生物化学实验技术与方法
00 生物化学实验--常用生物化学实验技术及原理-比色分析技术
比色分析技术分光光度法是利用单色器（主要是棱镜）获得单色光来测定物质对光吸收能力的方法。
物质对不同波长的光波具有选择吸收的特性，分光光度法就是基于物质的这种特性而建立起来的分析方法，它是光谱分析技术中最基本和最常用的方法，因其具有灵敏、准确、快速、简便、选择性好等特点而被广泛应用。
一、比色分析的基本原理比色分析技术是利用物质对光的吸收作用来对物质进行定性或定量分析的技术。
分光光度法是光谱分析技术中最常用的一种，应用最多的是紫外 - 可见光分光光度法。
（一）吸光度与透光度当一束光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部分光被吸收，另有一部分光透过溶液。
设入射光强度为I 0 ，透射光强度为I ，I 和I 0 的比值称为透光度（ transmittance ，T ），即T ＝，其数值小于 1 。
T 与 100 的乘积称为百分透光度，以 %T 表示。
透光度的负对数称为吸光度 (absorbance ， A) 。
其表达式为：A ＝－LgT ＝－Lg ＝Lg（二） Lambert-Beer 定律Lambert-Beer 定律指出当一束单色的辐射能通过介质或溶液后，有一部分被吸收，其辐射能的吸收与溶液中吸收物质的浓度和溶液厚度的乘积成正比。
Lambert-Beer 定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体。
Lambert-Beer 定律是描述溶液吸光度同溶液浓度和溶液液层厚度之间关系的基本定律，该定律是分光分析的理论基础。
其表达式为：A ＝KLC式中，A ——吸光度；K ——吸光系数；L ——溶液厚度，称为光径；C ——溶液浓度。
根据 Lambert-Beer 定律，当液层厚度单位为 cm ，浓度单位为 mol/L 时，吸光系数K 称为摩尔吸光系数（ε）。
ε的意义是：当液层厚度为 l cm ，物质浓度为 l mol/L 时，在特定波长下的吸光度值。
ε是物质的特征性常数。
在一定条件（入射光波长、温度等）下，特定物质的ε不变，这是分光光度法对物质进行定性的基础。
医学生物化学实验技术
生物化学实验在医学领域应
06
用
临床诊断中生物化学实验应用
生物标志物检测
利用生物化学实验技术检测血液 、尿液等样本中的生物标志物， 如肿瘤标志物、心肌损伤标志物 等，为临床诊断提供重要依据。
酶活性测定
通过测定酶活性的变化，了解组 织器官的功能状态，如肝功能检
查中的转氨酶测定等。
代谢物分析
分析体内代谢产物的含量和比例 ，如血糖、血脂等，以评估机体
03 免疫学研究方法
利用抗原-抗体反应研究
蛋白质在免疫应答中的作
用。
02 细胞生物学研究方法
通过观察蛋白质在细胞内 的定位、运输和功能来研 究其作用机制。
04 生物信息学研究方法
利用生物信息学技术对蛋
白质序列、结构和功能进
行预测和分析。
04
酶学相关实验技术
酶活力测定方法
01 分光光度法
通过测定酶促反应过程中吸光度的变化，计算酶 活力大小。
常见实验方法与原理
光谱技术
色谱技术
电泳技术
离心技术
免疫技术
利用物质对光的吸收、 发射或散射等性质，对 生物分子进行结构分析 和功能研究，如紫外-可 见光谱、红外光谱、荧 光光谱等。
利用物质在固定相和流 动相之间的分配平衡， 对生物分子进行分离、 纯化和鉴定，如薄层色 谱、气相色谱、高效液 相色谱等。
基因表达调控机制研究方法
转录水平调控研究
通过基因敲除、突变分析、染色质免 疫共沉淀等技术，研究转录因子对基 因表达的调控作用。
表观遗传学调控研究
通过DNA甲基化、组蛋白修饰等表观 遗传学手段，分析基因表达的长期调 控机制。
翻译水平调控研究
利用核糖体分析、mRNA稳定性测定 等方法，探讨翻译过程对基因表达的 调控机制。
生物化学实验原理与方法
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2020/11/26
生物化学实验原理与方法
二、有机溶剂沉淀法
n 原理：有机溶剂对许多溶于水的小分子生化物质以及核酸、 多糖、蛋白质等生物大分子都能发生沉淀作用。有机溶剂 的沉淀作用主要是降低溶液的介电常数从而 增强分子之 间的相互作用，使其溶解度降低。对于具有表面水层的生 物大分子来说，有机溶剂可破坏溶质分子表面的水膜，使 这些大分子脱水而相互聚集析出。不同溶质要求不同浓度 的有机溶剂，因此可用有机溶剂进行分步沉淀。
n 提取是在分离纯化前期，将样品研磨，把被破碎的细胞置于一定的溶剂（提 取液）中，使某一类分子目的物释放到提取液中的过程。提取液应具备的条 件：对有效成分溶解度大，破坏作用小；对杂质溶解度小或不溶解；来源广 泛、价格低廉、操作安全等。
n 生物分子可以分为生物大分子和生物小分子。生物小分子的结构由较强的共 价键决定；生物大分子中除共价键外，还含有较弱的共价键和次级键，故需 温和的条件才能保证生物大分子的活性不被破坏。因此，这两类生物分子的 提取液成分和操作条件差别很大。
n 1、生物小分子的提取 n 2、生物大分子的提取
蛋白质和酶的提取 核酸的提取
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生物化学实验原理与方法
溶剂提取法
n 原理:利用溶剂的溶解作用把所需物质从细胞中转移出来 n 影响溶剂提取效率的因素（影响溶解度的的因素）
1、溶剂的性质：（根据相似相溶原理） 2、离子强度：离子强度是影响物质溶解度的主要因素，但离子强度 对不同物质溶解度的影响不同，如高离子强度下DNA-核蛋白溶解度增 加，而低离子强度下RNA-核蛋白溶解度增加；绝大多数蛋白质和酶， 在稀盐溶液中溶解度增加（盐溶）。 3、PH值：溶剂的PH值影响溶质分子的解离状态，离子状态的物质， 不能是阳离子还是阴离子都易溶于水，而非离子状态的物质易溶于有 机溶剂。 4、温度：温度的升高可以增加物质的溶解度。 5、去垢剂：去垢剂是一类既有亲水基又有疏水基的物质，可以分为 阴离子、阳离子和中性去垢剂等，如SDS，Tween20，Triton X-100。
