毒死蜱和三唑磷对斑马鱼头部AChE活性影响及在鱼体内的富集
10种农药对斑马鱼的毒性与安全评价
Toxicity of Ten Pesticides to Brachydanio rerio and Safety Evaluation ZHAO Yu2ding et al (College of Plant Protection , Fujian Agricultural and Forestry University , Fuzhou , Fujian 350002) Abstract The toxicity of ten pesticides to Brachydanio rerio was investigated using standardized laboratory procedures ; the grade was compartmentalized
种药剂的 96 h LC50 > 10 mg/ L ,属于低毒级。[ 结论]该研究为 10 种农药的合理使用提供了基础资料和科学指导。 关键词 农药 ;斑马鱼 ;毒性 ;安全评价 中图分类号 S481 + . 8 文献标识码 A 文章编号 0517 - 6611(2007) 22 - 06801 - 02
6802
安徽农业科学 2007 年
表 1 供试农药 氟虫腈 毒死蜱 三唑磷 杀虫单 仲丁威 乙草胺 丁草胺 三唑磷·阿维菌素 高效氯氰菊酯 高氯·甲维盐
时间 ∥h
24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96
10 种供试农药对斑马鱼的毒性
毒力回归方程 ∥Y = a + bx ( R)
3种农药亚致死浓度对斑马鱼AChE和EROD活性的影响
江苏农业学报(J iangsu J.of Agr .Sci .),2008,24(6):989～9913种农药亚致死浓度对斑马鱼AChE 和EROD 活性的影响赵于丁1,2, 徐敦明1, 范青海2, 刘贤进1(1.江苏省农业科学院食品质量安全与检测所,江苏南京210014;2.福建农林大学植物保护学院,福建福州350002)收稿日期:2008205214基金项目:江苏省社会发展计划(BS2007096);“十一五”国家科技支撑计划(2006BAD08A03)作者简介:赵于丁(19822),男,云南泸西人,硕士,主要从事农药毒理与残留检测研究。
(E 2mail )yudingj oe@通讯作者:刘贤进,(Tel )025*********;(E 2mail )jaasliu@jaas .ac .cn 关键词: 农药;AChE;EROD ;斑马鱼;生物标志物;生态毒理学中图分类号: X839.2 文献标识码: A 文章编号: 100024440(2008)0620989203Effects of Sublethal Concentrati on of Three Pesti ci des on AChE and EROD Acti viti es i n B rachydan io rerioZHAO Yu 2ding 1,2, XU Dun 2m ing 1, F AN Q ing 2hai 2, L I U Xian 2jin1(11Food Safety and Service Center ,J iangsu A cade m y of Agricultural Sciences,N anjing 210014,China;21College of Plant Protection,Fujian Agriculturaland Forestry U niversity,Fuzhou 350002,China ) Key words: pesticide;AChE;EROD ;B rachydanio rerio ;bi omarker;ecot oxicol ogy 毒死蜱、三唑磷和仲丁威是中国稻田里常用的农药,在中国南方稻区都有大面积施用,但由于中国南方水产养殖常与稻田紧密相邻,如稻田2鱼塘水相互交错使用[1]、稻田2养鱼模式等,因此稻田施用农药很容易对鱼类等水生生物产生危害。
维生素E对毒死蜱胁迫下斑马鱼血清CAT和SOD的保护作用
维生素E对毒死蜱胁迫下斑马鱼血清CAT和SOD的保护作用焦铭;孙雪;李笔;黄俊潮【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2015(54)7【摘要】通过对斑马鱼肌肉注射不同浓度毒死蜱以及维生素E,研究斑马鱼血清中过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活力变化情况以及维生素E的抗氧化作用.试验分为5组,依次为对照组和低、中、高浓度毒死蜱组(0.002、0.02、0.2 mg/kg)以及高浓度联合维生素E(0.2 mg/kg+VE)治疗组.结果表明,毒死蜱不同浓度组短时间(24 h)作用均使两种酶活性升高(P＜0.01),加维生素E组活性增高更显著;长时间(168 h)作用则明显抑制酶活性(P＜ 0.01),维生素E组酶活性变化较平缓.表明毒死蜱对斑马鱼机体抗氧化系统损伤作用明显,维生素E对CAT和SOD活力有保护作用.【总页数】4页(P1590-1593)【作者】焦铭;孙雪;李笔;黄俊潮【作者单位】湖北科技学院基础医学院,湖北咸宁437100;湖北科技学院基础医学院,湖北咸宁437100;湖北科技学院基础医学院,湖北咸宁437100;湖北科技学院基础医学院,湖北咸宁437100【正文语种】中文【中图分类】X592【相关文献】1.毒死蜱对斑马鱼血清 CAT和 SOD活性的影响 [J], 焦铭;孙雪;李笔;吴喆2.白粉病菌胁迫下甜瓜叶片中Ca2+的细胞化学定位及外源Ca2+对POD、CAT和SOD同功酶的影响 [J], 钟俐;李冠3.废弃烟叶有机肥对Cd胁迫下甘蓝叶片POD、CAT、rSOD的活性的影响 [J],张欣琪4.聚天冬氨酸锰(Ⅱ)对小叶苦苣萌发及干旱胁迫下SOD、CAT、POD活性的影响[J], 马旭东;罗蒨;樊星;王建立;李泽文;李云乐5.多胺及其合成抑制剂对干旱胁迫下李苗叶片SOD、POD和CAT活性的影响 [J], 王尚堃因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
毒死蜱对斑马鱼的急性毒性试验
毒死蜱对斑马鱼的急性毒性试验霍奕安;胡秀彩;吕爱军;孙敬锋【摘要】为了研究毒死蜱对于斑马鱼的毒性和安全评价进行急性毒性试验,以24～96 h半致死浓度(LC50)来判定斑马鱼对毒死蜱的敏感性.结果表明,毒死蜱24 h LC50、48 h LC50、72 h LC50、96 h LC50分别为1.345 mg/L、1.080 mg/L、0.992 mg/L、0.926mg/L,安全质量浓度(SC)为0.209 mg/L.参照我国化学物质对鱼类毒性分级标准,判定毒死蜱对斑马鱼急性毒性为Ⅰ级,根据《化学农药环境安全评价试验准则》中农药对鱼类的毒性等级划分,可以判定毒死蜱对斑马鱼为高毒.【期刊名称】《水产养殖》【年(卷),期】2018(039)010【总页数】4页(P34-36,41)【关键词】斑马鱼;急性毒性;毒死蜱;半致死浓度;安全质量浓度【作者】霍奕安;胡秀彩;吕爱军;孙敬锋【作者单位】天津农学院水产学院,天津市水产生态及养殖重点试验室,天津300384;天津农学院,创新创业试验室,天津300384;天津农学院水产学院,天津市水产生态及养殖重点试验室,天津300384;天津农学院,创新创业试验室,天津300384;天津农学院水产学院,天津市水产生态及养殖重点试验室,天津300384;天津农学院水产学院,天津市水产生态及养殖重点试验室,天津300384【正文语种】中文【中图分类】S482斑马鱼（Danio rerio）又名蓝条鱼、花条鱼、斑马担尼鱼等，是一种热带观赏鱼体长4～6 cm，胚胎透明且体外发育，易于活体观察，生长发育快[1]。
因此已经成为生命科学中对疾病，遗传和毒理学的理想模式生物[2]。
随着人类社会的迅速发展，工业上产生的各种废弃物，如重金属，工业污水，农业上产生的农药、消毒液残留等有害物质通过雨水冲刷，或者直接向农田施肥等途径对土壤、鱼类等产生了严重的影响，并且直接威胁到人类健康。
目前，国内关于鱼类急性毒性的试验研究，经常以鲤、金鱼作为试验对象，斑马鱼还未被广泛地应用于药物毒理学的研究[1-2]。
三唑磷和毒死蜱对大型溞繁殖率的影响
抑 制 情 况 。 试验 结 果 表 明 ，随 暴 露 剂 量 增 大 、暴 露 时 间 延 长 ， 三 唑磷 和 毒 死 蜱 导致 大 型 潘 繁 殖 量 降 低 ５ ％ 的浓 ０ 度 分 别 为 ６ ０ （ ． ８～ ．５ 和 ５ Ｏ （． Ｏ～ ．４ ｇ・Ｌ ．１ ４ ８ ７８ ） ． ５ ３７ ７ ６ ） ～； 三 唑 磷 的 最 高 无 可 观 察 效 应 浓 度 和 最 低 可 观 察
囝
２ 结 果与分 析 ２ １ 急性 毒性 结果 ．
渺 唇－ 学 ２２ 第 期 江 Ｊ ０ 年 １ ： 种 １
表 ３ 不 同浓度 三唑磷 作 用下 大型
潘 母 潘繁 殖 指 标 的 变化
药 剂 浓 度／ ｇ・ １ （ ＬＩ ）
空白
幼 溢／ 潘数 母
１ ２ ５ ±９． ７ ａ ０ ． ６ ９ ． ±ｌ ． ３ ９０ １７ ９ ． －８． ９ ａ ４ ４ Ｉ １ － ９１ １ ±６． ４ ａ ． ５ ７ ． ±ｌ ６ ６ ０ ０． ０ ｂ ５ ． ± ８ ３１ Ｃ ９ ４ ． ４ ． － ７ ｄ ７ ３ ４９． ０ ３ ． ±４ ８ ｅ ４ ４ ８
［ ６］
吴 长 兴 ，赵学 平 ，吴 声 敢 ，等 ． 丘陵 地 区水 稻 田使 用 毒 死 蛑 对水 体 的 污 染 及 其 生 态 风 险 ［ ］ 生 态 与 农 村 环 境 学 Ｊ．
报 ，２ １ ，２ （ ） ０ １ ２ ０ １ ７ ３ ：１ ８— １ ．
４ ０ （ 关 系数为 ０ ９ ） ．３ 相 ．４ 。
Ｙ＝１４ ＋ ．５ （ ．８ ３ ０ 相关 系数 ＝ ． ９ ，Ｙ＝１３ ＋ ０９ ） ．７
赵 华 ，徐 浩 ，叶兴 祥 ． 甲胺 磷 和 三唑 磷 在 稻 田中 的 降解 迁
有机磷农药对海洋动物乙酰胆碱酯酶(AChE)的毒性效应研究进展
有机磷农药对海洋动物乙酰胆碱酯酶(AChE)的毒性效应研究
进展
何东海;孟范平;朱小山
【期刊名称】《海洋通报》
【年(卷),期】2003(022)006
【摘要】近几十年来,农业和海水养殖业所使用的有机磷农药(OPs)造成沿岸海水的严重污染,威胁到海洋动物的生存.有机磷农药的海洋生态毒理学研究已经成为海洋环境科学中的热门领域之一.作为动物神经传导过程中的关键酶,乙酰胆碱酯酶(AChE)能够被有机磷农药专一性抑制,因此,有机磷农药对海洋动物AChE的影响受到更多的关注.本文以近年来该领域的研究成果为基础,综述了有机磷农药对海洋动物乙酰胆碱酯酶的毒性效应.
