀相测定法作为临床实验室测定血清HDL-C的常规方法。
1.4血清HDL-C测定超速离心结合ALBK法为LDL-C测定的参考方法。
建议匀相测定法作为临床实验室测定血清LDL-C的常规方法。
1.5血清apoA1和apoB测定目前尚无公认的血清apoA1和apoB测定的参考方法。
建议免疫浊度法作为临床实验室测定血清的常规方法。
1.6血清Lp﹙a﹚测定目前尚无公认的血清Lp﹙a﹚测定的参考方法。
建议免疫浊度法作为临床实验室测定血清Lp﹙a﹚的常规方法。
2 血脂检验试剂的选择原则与测定的技术指标2.1不精密度与不准确度各实验室进行血脂检验并非要求统一的测定方法，而是要求对同一批标本血脂测定值取得基本一致，卫生部检验中心及各省检验中心均要求各县级医疗单位实验室参加其组织的室间质评活动。
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血清脂蛋白胆固醇的体外再分布
脂蛋白的分离方法
• 超速离心法: 各类脂蛋白的定义方法，在分析化学上可能 也是最可靠的脂蛋白分离方法，是一种物理分离方法， 影响因素最少。 • 电泳法: 很难用于精密脂蛋白分析。
• 沉淀法: 沉淀剂和沉淀条件多种多样，影响因素多，
较难实现一致的特异性。
超速离心法（结合精密胆固醇分析）
• 1.006密度下超速离心，将HDL和LDL（BF1.006）与VLDL分离
• 用HPLC测定BFC1.006和BFC1.063 HDLC = BFC1.063 LDLC = BFC1.006 - BFC1.063 (含IDLC和Lp(a)C)
密度液及标准溶液配制
超速离心密度液配制:
密度液I: 含0.1M脯氨酸的溴化钠溶液，使密度为1.006
118
98
78
(lp(a),me-) all,me(lp(a),me) all,me
58
38
18
(2) 0.95 0.96 0.97 0.98 0.99 1.00 1.01 1.02 1.03 1.04 1.05 1.06 1.07 1.08 1.09 1.10 1.11 1.12 1.13 1.14 1.15 1.16 1.17 1.18 1.19 1.20 1.21
（r = 0.414, P<0.005）
bias vs lp(a)-pr 0.10 0.05 0.00 0.0 (0.05) (0.10) (0.15) 20.0 40.0 60.0 80.0
脯氨酸可以解离Lp(a)与其他脂蛋白的非共价键结合
• Lp(a)可与 脂蛋白发生非共价键结合 • 此种结合不能被超速离心完全解离 • 脯氨酸可以消除Lp(a)与其他脂蛋白的非共价结合
2.0
1.5
1.0
0.5 0.5 1.0 1.5 DCM HDLC (m m ol/L) 2.0 2.5
超速离心HPLC法测定血清HDLC和LDLC的精密度
血清 平均值 (mmol/L) HDLC LDLC 平均批内CV(%) HDLC LDLC 总CV (%) HDLC LDLC
1 2 3
1.342 2.202 1.292
参考方法
• 超速离心中的定量操作困难、繁琐，样品量大
• 部分Lp(a)在HDL密度范围内，造成HDL测定偏差
血清脂蛋白的密度分布
118
LDL
98
78
58
38
HDL
VLDL Lp(a)
18
(2) 0.95 0.96 0.97 0.98 0.99 1.00 1.01 1.02 1.03 1.04 1.05 1.06 1.07 1.08 1.09 1.10 1.11 1.12 1.13 1.14 1.15 1.16 1.17 1.18 1.19 1.20 1.21
超速离心-高效液相色谱测定血清高密度脂蛋白
和低密度脂蛋白胆固醇：一种候选参考方法
董军
国汉邦
陈文祥
卫生部老年医学研究所
HDL-C 和LDL-C准确测定
必要性
• HDL-C降低 和LDL-C升高，是明确的心血管病独立危险因素
• 心血管病防治工作需要准确的HDL-C和LDL-C测定结果
• 建立和保证HDL-C和LDL-C常规测定结果的准确性需要 可靠的参考方法
-定量法存在的问题
• 样品量大(5 mL)，其应用受到可得样品量限制 • LDL和HDL的分离采用化学沉淀法，影响因素较多 • 样品制备需多部手工容量操作，费时，技术要求高
• 受超速离心转头品种的限制，每次分析最多18 个样品
• 由于脂蛋白的不稳定性，样品制备过程（约需24-28小时）
本身造成HDL-C和LDL-C的变化
（r = -0.232, P>0.05）
4.0
À -DCM) ¬ ë HDL-C (³
2.0 0.0 -2.0 -4.0 -6.0
Lp(a) (mg/dl)
0
20
40
60
80
100
方法原理
• 用ME使 Lp(a) 解离为游离apo(a)和Lp(a)[Lp(a-)] • 用脯氨酸解离Lp(a)或apo(a)与脂蛋白的可能非共价键结合 • 1.063密度下超速离心，将HDL（BF1.063）与其他脂蛋白分离
样品溶液中ME浓度对1.063密度下超速离心BFC的影响
1.6
BFC (mmol/L)
1.5
1.4
1.3 0.00
0.02
0.04
0.06
0.08
0.10
ME (mol/L)
ME 解离Lp(a)
有效性
• 取来自不同个体的血清49 份 • 在1.063背景密度及ME（0.05 mol/L）存在和不存在下 超速离心，测定BFC（BFC1.063ME(+)和BFC1.063ME(-)） • 用免疫比浊法测定Lp(a)质量
BFC1.063ME(-)与BFC1.063ME(+)之差与HDLC的关系
( r=0.093,)
0.30
BFC1.063-BFC1.063ME (mmol/L)
0.25 0.20 0.15 0.10 0.05 0.00 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
BFC1.063ME
BFC1.063ME(+)与 HDLCDCM之差与Lp(a)的关系
Vortex, 5min
200ul supernatant dry down for chromatography
高效液相色谱分离胆固醇和6-氯豆甾醇
超速离心法HDLC(BFC1.063ME(+))与 HDLC DCM的关系 (r = 0.998)
2.5
· HDLC (m m ol/L) Ä ¨ ë Ð Ù À ¬ Ë ³
Lp(a)
LDL-apo(a)复合体
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• Lp(a)是二硫键连接的LDL-apo(a)复和体，还原剂
可使Lp(a)解离为LDL[Lp(a-)]和apo(a).