生物化学的实验技术有哪些
生物化学的实验技术有哪些生物化学是一门研究生物体化学组成和生命过程中化学变化的学科，实验技术在生物化学的研究中起着至关重要的作用。
以下为您介绍一些常见的生物化学实验技术。
一、分光光度法分光光度法是一种基于物质对光的吸收特性来定量分析物质浓度的方法。
在生物化学中，常用于测定蛋白质、核酸、酶等生物大分子的浓度。
例如，通过测量蛋白质在 280nm 处的吸光度，可以估算蛋白质的浓度。
分光光度法操作简便、快速，且灵敏度较高。
二、电泳技术电泳是指带电粒子在电场中向与其所带电荷相反的电极移动的现象。
在生物化学中，常用的电泳技术有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
琼脂糖凝胶电泳常用于分离和分析 DNA 片段，根据 DNA 片段的大小不同，在凝胶中移动的速度不同，从而实现分离。
聚丙烯酰胺凝胶电泳则常用于分离蛋白质，能够分辨分子量差异较小的蛋白质。
三、层析技术层析技术是利用混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，从而实现分离的方法。
常见的层析技术有凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。
凝胶过滤层析根据分子大小进行分离，大分子先流出，小分子后流出。
离子交换层析基于分子所带电荷的不同来分离物质。
亲和层析则利用生物分子之间的特异性亲和力进行分离，具有很高的选择性。
四、离心技术离心是利用离心机旋转产生的离心力，使不同密度、大小的颗粒分离的技术。
在生物化学实验中，常用于分离细胞器、细胞组分、蛋白质复合物等。
差速离心通过逐渐提高离心速度，分步沉淀不同大小的颗粒。
密度梯度离心则是在离心管中形成密度梯度，使不同密度的颗粒在相应的密度区带中沉降，从而实现分离。
五、PCR 技术（聚合酶链式反应）PCR 技术是一种用于扩增特定 DNA 片段的分子生物学技术。
通过高温变性、低温退火和适温延伸的循环过程，使 DNA 片段呈指数级扩增。
PCR 技术在基因诊断、基因克隆、基因突变检测等方面有着广泛的应用。
六、酶联免疫吸附测定（ELISA）ELISA 是一种利用抗原抗体特异性结合进行检测的技术。
生物化学与分子生物学实验技术
生物化学与分子生物学实验技术生物化学与分子生物学实验技术是现代生物科学研究中不可或缺的重要工具。
它们通过一系列的实验技术和方法，帮助研究者深入了解生物大分子的结构、功能以及生物分子之间的相互作用。
本文将重点介绍生物化学与分子生物学实验技术的一些常用方法和应用。
一、蛋白质纯化技术蛋白质是生物体内最重要的大分子之一，其功能多种多样，参与了生物体内的各种生命活动。
而蛋白质的研究离不开纯化技术。
目前常用的蛋白质纯化方法包括离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析和透析等。
这些方法可以根据蛋白质的特性和目的进行选择，从而获得高纯度的蛋白质样品，为后续的分析和研究提供了可靠的基础。
二、核酸提取与分离技术核酸是生物体内信息传递和遗传的基础分子，对于研究生物体的基因组结构和功能起着重要作用。
核酸提取与分离技术是研究核酸的关键步骤。
常用的核酸提取方法包括酚-氯仿法、硅胶柱法和磁珠法等。
通过这些方法，可以从不同来源的生物样品中提取出高纯度的DNA或RNA，为进一步的PCR扩增、酶切、测序等实验提供可靠的样本。
三、蛋白质电泳技术蛋白质电泳是一种常用的蛋白质分析方法，可以根据蛋白质的分子量和电荷进行分离和鉴定。
常见的蛋白质电泳方法包括SDS-PAGE和二维电泳。
其中，SDS-PAGE通过蛋白质与SDS（十二烷基硫酸钠）的结合，使蛋白质带负电荷，从而根据蛋白质的分子量进行分离；而二维电泳则结合了蛋白质的分子量和等电点，可以更精确地分离复杂的蛋白质混合物。
四、PCR技术PCR技术（聚合酶链式反应）是一种在体外扩增DNA片段的技术，其原理基于DNA的双链结构和DNA聚合酶的酶活性。
通过PCR技术，可以迅速扩增出目标DNA片段，并进行后续的测序、克隆、基因组分析等实验。
PCR技术具有高度灵敏性和特异性，已成为现代分子生物学研究中的重要手段。
五、基因测序技术基因测序是研究基因组结构和功能的重要方法。
随着测序技术的不断发展，高通量测序技术（Next Generation Sequencing，NGS）已成为目前最常用的基因测序方法之一。
常见的生物化学实验方法
常见的生物化学实验方法生物化学实验是研究生物分子结构、功能和相互作用的重要手段，广泛应用于生物医学研究、药物开发和环境保护等领域。
本文将介绍一些常见的生物化学实验方法。
一、色谱技术色谱技术是一种分离和分析物质的方法，根据分子的化学性质和大小差异，将混合物分离成各个组分。
常见的色谱技术包括气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和薄层色谱（TLC）等。
在生物化学实验中，色谱技术常用于对生物样品中的分子进行纯化和分析。
例如，气相色谱可用于分析氨基酸和脂肪酸等小分子化合物，液相色谱则可以用于分离蛋白质、核酸和多糖等生物大分子。
二、电泳技术电泳技术是利用电场作用下物质的电荷和大小差异，将混合物分离成各个组分的方法。
常见的电泳技术包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和凝胶过滤电泳等。
在生物化学实验中，电泳技术常用于分离和检测蛋白质和核酸等生物大分子。
例如，聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于分离和测定蛋白质分子量，SDS-PAGE则可以用于检测蛋白质的纯度。
三、质谱技术质谱技术是利用质量分析仪器对物质的质量和结构进行分析的方法。