【总页数】8页(P71-78)
【作者】何东海;孟范平;朱小山
【作者单位】中国海洋大学海洋生命学院,山东,青岛,266003;中国海洋大学海洋生命学院,山东,青岛,266003;中国海洋大学海洋生命学院,山东,青岛,266003
【正文语种】中文
【中图分类】X171.5
【相关文献】
1.鲫鱼脑乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性测定及对有机磷农药的敏感性研究 [J], 刘晓宇;郝强;吴谋成;杨健;徐盈
2.南海海港疏浚淤泥悬浮物对海洋动物的急性毒性效应 [J], 李纯厚;林燕棠
3.天津港口疏浚淤泥悬浮物对海洋动物的急性毒性效应 [J], 陈永平;王娟娟;李兆千;王宝峰;易伟;缴建华
4.三唑磷对中华乌塘鳢乙酰胆碱酯酶毒性效应及在环境评价中的应用研究 [J], 何东海;叶慧明;沈锡权;王晓波;朱志清;张志伟
5.沙蚕暴露于石油烃、Cu^(2+)和Cd^(2+)毒性效应及乙酰胆碱酯酶活性的响应[J], 王晶;周启星;张倩茹;张颖
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怎样鉴别农药毒死的鱼
怎样鉴别农药毒死的鱼
杜崇贵
【期刊名称】《黑龙江水产》
【年(卷),期】2002(000)002
【摘要】农民使用农药时，常有农药流入河塘，造成鱼类中毒死亡。
也有不法之徒故意用农药毒死鱼类，然后在市场上出售。
吃了被农药毒死的鱼会严重损害身体建康。
因此，购买时要注意鉴别。
【总页数】1页(P42-42)
【作者】杜崇贵
【作者单位】山东省滨州市黄河三路631号滨城区水产局256617
【正文语种】中文
【中图分类】F724.726
【相关文献】
1.毒死蜱和百菌清对斑马鱼早期发育阶段的联合毒性效应 [J], 李健;杨桂玲;赵慧宇;王强;朱朝华
2.农药毒死鱼的鉴别 [J], 翟洪民
3.毒死蜱对斑马鱼的急性毒性试验 [J], 霍奕安;胡秀彩;吕爱军;孙敬锋
4.毒死蜱对斑马鱼抗氧化体系的影响 [J], 李方敏;姚灿灿;丁存宝
5.有机磷农药毒死蜱对有机氯农药三唑酮在气相色谱-双ECD上响应的影响 [J], 王吉河;孙花;张妍
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水体中3种磺胺类药物对斑马鱼的生态毒性效应
水体中3种磺胺类药物对斑马鱼的生态毒性效应谢美萍;颜勇【期刊名称】《环境科技》【年(卷),期】2015(000)002【摘要】采用斑马鱼作为模式动物,针对斑马鱼的代谢能力,进行3种磺胺类药物(磺胺甲恶唑,磺胺嘧啶,磺胺二甲嘧啶)的暴露实验。
实验选取谷胱甘肽s-转移酶(GST)和丙二醛(MDA)含量作为评判斑马鱼代谢能力的指标。
在实验过程中,随着暴露时间的改变,GST活性和MDA含量都呈现出不同的变化。
在实验前3 d,GST酶活性在不同浓度下都呈现出显著增长。
但是MDA的含量在第1天达到顶峰,随后都呈现出下降趋势。
由结果可得,MDA含量指标对磺胺类药物的毒性更加敏感,其指示作用更优于GST活性指标。
同时,实验结果中可以看出,在磺胺嘧啶作用下的GST酶活性和MDA含量都呈现更加明显的变化,因此实验推断磺胺嘧啶会对水环境具有更潜在的危害。
【总页数】5页(P30-34)【作者】谢美萍;颜勇【作者单位】扬州自来水有限责任公司，江苏扬州 225000;扬州自来水有限责任公司，江苏扬州 225000【正文语种】中文【中图分类】X8【相关文献】1.HPLC-MS-MS法测定养殖水体中18种磺胺类药物的残留量 [J], 黄江南2.水体酸化条件下Cu(Ⅱ)对斑马鱼胚胎的毒性效应 [J], 吴寅;吴永贵;马岚;熊宇霏;张枢;陈琴3.水体甲苯、乙苯和二甲苯对斑马鱼的毒性效应 [J], 范亚维;周启星4.恩施城区典型区域水体中磺胺类药物的检测评价 [J], 屈桃李;危志峰;周红艳;王联芝5.基于金属有机骨架材料分散固相萃取-高效液相色谱法检测环境水体中两种磺胺类药物 [J], 张鸣珊;李腾崖;雷宇;吴艳;何书海因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
维生素E对毒死蜱胁迫下斑马鱼血清CAT和SOD的保护作用
维生素E对毒死蜱胁迫下斑马鱼血清CAT 和SOD的保护作用作者：焦铭，孙雪，李笔，等来源：《湖北农业科学》 2015年第7期焦铭，孙雪，李笔，黄俊潮（湖北科技学院基础医学院，湖北咸宁４３７１００）摘要：通过对斑马鱼肌肉注射不同浓度毒死蜱以及维生素Ｅ，研究斑马鱼血清中过氧化氢酶（ＣＡＴ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活力变化情况以及维生素Ｅ的抗氧化作用。
试验分为５组，依次为对照组和低、中、高浓度毒死蜱组（０．００２、０．０２、０．２ｍｇ／ｋｇ）以及高浓度联合维生素Ｅ（０．２ｍｇ／ｋｇ＋ＶＥ）治疗组。
结果表明，毒死蜱不同浓度组短时间（２４ｈ）作用均使两种酶活性升高（P﹤０．０１），加维生素Ｅ组活性增高更显著；长时间（１６８ｈ）作用则明显抑制酶活性（P﹤０．０１），维生素Ｅ组酶活性变化较平缓。
表明毒死蜱对斑马鱼机体抗氧化系统损伤作用明显，维生素Ｅ对ＣＡＴ和ＳＯＤ活力有保护作用。
关键词：维生素Ｅ；毒死蜱；斑马鱼；过氧化氢酶；超氧化物歧化酶中图分类号：Ｘ５９２文献标识码：A文章编号：0439－８114（２０15）07－1590-03DOI:10.14088/ki.issn0439-8114.2015.07.014毒死蜱（Ｃｈｌｏｒｐｙｒｉｆｏｓ）商品名为乐斯本，具有触杀、胃毒和熏蒸作用，凭借其高效、低毒、广谱的特性成为全球应用最为广泛的农药之一［１］。
毒死蜱主要通过干扰胆碱酯酶的活性，从而影响人类和昆虫的中枢神经系统［２］。
毒死蜱类有机磷农药对哺乳动物的毒性较低，但对水生鱼类的毒性却比较高，若使用不当进入水环境，将对水生生态和水产养殖带来比较大的危害［３］。
由于毒死蜱的大量使用，在较多地区的土壤、大气、雨水和地下水等均能检测到毒死蜱残留，水体也由于毒死蜱污染累积导致鱼类死亡。
农药对环境产生的危害最终会通过富集浓缩和食物链传递给人类［４］。
因此，研究毒死蜱的毒理作用将可为农药安全使用，水产资源和生态环境保护提供理论依据。
雌性斑马鱼暴露于环境剂量三唑磷对亲代生殖和氧化应激及子代胚胎发育的影响
雌性斑马鱼暴露于环境剂量三唑磷对亲代生殖和氧化应激及子代胚胎发育的影响汪和祥;李瑞娇;张建禄;张春云;王立新;陈绪;梁昊;熊冬梅【期刊名称】《水生生物学报》【年(卷),期】2024(48)2【摘要】三唑磷作为一种广泛使用的有机磷杀虫剂,该药物在自然水体中的残留可对非靶标生物产生潜在威胁,文章旨在探究三唑磷对斑马鱼的毒性效应。
研究将3月龄雌性斑马鱼(Danio rerio)持续暴露于环境相关浓度的三唑磷(10μg/L)21d,然后与健康雄鱼自然受精产卵;通过测定雌鱼生殖力、亲代与子代的氧化应激及子代胚胎发育相关指标,评估三唑磷对亲代雌鱼及其子代的毒性效应。
主要研究结果:亲代雌鱼经10μg/L三唑磷暴露后,产卵量显著提高(P<0.05),肝脏内乙酰胆碱酯酶(AChE)活性显著降低(P<0.05),丙二醛(MDA)含量显著增加(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和羧酸酯酶(CarE)活性均显著增强(P<0.05);所产子代胚胎受精率、受精卵直径、胚胎心率和初孵仔鱼体长均显著降低(P<0.05),仔鱼畸形率显著增加(P<0.05),孵化率无显著性差异;仔鱼AChE与SOD活性呈下降趋势但差异不显著,MDA含量显著增加(P<0.05),GPx 与GST活性显著降低(P<0.05),CarE活性显著提高(P<0.05)。
以上研究结果表明环境浓度三唑磷21d暴露可提高雌性斑马鱼的生殖力,诱导亲代及子代氧化应激反应,并对子代胚胎发育过程产生不良影响。
【总页数】8页(P185-192)【作者】汪和祥;李瑞娇;张建禄;张春云;王立新;陈绪;梁昊;熊冬梅【作者单位】西北农林科技大学动物科技学院水产科学系;陕西省水产研究与技术推广总站;陕西省秦岭生态安全重点实验室【正文语种】中文【中图分类】X171.5【相关文献】1.高氯酸钠急性暴露对斑马鱼胚胎发育及氧化应激的影响2.戊唑醇暴露亲代斑马鱼诱发子代胚胎发育神经毒性的研究3.[C_(4)mim]Cl亲代暴露对F1代斑马鱼胚胎-幼体发育毒性的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
