2019版高考生物一轮复习生物技术实践第二讲微生物的培养与应用精选教案
高三生物一轮复习导学案微生物的培养技术及应用
选择性必修三第1章微生物的培养技术及应用一、你从教材上找到的关键性语句：Ⅰ、微生物的基本培养技术1. 微生物的定义：肉眼难以看清，需要借助光学显微镜或电子显微镜才能观察到的一切微小生物的总称。
3.微生物菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。
由单个微生物繁殖形成的纯培养物就是一个单菌落；4.培养基的配制（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。
（2）培养基作用：培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物（3）培养基类型：①按物理状态可分为液体培养基和固体培养基。
②按功能可分为选择培养基和鉴别培养基。
（4）成分：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生长对、、、、、、、、、、、以及、、、的要求。
5. 无菌技术（1）关键：防止外来杂菌的入侵。
（2）无菌技术工作两个方面：①对操作的_空间、操作者的_衣着_和_手_进行_清洁_和_消毒_；②对用于微生物培养的_器皿_、__接种用具__和__培养基_等进行__灭菌_；（3）无菌技术主要包括消毒和灭菌项目理化因素的作用强度能否消灭芽孢和孢子常用方法消毒较为温和不能煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药物消毒法、紫外线照射灭菌强烈能灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌、湿热灭菌法6. 微生物的纯培养（1）培养物：在微生物学中，将接种于_培养基_内，在_合适条件_下形成的__含特定种类微生物的群体_称为培养物。
（2）纯培养物：由_单一个体_繁殖所获得的_微生物群体_称为纯培养物。
（3）纯培养：__获得纯培养物的过程_就是纯培养。
（4）微生物纯培养步骤：配制培养基—灭菌—接种—分离—培养。
Ⅱ、探究.实践：酵母菌的纯培养1.原理：采用__和___将__微生物_分散_在__上，之后得到的__一般是由单个微生物形成的__。
（1）制备培养基：配制培养基—灭菌—倒平板（2）接种和分离酵母菌：通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。
2019年高考生物一轮复习211037微生物的培养与应用课件
(3)下图所示的操作是培养基配制过程中的___倒__平__板___，该 操作的正确使用顺序是：__①__→__②__→__④__→__③____(用图中的序号和 箭头表示)，②步骤需要培养基冷却到__5_0_℃__左__右____才能操作。
(2)纤维素分解菌的筛选 ①原理
②筛选方法：__刚__果__红__染色法，即通过是否产生透明圈来 筛选纤维素分解菌。
③培养基：_以__纤__维__素__为__唯__一__碳__源____的选择培养基。
④实验流程 土壤取样：富含_纤__维__素___的环境→选择培养：用选择培养 基培养，以增加纤维素分解菌的数量→梯度稀释→涂布平板： 将样品涂布于鉴别纤维素分解菌的培养基(固体)上→挑选产生 _透__明__圈___的菌落：能产生纤维素酶的菌落周围出现透明圈。
(2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有 _鉴__别__乳__酸__菌__和_中__和__产___生__的__乳__酸__(或__酸__)_。分离纯化时应挑选出 _具__有__透__明__圈___的菌落作为候选菌。
(3)乳酸菌在－20 ℃长期保存时，菌液中常需要加入一定 量的__甘__油____(填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。
2019年高考生物一轮复习 211037微生物的培养与应用课
件
[考纲要求] 1.微生物的分离和培养。2.培养基对微生物 的选择作用。3.某种微生物数量的测定。4.微生物在其他方面 的应用。
高考生物一轮复习生物技术实践第二讲微生物的培养和利用课件(选修1)高三选修1生物课件
获取 区域菌落中挑取菌体
落中挑取菌体
适用 范围
适用于好氧菌
适用于厌氧菌和兼性厌氧菌
优点
可以根据菌落的特点获得 某种微生物的单细胞菌落
既可以获得单细胞菌落，又能 对微生物计数
缺点 不能对微生物计数
操作复杂，需要涂布多个平板
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微生物的筛选与计数
命题点 1 土壤中分解尿素细菌的分离与计数 1．(2016·四川高考)图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙
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(2)选择无菌技术的原则： ①考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好。 ②考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能 采用消毒，而不能用灭菌。
(3)纯化大肠杆菌的两种方法的异同： ①相同点：平板划线法和稀释涂布平板法都能获得单细胞菌落。 ②不同点：平板划线法不能对微生物计数，而稀释涂布平板法能
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ห้องสมุดไป่ตู้
2.下图是倒平板的操作，请据图填空
(1)请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁 。 (2)甲、乙、丙中的灭菌方法是 灼烧灭菌 。 (3)丁中的操作需要等待 平板冷却凝固 才能进行。
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3.下面是采用纯化微生物培养的两种接种方法，接种后培养的 效果图，请完成下列问题
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拓展·归纳|全面比较消毒和灭菌
条件
结果
常用方法
应用范围
消 毒
较为温 和的物 理或化 学方法
仅杀死物体表 面或内部的部 分微生物
煮沸消毒法
日常用品
巴氏消毒法 不耐高温的液体
化学药剂 用酒精擦拭双手， 消毒法 用氯气消毒水源
灼烧灭菌法
2019版高考生物一轮复习生物技术实践第二讲微生物的培养与应用精选教案
第二讲微生物的培养与应用[基础知识·系统化]知识点一微生物的实验室培养1．培养基2．无菌技术3．大肠杆菌的纯化培养知识点二土壤中分解尿素的细菌的分离知识点三分解纤维素的微生物的分离1．实验原理2．实验流程[基本技能·问题化]1．据某微生物培养基的配方表回答下列问题(1)此培养基按物理性质划分属于液体培养基，因为没有凝固剂(如琼脂)；按功能划分属于选择培养基，因为没有碳源，只有自养型微生物才能生长(利用空气中的CO2)。