常见的质谱技术包括质谱仪、飞行时间质谱（TOF-MS）和液相色谱质谱联用（LC-MS）等。
在生物化学实验中，质谱技术常用于鉴定和定量生物分子。
例如，利用质谱仪可以对蛋白质进行鉴定，通过测定样品中蛋白质的质量和碎片离子的质量谱图，确定蛋白质的氨基酸序列。
四、核酸杂交技术核酸杂交技术是利用互补的DNA或RNA序列进行结合，从而检测目标序列的方法。
常见的核酸杂交技术包括Southern blot、Northernblot和in situ hybridization等。
在生物化学实验中，核酸杂交技术常用于检测和定量特定DNA或RNA序列的存在。
例如，Southern blot可用于检测DNA片段在基因组中的分布和拷贝数，Northern blot则可用于检测特定mRNA的表达水平。
生物化学中的新技术和新方法
生物化学中的新技术和新方法生物化学是一门将生命科学和化学相结合的学科，它研究诸如蛋白质、核酸、碳水化合物等物质对生物体的作用以及相关代谢途径等问题。
随着科技的不断进步，生物化学领域也不断涌现出新技术和新方法，其中一些可以有效提高生物化学研究的效率和准确性。
下面我们将探讨几种新兴的生物化学技术和方法。
一、质谱技术质谱技术广泛应用于蛋白质和代谢产物的鉴定和定量。
质谱技术基于电离和质量分析原理，能够快速、准确地分离和识别各种分子。
通过质谱技术，研究人员可以确定蛋白质的氨基酸序列、研究蛋白质结构和相互作用等。
由于质谱技术灵敏度高、分析速度快，且可以与其他技术结合使用，所以在生物医学研究和临床分析中得到广泛应用。
二、基因编辑技术基因编辑技术包括CRISPR-Cas9和TALEN等技术，可以定向改变DNA序列，从而实现人工修改基因。
通过基因编辑技术，可以解决许多基因缺陷导致的疾病。
例如，糖尿病和癌症等疾病均与个体内基因异常相关。
基因编辑技术虽然仍处于早期阶段，但被认为是治疗遗传疾病的一种有前途的方法。
三、膜蛋白晶体学膜蛋白晶体学为第三代生物晶体学，可用于研究膜蛋白结构。
膜蛋白是细胞膜的主要组成部分，对药物的传输以及膜跨越的化学反应十分重要。
然而，膜蛋白的结构一直难以解析。
膜蛋白晶体学通过利用一些特殊的膜蛋白结构和表达技术，成功地解析了多个膜蛋白的结构。
这对于理解膜蛋白的结构和功能，以及药物的研发都有重要的意义。
四、细胞成像技术细胞成像技术通过可视化方法来观察和研究细胞的动态过程，可以提高对细胞的理解。
高分辨细胞成像技术比如荧光显微镜、双光子显微镜和结构光成像技术等，在生物医学研究和药物开发领域都有广泛的应用。
例如，荧光蛋白标记的细胞可以用于疾病的诊断和监测。
综上所述，随着生物化学科技的快速发展，生物化学研究领域涌现出了许多新技术和新方法。
这些技术和方法有望为生物医学研究提供更快、更准确、更有效的方法，并为人类的健康和生命带来更多的福祉。
生物化学实验技术
生物化学实验技术生物化学实验技术是一门研究生物分子结构和功能的学科，主要运用化学方法和技术手段来研究生物大分子的组成、结构、功能和转化过程。
本文将介绍几种常用的生物化学实验技术和其应用。
1. 蛋白质电泳蛋白质电泳是一种常用的生物化学实验技术，用于分离和定量分析蛋白质混合物。
常见的蛋白质电泳方法包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和二维凝胶电泳。
SDS-PAGE通过蛋白质与阴离子表面活性剂SDS结合，并在电场中沿凝胶分离，根据蛋白质的分子量进行定量分析。
二维凝胶电泳则结合了分子量和等电点的信息，实现更高分辨率的分离。
2. DNA测序技术DNA测序技术是生物化学实验中的重要手段，用于确定DNA序列。
目前常用的DNA测序技术包括链终止法（Sanger测序）和高通量测序（Next Generation Sequencing）。
链终止法通过使用缺少3'-OH基团的硫酸二酯链终止剂和核酸聚酶合成短链DNA，并借助电泳分离完成测序。
高通量测序则通过将DNA分子串联成DNA文库，并应用测序仪进行高通量测序，从而大大提高测序效率和准确性。
3. 酶联免疫吸附实验（ELISA）ELISA是一种常见的生物化学免疫学实验技术，用于检测目标蛋白质的存在和浓度。
ELISA基于酶与底物的反应产生可检测信号的原理，可以通过颜色变化或发光信号来定量分析蛋白质。
ELISA技术广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物筛选等领域。
4. 质谱分析技术质谱分析技术是一种能够确定化合物分子量和结构的重要手段。
生物化学实验中常用的质谱分析技术包括质谱仪、气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）、液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）等。
质谱分析技术在药物研发、代谢组学和蛋白质组学等领域有着广泛的应用。
5. 核磁共振技术核磁共振（NMR）技术是一种用于研究物质结构和动力学的强大工具。
生物化学实验中常用的核磁共振技术包括核磁共振波谱（NMR spectroscopy）和核磁共振成像（NMR imaging）。
生物化学检验技术实验报告
生物化学检验技术实验报告一、实验目的1. 熟悉生物化学检验的基本原理和实验操作步骤。
2. 掌握常用生物化学检验技术，如光谱分析、电泳分析、层析分析、酶学分析等。
3. 提高实验操作能力和分析问题的能力。
二、实验原理生物化学检验技术是研究人体健康和疾病时的生物化学过程，通过测定组织、体液的成分，揭示疾病变化和药物治疗对机体生物化学过程和组织、体液成分的影响，以提供疾病诊断、病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防等信息的一门学科。
本实验将通过进行一系列生物化学检验技术实验，验证相关原理并分析实验结果。
三、实验材料与仪器1. 材料：淀粉酶、淀粉、碘液、不同温度和pH值的缓冲溶液等。
2. 仪器：分光光度计、电泳仪、层析柱、酶标仪、显微镜等。