夹竹桃叶乙醇提取物对斑马鱼的毒性评价
水 生 生 物 学 报
ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA
Vol. 35, No.5 Sep., 2011
DOI: 10.3724/SP.J.1035.2011.00835
夹竹桃叶乙醇提取物对斑马鱼的毒性评价
陈建明 何月平 张珏锋 陈列忠
32 mg/L) 处理斑马鱼 , 发现斑马鱼的死亡率与药剂 剂量和处理时间均呈明显的正相关。粗提物浓度越 大 , 斑马鱼的死亡率越高。 8 mg/L 处理后 , 斑马鱼 的校正死亡率均在 22.22%以下 ; 16 mg/L 处理后 , 随 处理时间延长 , 死亡率明显增加 , 24h 的校正死亡率
表 1 夹竹桃叶乙醇粗提物对斑马鱼的 LC50 值 LC50 value of ethanol crude extracts from Nerium indicum leaves to Brachydanio rerio 线性方程 Linear equation Y=2.17x+1.33 Y=4.29x0.97 Y=9.04x6.28 Y=4.80x0.52 Y=4.68x0.14 Y=0.69x+3.41 相关系数 Correlation coefficient 0.9949 0.9663 0.9487 0.9754 0.9788 0.9968 LC50 (95%置信区间) Confidence interval (mg/L) 49.28 (25.22—135.13) 23.70 (7.31—1557.78) 17.68 (7.04—193.70) 14.09 (5.08—669.59) 12.52 (4.94—276.92) 199.51 (101.84—488.31) LC90 (95%置信区间) Confidence interval (mg/L) 191.92 (78.19—744.28) 47.13 (11.39—7596.16) 24.50 (8.84—350.41) 26.05 (7.53—2986.09) 23.52 (7.47—1107.07) 14437.70 (4321.51—72153.66)
5种海鱼脑AChE对2种有机磷农药的敏感性比较
5种海鱼脑AChE对2种有机磷农药的敏感性比较朱小山;孟范平;杨正先【期刊名称】《上海环境科学》【年(卷),期】2003(022)008【摘要】以鲈鱼、黄鱼,美国红鱼,真鲷和黑鲷为实验材料,采用半抑制浓度(IC50)和双分子速率常数(Ki)为指标,通过体外抑制作用比较了5种海鱼脑乙酰胆碱酯酶[AChE(EC 3.1.1.7)]对马拉硫磷和甲基对硫磷的敏感性.结果表明:(1)5种海鱼脑AChE基础活性为10.18～22.64[μmol/(min@g)],黄鱼的酶活性最高,鲈鱼的酶活性最低.(2)对马拉硫磷,由IC50所得到的AChE敏感性为:黄鱼、鲈鱼、真鲷＞黑鲷＞美国红鱼;由Ki所得到的AChE敏感性为:鲈鱼、黄鱼,真鲷＞黑鲷＞美国红鱼.对甲基对硫磷,由IC50所得到的AChE敏感性为:鲈鱼＞黄鱼、真鲷、黑鲷＞美国红鱼;由Ki所得到的AChE敏感性为:鲈鱼、黄鱼、黑鲷＞真鲷＞美国红鱼.鲈鱼和黄鱼对2种有机磷农药都较为敏感.(3)鱼脑AChE活力抑制作用与水体中的有机磷农药具有良好的剂量-效应关系.在1～100mg/L浓度范围内,两者间呈现较好的线性相关性,其相关系数基本上都在0.98以上.根据AChE的敏感性及其对有机磷农药的线性响应程度,黄鱼和鲈鱼脑AChE分别适于作为监测马拉硫磷和甲基对硫磷的指示酶.【总页数】5页(P521-525)【作者】朱小山;孟范平;杨正先【作者单位】中国海洋大学海洋生命学院环境生态系,青岛,266003;中国海洋大学海洋生命学院环境生态系,青岛,266003;中国海洋大学海洋生命学院环境生态系,青岛,266003【正文语种】中文【中图分类】X592【相关文献】1.鲫鱼脑乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性测定及对有机磷农药的敏感性研究 [J], 刘晓宇;郝强;吴谋成;杨健;徐盈2.利用鲫鱼脑AChE监测地表水中的有机磷农药污染 [J], 陈樑;孙志刚3.对有机磷农药敏感的海鱼脑AChE筛选研究 [J], 朱小山;孟范平;朱琳;何东海;杨瑶4.落叶松毛虫AChE最佳反应体系建立及其对3种杀虫剂敏感性比较 [J], 邹传山;曹传旺;王志英5.海鱼AChE监测海水有机磷农药的可行性研究 [J], 穆大刚;孟范平;朱小山;何东海;杨正先因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
毒死婢对鲫鱼的急性毒性的研究开题报告
毒死蜱对鲫鱼的急性毒性的研究开题报告一、选题背景及依据1.立题背景农药是现代农业生产中必不可少的一类重要的生产资料,在农业生产中占有非常重要的地位。
农药的使用确实提高了粮食的增产和农民的增收,但农药残留的不良影响对环境和人类健康的危害也日益显得突出。
残留在土壤中的农药经地表水或降雨进入沟渠、池塘和河流中，进而对水域中淡水鱼类的生长繁殖产生影响，甚至出现邻近养殖水体出现鱼类急性中毒死亡事件，或者造成水体慢性污染而引发系列生态污染事件。
毒死蜱作为常用农药，普遍存在于沟渠、池塘和河流中，从而对生活在其中的淡水鱼类具有潜在风险。
2.目的及意义毒死蜱(chlorpyrifos)是一种稻田杀虫剂,随着研究的深入,毒死蜱对环境造成的污染和对人体健康造成的危害己越来越得到人们的重视。
研究稻田排水中毒死蜱对水生动物的毒性作用是评价毒死蜱对水生生态环境影响与危害的一个重要指标,在毒理学研究中具有重要意义。
本文研究的目的在于确定稻田排水中毒死蜱对鲫鱼的半致死浓度及机体急性毒性的大小，毒效应特征和剂量-反应效应，并根据LD进行急性毒性分级，50为毒死蜱污染的治理提供一定的科学依据。
⒊国内外研究现状(1)毒死蜱的理化性质毒死蜱(chlorpyrifos)是一种有机磷农药,已被广泛应用于防治粮食、水果、茶叶、蔬菜、甘庶、卫生和畜牧体等表面害虫。
其原药为白色颗粒状结晶,室温下稳定,有硫醇臭味,密度 1.398(43.5°C),焰点41.5~43.5°C,蒸气压为2.5mPa(25°C),可与苯、甲醇、丙酮、正己焼等常用有机溶剂以任意比例互溶。
制剂有乳油、颗粒剂。
(2)毒死蜱在环境中的分布和代谢毒死蜱除喷雾使用外，还可用颗粒或毒土法直接施用于土壤中。
毒死蜱在土壤中相当稳定，其半衰期与施用剂型、施用量、土壤类型、气候及其他因素有关，通常变化在7～120d，甚至长达1a。
与土壤颗粒结合的毒死蜱可通过紫外线、化学水解、脱氯作用、微生物等途径降解，其过程与在动植物体内的降解相似，主要产物是3,5,6-三氯吡啶-2-醇。
三唑磷对斑马鱼肝脏氧化损伤作用研究
Abstract: The zebrafishes were bred in different concentrations of triazophos pesticides and tested for total proteincontent, superoxide dismutase, catalase, lipidperoxidation, acetylcholinesterasein vivo. The changes in glutathione were used to explore the effects of triazophos on the antioxidant system of zebrafish liver. Under the stimulation of triazophos pesticide, the specific activity of SOD and CAT showed a trend of promoting first and then inhibiting; the content of MDA rapidly and significantly decreased; The specific vitality of AChE shows a trend of inhibition. The stimulation of triazophos will affect the activity of the enzymes associated with the antioxidant system in the zebrafish liver, or inhibit or promote it, thus affecting the normal life activities of the zebrafish.
