核酸的生产
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
• 这类物质多数生物体能自身合成，作为 核酸类药物基本上是经微生物发酵或从 生物材料中提取生产的。
药物作用
• 有助于改善机体的物质代谢和能量代谢 平衡，加速受损组织的修复，促使机体 恢复正常生理机能。
• 临床已广泛使用于血小板减少症，白细 胞减少症，急慢性肝炎，心血管疾病， 肌肉萎缩等代谢障碍性疾病。
• 核算由于酸性较强，能与钠，钾，镁等 金属离子结合成盐，也易与碱性化合物 结合成复合物，如能和甲苯胺蓝，派罗 红，甲基绿等碱性染料结合，其中甲苯 胺蓝能使RNA和DNA均染上蓝色，派罗红 专染RNA成红色，甲基绿专染DNA成绿色。
• 核酸和蛋白质一样有变性现象，在一定 条件下受到某些理化因素的作用，会发 生变性，如二级结构改变，氢键断裂， 碱基的规律堆积破坏，双螺旋松散成为2 条缠绕的无定形多核苷酸连，从螺旋向 无规则卷曲转变。
DNA的提取
• 动物内脏（肝、脾等）加4倍量生理盐水经组织捣碎机 捣碎1min，匀浆，2500r／min离心30min； • 沉淀用同样体积生理盐水洗涤3次，每次洗涤后离心， 将沉淀物悬浮于20倍量的冷生理盐水中，再捣碎3min； • 加入2倍量的5%的十二烷基磺酸钠，用45%乙醇作溶剂， 搅拌2-3h。 • 在0°C,2500r／min离心，收集上清液并加入等体积的 冷95%乙醇，离心即可得到纤维状DNA，再用冷乙醇和 丙酮洗涤，减压低温干燥得粗品DNA.
DNA的提纯
• 粗品DNA溶于适量蒸馏水，加入5%的十二 烷基磺酸钠，用45%乙醇作溶剂，按1／ 10体积，搅拌1h，经5000r／min离心1h， 上清液中加入Nacl按1mol／L，在缓慢加 入冷95%乙醇，DNA析出，经乙醇、丙酮 洗涤，真空干燥得具有生物活性的DNA。 （0-3度）
RNA的提取
• 材料：动物内脏（肝，脾），酵母细胞， • 器材：捣碎机，离心机，
• 试剂：NaOH,HCl，95%乙醇，十二烷基酸 钠，生理盐水，丙酮，
• DNA主要存在于细胞中，占总DNA的98%，另2% 存在于线粒体和叶绿体; • RNA主要存在于细胞质中，约占总RNA的90%， 另10%存在于细胞核里的核仁、核浆和染色体 中。
核算变性因素：加热，氢离子浓度变化， 变性试剂（尿素，某些有机溶剂等）
• 变性后的核酸生物活性丧失，物化形状 改变，如粘度下降，沉降系数增加，比 旋度值降低以及紫外光吸收能力显著增 加。
核酸类药物分类
• 第一类为具有天然结构的核酸类物质。 属于这一类的核酸类药物有：肌酐，ATP， 辅酶A，脱氧核苷酸，肌酐酸，GTP,CTP， 腺嘌呤等。
• 第二类为自然结构碱基，核苷，核苷酸类似物 或聚合物。这类核苷酸药物是当今治疗病毒， 肿瘤，艾滋病的重要药物，也是产生干扰素， 免疫抑制剂的临床药物。
• 这类药物大部分由自然结构的核酸类物质通过 半合成生产。
• 临床用于抗病毒的这类药物有：三氯代胸苷， 氮杂鸟嘌呤，氟胞嘧啶肌酐二醛，阿糖胞苷等。
• 核酸的丰富资源是微生物，通常RNA在细 菌中，占5%～25%，在酵母中占2.7～15%， 在霉菌中占0.7%～28%，所以从微生物中 提取RNA工业上最实际有效地方法。工业 生产主要是培养酵母菌体，提取RNA。
• 取100g压榨啤酒酵母（含水70%），加入 0.13%NaOH230mL,20度缓慢搅拌30min。 • 用6mol／L HCl调至pH=7，搅拌15min， 离心，得清夜255mL。 • 冷至10度以下，6mol／L HCl调PH=2.5， 冷置过夜，离心得 RNA 1.8g。
核酸性质
理化性质：RNA和核苷酸的纯品都呈白色 粉末或结晶，DNA则为白色类似石棉样 的纤维状物。除肌酐酸，鸟甘酸具有鲜 味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。 RNA,DNA,和核苷酸都是极性化合物，一 般都溶于水，不溶于乙醇，氯仿等有机 溶剂，。
• RNA,DNA和核苷酸既有磷酸基又有碱性 基，故为两性电解质，在一定的pH条 件下，可以解离而带有电荷，因此， 都有一定的等电点，能进行电泳。
核酸类药物的生产
任务一：核酸的提取
概念： 核酸（DNA、RNA）是由许多核苷酸以3′，5′-磷 酸二酯键链接而成的大分子化合物。在生物的 遗传、变异、生长发育以及蛋白质合成等方面 起着重要作用。
核苷酸是核酸的基本结构
核苷酸
碱基 戊糖 磷酸
核苷
因而核酸类药物包括：核酸、核苷酸、核苷、碱 基及其衍生物
• 核酸的含量与细胞的大小无关，故制备核酸时 采用生长较旺盛的组织，如胰、脾、胸腺等。 这类组织核酸含量较高。 • 由于DNA是遗传物质，所以对同一种生物而言， 每个细胞（生殖细胞除外）中的DNA含量是恒 定的；而RNA的含量则与细胞的活跃程度有关， 在蛋白质合成旺盛的细胞中，其RNA的含量也 相应的较高。
Βιβλιοθήκη Baidu
药物作用
• 有助于改善机体的物质代谢和能量代谢 平衡，加速受损组织的修复，促使机体 恢复正常生理机能。
• 临床已广泛使用于血小板减少症，白细 胞减少症，急慢性肝炎，心血管疾病， 肌肉萎缩等代谢障碍性疾病。
• 核算由于酸性较强，能与钠，钾，镁等 金属离子结合成盐，也易与碱性化合物 结合成复合物，如能和甲苯胺蓝，派罗 红，甲基绿等碱性染料结合，其中甲苯 胺蓝能使RNA和DNA均染上蓝色，派罗红 专染RNA成红色，甲基绿专染DNA成绿色。
• 核酸和蛋白质一样有变性现象，在一定 条件下受到某些理化因素的作用，会发 生变性，如二级结构改变，氢键断裂， 碱基的规律堆积破坏，双螺旋松散成为2 条缠绕的无定形多核苷酸连，从螺旋向 无规则卷曲转变。
DNA的提取
• 动物内脏（肝、脾等）加4倍量生理盐水经组织捣碎机 捣碎1min，匀浆，2500r／min离心30min； • 沉淀用同样体积生理盐水洗涤3次，每次洗涤后离心， 将沉淀物悬浮于20倍量的冷生理盐水中，再捣碎3min； • 加入2倍量的5%的十二烷基磺酸钠，用45%乙醇作溶剂， 搅拌2-3h。 • 在0°C,2500r／min离心，收集上清液并加入等体积的 冷95%乙醇，离心即可得到纤维状DNA，再用冷乙醇和 丙酮洗涤，减压低温干燥得粗品DNA.