四、实验方法与步骤1. 光谱分析技术实验：(1) 准备标准溶液：配制不同浓度的淀粉酶溶液。
(2) 测定吸光度：使用分光光度计，在特定波长下测定标准溶液的吸光度。
(3) 绘制标准曲线：以淀粉酶浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
(4) 样品测定：将待测样品加入分光光度计，测定其吸光度，并从标准曲线中计算出样品中淀粉酶的浓度。
2. 电泳分析技术实验：(1) 制备样品：将淀粉酶溶液与适当比例的蛋白质混合，作为样品。
(2) 进行电泳：将样品加入电泳仪，应用适当电压进行电泳。
(3) 观察并记录结果：观察电泳后的条带分布，记录相关数据。
3. 层析分析技术实验：(1) 准备层析柱：选用适当固定相和流动相，填充层析柱。
(2) 样品进样：将淀粉酶溶液加入层析柱，进行层析分离。
(3) 检测并记录结果：检测层析后的物质分布，记录相关数据。
4. 酶学分析技术实验：(1) 制备酶标板：将淀粉酶溶液分别加入酶标板的小孔中。
(2) 添加底物：向每个小孔中加入适量的淀粉溶液。
(3) 孵育：将酶标板放入恒温箱中，孵育一定时间。
(4) 检测并记录结果：使用酶标仪测定每个小孔的吸光度，记录相关数据。
生物化学实验技术
生物化学实验技术生物化学实验技术是现代生物学研究中不可或缺的重要手段之一。
通过利用各种生物化学实验技术，科研人员可以深入探索生物体内的分子机制，揭示生命活动的规律。
本文将介绍几种常见的生物化学实验技术，包括蛋白质表达与纯化、核酸提取与分析、酶活性检测等内容，帮助读者更好地理解和运用这些技术。
一、蛋白质表达与纯化在生物化学研究中，蛋白质是研究的重点之一。
蛋白质表达与纯化技术是研究蛋白质结构和功能的基础。
常用的表达系统包括原核表达系统和真核表达系统。
原核表达系统如大肠杆菌表达系统，适用于表达小分子量的蛋白质；而真核表达系统如哺乳动物细胞表达系统，则适用于表达复杂的蛋白质。
在蛋白质表达后，需要进行蛋白质纯化，常用的纯化方法包括亲和层析、离心超滤、离子交换层析等。
二、核酸提取与分析核酸是细胞内的遗传物质，也是生物体内的重要分子之一。
核酸提取与分析技术是研究生物学和遗传学的重要手段。
核酸提取方法有多种，如酚氯仿法、硅胶柱法、磁珠法等。
核酸分析方法包括凝胶电泳、PCR、酶切等。
通过核酸提取与分析技术，科研人员可以研究DNA序列、RNA表达等重要生物学问题。
三、酶活性检测酶是一类在生物体内发挥催化作用的蛋白质，具有重要的生物学功能。
酶活性检测是评价酶的功能和活性的重要方法。
常见的酶活性检测方法包括光谱法、比色法、荧光法等。
通过这些方法，可以准确地测定酶的活性，研究酶的底物特异性、酶促反应动力学等问题。
总结生物化学实验技术在现代生物学研究中起着至关重要的作用。
通过蛋白质表达与纯化、核酸提取与分析、酶活性检测等技术，科研人员可以深入研究生物体内的分子机制，揭示生命活动的规律。
希望本文介绍的几种常见的生物化学实验技术对读者有所帮助，激发读者对生物化学实验技术的兴趣，进一步探索生物学的奥秘。
生物化学的研究方法和实验技术
生物化学的研究方法和实验技术生物化学是研究生物系统中生化过程及其调控的一门学科。
在生物化学领域，研究方法和实验技术的选择对于科学研究的准确性和可靠性至关重要。
本文将介绍几种常见的生物化学研究方法和实验技术。
一、色谱法色谱法是生物化学研究中常用的一种分离和分析技术，其原理是利用样品的化学性质差异通过色谱柱将其分离。
1. 气相色谱法：适用于挥发性或可热分解的物质的分离和分析，常用于分析气体或液体样品中的有机化合物。
2. 液相色谱法：适用于研究不挥发或热不稳定的物质，常用于分析生物体内的有机物、无机物及大分子化合物等。
二、电泳法电泳法是一种将带电物质根据其电荷、分子量或带电状态的不同进行分离的方法。
1. 纸上电泳法：适用于分离和分析小分子有机化合物、氨基酸和核苷酸等。
2. 凝胶电泳法：包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳等，适用于分离和分析大分子化合物，如蛋白质、核酸等。
三、质谱法质谱法是一种通过测量样品中的化合物的离子质量谱来研究其分子结构和组成的方法。
1. 质谱仪：通过样品分子的电离和分析质谱仪中的离子质量谱图，可以确定样品的分子量和结构。
2. 毛细管电泳-质谱联用技术：结合毛细管电泳和质谱仪的优点，可以同时进行分离和分析，适用于复杂样品的分析。
四、核磁共振法核磁共振法通过测量核自旋在磁场中的共振吸收，研究物质的结构和性质。
1. 核磁共振波谱仪：通过测量样品中核自旋的共振吸收峰，可以确定样品的结构和成分。
2. 核磁共振成像技术：将核磁共振波谱仪的原理应用于医学影像学，可以生成人体内部组织和器官的图像。
五、同位素标记法同位素标记法是利用同位素的特性来追踪和研究生物化学过程的一种方法。
1. 放射性同位素标记法：通过将放射性同位素标记到分子中，可以追踪其在生物体内的代谢和转运过程。
2. 稳定同位素标记法：利用稳定同位素在自然界中含量相对稳定的特点，研究生物体内元素的代谢过程。
以上介绍的是生物化学研究中常用的几种方法和技术，每种方法和技术都有自己的特点和适用范围。
化学生物学的实验技术
化学生物学的实验技术化学生物学是一门融合了化学和生物学知识的交叉学科，通过研究生物体内化学反应的规律性和机制，揭示生物现象背后的化学过程。
在化学生物学研究中，实验技术是至关重要的工具。
本文将介绍化学生物学领域常用的实验技术，包括分子生物学实验技术、生物化学实验技术和细胞生物学实验技术。
一、分子生物学实验技术1. PCR技术PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种在体外复制DNA片段的技术。
通过PCR技术，可以快速扩增DNA序列，用于基因克隆、DNA测序、基因变异分析等领域。
PCR技术是分子生物学实验中常用的方法之一。
2. 基因克隆技术基因克隆是将DNA片段插入载体DNA中，并在细胞中复制的过程。