毒死蜱和丙溴磷对鲫鱼的毒性效应及其在鱼体中的富集
毒死蜱和丙溴磷对鲫鱼的毒性效应及其在鱼体中的富集夏锦瑜;王冬兰;张志勇;余向阳;黄东林;刘贤进【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2010(026)005【摘要】为评价毒死蜱和丙溴磷的环境生态风险,采用半静态法,测定这2种农药对鲫鱼(Carassius auratus)的急性毒性,以及在 1/40、1/20和1/10 96 h-LC50值的作用剂量下持续暴露14 d和在清水中恢复7 d,对鲫鱼脑部乙酰胆碱酯酶(AChE)和羧酸酯酶(CarE)活性的影响(慢性毒性效应).利用气相色谱法测定鲫鱼肌肉、鳃、肝脏中2种农药的富集量.毒死蜱和丙溴磷对鲫鱼的96 h-LC50分别为 0.184 9mg/L和0.192 9 mg/L.在 1/10 96 h-LC50值的作用剂量下连续暴露14 d,毒死蜱和丙溴磷对鲫鱼脑部AChE的活性抑制率分别为95.36%和93.61%,而对CarE的活性抑制率分别为76.07%和83.03%.在清水中恢复饲养7 d后,酶活性均有不同程度的恢复.此外,在鲫鱼组织器官中均检测到2种农药,且富集量都表现为肝脏>鳃>肌肉,其中,毒死蜱较易在鱼体内富集.【总页数】5页(P1088-1092)【作者】夏锦瑜;王冬兰;张志勇;余向阳;黄东林;刘贤进【作者单位】江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所,江苏,南京,210014;扬州大学园艺与植物保护学院,江苏,扬州,225009;江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所,江苏,南京,210014;江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所,江苏,南京,210014;江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所,江苏,南京,210014;扬州大学园艺与植物保护学院,江苏,扬州,225009;江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所,江苏,南京,210014【正文语种】中文【中图分类】X592【相关文献】1.镉在芙蓉鲤鲫养殖水体中的分布及在鱼体的富集研究 [J], 黄华伟;李小玲;刘伶俐;陈湘艺;黄向荣;何志刚;李传武2.亚致死剂量二嗪农对锦鲫的毒性效应及鱼体富集研究 [J], 侯方浩;余向阳;赵于丁;刘贤进;黄鹰3.毒死蜱对锦鲫性腺的影响及其在鱼组织中的富集 [J], 侯方浩;余向阳;赵于丁;王冬兰;刘贤进;黄鹰4.溶解有机质对生物富集因子计算的影响:以东江鱼体中多溴联苯醚的生物富集为例 [J], 罗孝俊;何明靖;曾艳红;吴江平;陈社军;麦碧娴5.松花江鱼体中重金属的富集及污染评价 [J], 祝惠;阎百兴;张凤英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
毒死蜱对斑马鱼胚胎氧化应激效应研究
毒死蜱对斑马鱼胚胎氧化应激效应研究张家禹;刘丽丽;李国超;余凯敏;吕鹏;闫艳春【摘要】以斑马鱼为模型，研究了毒死蜱对斑马鱼胚胎形态学的影响，及其对胚胎的氧化应激和氧化损伤作用.将斑马鱼胚胎暴露在梯度浓度的毒死蜱溶液中96h 后，发现毒死蜱会造成斑马鱼胚胎严重畸形甚至死亡，其96h半致死浓度为1.18mg/L.对氧化应激相关基因的表达及抗氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量进行检测，结果表明，在毒死蜱胁迫下抗氧化酶(SOD、CAT)活性降低，并且其编码基因(Cu/Zn-sod、Mn-sod、cat)的表达受到抑制；但在低浓度毒死蜱胁迫下，抗氧化酶活性并没有受到显著影响，而抗氧化酶基因的表达对毒死蜱更加敏感.毒死蜱能引起gstp2的表达上调，但GST活性与gstp2的表达变化并不一致.处理组胚胎中nrf2表达上调，从而上调抗氧化蛋白和II相解毒酶基因的表达.毒死蜱胁迫下，基因ucp2、cox1表达下调，能够减少呼吸链ROS的产生.同时基因bcl2表达下调，表明凋亡的平衡受到破坏.毒死蜱处理组中MDA含量显著升高，说明毒死蜱能造成斑马鱼胚胎氧化损伤.%We elucidated the effects of chlorpyrifos exposure on the morphology, oxidative stress and oxidative damage in zebrafish (Danio rerio) embryos. After exposed to concentration gradient of chlorpyrifos solution for 96hours, the rates of deformities and death were dramatically higher than those in the control groups, and the median lethal concentration of CPF was calculated to be 1.18mg/L after a 96h exposure. The expression levels of oxidative stress-related genes, antioxidant enzyme activities and malondialdehyde (MDA) content were investigated. In CPF treatment groups, the antioxidant enzyme (SOD, CAT) activities and the expression levels of their encoding genes (Cu/Zn-sod,Mn-sod, cat) significantly decreased, compared with the control groups. At low concentrations of chlorpyrifos, antioxidant enzyme activities were not affected significantly, while the expression levels of their encoding genes were more sensitive to chlorpyrifos. Chlorpyrifos could induce the expression ofnrf2, which played an important role in increased expressionof a group of genes encoding antioxidant and phaseⅡd etoxification enzymes, but the kinetics of GST andgstp2were not consistent with each other. The down-regulation of expression levels ofucp2andcox1made contributions to reducing ROS generated by the respiratory chain in CPF treatment groups. Meanwhile, in CPF treatment groups, the expression level ofbcl2was significantly down-regulated, suggesting that the balanceof apoptosis was destroyed. MDA content was significantly higher in CPF treatment groups than that in control, indicating that chlorpyrifos could cause oxidative damage in zebrafish embryos.