烟草野火病菌生物学特性研究
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的鉴定提供依据 。 １４ 病 原 菌 的 复 壮 ．
将 ２ ｃ振 荡 过 的 ２ ８【 ＝ ８ ｍＬ ＫＢ液 体 培 养 基 （ 菌 单
落 接 种 ） 释 至 浓 度 为 １ 左 右 ； ４号 注 射 针 头 稀 ０ 用 接 种 烟 草 叶 片 ， 针 接 种 ｌ ｍ 左 右 ， １ ２片 烟 叶 ； 每 ｃ 接 ～
ｔ￣ ｃ） ｓ — ， 由本 课 题 组 采 自沂 水 分 离 纯 化 保 存 ； ａ ａ／Ｐ ５ ３ 鼠伤寒 沙 门 氏 菌 （ａ ｎｌ ＳＺ ｅａ ｍｏ ｌ Ｌ ， 由
中科 院 微 生 物 所 张 和 生博 士 惠 赠 。烤 烟 品 种 红 花 大 金元 ， 由本 学 院 烟 草 研 究 室 提 供 。 １２ 培 养 基 ． ＫＢ培 养 基 ， 于 培 养 烟 草 野 火 病 菌 ； Ｂ培 养 ， 用 Ｌ
０９ ｍ ． Ｌ无 菌蒸 馏 水 ，取 ０１ ． ｍＬ上 清 加 入 到 第 １ 个
１ 材 料 与 方 法
１１ 供 试 菌 株 及 烟草 品 种 ． 烟 草 野 火 病 菌 （ ｓ ｕ ｏ ｎ ｓ ｙｌｇ ｅ ｐ ． Ｐ ｅ Ｊ ｍｏ ａ ｓｒ ａ ｖ ｈ
离 心 管 中 ，摇 匀 后 取 ０ １ ．ｍＬ加 入 第 ２个 离 心 管 中 ， 依 次 重 复 ， 到 １ － ０ 直 ０ １ 稀 释 度 ； 个 稀 释 度 各 取 每 ０１ Ｌ加 入 到 预 先 准 备 好 的 ＫＢ固 体 平 板 上 ， 布 ． ｍ 涂
甲基 亚 砜 （ ＭＳ 穿 刺 小 瓶 中 在 一 ０【 一 ４【下 保 Ｄ Ｏ） ２ ｃ或 ８ ｃ ＝ ＝ 存 （ 一 ４【 存 时 ， 多 数 菌 种 可 保 持 更 长 的存 活 于 ８ ｃ保 ＝ 大 时 间 ） 复 苏 时 ， 一 无 菌 牙 签 或 吸 管 刮 取 固体 冰 渣 ； 用
以 致 病 力 强 的 菌 株 产 毒 能 力 为更 强 ； 改用 对 病 菌 更 敏 感 的 鼠伤 寒 沙 门 氏菌 为指 针 成 功 地 测 定 了烟 毒素的活性。
关 键 词 烟 草 野 火 病 菌 生物 学 特 性 方 法 中 图分 类 号 ：４ ５７ 文 献 标 识 码 ： 文 章 编 号 ：ｏ ７ ５ （０ １０ — ｏ ８ ０ ￥ ３ ．２ Ａ １０ — １９ ２ ０ ）４ ０ ０ — ３ １ 烟 草 野 火 病 广 泛 发 生 在 世 界 主 产 烟 区『， 年 】近 】 来 该 病 在 我 国 主 产 烟 区 发 生 普 遍 ， 别 年 份 呈 爆 发 个 现象 ， 已成 为 烟 草 稳 产 优 质 的 主 要 限 制 因 素 之 一 。 防 治 该 病 的 有 效 措 施 之 一 是 选 育 抗 病 品 种 『， 目 ３但 】 前 由于 缺 少 规 范 的 抗 病 性 测 定 方 法 ， 种 鉴 定 工 作 品 进 展 缓 慢 。本 文 旨在 从 野 火 病 的 生 物 学 特 性 人 手 ， 建立一 套行之 有效 的实验方 法 ， 以期 为 品 种 抗 病 性
片 （ 细操 作不 可让 其 融化 ）然 后 在 Ｋ 仔 ， Ｂ平 板 上划 线 。 １６ 毒 素 的检 测 （ ． 鼠伤 寒 沙 门 氏菌 指 针 法 ） 嘲
将 野火病菌在 Ｋ Ｂ液 体 培 养 基 中 ２ ℃振 摇 培 养 ８ ６ ８ ｈ后 ，常 温 下 ４ ０ ０ ｒｍｉ － ０ ／ ｎ离 心 ３ ｎ ０ ｍｉ，弃 上 清 ， １ ｏ／ 的 Ｍｇ １ 冲 洗 沉 淀 ， 据 培 养 液 用 ０ ｍｍ ｌＬ Ｃ２ 根 的 ０ Ｄ ６ ０值 用 １ ． ．０ ０ ｍｍｏ Ｌ 的 Ｍｇ １ 配 制 所 需 浓 ］ ／ Ｃ２
