半胱氨酸蛋白酶-3、8在病毒性丙型肝炎肝组织中的表达
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World Latest Medicine Information (Electronic Version) 2018 Vo1.18 No.43
·临床研究·
半胱氨酸蛋白酶 -3、8 在病毒性丙型肝炎肝组织中的表达
杨海峰 1，苗益辉 2
（１． 唐山市传染病医院，河北 唐山 ０６３０００；２． 滦县疾病预防控制中心，河北 唐山 ０６３７００）
血清谷丙转氨酶 （ＡＬＴ） 检测采用全自动生化分析仪。 1.2.2 Caspase-3 免疫组织化学检测
Ｃａｓｐａｓｅ－３ 兔抗人多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技 术有限公司。采用免疫组织化学染色 ＰＶ 两步法检测肝组 织中 Ｃａｓｐａｓｅ－３ 的表达。按常规程序操作，一抗工作液浓度： Ｃａｓｐａｓｅ－３ １：２００、ＤＡＢ 显色。设阳性和阴性对照。阴性对 照采用 ＰＢＳ 代替一抗。Ｃａｓｐａｓｅ－３ 的表达阳性为细胞浆和细 胞核中有棕黄色颗粒。每个切片随机选取不重叠 ５ 个高倍 视野 （４００ 倍 ）。 1.2.3 Caspase-8 免疫组织化学检测
1 材料与方法
1.1 一般资料 随机选取 ２０１７ 年 １ 至 １２ 月于唐山市传染病医院就诊的
病毒性丙型肝炎 ８０ 例。收集同期非肝脏疾病死亡并及时获 取的正常肝组织标本共 １５ 例。所选病例行肝穿活检，标本 常规用 ｌ０％ 中性甲醛固定，石蜡包埋。 1.2 研究方法 1.2.1 血清谷丙转氨酶 (ALT) 检测
９４．１
９
１００．０
１３．８６５
０．００１
表 2 Caspase-3、Caspase-8 与谷丙转氨酶水平的表达关系
病毒量
肝炎类型
Ｎ
（ｃｏｐｙ／ｍＬ）
Ｃａｓｐａｓｅ－３
Ｃａｓｐａｓｅ－８
阳性数 阳性率 阳性数 阳性率
慢性丙型肝炎 阴性
１６
６
３７．５
５
３１．３
１０３－１０６ ２８
１８
６４．３
１８
６４．３
１０６－１０８ ３６
３３
９１．７
２９
８０．６
ｒ
－０．４３４
－０．３７６
Ｐ
０．０００
０．００１
3 讨论
慢性病毒性丙型肝炎是由丙型肝炎病毒引起的、以肝脏 炎症和坏死病变为主的传染病。肝细胞感染病毒后可发生凋 亡 （ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）。随着对细胞凋亡研究的深入，越来越多的研 究发现，ｃａｓｐａｓｅ 家族在肝脏细胞凋亡中起着非常重要的作 用，Ｃａｓｐａｓｅ 家族是细胞调亡的启动者和执行者，ｃａｓｐａｓｅ－８ 的活化是 ｃａｓｐａｓｅ 级联反应的第一步。Ｃａｓｐａｓｅ－３ 作为细胞 凋亡中重要的诱导和下游执行的中心分子，参与细胞染色质 的 凝 聚 和 核 酸 酶 的 激 活，促 使 细 胞 发 生 不 可 逆 的 凋 亡，在 诱 导细胞凋亡时具有独特的优势 ［２］， ｃａｓｐａｓｅ 活化而降解其作用 底物产生终末效应事件，引起肝脏细胞特征性的凋亡形态学 上的改变。
0 引言
病 毒 性 丙 型 肝 炎 一 旦 感 染，８０％ 的 病 例 发 展 为 慢 性 感 染，持 续 的 感 染 状 态 是 病 毒 性 丙 型 肝 炎 的 明 显 特 征。 目 前， 病毒性丙型肝炎的肝脏损伤机制仍然不清。导致病毒性丙 型 肝 炎 的 病 理 损 伤 的 发 生 机 制 尚 未 明 确，细 胞 凋 亡 作 为 多 种肝病的细胞损伤形式之一，在病毒性肝炎发生和进展病理 过程中的作用和意义值得研究。本研究检测 Ｃａｓｐａｓｅ－３ 和 Ｃａｓｐａｓｅ－８ 在丙型肝炎中的表达，结合临床生化指标为深入 研究肝炎发病机制提供实验依据。
表 1 Caspase-3、Caspase-8 在不同病理分型肝组织中的表达
肝炎类型
病理 分型
Ｃａｓｐａｓｅ－３
Ｃａｓｐａｓｅ－８
Ｎ
阳性数 阳性率 ％ 阳性数 阳性率 ％
病毒性丙型肝炎 轻型 ３６
中型 ３４
χ２ 值
重型 １０
P值
２３
６３．９
３０
８８．２
９
１００Hale Waihona Puke ０６．９７８０．０３１
２１
５８．３
３２
同 Ｃａｓｐａｓｅ－３ 免疫组织化学检测。 1.3 统计分析