【期刊名称】《中国环境科学》【年(卷),期】2016(036)003【总页数】8页(P927-934)【关键词】毒死蜱;斑马鱼胚胎;氧化应激;氧化损伤【作者】张家禹;刘丽丽;李国超;余凯敏;吕鹏;闫艳春【作者单位】中国农业科学院研究生院，北京100081;中国农业科学院研究生院，北京100081;中国农业科学院研究生院，北京100081;中国农业科学院研究生院，北京100081;中国农业科学院研究生院，北京100081;中国农业科学院研究生院，北京 100081【正文语种】中文【中图分类】X171.5* 责任作者, 教授,******************毒死蜱是一种高效、广谱、中等毒性的有机磷类杀虫杀螨剂,对害虫具有触杀、胃毒和熏蒸作用.自从国家对高毒农药的禁限用政策出台后,毒死蜱作为主要替代品种之一,广泛应用于农业和城市害虫的防治[1-2].毒死蜱的大量使用对生态环境已产生了负面影响,研究显示可在多种水体中检测到其残留[3-4],在农作物种植区附近的水域中其残留量往往更高,水稻田出水中毒死蜱残留最高达26.07μg/L[5].毒死蜱对于多数水生生物属于高毒性物质,并且可以通过生物富集和生物放大作用对水体食物链产生影响,最终威胁人类的健康[6-7].斑马鱼(Danio rerio)具有体型小、易于管理、产卵量大、早期胚胎便于观察等特点,已成为毒理学研究领域的模式生物[8-10].目前斑马鱼被广泛应用于发育毒理学、内分泌干扰和生殖毒理学、神经毒理学、纳米毒理学等毒理学研究中,成为揭示化学品对人类健康和环境的影响及其机制的重要模式生物,并促进了新技术和新分析方法的发展[11].环境污染物能够破坏机体氧化与抗氧化之间的平衡,从而导致机体内活性氧(ROS)等自由基产生过多,细胞自身无法及时清除,并产生大量氧化中间产物,进而导致机体氧化损伤[12-15].机体内抗氧化系统包括酶促系统(CAT、SOD、GSH 等) 和非酶促系统(维生素类、生物碱类等)[16].已有研究报道,毒死蜱会引起鲤鱼肝脏损伤及抗氧化系统的异常[17].高剂量毒死蜱能诱导小鼠肺组织细胞的抗氧化能力下降,造成肺组织的病理损伤[18].毒死蜱对蚯蚓SOD和CAT活性具有显著抑制作用,同时会造成脂质过氧化[19].本研究通过对氧化应激相关基因的表达量及酶活性的检测,探究毒死蜱对斑马鱼胚胎的毒性作用机制.1.1 材料AB品系斑马鱼购自国家斑马鱼资源中心(CZRC,China Zebrafish Resource Center).毒死蜱(Chlorpyrifos,CPF)购自于成都化夏化学试剂有限公司,其纯度≥97%;谷胱甘肽—S转移酶(GST)测定试剂盒(比色法)、过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒(可见光法)、丙二醛(MDA)测定试剂盒(TBA法)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)测试盒(羟胺法)、总蛋白(TP)测定试剂盒(带标准:考马斯亮蓝法)购自南京建成生物研究所.反转录试剂盒 PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect RealTime)(Takara);SYBR Premix Ex Taq II试剂盒(Takara).1.2 斑马鱼的养殖AB品系野生型斑马鱼在独立养殖系统中进行养殖,自来水经过活性炭过滤,紫外灯灭菌,在系统中自动循环,水温控制在(28±0.5)℃,光周期14(光):10(暗).每天喂食2～3,食物为丰年虫幼虫.胚胎收集方法.提前一个晚上将成年种鱼按照雌雄2:1的比例装入交配盒中,并用隔板将雌雄鱼分开,第2d早上光照开始时(10h后)将隔板抽出,半个小时后收集胚胎.挑选发育正常的0.5～ 1.0hpf(孵化后小时)的胚胎,随机分装于6孔塑料板中(10个胚胎/孔),每孔培养液体积为10mL.1.3 暴露方法选用甲醇作为助溶剂.在处理液中,甲醇的浓度为0.025%.前期的研究表明,毒死蜱处理液中低浓度(＜0.1%)的甲醇不会影响实验结果(数据未给出).设置6个毒死蜱暴露浓度,分别为0.25、0.50、0.75、1.00、1.25和1.50mg/L,每个浓度组中有20个胚胎,并设置3个生物学重复.6孔板的每个孔中加入10个发育正常的3hpf胚胎,加入10mL处理液.将胚胎置于恒温培养箱中,温度(28±0.5)℃,光周期14(光):10(暗).采用半静态的试验方法,暴露总时间为96h,每24h更换一次溶液,并及时挑出死卵.1.4 斑马鱼胚胎形态学观察进行CPF暴露处理后,每24h对斑马鱼胚胎进行一次镜检观察.统计分析胚胎畸形率和死亡率,并计算96h半致死浓度(96h-LC50).1.5 氧化应激相关基因的表达分析根据预试验设立3个CPF浓度组,分别是0.24、0.47、0.94mg/L (1/5LC50、2/5LC50、4/5LC50).毒死蜱暴露96h后,每个浓度的胚胎分别取20枚保存,各3份.收集胚胎,液氮速冻,-80℃保存.使用TRIzol试剂提取总RNA,260nm下估算总RNA浓度,质量则通过260/280比率评估.使用1.2%琼脂糖凝胶电泳对RNA的质量进行进一步验证.样品总RNA经反转录得到cDNA.各目标基因引物由上海生工公司合成(表1),经验证所有引物扩增效率均良好(90%～110%).qRT-PCR程序为:95℃ 30s、95℃ 5s、60℃ 45s、55℃ 10s.基因表达的差异倍数通过2-ΔΔCt方法计算.每个浓度组3个生物学重复.1.6 氧化应激相关生化指标检测设立3个CPF浓度组,分别是0.24、0.47、0.94mg/L (1/5LC50、2/5LC50、4/5LC50),每个浓度组3个平行,每个平行60个胚胎.CPF暴露96h 后,收集胚胎,液氮速冻,-80℃保存.5%组织匀浆液的制备.按照重量(g):体积(mL)=1:19的比例加入19倍生理盐水,首先使用超声破碎仪冰水浴破碎斑马鱼胚胎,离心取上清,得到5%组织匀浆液.使用南京建成生物研究所酶活检测试剂盒,检测各项生化指标,包括总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、过氧化氢酶(CAT)活力、谷胱甘肽-S转移酶(GST)活力、丙二醛(MDA)含量和总蛋白(TP)含量.1.7 统计分析使用SPSS20.0通过Levene检验方法检测数据的方差齐性,并进行one-way ANOVA数据分析.P＜0.05作为统计显著性的标准,所有值表示方法均为平均值±标准误(SE).2.1 结果2.1.1 毒死蜱对斑马鱼胚胎发育影响本研究中,采用梯度浓度的毒死蜱(0.25、0.50、0.75、1.00、1.25和1.50mg/L)对斑马鱼胚胎进行处理. 在96h观察到的主要的幼鱼畸形包括心包水肿、尾部弯曲和卵黄囊畸形(图1b、c),并统计了这三种常见的畸形在毒死蜱0.25、0.50、0.75、1.00 和1.25mg/L处理组中的比例(图1d),1.5mg/L处理组胚胎死亡率过高,没有进行畸形率的统计.通过非线性曲线拟合得到毒死蜱96h半致死浓度为1.18mg/L (图2).2.1.2 毒死蜱对斑马鱼胚胎氧化应激相关基因的影响农药污染物可以改变机体抗氧化防御系统中相关基因的表达量,因此本研究选取斑马鱼的9个抗氧化相关基因作为参考,从转录水平揭示毒死蜱对斑马鱼胚胎氧化应激效应的发生机制.荧光定量PCR结果显示(图3),相对于空白对照组,0.24mg/L和0.47mg/L CPF处理组中基因Cu/Zn-sod表达显著下调(0.54、0.22倍),并且呈现剂量-效应关系(图3a).Mn-sod的表达量在高浓度CPF处理组中同样显著下调,并呈现剂量-效应关系(图3b).cat的表达在0.47mg/L和0.94mg/L CPF处理组中显著下调(0.51、0.12倍),并且呈现剂量-效应关系(图3c).gstp2表达在0.24mg/L和0.47mg/L CPF处理组中显著上调(1.58、1.88倍),但在最高浓度组与对照组相比并无显著差异,呈现倒“U”形的剂量-效应关系(图3d).