• Lp(a-)密度与LDL相近，或略小于LDL.
• 若能建立条件，使Lp(a)解离，又不改变HDL的密度
性质，则可实现HDL的超速离心分离.
密度液II: 含0.1脯氨酸和0.05M ME的溴化钠溶液，调节溴 化钠浓度，使密度为1.0666
(两种密度液（0.8 ml）与血清（0.05 ml）混合
后分别给出背景密度1.006 g/ml和1.063 g/ml)
标准溶液和内标溶液配制:
胆固醇乙醇溶液: 浓度 0.646, 1.293, 2.586 , 5.172 , 7.758 mmol/L 豆甾醇乙醇溶液: 浓度5.17 mmol/L，作内标溶液
超速离心分离脂蛋白组分
样品制备: 用稀释器的稀释功能加入血清样品(体积为0.05ml)和 稀释剂（密度液, 体积为0.8 ml)
超速离心条件:
离心管切割:
20℃, 23000 rpm, 离心18.5 h
用离心管切割器在离心管中液体的中间位置切割离心管，取下部
离心管，内含1.006 g/ml背景密度下的BF（BF1.006）和1.063 g/ml 背景密度及ME存在下的BF（BF1.063），进行胆固醇分析 HDLC = BFC1.063 LDLC = BFC1.006 - BFC1.063
高效液相色谱测定胆固醇 I
• 将内含不同BF的下部离心管，置10-ml具盖试管中
• 标准溶液0.05 ml，用0.5 ml乙醇冲入10-ml具盖试管中 • 向各试管中加乙醇-8.9 mol/L氢氧化钾（9:1）4 ml • 各管加内标0.05 ml，用0.5 ml乙醇冲入10-ml具盖试管中 • 水平式振荡器振荡20 min
• • • • 分离过程影响因素少 所需样品量小（0.1 ml），且一次可分析50个样品 用稀释器代替手工容量操作, 操作简便，精密度良好
可以测定脂蛋白亚类
本法可望用作HDLC和LDLC参考方法
美国疾病控制与预防中心(CDC)
定量法
D=1.006 超速离心分离极低密度脂蛋白（VLDL），
制备底部组分（BF）( 包括IDL, LDL, HDL和Lp(a)等） 用肝素-锰离子试剂沉淀BF中的脂蛋白，制备HDL组分
分别用AK胆固醇参考方法测定BF 胆固醇(BFC)和HDLC，
自BFC中减去HDLC得LDL-C (包括IDL和Lp(a))
2.897 2.778 4.148
0.67 0.60 0.91
0.48 0.78 0.45
0.96 1.01 1.73
1.12 0.92 0.65
4
0.880
2.874
1.21
0.68
2.07
0.82
HDLC和LDLC准确测定方法
• 用超速离心法分离脂蛋白，所分离的脂蛋白与应用
最广泛的脂蛋白定义一致，HDL不受Lp(a)污染
在d =1.150背景密度下试验脯氨酸的作用:
• 在ME存在下，无脯氨酸时约10％的Lp(a)免疫原性分布在顶部 • 在ME存在下，含脯氨酸时顶部组分中无Lp(a)免疫原 性 • 提示血清经ME作用后，部分游离apo(a)仍与某些脂蛋白以
非二硫键形式结合，这种结合可被脯氨酸解离
脯氨酸存在下BFC1.063ME(+)与 HDLCDCM之差与Lp(a)的关系
• 用DCM测定HDLC（HDLCDCM）
BFC1.063ME(-)与BFC1.063ME(+)之差与Lp(a)的关系
(r=0.848)
0.30
BFC1.063-BFC1.063ME (m m ol/L)
0.25 0.20 0.15 0.10 0.05 0.00 0 10 20 30 40 50 60 70 Lp(a) (m g/dl)