通过基因克隆技术，科研人员可以研究基因的功能、调控机制以及相关疾病的发生机制。
3. 基因编辑技术基因编辑技术是指通过特定的工具，如CRISPR/Cas9系统，对目标基因进行精准编辑。
这项技术在分子生物学研究和基因治疗领域有着广泛的应用。
二、生物化学实验技术1. 蛋白质纯化技术蛋白质纯化是生物化学实验中的重要环节，通过不同的分离方法，如柱层析、电泳等，可以获得高纯度的蛋白质样品，用于研究蛋白质的结构和功能。
2. 激酶活性测定技术激酶是生物体内的一类重要酶类，参与调控细胞信号传导。
通过测定激酶的活性，可以了解其在细胞信号通路中的功能和作用机制，为药物研发和疾病治疗提供依据。
三、细胞生物学实验技术1. 细胞培养技术细胞培养是细胞生物学的基础实验技术之一，通过在细胞培养基中培养细胞系，可以进行各种细胞学实验，如细胞增殖、细胞凋亡等研究。
2. 免疫荧光染色技术免疫荧光染色技术是在细胞或组织中标记特定蛋白质或细胞器的方法，通过荧光显微镜观察，可以了解细胞内蛋白的定位和表达水平，为细胞功能研究提供依据。
综上所述，化学生物学的实验技术覆盖了分子生物学、生物化学和细胞生物学等多个学科领域，这些实验技术的发展与应用推动了化学生物学的研究进展，为新药研发、疾病治疗和生命科学领域的发展做出重要贡献。
常用的生物化学实验方法
常用的生物化学实验方法
一、蛋白质实验：
1、放射免疫分析：是一种应用放射性标记物，用易位法来研究物质在生物体中的含量或位置的分析技术。
2、免疫结合的沉淀反应：通过将靶蛋白质与抗原特异性抗体结合并沉淀，在溶解液中分离和定量靶蛋白质的重要方法。
3、Blood-Brain Barriers Permeability：使用半乳糖或单糖的报告系统检测血脑屏障的渗透性，可以预测视网膜色素上皮毛细血管的渗透性调节作用。
4、 Western blotting：通过将细胞中表达的蛋白质组分整合到一起，电泳后标记抗原，并通过免疫检测来检测其表达情况和定量的技术。
5、 Northern blotting：使用报告物和抗体来检测RNA分子在细胞中分布，并用于检测RNA的表达水平及分析调控机制的重要技术。
二、细胞实验：
1、细胞培养：将活细胞从器官细胞中分离，学习细胞的结构、功能及调控原理的一种重要实验方法。
2、细胞归性实验：通过把特定细胞分离并重新植入到胚胎中，分析器官结构中各细胞归性状态，研究细胞及组织的发育调控机制的实验。
3、生物因子实验：一种研究因子介导的细胞凋亡和细胞分化、细胞迁移的行为的生物实验技术。
4、细胞膜荧光素酶报告系统：结合细胞膜转运蛋白的荧光素酶报告系统，可以在实验条件下测定细胞的膜质电位和其余两类离子通道。
5、FACS 实验：通过测定细胞表面抗原，进行一个抗原一个细胞的分类，从而对细胞作出正确评估和定位，分析细胞状态变化及其相关表型的技术。
现代生物化学实验技术
现代生物化学实验技术一、引言现代生物化学实验技术是生物化学研究领域的重要组成部分，为生物化学研究提供了强大的实验工具和手段。
本文将重点介绍几种常用的现代生物化学实验技术，包括蛋白质分离与纯化技术、核酸分离与纯化技术、酶活性测定技术以及基因克隆技术。
二、蛋白质分离与纯化技术蛋白质是生物体内最重要的大分子有机物之一，其分离与纯化是生物化学研究的关键步骤。
常用的蛋白质分离与纯化技术包括电泳分离技术、层析分离技术和亲和纯化技术。
1. 电泳分离技术电泳分离技术是利用蛋白质在电场中的迁移性差异进行分离的方法。
常用的电泳分离技术包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-PAGE电泳和等电点聚焦电泳。
这些技术可以根据蛋白质的分子量、电荷和等电点进行分离和纯化。
2. 层析分离技术层析分离技术是基于溶液中物质在固定相与流动相之间的相互作用力差异进行分离的方法。
常用的层析分离技术包括凝胶过滤层析、离子交换层析和亲和层析。
这些技术可以根据蛋白质的大小、电荷和亲和性进行分离和纯化。
3. 亲和纯化技术亲和纯化技术是利用特定配体与目标蛋白质之间的特异性结合进行分离和纯化的方法。
常用的亲和纯化技术包括金属螯合亲和纯化、抗体亲和纯化和亲和标记纯化。
这些技术可以根据蛋白质与特定配体的亲和性进行分离和纯化。
三、核酸分离与纯化技术核酸是生物体内存储遗传信息的重要分子，其分离与纯化是生物化学研究的另一个关键步骤。
常用的核酸分离与纯化技术包括凝胶电泳、超滤技术和柱层析技术。
1. 凝胶电泳凝胶电泳是利用核酸在电场中的迁移性差异进行分离的方法。
常见的凝胶电泳技术包括琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
这些技术可以根据核酸的大小、电荷和形态进行分离和纯化。
2. 超滤技术超滤技术是利用滤膜的孔径大小选择性地分离不同大小的分子的方法。
常用的超滤技术包括离心超滤和压力超滤。
这些技术可以根据核酸的分子量和形态进行分离和纯化。
3. 柱层析技术柱层析技术是利用固定相与流动相之间的相互作用力差异进行分离的方法。
生物化学实验技术
生物化学实验技术生物化学实验技术是研究生物体内化学成分、代谢和分子机制的重要手段。
它包括了一系列实验技术和方法，用于分离、提取、纯化和分析生物体内的化学组分，以及研究生物化学反应和代谢途径。
本文将介绍几种常用的生物化学实验技术。
一、柱层析法柱层析法是一种广泛应用于生物化学实验的分离和纯化方法。
它通过将混合物溶液在柱子中通过填充有吸附剂的柱子，利用不同成分在吸附剂上的亲和力不同而实现分离。
柱层析法可以根据需要选择不同类型的柱子和吸附剂，如离子交换柱、凝胶过滤柱和逆相柱等。
二、电泳法电泳法是依据生物分子在电场作用下的迁移速率不同而进行分离的方法。
常见的电泳方法包括凝胶电泳和毛细管电泳。
凝胶电泳通过在凝胶中进行分离，根据分子的大小和电荷差异进行分离；毛细管电泳则通过在毛细管中进行分离，具有分离速度快、灵敏度高等优点。
电泳法广泛应用于核酸和蛋白质的分离和定量分析。
三、酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验是一种常用的生物化学检测技术，广泛应用于蛋白质和抗原的定性和定量分析。
