传染病血清标志检测指标的发展与应用

HBsAg检测易出现“假阴性”结果

HBsAg含量低于所用方法的测定下限之下
——如感染的“窗口期”、急性期后或恢复期、自限性感染末期的携带者等。

编码HBsAg的HBV S基因的突变。
——HBV容易发生突变，较其他DNA病毒的突变率要高10倍；S基因发生突变可导致 HBsAg的 a决定簇发生改变，最相关的突变是G145R、K141E和T131I以及在122与123位 残基之间3个氨基酸的插入，可明显影响HBsAg的抗原结构。
,几乎一半在中国
http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs204/en
乙型病毒传播模式
• 性传播
• 输血传播
• 围产期传播

医院内传播
HBV疾病的发展
血清学诊断 三步骤
感染
复制
疾病活动期
血清标志物
HBsAg, anti-HBc, anti-HBe
HBeAg, HBV DNA
缺点 包被面积小，反应面积有限 颜色反应（灵敏度、特异性） 包被均一性不足（精密度） 反应时间不一致造成结果偏差（精密度低， 熟练的操作人员其批间差也达20%以上） 洗板容易带来污染 手工操作，管理不易
电化学发光免疫测定（ECL）
——输血病人筛查自动化方法
结合 标记抗体
结合磁 性微珠
转移至 电极
施加电压 启动反应
信号检测
方法学对比
传统（ELISA）
优点： 降低成本 可实现自动化
现在（ECL）
缺点： HOOK效应引起的假阳性 非特异反应 交叉污染引起的假阳性 灵敏度低,对于窗口期感染的检出率低,容 易导致假阴性的出现
优点： 异相免疫分析，抗原抗体高效结合， 无传统一步法的缺点 结果稳定，高精密度 可控的反应体系 快速的检测时间 抛弃型tip头避免交叉污染 缺点： 成本相对较高
ALT
乙肝血清学标记物检测要点
感染后血清转换的早期即可检测出（缩短窗口期) 分析灵敏度优异 识别所有的亚型 可靠地识别病毒变异株 高特异性的表现 高检测精密度,尤其是cutoff 处精密度表现尤为重要
乙肝表面抗原（HBsAg）

1963年由 Blumberg在澳大利亚土著人血中发现，称为澳大利亚抗原（即以前所谓的“澳抗”） ；又称为肝炎相关抗原（HAA）；1974年正式定名为乙型肝炎病毒表面抗原。
感染性疾病血清标志物检测的发展与临床应用
传染病血清标志物
• 1.感染性疾病筛查 • 2.HBV的检测 • 3.HCV的检测 • 4.HIV的检测
感染性疾病筛查
• HBV、HCV、HIV等是感染性疾病术前筛查的重要指标 • 2000年卫生部184号文颁发了“临床输血技术规范”的通知，特别 强调了手术病人术前的筛查项目
传染病血清标志物
• 1.感染性疾病筛查 • 2.HBV的检测 • 3.HCV的检测 • 4.HIV的检测
乙型肝炎: 世界性的公共卫生问题
HBsAg Prevalence
>8% - High 2-7% - Intermediate <2% - Low
全球约有20亿人曾感染过乙肝
其中3.5亿人为慢性HBV感染者
国内 试剂 C 6.96 3.87 1.99 0.87 0.62 0.39 -
国内 试剂 D 7.46 3.82 2.07 0.98 0.65 0.28 -
进口 试剂 E 45.81 27.74 14.89 8.00 4.28 2.36 1.17 0.58
进口 试剂 F 26.13 16.10Hale Waihona Puke Baidu9.45 5.44 2.83 1.67 1.05 0.48
进口 试剂 G 20.39 13.11 8.19 5.19 2.97 1.88 1.09 0.38

HBsAg有一个特异的共同抗原决定簇“a”和至少两个亚型决定簇“d/y”和“w/r”，最常见的血清 型为adw、adr和ayw。

最常用的测定方法为ELISA，使用针对HBsAg的a决定簇的单克隆和多克隆抗体，为双抗体夹心
测定模式。

血清中检出 HBsAg是乙型肝炎的早期诊断指标之一 ——出现时间：HBV感染后2～6个月（潜伏期）
根据HBsAg II在华西医院的评估结果估计： 每100例HBsAg II阳性的标本中，华西的检测方法会漏检5例。
国内外HBsAg诊断试剂灵敏度评估
国家参考品adr血清的检测结果
抗原浓度 (ng/ml) 4 2 1 0.5 0.25 0.125 0.06 0.03 国内 试剂 A 8.86 4.14 2.03 0.99 0.48 0.13 国内 试剂 B 14.43 7.86 4.10 1.25 0.84 0.42 -

丙型肝炎病毒（HCV）与丁型肝炎病毒（HDV）重叠感染对HBV复制和/或HBsAg
表达的抑制作用 测定方法所用抗体对 HBV不同基因型检测敏感性的不同。

HBsAg 检测的挑战之一： 对于低水平HBsAg的检测
HBsAg 是 乙肝感染最早出现的血清学标记物
灵敏度 是评价表面抗原的最重要的指标
2006年临床化学杂志 －－美国华盛顿大学
国内感染性血清标志物检测特点
• 手工操作为主,自动化使用较少 • 检测方法较多, ELISA方法占绝大部分 • 使用仪器和试剂较混乱,试剂多达30几家,仪器多达50多种
• 实验室之间检测结果存在较大差异
酶联免疫法（ELISA）
• 微板法固相载体
——术前病人筛查传统方法
优势
简单，易操作
成本低
1.
2.
以前在HBV DNA检测方法不是很灵敏度的时候认为HBsAg 阳性而DNA阴性代表病 毒的静默期，没有复制；
随着更灵敏的DNA检测方法的使用，人们也发现HBsAg阴性而DNA阳性的状况；
•
•
第一个原因是处于窗口期
由于HBsAg的灵敏度决定的
中国低水平HBsAg的状态
• 浙江大学第一附属医院在2002年做的评估如下： • 8089例病人中2.34%<5ng/ml • 816表面抗原阳性的人群中23.16% <5ng/ml • 其中84例<1ng/ml(44.4%) • 33例 <2, >1ng/ml(17.5%) • 72例 <5,>2ng/ml(38.10%)