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二、原理
1.总试验原理：沉淀反应是指可溶性抗 原与相应抗体在一定条件下发生结合并出 现肉眼可见的沉淀物。
2.双向免疫扩散试验原理：可溶性抗原 与相应抗体在琼脂介质中相互扩散，当扩 散到两者浓度比例合适的部位相遇时，即 出现乳白色的沉淀线。
Ag Ab
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双向琼脂扩散的用途
琼脂板厚 度3mm
3.在琼脂板上打孔：孔径3㎜、抗原、抗体孔间 距5㎜，抗原孔间距2㎜。
4.加样：(见图样) 5.电泳：将琼脂板放入电泳槽、抗体端接阳极，
纱布做引桥，电流为3～4mA/㎝（玻片宽度） 电泳40—50min。
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四、方法
双向免疫扩散
1.配制1%琼脂： 称取琼脂0.5g + 生理盐水50ml
？
根据抗原抗体的反应有特异性， 抗人血清 可用已知抗原测定未知抗体；
也可用已知抗体测定未知抗原。
血清学反应条件
抗原抗体反应特点
1.电解质
1.特异性
2.PH
2.可逆性
3.温度
3.可见性
4.阶段性
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沉淀反应类型
环状沉淀 絮状沉淀 琼脂扩散 荚膜膨胀
• 根据抗原抗体反应的方式和特性分为:
• 双向免疫扩散
• 用已知抗血清（或抗原）检测未知抗原 （或抗体）；
• 抗原或抗体的纯度鉴定；
• 抗原或抗体相对量的估计。
1:2
1:8
1:4
1:16
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• 沉淀线形成的位置与抗原、抗体浓度有关，抗原浓度越浓，形 成的沉淀线距离抗原孔越远，抗体浓度越浓，形成的沉淀线距 抗体孔越远，因此，当固定抗体的浓度，稀释抗原，可根据已 知浓度的抗原沉淀线的位置，测定未知抗原的浓度；反之固定 抗原的浓度，亦可测定抗体的效价。
加热溶解
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四、方法
双向免疫扩散
2.制板：3.5-4.ml加热琼脂/片 3.在琼脂上打孔：
Ab
1:64
1:2
Ag
1:32
1:4
1:16 1:8
4.加样：中间加入抗原、周围加稀释的抗体 5.放室温24小时看结果
注意：佐剂抗原实验组采用此方法测定血清效价
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• 佐剂抗原采用免疫双扩散法检测血清效价（P：10） • 效价在1:16以上即可决定采血
血 清 学 反 应 术免 疫 标 记 技
免疫学检验主要内容
凝集反应 √
沉淀反应 √ 中和反应 补体结合反应
酶标记技术√ 金标记技术√ 荧光标记技术 同位素标记技术
免
TC√
疫
BC√
细
NKC
胞 检
Mφ√、、、
测
中性粒细胞√
其 化学发光免疫技术
它 技
免疫比浊分析技术
术 其它
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抗原抗体的总体原理
三、材料
人血清（Ag） 抗人血清(Ab) PH8.6巴比妥缓冲液 生理盐水 琼脂粉、玻片 打孔器 加样器、电泳仪等。
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四、方法
对流免疫电泳
1.配制1%琼脂： 称取琼脂0.5g + 巴比妥缓冲液50ml
加热溶解
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四、方法
对流免疫电泳
2.配制琼脂板:倾入3.5~4ml加热琼脂/片
单向免疫扩散
方法：用抗体制板、 打孔 、加样、单向 扩散24小时看结果
结果
第22页/共27页
示教 2
免疫电泳
方法：制板、打孔、加样、电泳2小时 挖槽、加泳扩散模式图 A1b：白蛋白 血浆免疫电泳各区带所含蛋白成分
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示教 3
火箭电泳抗原
方法：抗体琼脂板的制备、加样、电泳。
—
+
结果
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示教 4
环状沉淀反应
人血清
Ag
抗人血清 Ab
当抗原与相应抗体 比例适当时，接触 面出现乳白色的环 状物即为阳性沉淀 反应。
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• 实验报告要求：绘图表示对流免疫电泳、 双向琼脂扩散的结果,并予以简单的说明。
六、讨论
• 对流免疫电泳与琼脂双向扩散试验各有何优缺点？ • 如果本试验中没有出现沉淀线考虑有何因素? • 琼脂扩散有哪些类型？有何用途？
1:2、1：4、1：8、1：16、1：32、 1：64稀释 Ag Ab
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• 加样量要精确，不能逸出孔外，否则结 果不好观察；
• 制板时，玻片要清洁，边缘要整齐; • 孔距约5mm左右，太远看不到实验现
象。
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五、结果
对流免疫电泳
双向免疫扩散
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示教 1
• 对流免疫电泳
• 单向免疫扩散
• 免疫电泳
• 火箭电泳
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实验内容
• 对流免疫电泳 • 双向琼脂扩散 示教： • 单向琼脂扩散 • 火箭免疫电泳 • 免疫电泳 • 环状沉淀
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一、目的
掌握对流免疫电泳与双向琼脂扩散的 操作步骤，结果观察及实际应用。并在此 基础上了解各类琼脂扩散试验的特点。
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• 3.对流免疫电泳原理
• 抗原在PH8.6的缓冲液中带负电荷，将
抗原置于阴极端，由阴极向阳极移动；抗 体因电渗作用而流向阴极。当抗原抗体在 两孔间相遇时，在两者比例适当处形成白 特色点沉：淀简线便。、快速、短时 间出结果，敏感性高于双 扩5-10 倍。 用途：抗原、抗体的测定
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第26页/共27页
谢谢您的观看！
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二、原理