在3个CPF处理组中,nrf2基因表达显著上调(6.18、7.72、11.55倍),并且呈现剂量-效应关系(图3e).keap1基因的表达在CPF 处理组与对照组中无显著差异(图3f).ucp2的表达在0.47mg/L和0.94mg/L CPF处理组中显著下调(0.68、0.34倍),并且呈现剂量-效应关系(图3g).在0.47mg/L和0.94mg/L CPF处理组中,cox1显著下调(0.65、0.38倍),并且呈现剂量-效应关系(图3h).bcl2的表达在0.47mg/L和0.94mg/L CPF处理组中显著下调(0.7、0.31倍),并且呈现剂量-效应关系(图3i).2.1.3 毒死蜱对氧化应激酶活性的影响农药污染物可以改变机体抗氧化防御系统中相关基因的表达量,进而改变机体内抗氧化酶的活性,同时也会造成脂质过氧化.由图4可见,经0.24、0.47、0.94mg/L CPF处理后,胚胎总SOD活力分别是对照组的102%、81.3%、71.8%,0.94mg/L CPF处理组总SOD活力与对照组相比显著降低,并呈现剂量-效应关系;处理组CAT活力分别是对照组的86.8%、76.7%、56.5%,CPF处理组CAT活力与对照组相比显著降低,并呈现剂量-效应关系;处理组GST活力分别是对照组的136.7%、140.1%、119.5%;0.24、0.47、0.94mg/L CPF处理组MDA含量分别是对照组的305.4%、461.9%、558.1%,3个处理组与对照组相比显著升高,并呈现剂量-效应关系.2.2 讨论本研究中,采用梯度浓度的毒死蜱对斑马鱼胚胎进行处理,毒死蜱暴露96h后可以观察到,毒死蜱诱导胚胎产生了3种常见畸形心包水肿、尾部弯曲和卵黄囊畸形(图1b、图1c).经统计,3种畸形的畸形率的比例都随着处理浓度的提高而显著升高,呈现剂量-效应关系.由图1d可看出,高浓度毒死蜱对斑马鱼胚胎有严重的致畸作用.同时毒死蜱也会对胚胎产生致死作用,致死率随着处理浓度的提高而升高(图2).本研究通过检测毒死蜱暴露96h斑马鱼胚胎抗氧化酶相关基因的表达及酶活力来研究毒死蜱对斑马鱼胚胎氧化应激的影响.SOD和CAT是抵御氧化损伤的第一道防线,其中Cu/Zn-sod 和Mn-sod是编码超氧化物歧化酶(SOD)的基因,SOD的主要功能是清除氧自由基生成 H2O2和O2[20-22].过氧化氢酶(CAT)能够清除体内产生的过多的H2O2,将其分解成O2和H2O,编码基因是cat[20].在本研究中,高浓度毒死蜱暴露96h能够下调Cu/Zn-sod、Mn-sod和cat的表达,并呈现剂量-效应关系(图3a、图3b、图3c),这说明高浓度的毒死蜱会诱导胚胎产生氧化应激,导致胚胎体内产生过多的ROS无法及时清除,抑制了这3个基因的表达.酶活检测的结果也显示,高浓度毒死蜱能够显著抑制SOD和CAT活力,并呈现剂量-效应关系(图4a、图4b).谷胱甘肽S-转移酶(GST)具有Ⅱ相解毒酶和抗氧化酶的双重功能,能够保护机体免受环境污染物的损害,已被广泛用作检测环境污染物的生物指示物[23-26].在本研究中,毒死蜱能够提高GST活力(图4c),GST的编码基因gstp2的表达检测结果显示,低浓度毒死蜱能够显著上调的表达,表明毒死蜱诱导胚胎产生解毒反应,但最高浓度毒死蜱并没有显著诱导gstp2的表达(图3d),这可能是由于毒死蜱浓度过高,超过了胚胎的解毒能力,诱导机体产生过多的ROS,抑制了基因的表达.但在本研究中GST 的活力在处理组与对照组中差异并不显著,说明其对CPF胁迫并不敏感,但基因gstp2却可作为CPF污染的潜在生物指示物.转录因子NF-E2相关因子(nrf2),是细胞氧化应激反应中的关键因子,受胞质接头蛋白(keap1)的调控,通过与抗氧化反应元件ARE相互作用,能够上调抗氧化蛋白和II 相解毒酶的表达,keap1-nrf2/ARE通路是细胞抗氧化反应的中枢调节者[27-28].在毒死蜱胁迫下,斑马鱼胚胎体内nrf2表达量显著提高,同时keap1下调,能够诱导nrf2的积聚及活性增强(图3e、图3f),从而上调抗氧化蛋白和II相解毒酶(GST等)的表达,诱导斑马鱼胚胎产生抗氧化反应.过量ROS可侵害生物膜中的不饱和脂肪酸,引起脂质过氧化反应.丙二醛是膜脂过氧化最重要的产物之一,它的高低间接反映了机体细胞受自由基攻击的程度[29].毒死蜱处理组胚胎MDA含量显著高于对照组,并呈现剂量-效应关系(图4d),说明毒死蜱诱导机体产生过多的ROS,引起脂质过氧化,侵害机体细胞,可能引起细胞凋亡. cox1是细胞色素c氧化酶亚基I基因,细胞色素氧化酶是线粒体内呼吸链电子传递的终末复合物,是线粒体氧化能力的关键调节物质[30].毒死蜱能够显著下调其表达(图3h),对细胞色素c 氧化酶产生抑制作用,说明毒死蜱可以抑制呼吸链,能够减少ROS的产生和ATP的生成,同时电子传递和氧化磷酸化障碍能够引起细胞凋亡.ucp2是解偶联蛋白2的编码基因,解偶联蛋白2可以使氧化磷酸化过程解偶联,从而使ATP合成减少,这可导致细胞功能下降,降低机体对损伤的耐受性;同时也能抑制呼吸链ROS的产生.而在机体正常生理条件下,90% ROS来自线粒体呼吸链,因此可保护组织和细胞,避免产生过多ROS对机体造成损伤.所以它对机体的作用既有利也有弊[31].毒死蜱能够诱导ucp2显著下调(图3g),从而促进氧化磷酸化过程,有利于机体抵抗毒死蜱的氧化损伤作用.bcl2编码蛋白主要功能是抑制细胞凋亡[32],在毒死蜱胁迫下,其表达量显著下调(图3i),由此可见,毒死蜱破坏了机体内细胞凋亡的平衡.正常的细胞凋亡可以清除体内受损或者已经完成特定使命的细胞,是对机体的保护.而在毒死蜱胁迫下,斑马鱼胚胎体内MDA显著上升,引起脂质过氧化,并且cox1下调,造成电子传递和氧化磷酸化障碍,在这些凋亡信号的刺激下,抑制凋亡基因bcl2的表达下调,凋亡平衡机制遭到破坏,可能会引起斑马鱼胚胎细胞凋亡过度,从而对胚胎造成损伤.根据本研究结果,抗氧化酶SOD和CAT及抗氧化相关基因Cu/Zn-sod、Mn-sod、cat等都可成为CPF胁迫下斑马鱼胚胎氧化应激检测的潜在生物指示物.但是在低浓度CPF胁迫下, SOD、CAT和GST的活性差异并不显著.由此可见,在CPF胁迫下抗氧化酶活性及其相关基因的表达的改变并不完全一致,显然抗氧化相关基因的表达对CPF胁迫更加敏感.MDA作为氧化损伤的指示物,在本研究中其在斑马鱼胚胎中的含量受CPF浓度的影响,并具有浓度-效应关系.通过对毒死蜱胁迫下斑马鱼胚胎形态学的观察,以及氧化应激相关基因的表达和抗氧化酶含量的检测,发现较高浓度的毒死蜱对斑马鱼胚胎有严重致畸和致死作用,并且毒死蜱能够诱导斑马鱼胚胎产生氧化应激,诱导nrf2高表达,从而促进gstp2的表达.同时高浓度毒死蜱能够抑制部分抗氧化酶(SOD、CAT)的活性及其相关基因(Cu/Zn-sod、Mn-sod、cat)的表达,引起MDA含量升高,造成脂质过氧化.CPF也能够诱导呼吸链相关基因cox1、氧化磷酸化相关基因ucp2和抗凋亡基因bcl2表达显著下调.结果表明毒死蜱会诱导斑马鱼胚胎产生氧化应激,造成脂质过氧化,导致斑马鱼胚胎氧化损伤.【相关文献】[1] 刘占山,黄安辉,肖明山.毒死蜱的研究应用现状及产业发展前景 [J]. 世界农药, 2009,31(S1):59-61.[2] 汪家铭.毒死蜱市场竞争优势及发展建议 [J]. 化工科技市场, 2010,33(6):11-15.[3] 徐迎春,王松松,徐建军,等.烟台市农村饮用水水源地农药残留监测分析 [J]. 现代预防医学, 2015,42(9):1704-1707.[4] 吴长兴,赵学平,吴声敢,等.丘陵地区水稻田使用毒死蜱对水体的污染及其生态风险 [J]. 生态与农村环境学报, 2011,27(3): 108-112.[5] 郭强,田慧,毛潇萱,等.珠江河口水域有机磷农药水生生态系统风险评价 [J]. 环境科学, 2014,35(3):1029-1034.[6] Varó I, Serrano R, Pitarch E, et al. 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毒死蜱和三唑磷对斑马鱼头部AChE活性影响及在鱼体内的富集
摘
要： 采用半静态法 ， 测定了在 ９ — ｃ ６ｈ Ｌ 的 １ ０ １ ０ １ ０及 １ ０作 用剂量下慢性 暴露 ， ／ 、／ 、／ １ ２ ４ ／ ８ 毒死蜱和 ＝唑磷对斑马鱼头部 乙酰胆 ．