采用 ＳＰＳＳ １７．０ 统计分析软件进行 χ２ 检验，ｓｐｅａｒｍａｎ 相 关分析。P<０．０５ 有统计学意义。
2 结果
2.1 Caspase-3、Caspase-8 在病毒性丙型肝炎中不同病理 分型的表达
Ｃａｓｐａｓｅ－３、Ｃａｓｐａｓｅ－８ 在 病 毒 性 丙 型 肝 炎 随 病 理 损 伤 程 度 加 重 其 阳 性 表 达 率 增 高，有 统 计 学 意 义 （χ２＝６．９６８， χ２＝１３．８６５，P<０．０５）。（见表 １）。 2.2 Caspase-3、Caspase-8 表达与丙型肝炎病毒复制的关系
在慢性丙型肝炎中，Ｃａｓｐａｓｅ－３、Ｃａｓｐａｓｅ－８ 在病毒性丙
基金项目 ：唐山市科学技术研究与发展指导计划基金资助项目
NO.111302091b。
型 肝 炎 中 的 表 达 与 病 毒 复 制 水 平 密 切 相 关（ｒ＝－０．４３４ ，ｒ＝－ ０．３７６ ， P<０．００１）。结果见表 ２。
摘要：目的 检测半胱氨酸蛋白酶 -3（Caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶 -8（Caspase-8）在病毒性丙型肝炎中的表达，探讨其在肝炎 中临床意义。方法 应用免疫组化方法检测 50 例肝炎肝组织和 15 例正常肝组织中 caspase-3、caspase-8 表达。结果 Caspase-3、 Caspase-8 在病毒性丙型肝炎随病理损伤程度加重其阳性表达率增高，有统计学意义 (χ2=6.968，χ2=13.865，P<0.05)。Caspase-3、 Caspase-8 在病毒性丙型肝炎中的表达与病毒复制水平密切相关（r=-0.434 , r=-0.376 , P<0.001）。结论 Caspase-3、Caspase-8 参与病 毒性丙型肝炎肝细胞凋亡的发生，并参与病毒性丙型肝炎的发病过程。 关键词：Caspase-3；Caspase-8；病毒性丙型肝炎；免疫组织化学方法；细胞凋亡 中图分类号：R512.6 文献标识码：A DOI: 10.19613/ki.1671-3141.2018.43.065 本文引用格式：杨海峰 , 苗益辉 . 半胱氨酸蛋白酶 -3、8 在病毒性丙型肝炎肝组织中的表达 [J]. 世界最新医学信息文摘 ,2018,18(43):156-157.
World Latest Medicine Information (Electronic Version) 2018 Vo1.18 No.43
·临床研究·
半胱氨酸蛋白酶 -3、8 在病毒性丙型肝炎肝组织中的表达
杨海峰 1，苗益辉 2
（１． 唐山市传染病医院，河北 唐山 ０６３０００；２． 滦县疾病预防控制中心，河北 唐山 ０６３７００）
血清谷丙转氨酶 （ＡＬＴ） 检测采用全自动生化分析仪。 1.2.2 Caspase-3 免疫组织化学检测
Ｃａｓｐａｓｅ－３ 兔抗人多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技 术有限公司。采用免疫组织化学染色 ＰＶ 两步法检测肝组 织中 Ｃａｓｐａｓｅ－３ 的表达。按常规程序操作，一抗工作液浓度： Ｃａｓｐａｓｅ－３ １：２００、ＤＡＢ 显色。设阳性和阴性对照。阴性对 照采用 ＰＢＳ 代替一抗。Ｃａｓｐａｓｅ－３ 的表达阳性为细胞浆和细 胞核中有棕黄色颗粒。每个切片随机选取不重叠 ５ 个高倍 视野 （４００ 倍 ）。 1.2.3 Caspase-8 免疫组织化学检测
1 材料与方法
1.1 一般资料 随机选取 ２０１７ 年 １ 至 １２ 月于唐山市传染病医院就诊的
病毒性丙型肝炎 ８０ 例。收集同期非肝脏疾病死亡并及时获 取的正常肝组织标本共 １５ 例。所选病例行肝穿活检，标本 常规用 ｌ０％ 中性甲醛固定，石蜡包埋。 1.2 研究方法 1.2.1 血清谷丙转氨酶 (ALT) 检测
９４．１
９
１００．０
１３．８６５
０．００１
表 2 Caspase-3、Caspase-8 与谷丙转氨酶水平的表达关系
病毒量
肝炎类型
Ｎ
（ｃｏｐｙ／ｍＬ）
Ｃａｓｐａｓｅ－３
Ｃａｓｐａｓｅ－８
阳性数 阳性率 阳性数 阳性率
慢性丙型肝炎 阴性
１６
６
３７．５
５
３１．３
１０３－１０６ ２８
１８
６４．３
１８
６４．３
１０６－１０８ ３６
３３
９１．７
２９
８０．６
ｒ
－０．４３４
－０．３７６
Ｐ
０．０００
０．００１
3 讨论