维普资讯
中 国烟 草 科 学 ２ ０， ２ ：— Ｏ ０２ （）８ １
烟草野火病菌生物学特性研究 ★
张 广 民 吕军 鸿 王 智 发
（ 东 农 业 大 学 植 保 学 院 泰 安 山 ２ １１ ） ７ ０ ８
摘 要 研 究 了烟 草 野 火 病 菌 的部 分 生 物 学 特 性 ， 涉及 致 病 性 、 株 的保 存 与复 壮 、 菌 生长 曲 线 及 Ｏ Ｄ ㈣ 值 与 Ｃ Ｕ ｍＬ之 间 关 系 、 菌 毒 素 的产 生 等 诸 方 面 。 究发 现用 甘 油 溶 液 保 存 病 菌 ４年 后 仍 ．． Ｆ／ 病 研 具 有 较 强 的致 病 力 ， 且 通 过 复 壮 可 使 致 病 力 进 一 步 增 强 ： 同 菌株 的 产 毒 能 力 存 在 明显 的 差 异 ， 并 不
均 匀 ，０【 养 ２ － ８ ｈ挑 选 几 个 较 大 的 单 菌 落 到 ３ ｃ培 ＝ ４ ４ ； 另 一 个 ＫＢ平 板 上 ，并 接 种 烟 草 叶 片 ，检 测 其 致 病 性 ， 存 致 病 力 最 强 的单 菌 落 。 保 １５ 病 原 菌 的长 期 保 存 嘲 ． 将 ０８ ｍＬ新 鲜 饱 和 （ 对 数 生 长 中期 ） 培 养 ． 或 的 液 加 入 到 一 已装 有 ０８ ．ｍＬ甘 油 溶 液 或 ７ （ ／ 二 ％ Ｖ Ｖ）
基［ 用 于 培养 鼠伤寒 沙 门 氏菌 ； ４ ］ ， ＶＢ培 养 基 嘲， 于 用 野 火 病 菌 毒 素 的 检 测 ； ｏｌｙＳ培 养 基［， 于 制 备 Ｗｏ ｌ ＂ ｃ 句用
野 火 病 菌 毒 素 ； 油 溶 液 ， 于 菌 种 的 长 期 保 存 。 甘 用 １３ 致 病 性 测 定 ．
２ ７ ｄ后 ， 叶 片 的损 伤 与 健 康 交 界 处 取 ３ ５块 ０５ － 在 ～ ．
ｃ 小 的 叶 块 ； 行 表 面 消 毒 （ ％次 氯 酸 钠 ｌ ｎ ｍ 大 进 １ ｍｉ，
７ ％ 乙醇 ０５ ｉ， 菌 蒸 馏 水 １ ｎ 后 用 无 菌 滤 纸 吸 ０ ．ｍ ｎ无 ｍｉ ） 干 ， 到无 菌 试 管 中 ； 入 ｌ 放 加 ｍＬ无 菌 水 ， 玻 璃 棒 磨 用 碎 叶 片 ；取 ５ ６个 １ － ． ｍＬ 离 心 管 ，分 别 准 确 加 入 ５
将 ２ ｃ振 荡 过 的 ２ ８【 ＝ ８ ｍＬ ＫＢ液 体 培 养 基 （ 菌 单
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ｔ￣ ｃ） ｓ — ， 由本 课 题 组 采 自沂 水 分 离 纯 化 保 存 ； ａ ａ／Ｐ ５ ３ 鼠伤寒 沙 门 氏 菌 （ａ ｎｌ ＳＺ ｅａ ｍｏ ｌ Ｌ ， 由
中科 院 微 生 物 所 张 和 生博 士 惠 赠 。烤 烟 品 种 红 花 大 金元 ， 由本 学 院 烟 草 研 究 室 提 供 。 １２ 培 养 基 ． ＫＢ培 养 基 ， 于 培 养 烟 草 野 火 病 菌 ； Ｂ培 养 ， 用 Ｌ
０９ ｍ ． Ｌ无 菌蒸 馏 水 ，取 ０１ ． ｍＬ上 清 加 入 到 第 １ 个
１ 材 料 与 方 法
１１ 供 试 菌 株 及 烟草 品 种 ． 烟 草 野 火 病 菌 （ ｓ ｕ ｏ ｎ ｓ ｙｌｇ ｅ ｐ ． Ｐ ｅ Ｊ ｍｏ ａ ｓｒ ａ ｖ ｈ
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以 致 病 力 强 的 菌 株 产 毒 能 力 为更 强 ； 改用 对 病 菌 更 敏 感 的 鼠伤 寒 沙 门 氏菌 为指 针 成 功 地 测 定 了烟 毒素的活性。