碱酯酶（ Ｃ Ｅ 活性 的抑制及两种农药在鱼体的富集作用 ， Ａｈ） 并研究解 除 ３ 后酶活性的恢 复。 ０ｄ 结果表明 ， 随暴露剂量增大 、 暴露时间 延长 ， 农药对 Ａ ｈ Ｃ Ｅ活性抑制越强。在 ９ — ｃ ６ｈ Ｌ 的 １１ ／０作用剂量下连续暴露 ３ ， ０ｄ 毒死蜱和ｊ唑磷处理组斑马鱼头部 Ａ ｈ Ｃ Ｅ活性
分别为对照的 ４ ．５ ２ ％和 ３ ． ％。毒死蜱不同剂量处理组酶活性在解除药剂后 ３ ２ １０ ８ ０ｄ均可恢 复到对照 的 ９ ％以上 ， ｌ ０ 而 二唑磷高剂量 处理 组（ ６ｈ Ｌ 的 １１ ９ — ｃ ，０和 １２ ） ／０ 分别 只有对 照的 ７ ．１ ４９ ％和 ７ ． ％。毒 死蜱极 容易 在鱼体 富集 ， １６ ・ ４ 慢性 暴露 ３ ０ｄ富集 系数 达
Ｉ ａ ｔ ｎｔｅ ｔ ｉ ｆ ｃｔｌｈ Ｉ ｅｔｒ ｓ（ ｈ ｉ ａ ｎ ｉｃ ｎ ｅ ｔａｉｎｉ ｅ ｒ ｆ ｈ Ｂ ａ ｈ７ ｎｏ ｍｐ ｃ ｉ ｔ ｏ ｅｙｃ ｏｉ ｓ ａｅ ＡＣ Ｅ） Ｈｅ ｄａ ｄＢ ｏ０ ｃ ｎｒｔ Ｚ ｂ ａ ｓ （ ｒｃ ） ａ ｉ ｏ ｈ Ａｃ ｖ ｙ Ａ ｎ ｅ ｎ ０ ｎ ｉ ｄ
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三唑磷对斑马鱼miR-99及其预测靶标ckmt2的表达的影响
在靶标基 因 ｃ ｋ ｍ ｔ ２的表达可 能存在抑制作用 ， ｍ ｉ Ｒ 一 ９ ９ 表达 的降低致使 对 ｃ ｋ ｍ ｔ ２ 表 达抑制 的作用减 弱 ，
ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ． Ｃ ｋ ｍｔ ２ ｇ ｅ ｎ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｄ ｉ ｄ ｎ ｏ ｔ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｎ ｌ ｔ ｙ ， ｗｈ ｉ ｃ ｈ ｉ ｓ ０ ． ９ １ ａ ｎ ｄ ０ ． ８ ９ ｔ ｉ ｍｅ ｓ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｏｒ ｆ ｔ ｒ ｉ ａ ｚ ｏ ｐ ｈ ｏ ｓ ａ ｎ ｄ
第２ ９卷 第 ３期
２ ０ １ ３ 年 ３月
科 技 通 报
ＢＵＬ Ｌ Ｅ ＴＩ Ｎ ０Ｆ Ｓ Ｃ Ｉ ＥＮＣ Ｅ ＡＮＤ Ｔ ＥＣ ＨＮＯＬ ＯＧ Ｙ
Ｖｏ １ ． ２ ９ Ｎｏ ． ３
Ｍａ ｒ ．２ Ｏｌ ３
三唑磷 对斑 马鱼 ｍｉ Ｒ 一 ９ ９及 其预 测靶标 ｃ ｋ ｍｔ ２的表 达 的影 响
ｉ ｎ ｚ ｅ ｂ ｒ ａ ｉ ｆ ｓ ｈ ｗ ｅ ｒ ｅ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｅ ｄ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｒ ｅ ｌ— ａ ｔ ｉ ｍｅ Ｐ ＣＲ ａ ｎ ｄ Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｆｔ ａ ｅ ｒ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｅ ｄ ｗｉ ｈ ｔ ｔ ｒ ｉ ａ ｚ ｏ ｐ ｈ ｏ ｓ ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄ
斑马鱼在生态毒理学研究中的应用
斑马鱼在生态毒理学研究中的应用刘在平;张松林;李运彩【摘要】介绍了斑马鱼在常规毒性实验、分子及细胞生态毒理、生物致突变效应检测和环境激素测试等生态毒理领域中的最新应用动态,并展望了微宇宙毒性实验的应用前景,以期为斑马鱼毒性实验提供参考.【期刊名称】《江西农业学报》【年(卷),期】2010(022)007【总页数】3页(P97-99)【关键词】斑马鱼;生态毒理学;毒性试验;应用【作者】刘在平;张松林;李运彩【作者单位】西北师范大学,地理与环境科学学院,甘肃,兰州,730070;西北师范大学,地理与环境科学学院,甘肃,兰州,730070;西北师范大学,地理与环境科学学院,甘肃,兰州,730070【正文语种】中文【中图分类】X171.5斑马鱼(Danino rero)是最早用作胚胎发育生物学和遗传学实验的动物模型。
20世纪70年代末，国外开始用斑马鱼进行急性毒性研究［1］;90年代初，开始用于急、慢性联合毒性实验［2］。
近几年，国外以斑马鱼及转基因斑马鱼为动物模型进行的生态毒理研究与检测技术日趋成熟。
目前，国内对斑马鱼的生态毒理研究水平也较高，但与美国和欧盟相比还存在一定的差距。
以下重点介绍斑马鱼在常规毒性实验、分子及细胞生态毒理、生物致突变效应检测和环境激素测试等生态毒理领域中的最新应用研究进展，以期为斑马鱼毒性实验提供一定的参考。
1 在常规毒性实验中的应用1.1 急性毒性实验目前，斑马鱼已被OECD和ISO列为实验标准鱼类，用于α－二氯甲苯和11－氨基十一烷酸等物质的急性毒性实验。
国内则用斑马鱼急性毒性实验测试各种农药、有机试剂和污染物等的急性毒性。
赵春青等［3］采用半静态法在室内测定了10种不同类型的农药对斑马鱼的急性毒性，发现它们对斑马鱼都有毒，但毒性大小无规律可循，与药剂种类亦无相关性。
因此，这些农药对斑马鱼的毒性作用机理值得深入研究。
范亚维等［4］也用该实验方法研究了甲苯、乙苯和二甲苯的水生生态毒性效应，发现对斑马鱼毒性大小为:乙苯≈二甲苯＞甲苯，乙苯和二甲苯的毒性差别不大，大约是甲苯的2倍，这种毒性效应的差别可能与其分子结构有关，这3种物质的苯环所含支链数目及位置不同。
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农业环境科学学报２００8,２7(6):2452-2455ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｏ-ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔＳｃｉｅｎｃｅ摘要：采用半静态法，测定了在96h-LC 50的1/10、1/20、1/40及1/80作用剂量下慢性暴露，毒死蜱和三唑磷对斑马鱼头部乙酰胆碱酯酶（AChE ）活性的抑制及两种农药在鱼体的富集作用，并研究解除30d 后酶活性的恢复。
结果表明，随暴露剂量增大、暴露时间延长，农药对AChE 活性抑制越强。
在96h-LC 50的1/10作用剂量下连续暴露30d ，毒死蜱和三唑磷处理组斑马鱼头部AChE 活性分别为对照的42.25%和31.80%。
毒死蜱不同剂量处理组酶活性在解除药剂后30d 均可恢复到对照的90%以上，而三唑磷高剂量处理组（96h-LC 50的1/10和1/20）分别只有对照的74.91%和71.46%。
毒死蜱极容易在鱼体富集，慢性暴露30d 富集系数达260.91~1320.03L ·kg -1，而三唑磷仅为8.23~26.84L ·kg -1。
关键词：乙酰胆碱酯酶（AChE ）；毒死蜱；三唑磷；生物富集中图分类号：X592文献标识码：A文章编号：1672-2043(2008)06-2452-04收稿日期：2008-02-16基金项目：国家“十一五”支撑计划（2006BAK02A04）；江苏省社会发展基金（BS2007096）；江苏省农科院创新人才基金（6510709）作者简介：余向阳（1972—），男，湖北浠水人，博士，副研究员，主要从事农药污染评价及治理技术研究。