慢性病毒性丙型肝炎是由丙型肝炎病毒引起的、以肝脏 炎症和坏死病变为主的传染病。肝细胞感染病毒后可发生凋 亡 （ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）。随着对细胞凋亡研究的深入，越来越多的研 究发现，ｃａｓｐａｓｅ 家族在肝脏细胞凋亡中起着非常重要的作 用，Ｃａｓｐａｓｅ 家族是细胞调亡的启动者和执行者，ｃａｓｐａｓｅ－８ 的活化是 ｃａｓｐａｓｅ 级联反应的第一步。Ｃａｓｐａｓｅ－３ 作为细胞 凋亡中重要的诱导和下游执行的中心分子，参与细胞染色质 的 凝 聚 和 核 酸 酶 的 激 活，促 使 细 胞 发 生 不 可 逆 的 凋 亡，在 诱 导细胞凋亡时具有独特的优势 ［２］， ｃａｓｐａｓｅ 活化而降解其作用 底物产生终末效应事件，引起肝脏细胞特征性的凋亡形态学 上的改变。
0 引言
病 毒 性 丙 型 肝 炎 一 旦 感 染，８０％ 的 病 例 发 展 为 慢 性 感 染，持 续 的 感 染 状 态 是 病 毒 性 丙 型 肝 炎 的 明 显 特 征。 目 前， 病毒性丙型肝炎的肝脏损伤机制仍然不清。导致病毒性丙 型 肝 炎 的 病 理 损 伤 的 发 生 机 制 尚 未 明 确，细 胞 凋 亡 作 为 多 种肝病的细胞损伤形式之一，在病毒性肝炎发生和进展病理 过程中的作用和意义值得研究。本研究检测 Ｃａｓｐａｓｅ－３ 和 Ｃａｓｐａｓｅ－８ 在丙型肝炎中的表达，结合临床生化指标为深入 研究肝炎发病机制提供实验依据。
表 1 Caspase-3、Caspase-8 在不同病理分型肝组织中的表达
肝炎类型
病理 分型
Ｃａｓｐａｓｅ－３
Ｃａｓｐａｓｅ－８
Ｎ
阳性数 阳性率 ％ 阳性数 阳性率 ％
病毒性丙型肝炎 轻型 ３６
中型 ３４
χ２ 值
重型 １０
P值
２３
６３．９
３０
８８．２
９
１００Hale Waihona Puke ０６．９７８０．０３１
２１
５８．３
３２
同 Ｃａｓｐａｓｅ－３ 免疫组织化学检测。 1.3 统计分析
采用 ＳＰＳＳ １７．０ 统计分析软件进行 χ２ 检验，ｓｐｅａｒｍａｎ 相 关分析。P<０．０５ 有统计学意义。
2 结果
2.1 Caspase-3、Caspase-8 在病毒性丙型肝炎中不同病理 分型的表达
Ｃａｓｐａｓｅ－３、Ｃａｓｐａｓｅ－８ 在 病 毒 性 丙 型 肝 炎 随 病 理 损 伤 程 度 加 重 其 阳 性 表 达 率 增 高，有 统 计 学 意 义 （χ２＝６．９６８， χ２＝１３．８６５，P<０．０５）。（见表 １）。 2.2 Caspase-3、Caspase-8 表达与丙型肝炎病毒复制的关系
在慢性丙型肝炎中，Ｃａｓｐａｓｅ－３、Ｃａｓｐａｓｅ－８ 在病毒性丙
基金项目 ：唐山市科学技术研究与发展指导计划基金资助项目
NO.111302091b。
型 肝 炎 中 的 表 达 与 病 毒 复 制 水 平 密 切 相 关（ｒ＝－０．４３４ ，ｒ＝－ ０．３７６ ， P<０．００１）。结果见表 ２。
摘要：目的 检测半胱氨酸蛋白酶 -3（Caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶 -8（Caspase-8）在病毒性丙型肝炎中的表达，探讨其在肝炎 中临床意义。方法 应用免疫组化方法检测 50 例肝炎肝组织和 15 例正常肝组织中 caspase-3、caspase-8 表达。结果 Caspase-3、 Caspase-8 在病毒性丙型肝炎随病理损伤程度加重其阳性表达率增高，有统计学意义 (χ2=6.968，χ2=13.865，P<0.05)。Caspase-3、 Caspase-8 在病毒性丙型肝炎中的表达与病毒复制水平密切相关（r=-0.434 , r=-0.376 , P<0.001）。结论 Caspase-3、Caspase-8 参与病 毒性丙型肝炎肝细胞凋亡的发生，并参与病毒性丙型肝炎的发病过程。 关键词：Caspase-3；Caspase-8；病毒性丙型肝炎；免疫组织化学方法；细胞凋亡 中图分类号：R512.6 文献标识码：A DOI: 10.19613/ki.1671-3141.2018.43.065 本文引用格式：杨海峰 , 苗益辉 . 半胱氨酸蛋白酶 -3、8 在病毒性丙型肝炎肝组织中的表达 [J]. 世界最新医学信息文摘 ,2018,18(43):156-157.