1.总试验原理：沉淀反应是指可溶性抗 原与相应抗体在一定条件下发生结合并出 现肉眼可见的沉淀物。
2.双向免疫扩散试验原理：可溶性抗原 与相应抗体在琼脂介质中相互扩散，当扩 散到两者浓度比例合适的部位相遇时，即 出现乳白色的沉淀线。
Ag Ab
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双向琼脂扩散的用途
琼脂板厚 度3mm
3.在琼脂板上打孔：孔径3㎜、抗原、抗体孔间 距5㎜，抗原孔间距2㎜。
4.加样：(见图样) 5.电泳：将琼脂板放入电泳槽、抗体端接阳极，
纱布做引桥，电流为3～4mA/㎝（玻片宽度） 电泳40—50min。
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四、方法
双向免疫扩散
1.配制1%琼脂： 称取琼脂0.5g + 生理盐水50ml
？
根据抗原抗体的反应有特异性， 抗人血清 可用已知抗原测定未知抗体；
也可用已知抗体测定未知抗原。
血清学反应条件
抗原抗体反应特点
1.电解质
1.特异性
2.PH
2.可逆性
3.温度
3.可见性
4.阶段性
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沉淀反应类型
环状沉淀 絮状沉淀 琼脂扩散 荚膜膨胀
• 根据抗原抗体反应的方式和特性分为:
• 双向免疫扩散
• 用已知抗血清（或抗原）检测未知抗原 （或抗体）；
• 抗原或抗体的纯度鉴定；
• 抗原或抗体相对量的估计。
1:2
1:8
1:4
1:16
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• 沉淀线形成的位置与抗原、抗体浓度有关，抗原浓度越浓，形 成的沉淀线距离抗原孔越远，抗体浓度越浓，形成的沉淀线距 抗体孔越远，因此，当固定抗体的浓度，稀释抗原，可根据已 知浓度的抗原沉淀线的位置，测定未知抗原的浓度；反之固定 抗原的浓度，亦可测定抗体的效价。
加热溶解
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四、方法
双向免疫扩散
2.制板：3.5-4.ml加热琼脂/片 3.在琼脂上打孔：
Ab
1:64
1:2
Ag
1:32
1:4
1:16 1:8
4.加样：中间加入抗原、周围加稀释的抗体 5.放室温24小时看结果
注意：佐剂抗原实验组采用此方法测定血清效价
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• 佐剂抗原采用免疫双扩散法检测血清效价（P：10） • 效价在1:16以上即可决定采血
血 清 学 反 应 术免 疫 标 记 技
免疫学检验主要内容
凝集反应 √
沉淀反应 √ 中和反应 补体结合反应
酶标记技术√ 金标记技术√ 荧光标记技术 同位素标记技术
免
TC√
疫
BC√
细
NKC
胞 检
Mφ√、、、
测
中性粒细胞√
其 化学发光免疫技术
它 技
免疫比浊分析技术
术 其它
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抗原抗体的总体原理
三、材料
人血清（Ag） 抗人血清(Ab) PH8.6巴比妥缓冲液 生理盐水 琼脂粉、玻片 打孔器 加样器、电泳仪等。
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四、方法
对流免疫电泳
1.配制1%琼脂： 称取琼脂0.5g + 巴比妥缓冲液50ml
加热溶解
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四、方法
对流免疫电泳
2.配制琼脂板:倾入3.5~4ml加热琼脂/片
单向免疫扩散
方法：用抗体制板、 打孔 、加样、单向 扩散24小时看结果
结果
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示教 2
免疫电泳
方法：制板、打孔、加样、电泳2小时 挖槽、加泳扩散模式图 A1b：白蛋白 血浆免疫电泳各区带所含蛋白成分
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示教 3
火箭电泳抗原
方法：抗体琼脂板的制备、加样、电泳。
—
+
结果
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示教 4
环状沉淀反应
人血清
Ag
抗人血清 Ab
当抗原与相应抗体 比例适当时，接触 面出现乳白色的环 状物即为阳性沉淀 反应。
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• 实验报告要求：绘图表示对流免疫电泳、 双向琼脂扩散的结果,并予以简单的说明。
六、讨论
• 对流免疫电泳与琼脂双向扩散试验各有何优缺点？ • 如果本试验中没有出现沉淀线考虑有何因素? • 琼脂扩散有哪些类型？有何用途？
1:2、1：4、1：8、1：16、1：32、 1：64稀释 Ag Ab
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• 加样量要精确，不能逸出孔外，否则结 果不好观察；
• 制板时，玻片要清洁，边缘要整齐; • 孔距约5mm左右，太远看不到实验现
象。
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五、结果
对流免疫电泳
双向免疫扩散
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示教 1
• 对流免疫电泳
• 单向免疫扩散
• 免疫电泳
• 火箭电泳
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实验内容
• 对流免疫电泳 • 双向琼脂扩散 示教： • 单向琼脂扩散 • 火箭免疫电泳 • 免疫电泳 • 环状沉淀
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一、目的
掌握对流免疫电泳与双向琼脂扩散的 操作步骤，结果观察及实际应用。并在此 基础上了解各类琼脂扩散试验的特点。
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• 3.对流免疫电泳原理
• 抗原在PH8.6的缓冲液中带负电荷，将
抗原置于阴极端，由阴极向阳极移动；抗 体因电渗作用而流向阴极。当抗原抗体在 两孔间相遇时，在两者比例适当处形成白 特色点沉：淀简线便。、快速、短时 间出结果，敏感性高于双 扩5-10 倍。 用途：抗原、抗体的测定
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谢谢您的观看！
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