E-mail ：yu981190@毒死蜱和三唑磷对斑马鱼头部AChE 活性影响及在鱼体内的富集余向阳，赵于丁，王冬兰，侯方浩，刘贤进（江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所，江苏南京210014）Impact on the Activity of Acetylcholinesterase （AChE ）in Head and Bioconcentration in Zebrafish （Brachydanio rerio ）After Chronic Exposure to Chlorpyrifos and TriazophosYU Xiang-yang,ZHAO Yu-ding,WANG Dong-lan,HOU Fang-hao,LIU Xian-jin（Institute of Food Safety,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences,Nanjing 210014,China ）Abstract ：The acetylcholinesterase （AChE ）activities in zebrafish （Brachydanio rerio ）head was studied after chronic exposure at sublethal concentrations （1/10,1/20,1/40or 1/80of 96h-LC 50）of chlorpyrifos and triazophos,and the bioconcentration of these pesticides in fish was investigated as well.The results showed that the AChE activity gradually reduced with increasing of the exposure time and concentra －tions.When the concentrations of the pesticides were 1/10of 96h-LC 50and exposed for 30days,the activities of AChE in zebrafish head were 42.25%and 31.80%of control for chlorpyrifos and triazophos,respectively.The recovery activities of AChE by chlorpyrifos were all over 90%of control in all the treatments 30days after the pesticide was removecd.However,the recovery activities of AChE inhibited by tria －zophos were 74.91%and 71.46%of control at the high concentration exposures （1/10and 1/20of 96h-LC 50）.Chlorpyrifos could be easily taken up and concentrated by zebrafish from water,and the bioconcentration factors （BCF 30d ）were 260.91~1320.03L ·kg -1after exposure of 30days,while for triazophos ranged 8.23~26.84L ·kg -1.Keywords ：acetylcholinesterase （AChE ）;chlorpyrifos;triazophos;bio-concentration农药的大量使用造成对水环境污染问题已越来越受到关注。
水体的农药污染不仅危及水生生物安全，导致生态平衡被破坏，还可在生物体内富集浓缩，并通过食物链传递对人类的健康带来潜在的威胁[1]。
因此，应加强农药对水生生物，特别是对鱼类的危害评价研究，以指导农药的合理使用。
乙酰胆碱酯酶（AChE ）是有机磷和氨基甲酸酯类农药的作用靶标酶，也是用于评价水生生物对于神经毒剂化合物暴露效应中一种重要生物标志物，是对有机磷和氨基甲酸酯类农药污染的有效诊断工具[2-4]。
生物体内AChE 活性被抑制对其活动、取食、产卵以及躲避捕食天敌等均有不同程度的影响[5-9]。
研究农药对鱼体AChE 活性的影响对评价农药对鱼类的安全性及建立水体污染快速诊断方法具有重要意义。
第２7卷第6期农业环境科学学报毒死蜱和三唑磷在我国应用广泛，并且是作为替代甲胺磷、对硫磷等高毒有机磷类农药的两个主要有机农药品种，被推荐用于水稻、棉花等农作物的害虫防治[10]。
关于这两种农药对水生生物的安全性及生物富集作用研究有待深入开展。
本研究以斑马鱼为试鱼，测定了亚致死作用剂量下连续暴露30d，毒死蜱和三唑磷对斑马鱼头部AChE活性的抑制作用及酶活性的恢复，以及这两种农药在体内的富集浓缩作用，为评价这两种农药对水生生物的安全性提供依据。
1材料与方法1.1试验材料供试生物：斑马鱼（Brachydanio rerio）采购于南京夫子庙花鸟鱼市场，大小一致，平均体长2～3cm。
试验前在室内驯养7d以上，自然死亡率应小于2%，试验前1d停止喂食，急性毒性测定试验期间不喂食，慢性暴露试验期间每48h定期定量喂食1次。
仪器及试剂：Angilent6890N气相色谱仪（Angi－lent，美国），组织匀浆器（IKA T18基本型），低温高速离心机（Beckman），酶标仪（Thermo Multiskan MK3）。
毒死蜱、三唑磷标准品（含量>98%，均购自国家标准物质研究中心），乙酰胆碱酯酶测定试剂盒（南京建成生物工程研究所第一分所），标准牛血清蛋白（BSA）和考马斯亮蓝G-250均为SIGMA公司产品，乙腈等化学试剂均为AR级（上海化学试剂有限公司产品），无水硫酸钠（分析纯，使用前650℃烘拷4h以上），氟罗里硅土（100~200目）。
试验用水：用曝气去氯处理24h后的自来水，pH为6.8~7.5，试验期间保证水中溶氧量为5mg·L-1以上。
1.2试验方法1.2.1急性毒性试验参照OECD推荐的半静态法[11]。
在200cm×300 cm×200cm的玻璃缸中，按每1L药液投放1条鱼的比例进行试验。
试验期间保持水温（20±2）℃，每隔48h更换全部药液。
每浓度处理重复3次，每重复试鱼10条，并设1个不加农药的对照处理。
于试验开始后24、48、72、96h记录死鱼数，计算死亡率。
1.2.2慢性暴露试验参照OECD推荐的半静态法[12]。
分别以急性毒性试验测定两种农药96h-LC50值的1/10、1/20、1/40及1/80的剂量连续暴露处理30d，然后用不含农药的水继续恢复饲养30d。
于受药后10、20、30d及恢复30d后取样，分别测定头部AChE活性及鱼体残留农药浓度。
除试验期间需定期喂食外，慢性暴露处理方法和条件同急性毒性试验。
1.2.3乙酰胆碱酯酶活性测定匀浆制备：取试鱼整个头部，去掉鳃盖和鱼鳃后秤重，加入3mL预冷匀浆缓冲液（0.05mol·L-1PBS 缓冲液pH7.4）冰浴下充分匀浆。
然后在4℃下，4000 r·min-1离心10min，取上清液用于AChE活力和蛋白质含量测定。
生化测定：AChE活性采用南京建成生物工程研究所乙酰胆碱酯酶测定试剂盒进行测定，该试剂盒根据Ellman原理，乙酰胆碱酯酶水解乙酰胆碱生成胆碱和乙酸，通过胆碱与巯基显色剂反应生成TNB黄色化合物，在412nm下进行比色分析，根据水解产物胆碱的量反应乙酰胆碱酯酶活力。
蛋白质含量的测定采用Bradford[13]法。
1.2.4斑马鱼体内农药残留量测定方法提取：将试验鱼分装于10mL玻璃试管中，称重并按每1g样品加1g无水硫酸钠，充分混匀后加入5mL乙腈，匀浆2min，于4000r·min-1离心10min，取上清液，残渣再用2mL乙腈重复提取1次，合并提取液，40℃氮气吹干后，用1mL正己烷定容，氟罗里硅土小柱净化。
净化：在内径1.5cm、长15cm左右的聚乙烯层析柱依次填入1cm无水硫酸钠、3cm高氟罗里硅土和1cm无水硫酸钠，用5mL正己烷活化。
将上述1mL提取液加入到柱顶，用5mL正己烷洗涤后，再用5mL正己烷+二氯甲烷（7+3）进行洗脱，收集洗脱液，氮气吹干并用丙酮定容，气相色谱定量检测。
气相色谱测定条件：载气：氮气（纯度99.999%）；流速：3.4mL·min-1；色谱柱：DB-17（30.0 m×530μm×1.0μm）；进样口温度：250℃，不分流进样；柱温程序：初始温度220℃，保持1min，以10℃·min-1升温至250℃，保持5min，然后以20℃·min-1升温至280℃，并保持4.5min；检测器温度：230℃；氢气流速：75.0mL·min-1；空气流速：100mL·min-1；尾吹气流速：30mL·min-1；在上述色谱条件下，毒死蜱保留时间为5.561min，三唑磷保留时间为11.823min。