它基于特异性抗体与抗原的结合，利用酶标记的抗体或抗原检测目标物质的存在。
ELISA可以用于检测病原体、生物标志物等，具有高灵敏度和高特异性的特点。
四、质谱法质谱法是一种基于物质分子的质量和荷质比的测定方法，广泛应用于生物分子的结构鉴定和定量分析。
质谱法通过将样品中的分子离子化，并通过质谱仪测定离子质量/荷质比，从而获得分析样品的结构信息。
质谱法常用于蛋白质和代谢产物的鉴定和研究。
五、核磁共振（NMR）核磁共振是一种主要用于研究化合物结构和分子间相互作用的无创性分析手段。
核磁共振通过样品中核的磁共振现象，结合外加磁场和射频脉冲的作用，获得相关的谱图。
核磁共振广泛应用于有机化合物和生物分子的结构鉴定、分析和代谢研究。
综上所述，生物化学实验技术是研究生物体内化学成分和代谢过程的重要方法。
柱层析法、电泳法、酶联免疫吸附试验、质谱法和核磁共振等技术在实验中被广泛应用。
核酸生物化学实验技术实验
核酸生物化学实验步骤（一）酵母中RNA的提取及紫外分光光度法测定核酸浓度1．稀碱法提取酵母中RNA实验原理：基于核酸不溶于乙醇。
先用稀碱将酵母细胞裂解，采用酸中和，通过离心去除菌体细胞的大碎片，采用乙醇可将上清液中的RNA沉淀出来。
该方法提取的核酸分子为变性失活的RNA。
操作方法：（1）称取2 g干酵母粉，放入100 mL烧杯中，加入20 mL 的1%氢氧化钠水溶液，搅拌30 min （玻璃棒手动充分搅拌）。
（2）30 min后，向（1）中加入少量乙酸调节pH至中性（切忌调节pH低于3，RNA的等电点2-2.5），试纸检查。
（3）将（2）全部转移至离心管中，3800 rpm离心10 min（最大装液量离心管体积的三分之二，等分两个离心管进行离心）。
弃沉淀（主要是细胞壁等碎片），留上清（含有RNA）。
（4）将上清液转移至干净的100 mL烧杯中，加入15 mL 95%的乙醇，充分混匀，静置10 min。
（此时，大部分RNA沉积于烧杯底部，转移时需要搅动，以免丢失RNA。
因此该步骤也可将上清液直接转移到离心管，静置10 min是必要的）（5）将（4）转移至离心管，3800 rpm离心5 min（一次离心管装不下，分两次离心），弃掉上清液，用95%乙醇重悬，离心洗涤2次，每次95%乙醇用量5 mL。
（6）将洗涤后的样品转移至干净的表面皿（已称重）上，95℃水浴蒸汽干燥（约10 min左右），称重计算干酵母中RNA含量。
干酵母中RNA含量(%)=提取的RNA重量（g）干酵母重量（g）×100%2．紫外吸收法测定提取RNA干粉中核酸含量实验原理：核酸分子在260 nm处具有特异性吸收峰试验方法：（1）称取实验1中提取的RNA干粉20 mg，加入少量0.5 mol/L的氢氧化钠水溶液溶解，然后加入去离子水，用50 mL容量瓶定容，（2）以去离子水做空白，测260 nm处的吸光度（A），计算提取的RNA干粉中核酸含量。
生物化学实验技术与方法
生物化学实验技术与方法生物化学实验技术与方法是生物化学学科中非常重要的一部分，它涉及到生物体内化学反应的研究以及相关的实验操作方法。
通过掌握生物化学实验技术与方法，我们能够更好地理解生物体内的化学反应机制，为生物化学研究的深入开展提供有力的实验支持。
一、光谱分析技术光谱分析技术是生物化学中常用的一种实验手段，主要用于分析物质的组成、结构以及化学变化过程。
常见的光谱分析技术包括紫外可见吸收光谱、红外光谱和质谱等。
紫外可见吸收光谱可用于分析物质的吸收特性，进而推断它们的结构；红外光谱则用于研究物质的分子谐振运动，从而得到物质的结构信息；质谱则是通过对物质进行高能离子化，随后将离子进行质量筛选，最终得到物质的质谱图谱，从而确定物质的分子量和结构。
二、酶动力学实验技术酶动力学实验技术用于研究酶的催化过程和酶动力学参数，对于理解酶的性质和功能具有重要意义。
常见的酶动力学实验技术包括酶活测定、酶底物浓度对酶反应速率的影响、酶的温度和pH值对酶活性的影响等。
通过这些实验技术，我们可以深入了解酶在不同条件下的催化机制，为酶的应用研究提供理论依据和实验指导。
三、电泳技术电泳技术是生物化学中常用的一种分离和检测方法，广泛应用于DNA、蛋白质和核酸等生物大分子的分离、纯化和测定。
根据所用电场的性质，电泳技术可分为凝胶电泳和毛细管电泳。
其中，凝胶电泳是利用凝胶基质来分离生物大分子，其分离效果主要取决于凝胶浓度和凝胶孔径的选择；而毛细管电泳则是利用毛细管对生物大分子进行分离，其分离效果主要取决于毛细管的粗细和表面电荷特性。
四、核磁共振技术核磁共振技术是一种非常重要的生物化学实验手段，广泛应用于生物体内化学物质的结构解析和动力学研究。
通过核磁共振技术，可以获取分子的核磁共振信号，从而得到核磁共振谱图，进而推断出物质的结构和组成。
核磁共振技术在生物化学研究中的应用非常广泛，例如用于蛋白质结构的解析、代谢产物的鉴定等。
综上所述，生物化学实验技术与方法在生物化学研究中起着举足轻重的作用。
生物化学实验技术
生物化学实验技术生物化学是一门研究生物分子及其功能的学科，与其他化学学科相比，它的特点是针对生命体系进行研究。
因此，对生物化学实验技术的需求比较高。
下面我将介绍一些常用的生物化学实验技术。
一、蛋白质电泳蛋白质电泳是一种常见的分离和检测蛋白质的技术，也可以用来鉴定DNA或RNA中所含的蛋白质。
在此技术中，蛋白质通过电荷、分子量或结构等因素分离，在凝胶上形成带状条纹。
根据这些条纹的位置和形态，可以确定样品中蛋白质的数量和品种。
二、反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）RT-PCR是一种用于检测RNA的技术，首先将RNA转录成cDNA，然后进行PCR扩增。
由于RNA不易稳定，在实验过程中需要特别注意RNA的提取和保存，避免样品受到污染。
该技术用于检测病毒等疾病的诊断、基因的表达以及基因突变等多个方面。
三、糖转运实验糖转运实验是一种用于研究细胞膜上的糖转运体的实验。