DNA的提纯
• 粗品DNA溶于适量蒸馏水，加入5%的十二 烷基磺酸钠，用45%乙醇作溶剂，按1／ 10体积，搅拌1h，经5000r／min离心1h， 上清液中加入Nacl按1mol／L，在缓慢加 入冷95%乙醇，DNA析出，经乙醇、丙酮 洗涤，真空干燥得具有生物活性的DNA。 （0-3度）
RNA的提取
• 材料：动物内脏（肝，脾），酵母细胞， • 器材：捣碎机，离心机，
• 试剂：NaOH,HCl，95%乙醇，十二烷基酸 钠，生理盐水，丙酮，
• DNA主要存在于细胞中，占总DNA的98%，另2% 存在于线粒体和叶绿体; • RNA主要存在于细胞质中，约占总RNA的90%， 另10%存在于细胞核里的核仁、核浆和染色体 中。
核算变性因素：加热，氢离子浓度变化， 变性试剂（尿素，某些有机溶剂等）
• 变性后的核酸生物活性丧失，物化形状 改变，如粘度下降，沉降系数增加，比 旋度值降低以及紫外光吸收能力显著增 加。
核酸类药物分类
• 第一类为具有天然结构的核酸类物质。 属于这一类的核酸类药物有：肌酐，ATP， 辅酶A，脱氧核苷酸，肌酐酸，GTP,CTP， 腺嘌呤等。
• 第二类为自然结构碱基，核苷，核苷酸类似物 或聚合物。这类核苷酸药物是当今治疗病毒， 肿瘤，艾滋病的重要药物，也是产生干扰素， 免疫抑制剂的临床药物。
• 这类药物大部分由自然结构的核酸类物质通过 半合成生产。
• 临床用于抗病毒的这类药物有：三氯代胸苷， 氮杂鸟嘌呤，氟胞嘧啶肌酐二醛，阿糖胞苷等。
• 核酸的丰富资源是微生物，通常RNA在细 菌中，占5%～25%，在酵母中占2.7～15%， 在霉菌中占0.7%～28%，所以从微生物中 提取RNA工业上最实际有效地方法。工业 生产主要是培养酵母菌体，提取RNA。
• 取100g压榨啤酒酵母（含水70%），加入 0.13%NaOH230mL,20度缓慢搅拌30min。 • 用6mol／L HCl调至pH=7，搅拌15min， 离心，得清夜255mL。 • 冷至10度以下，6mol／L HCl调PH=2.5， 冷置过夜，离心得 RNA 1.8g。
核酸性质
理化性质：RNA和核苷酸的纯品都呈白色 粉末或结晶，DNA则为白色类似石棉样 的纤维状物。除肌酐酸，鸟甘酸具有鲜 味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。 RNA,DNA,和核苷酸都是极性化合物，一 般都溶于水，不溶于乙醇，氯仿等有机 溶剂，。
• RNA,DNA和核苷酸既有磷酸基又有碱性 基，故为两性电解质，在一定的pH条 件下，可以解离而带有电荷，因此， 都有一定的等电点，能进行电泳。
核酸类药物的生产
任务一：核酸的提取
概念： 核酸（DNA、RNA）是由许多核苷酸以3′，5′-磷 酸二酯键链接而成的大分子化合物。在生物的 遗传、变异、生长发育以及蛋白质合成等方面 起着重要作用。
核苷酸是核酸的基本结构
核苷酸
碱基 戊糖 磷酸
核苷
因而核酸类药物包括：核酸、核苷酸、核苷、碱 基及其衍生物
• 核酸的含量与细胞的大小无关，故制备核酸时 采用生长较旺盛的组织，如胰、脾、胸腺等。 这类组织核酸含量较高。 • 由于DNA是遗传物质，所以对同一种生物而言， 每个细胞（生殖细胞除外）中的DNA含量是恒 定的；而RNA的含量则与细胞的活跃程度有关， 在蛋白质合成旺盛的细胞中，其RNA的含量也 相应的较高。
Βιβλιοθήκη Baidu