关 键 词 烟 草 野 火 病 菌 生物 学 特 性 方 法 中 图分 类 号 ：４ ５７ 文 献 标 识 码 ： 文 章 编 号 ：ｏ ７ ５ （０ １０ — ｏ ８ ０ ￥ ３ ．２ Ａ １０ — １９ ２ ０ ）４ ０ ０ — ３ １ 烟 草 野 火 病 广 泛 发 生 在 世 界 主 产 烟 区『， 年 】近 】 来 该 病 在 我 国 主 产 烟 区 发 生 普 遍 ， 别 年 份 呈 爆 发 个 现象 ， 已成 为 烟 草 稳 产 优 质 的 主 要 限 制 因 素 之 一 。 防 治 该 病 的 有 效 措 施 之 一 是 选 育 抗 病 品 种 『， 目 ３但 】 前 由于 缺 少 规 范 的 抗 病 性 测 定 方 法 ， 种 鉴 定 工 作 品 进 展 缓 慢 。本 文 旨在 从 野 火 病 的 生 物 学 特 性 人 手 ， 建立一 套行之 有效 的实验方 法 ， 以期 为 品 种 抗 病 性
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将 野火病菌在 Ｋ Ｂ液 体 培 养 基 中 ２ ℃振 摇 培 养 ８ ６ ８ ｈ后 ，常 温 下 ４ ０ ０ ｒｍｉ － ０ ／ ｎ离 心 ３ ｎ ０ ｍｉ，弃 上 清 ， １ ｏ／ 的 Ｍｇ １ 冲 洗 沉 淀 ， 据 培 养 液 用 ０ ｍｍ ｌＬ Ｃ２ 根 的 ０ Ｄ ６ ０值 用 １ ． ．０ ０ ｍｍｏ Ｌ 的 Ｍｇ １ 配 制 所 需 浓 ］ ／ Ｃ２
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中 国烟 草 科 学 ２ ０， ２ ：— Ｏ ０２ （）８ １
烟草野火病菌生物学特性研究 ★
张 广 民 吕军 鸿 王 智 发
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摘 要 研 究 了烟 草 野 火 病 菌 的部 分 生 物 学 特 性 ， 涉及 致 病 性 、 株 的保 存 与复 壮 、 菌 生长 曲 线 及 Ｏ Ｄ ㈣ 值 与 Ｃ Ｕ ｍＬ之 间 关 系 、 菌 毒 素 的产 生 等 诸 方 面 。 究发 现用 甘 油 溶 液 保 存 病 菌 ４年 后 仍 ．． Ｆ／ 病 研 具 有 较 强 的致 病 力 ， 且 通 过 复 壮 可 使 致 病 力 进 一 步 增 强 ： 同 菌株 的 产 毒 能 力 存 在 明显 的 差 异 ， 并 不
均 匀 ，０【 养 ２ － ８ ｈ挑 选 几 个 较 大 的 单 菌 落 到 ３ ｃ培 ＝ ４ ４ ； 另 一 个 ＫＢ平 板 上 ，并 接 种 烟 草 叶 片 ，检 测 其 致 病 性 ， 存 致 病 力 最 强 的单 菌 落 。 保 １５ 病 原 菌 的长 期 保 存 嘲 ． 将 ０８ ｍＬ新 鲜 饱 和 （ 对 数 生 长 中期 ） 培 养 ． 或 的 液 加 入 到 一 已装 有 ０８ ．ｍＬ甘 油 溶 液 或 ７ （ ／ 二 ％ Ｖ Ｖ）
基［ 用 于 培养 鼠伤寒 沙 门 氏菌 ； ４ ］ ， ＶＢ培 养 基 嘲， 于 用 野 火 病 菌 毒 素 的 检 测 ； ｏｌｙＳ培 养 基［， 于 制 备 Ｗｏ ｌ ＂ ｃ 句用
野 火 病 菌 毒 素 ； 油 溶 液 ， 于 菌 种 的 长 期 保 存 。 甘 用 １３ 致 病 性 测 定 ．
２ ７ ｄ后 ， 叶 片 的损 伤 与 健 康 交 界 处 取 ３ ５块 ０５ － 在 ～ ．
ｃ 小 的 叶 块 ； 行 表 面 消 毒 （ ％次 氯 酸 钠 ｌ ｎ ｍ 大 进 １ ｍｉ，
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