在糖转运实验中，研究人员可以使用放射性标记的糖分子，测量它们在不同时间内对于细胞膜上的糖转运体的吸收情况。
通过这种方法，可以研究不同的糖转运体的种类和功能，进而研究其在人体内的应用和药物的研发。
四、质谱分析质谱分析是一种利用质谱仪对样品分子进行鉴定和定量的技术。
该技术具有高灵敏度、高精度和高分辨率等优点，广泛应用于生物化学研究和新药研发。
在实验过程中，需要特别注意样品的制备和保存，并使用合适的离子化方法和背景校正方法，以获得准确的分析结果。
五、蛋白质晶体学蛋白质晶体学是研究蛋白质晶体结构的一种技术。
在这个实验中，研究人员将蛋白质结晶，然后使用X射线或中子衍射等方法来研究其结构和功能。
该技术广泛用于药物研发和疾病治疗研究。
综上所述，生物化学实验技术是研究生命体系的重要手段和工具。
这些技术在药物研发、疾病治疗、基因转录等多个方面有着广泛的应用和研究价值。
最后，前景看好的生物化学实验技术在未来必将得到更加广泛和深入的应用。
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生物化学实验技术与方法实验讲义生物化学教研室（2005年9月）目录实验一：糖的薄层分析---------------------------------------2 实验二：高等植物DNA的提取和纯度鉴定------------3 实验三：苯丙氨酸解氨酶的纯化和活性测定-----------5 实验四：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量---------------------------------10实验一糖的薄层层析一．实验目的学习和掌握薄层层析的原理和方法二．实验原理薄层层析是一种微量而快速的层析方法。
该法是把吸附剂或支持剂涂布在玻璃板上成为一薄层，将要分析的样品滴加到薄层上，然后用合适的溶剂进行展开，使样品各个成分分离，然后进行定性鉴定和定量测定。
根据原理的不同薄层层析通常有4种类型：吸附薄层层析，分配薄层层析，离子交换薄层层析和薄层电泳。
本次实验是以硅胶H为吸附剂的薄层层析。
硅胶H是粘性差的纯硅胶；其特性是能用腐蚀性显色剂检测。
三．实验操作1. 硅胶H薄板的制备：注意胶要均匀。
2. 板的处理：薄板的活化：活化后冷却的速度不能过快。
薄板的刮分：径向层析的优点是：样品展层后图谱呈弧形带状，使Rf值相近的化合物也能清楚地分开。
3. 点样：样品为鼠李糖、甘露糖、木糖和葡萄糖。
点样量20-30μl。
注意：点样点的直径小于2mm，点样要少量多次，吹风机风力不能过大。
4. 展层：展层溶剂为：乙酸乙酯：甲醇：乙酸：水=12：3：3：2（体积比），新鲜配制。
5. 显色：显色剂：苯胺-二苯胺-磷酸试剂。
四．结果与讨论1. 根据显色结果，计算Rf值，根据颜色、Rf值判断糖的存在。
2. 哪些因素对薄层层析的结果产生影响？实验二高等植物DNA的提取和纯度鉴定一、实验目的掌握提取真核细胞DNA的一种基本方法，学习紫外吸收法测定DNA的含量和纯度。
二、实验原理高浓度的盐和离子表面活性剂SDS能破坏细胞膜，并能解聚脱氧核糖核蛋白复合物（DNP），使DNA释放出来。
苯酚可使蛋白质变性，蛋白质溶于酚相，DNA则溶于上层水相。
将氯仿与苯酚混合使用，可减少酚相中因水的存在而造成DNA的少量溶解。
95%乙醇可使核酸从水相中沉淀出来，用70%的乙醇洗涤可除去一些盐分，经RNase降解RNA，可得较纯的DNA。
DNA含量与纯度的测定，目前常用紫外吸收法，利用核酸在260nm有吸收峰，根据公式（DNA[ug/ml]=A260×50×稀释倍数）可计算出DNA的浓度。
由于蛋白质在280nm有吸收峰，可根据比值判断DNA纯度：A260/A280〈1.8时，表明蛋白质含量偏高；A260/A280〈1.9时，表明样品较纯；A260/A280〉2.0时，表明RNA 或DNA碎片较多。
三、仪器、试剂和材料1、仪器普通离心机；冰箱；恒温水浴箱；紫外分光光度计；可调整微量取样器；50ml 量筒；2ml烧杯；滴管2、试剂抽提液（2mol/LNaCl-1mmol/LEDTA）；10%SDS；盐饱和苯酚（SS-苯酚）：重蒸苯酚用1mol/Ltris-HCl缓冲液（pH8.0）饱和；氯仿－异戊醇（24：1）；95%乙醇；70%乙醇；TE缓冲液（10mmol/Ltris-HC，1mmol/LEDTA，pH8.0）；RNase3、材料植物材料或丙酮粉四、操作步骤1、DNA的提取（1）将已制备好的丙酮粉转入50ml离心管。
（2）加15ml抽提液及1.5ml10%SDS，搅拌后放入600C恒温水浴2h。
（3）离心（4000r/min，8min，250C），上清夜转入100 ml离心管中。
（4）分别加入一倍体积的SS-苯酚和氯仿－异戊醇，盖上离心管盖，轻轻倒转混匀。
（5）再离心（4000r/min，8min，250C），用干净滴管取上层水相转入50ml 烧杯中。
（6）加入二倍体积预冷的95％乙醇，置冰箱冷冻层0.5-2h。
（7）用玻璃棒将DNA沉淀轻轻捞起，转移至干净的50ml离心管，加入5ml70%乙醇浸泡数分钟，离心后弃去乙醇，管口扣于吸水纸上，吸去残留溶液。
（8）加入4mlTE缓冲液，摇动，使沉淀完全溶解。
（9）加入Rnase液10ul，370C水浴1 h。
（10）重复步骤（4）-（8）。
2、DNA紫外测定以TE作空白调零，在波长260nm和280nm处分别测定样液的吸光值。
五、结果处理1、计算样品液中DNA含量（ug）。
2、分析样品纯度。
六、注意事项离心管中加入SS-苯酚和氯仿－异戊醇后，需轻轻倒转混匀，此时注意动作的力度。
七、思考题1、为什么实验步骤（1）-（5）没有在冰浴条件下进行？2、实验中数次离心，每次离心后应保留哪部分？弃去的部分主要含什么？实验三苯丙氨酸解氨酶的纯化及活性测定一、实验目的掌握纯化酶的基本操作和方法；学习一种常用的酶活力测定法。
