微生物检查方法验证
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(2)菌液组 所加的试验菌数。 (3)供试品对照组 测定供试品本底菌数。 (4)稀释剂对照组 用相应的稀释液替代供试品, 加入试验菌按试验组测定其菌数。 考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。
药品污染常见的真菌
毛霉属、根霉属、曲霉属、青霉属、木霉属 一、毛霉属(Mucor Micheli ex Fries) 毛霉属在自然界分布很广,常用于发酵工业。并引起水分 高的粮食及食品的霉烂变质。
根霉属(RhizopusEhrenberg)
根霉属广泛应用于发酵工业,在潮湿的粮食及食品上能迅 速蔓延生长,引起粮食及食品的腐烂。
真菌(fungus;eumycetes) 是具有真核和细胞壁的生物。种类很多,已报道 的种超过10万个。大多是由纤细管状菌丝构成的 菌丝体。许多菌丝在一起统称菌丝体。菌丝体在 基质上生长的形态称为菌落。
真菌的形态具有多样性,大小不一,大的用肉眼 可以看到,小的用普通光学显微镜放大数倍乃至 千倍方可观察到。其形态分单细胞、多细胞,单 细胞呈圆形或卵圆形,如酵母菌(yeast)。多 细胞由菌丝和孢子组成,并交织成团。
微生物的特点
种类多 分布广 迄今为止,我们知道的微生物约有10万种,目前 已知的种类只占地球上实际存在的微生物总数的 20%。
微生物的特点
各体小,面积大 物体的表面积和体积之比称为表面积 大肠埃希菌的表面积是人的30万倍。
微生物的特点 吸收多 转化快 如大肠埃希菌在合适条件下,每小时可以消 耗相当于自身重量2000倍的数量,而人体则 需要40年之久。
曲霉属(Aspergillus)
曲霉属的菌丝无色、淡色或表面凝聚有色物质,为有隔的多细胞。 本属的常见产毒霉菌有8个种,具有强烈的致癌性。
青霉属
菌丝无色或有色,为有隔的多细胞。分生孢子梗从菌丝垂直生出, 无足细胞,顶端不膨大,无顶囊,产生一轮至数轮分叉,在最后一 级分枝的小梗上,长出成串的分生孢子,形似扫帚状,称为帚状枝。 本属的常见产毒霉菌有9个种,其中展青霉可产生展青霉素,是一种 神经毒素,并具有致畸、致突变和致癌性;
细菌的繁殖 细菌(bacterium)属于原核细胞型微生物,其 特点是具有细胞壁、原始的核质,以二分裂方式 繁殖。
细菌的形态 ⒈细菌体积微小,是无色半透明的,用肉眼直接观 察难以看到,其结构和形状须经过显微镜放大数百 倍至上千倍才能观察。 ⒉一般以微米(µm)作为测量单位。 ⒊在细菌学中,按其形态可分为球菌、杆菌、弧菌 和螺杆菌。 ⒋经革兰染色法(Gram stain)可将细菌分成两大 类:即革兰阳性菌(G+)和革兰阴性菌(G-)。
试验菌株 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、 白色念珠菌、 黑曲霉、枯草杆菌。 菌液制备 同计数培养基的适用性检查。
(1)试验组
① 平皿法 取最低稀释级供试液1ml和50~ 100cfu试验菌,分别注入平皿中,立即倾注琼 脂培养基(平行制备2个平皿),按平皿法测定其 菌数。 ②薄膜过滤法 取最低稀释级供试液,过滤,冲 洗,在最后一次的冲洗液中加入50~100cfu试 验菌,过滤,按薄膜过滤法测定其菌数。
微生物检查方法验证
介绍内容
一、微生物的基础知识 二、微生物检查方法验证
微生物基础知识
微生物(microorganism, microbe)是一些 肉眼看不见的微小生物的总称。 微生物(microorganism)包括细菌、支原 体、螺旋体、衣原体、立克次体、病毒及真菌 (霉菌、酵母菌和放线菌)等。
验证方法
菌液制备 验证方法 50~100cfu/ml。 试验组、菌液组、供试品对照组、释剂对照组。
结果判断
供试品组、对照组、稀释剂对照组的菌回收率
均不低70% 。
验证方法
⑴按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法 及下列要求进行。 ⑵对各试验菌的回收率应逐一进行验证。 ⑶验证试验至少应进行3次独立的平行试验,并分别计算各 试验菌每次试验的回收率。
微生物的特点 适应强 易变异 多数细菌能耐0~-196℃的低温;硫细菌 可在250~300℃的高温条件下正常生长; 一些嗜盐细菌甚至能在饱和盐水中正常生 活;产芽孢细菌和真菌孢子在干燥条件下 能保藏几十年、几百年。
微生物的类群和形态结构 微生物按其结构、化学组成及生活习性等分 为三大类: 原核细胞型:细菌、放线菌、支原体、衣原 体、立克次氏体、螺旋体等 真核细胞型:真菌 非细胞型:病毒 噬菌体
隔离系统的应用
应用隔离系统重要的目的 ⒈是保护产品免受外源性污染保证无菌实验结果的可靠性,实 现一次检出的要求。 ⒉是保护操作人员安全。 隔离系统应按相关的要求进行验证,其内部环境的洁净度须 符合无菌检查的要求。 日常检验还需对试验环境进行监控。
方法验证的必要性
⒈为保证检验结果的可靠性,真实性,选择正确的检验方 法是至关重要的。因此试验前必须对选择的方法进行验 证。 ⒉证明所采用的方法是适宜的,确认所采用的方法适宜于 被检供试品的微生物污染的检验。
霉菌菌落形态
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
霉菌在孟加拉红培养基上的形态
酵母菌显微镜下形态
微生物检查法
微生物限度检查方法系检查非规定灭菌制剂及其原料、 辅料受微生物污染程度的方法。 检查项目包括 细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。 检查方法 多用平皿法、薄膜过滤法、涂抹法和 MPN 法。
检查方法的验证
试验环境 无菌检查应在环境洁净度 10 000 级下的局部洁 净度 100 级的单向流空气区域内或隔离系统中进行。 检验依据 单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁 净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的 现行国家标准进行洁净度验证。 -2010版药典
检验结果的影响因素
⒈供试品的组分 抑菌剂、增溶剂、乳化剂及抗氧化 剂,这 些组分在一定浓度下对微生 物起一定的抑制作用也可对污染菌 造成损伤。 不同类型的微生物及不同的存活状态 对环境的抗性是不同的。 如培养基的质量、检验人员的操作误 差等。
⒉环境影响 ⒊检验方法 ⒋检验条件
试验全方面验证 如试验环境,培养基,供试液的制备,灭菌方法等全部进 行验证。 当验证试验符合要求时,就可认为在该试验条件下该供试 品对微生物无抑菌作用或抑菌作用可忽略不计,供试品检 验结果可真实的体现。