二、实验原理苯丙氨酸解氨酶（L-phenylalanine：ammonia lyase，简称PAL；EC4.3.1.5）是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切有关，在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。
PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸，反式肉桂酸在290nm 处有最大吸收值。
若酶的加入量适当，A290升高的速率可在几小时内保持不变，因此通过测定A290升高的速率以测定PAL活力。
规定1h内A290增加0.01为PAL 的一个活力单位。
酶的比活力是指样品中煤毫克蛋白质所含的酶活力单位数。
在实验中将会看到，随着PAL逐步被纯化，其比活力也逐步增加。
在蛋白质溶液中加入一定量的中性盐（如硫酸铵、硫酸钠等）使蛋白质沉淀析出称为盐析。
溶液的盐浓度通常以盐溶液的饱和度表示，饱和溶液称为100%饱和度。
沉淀某一种酶所需的具体浓度，需要经实验确定。
交联葡聚糖凝胶（商品名称为sephadex）是由细菌葡聚糖长链，用交联剂1-氯-2，3-环氧丙烷交联而成。
凝胶商品名后面的G值表示每克干胶吸水量（毫升数）的10倍。
交联度大，网孔小；交联度小，网孔大。
交联度的大小还与凝胶颗粒的机械强度有关，交联度大，机械强度也大（硬胶），在柱层析过程中流速快。
根据需要，选用一定型号的凝胶作柱层析介质（蛋白脱盐一般用G-25或G-50，G-100~G-200分离不同分子质量的蛋白质组分）。
由于被分离物质的分子大小和形状不同，分子质量大的由于不能进入凝胶的网孔中，而沿着颗粒间间隙最先流出柱子；分子质量小的由于进入凝胶网孔中被组阻滞，从而后流出柱子，达到分离的目的。
DEAE纤维素是以天然纤维素为母体联结了二乙基氨基乙基制备而成的。
DEAE纤维素柱层析属于阴离子交换层析中的一种，DEAE纤维素经过处理上柱后，由于静电引力等可吸引在固体相和流动相中的一些阴离子（如OH-、Cl-等）。
蛋白质分子在水溶液中可以作两性解离，控制溶液pH，可使蛋白质分子或成为阴离子，或成为阳离子。
洗脱时，可以用阶段洗脱法（stepwise elution），即先后更换不同离子强度（或pH）的洗脱液；也可以用梯度洗脱法（gradientelution），使洗脱液的pH或离子强度在洗脱过程中产生一个连续的梯度变化。
三、仪器、试剂和材料1、仪器高速冷冻离心机；研钵；恒温水浴；电子天平；双光束分光光度计；刻度试管；烧杯；剪刀；量筒；层析柱；滴管；止水夹2、试剂0.1mol/L 硼酸-硼砂缓冲液（pH8.7）；酶提取液：0.1mol/L硼酸-硼砂缓冲液（含1mmol/LEDTA、20mmol/Lβ-巯基乙醇）；0.6mol/L 苯丙氨酸溶液；6mol/LHCl；固体硫酸铵；0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH8.0，含0.5mmol/LEDTA，2.5%甘油，20mmol/Lβ-巯基乙醇）；SephadexG-25；DEAE纤维素52；标准蛋白质溶液（100ug/ml）：准确称取10mg牛血清白蛋百于烧杯内，用蒸馏水溶解，完全转移到100ml容量瓶内，定容至刻度，混匀；考马斯亮蓝G-250蛋白质染色液：称取10mg考马斯亮蓝G-250，溶于5ml95%乙醇中，加入85%（W/V）磷酸10ml，混匀后即为母液。
用时，按15ml母液加85ml蒸馏水的比例稀释，混匀后过滤既为稀释液。
3、材料供试植物材料四、操作步骤1、酶液提取（1）植物材料1g，剪成小段，加入5倍体积的酶提取液，于冰浴上用研钵研磨。
（2）将已匀浆的酶液，用三层纱布过滤。
滤液转入离心管，10 000r冷冻离心30min。
（3）取离心后的上清夜（酶粗提液），量出其体积，放置冰浴中备用。
2、硫酸铵分级沉淀酶蛋白（1）从酶粗提液中吸出0.5ml，以作后面活力测定用，下余酶液根据实际体积、温度和硫酸铵饱和度用量表（见附录七），算出达到38%饱和度应加入酶液中的硫酸铵量，并称硫酸铵。
（2）将酶液倒入烧杯内，边缓慢搅拌边缓慢加入称好的固体硫酸铵，待全部加完后，再缓慢搅拌10min；然后于10 000r下冷冻离心10min，保留上清夜于烧杯内。
（3）根据硫酸铵饱和度用量表，算出从38%到75%饱和度所需硫酸铵用量。
（4）按上述（2）步同法处理，离心后，弃去上清夜，保留沉淀。
（5）将沉淀溶于1ml酶抽提液中。
3、SephadexG-25层析脱盐（4）凝胶溶涨：称取SephadexG-25 5g，加入适量0.02mol/L磷酸盐缓冲液，在室温下溶涨。
待溶涨平衡后，虹吸去除上清夜中的细小凝胶颗粒，这样处理2~3次。
（5）装柱：固定好层析柱，柱保持垂直，将20ml蒸馏水装入柱内，打开止水夹赶去出口内气泡，当柱内保留1ml左右水层时，把处理好的SephadexG-25，用玻璃棒搅匀，尽量一次加入柱内，待胶床表面仅有1~2ml液层时，旋紧止水夹。
装好的胶柱应无气泡、无节痕、床面平正，床面铺一张圆形滤纸片。
（6）上样：让胶床表面几乎不留液层，将1ml酶液小心注入胶床面中央，注意不要冲坏床面，吸取1ml磷酸盐缓冲液，把吸附在玻璃壁上的沉淀液洗入柱内，在床表面仅有1ml左右液层时，再小心地用滴管加入5~6cm高的磷酸缓冲液洗脱。
（7）洗脱收集：取刻度试管5支（包括上面一支），编号，柱床上面不断加磷酸盐缓冲液洗脱，出水口不断用刻度试管收集洗脱液，每管收集3ml。
（8）测定每管的PAL酶活力，合并PAL活力高的试管，记为酶洗脱液‘4、DEAE纤维素柱梯度洗脱（1）称取DEAE纤维素52干粉1~1.5g，加20ml的0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH8.0）浸泡4h以上（或浸泡过夜）。
（2）装柱：把预处理的DEAE纤维素52装柱（方法及要求同凝胶层析柱）。
装柱完成后，用2~3个床体积的0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH8.0）洗脱平衡该柱。