(2)此培养基含有的微生物的营养成分包括水、无机盐和氮源三类，若加入氨基酸，则它可充当的营养成分包括碳源、氮源和生长因子。
(3)若要观察微生物的菌落特征，培养基中应添加的成分是凝固剂(琼脂)。
(4)若用该培养基来分离尿素分解菌，应除去表中①成分(填表中序号)，加入尿素和不含氮元素的有机物。
2．下图是倒平板的操作，请据图填空确的倒平板操作流程：请用文字和箭头写出正丙(1→)乙。
丁→→甲(2)灼烧灭菌甲、乙、丙中的灭菌方法是。
)(3平板冷却凝固后才能进行。
丁中的操作需要等待3．据两种接种方法产生的培养效果图完成下列问题图A获得)效果和(1。
图平板划线法稀释涂布平板法、B效果的接种方法分别是(2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象。
提示：最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灭菌。
采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灭菌。
4．连线以下几种选择培养基和鉴别培养基及其应用考点一培养基及微生物的纯化培养技术命题点(一) 培养基的成分、功能和制备1．(2016·全国卷Ⅰ)空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。
某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。
实验步骤如下：①配制培养基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；②制作无菌平板；③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；④将各组平板置于37 ℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。
高考生物一轮复习 微生物的培养与应用课件
(4)实验流程。
栏
土壤取样：富含_纤__维__素___的环境
目
↓
链
选择培养：用_选__择__培__养__基___培养，以增加纤维素分解菌的浓度 接
↓
梯___度__稀__释_：制备系列稀释液
↓
涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上
↓ 挑选产生_透__明__圈___的菌落
要点探究
考点1 微生物的实验室培养
的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。
②纯化大肠杆菌的关键步骤：__接__种____。
基础回顾
③常用的微生物接种方法有两种：
a．平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面
___连__续__划__线__的__操__作___，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
b．稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的__梯__度__稀__释____，
②固氮微生物能够固定空气中的N2，合成氨态氮，培养 基中不需添加氮源。
要点探究
(2)培养基中的不同营养成分不一定是不同物质提供。
培养基中不同的营养成分可以由同一物质提供，有些物质，
如NH4HCO3，既是氮源也是某些自养生物的碳源。
3．消毒和灭菌的不同点。
栏
目
比较项 目
理化因素的作用强 度
消灭微生物的数量
易蔓延
要点探究
(2)稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目低， 这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个 菌落。
(1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它 栏
们能合成__脲__酶____，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起
目 链
到__催__化____作用。
高中生物高考一轮总复习讲义 选修1 专题2 微生物的培养与应用
(4)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂， 若指示剂变蓝，则说明筛选到分解尿素的细菌。( )
三、分解纤维素的微生物的分离[填空] 1．纤维素酶 (1)组成：一种________酶，它至少包括三种组分，即 ________。 C1酶 葡萄糖 (2)作用：纤维素――→________ ――→ 葡萄糖 CX酶 苷酶 2．筛选方法 (1)方法：刚果红染色法，即通过是否产生________来 筛选纤维素分解菌。 (2)培养基：以________为唯一碳源的选择培养基。
高中生物高考复习讲义
选修部分
选修1
生物技术实践
专题2 微生物的培养与应用
忆教材 溯本源
研考点 破疑难
明题型 析典例
练真题 悟考情
课时作业
研
基础导学
一、微生物的分离与培养 1．培养基[判断正误] (1)据物理状态的不同，培养基只有液体培养基和固体 培养基两种类型。( )
(2)培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种 成分。( )
方法 平板划线法 (1)接种环的灼烧： 注 意 事 项 ①第一次划线前：杀死接种环上的 微生物，避免污染培养物 ②每次划线前：杀死残留菌种，保 证每次划线菌种来自上次划线末端 ③划线结束后：杀死残留菌种，避 免污染环境和感染操作者 稀释涂布平板法 (1)稀释操作时：每支 试管及其中的9 mL
水、移液管等均需灭 菌；操作时，试管口和 移液管应在离火焰1～2 cm处
3．实验流程 土壤取样：富含________的环境 ↓ 选择培养：用________培养，以增加纤维素分解菌的 数量 ↓ 梯度稀释 ↓
涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基 上 ↓ 挑选产生透明圈的菌落：产生________的菌落周围出 现透明圈
高考生物一轮教师用书 第2讲 微生物的培养与应用名师精选教案 新人教版选修1
第二讲微生物的培养与应用[教材知识问题化梳理]一、微生物的实验室培养 1．培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养物质。
(2)成分⎩⎪⎨⎪⎧一般都含有水、碳源、氮源、无机盐还要满足不同微生物生长对pH 、特殊营养物质以及氧气的需求(3)分类⎩⎪⎨⎪⎧固体培养基：含凝固剂液体培养基：不含凝固剂2．无菌技术3．纯化大肠杆菌(1)制备固体培养基的流程：计算溶化(2)纯化方法⎩⎪⎨⎪⎧平板划线法稀释涂布平板法二、土壤中分解尿素细菌的分离和计数(1)菌种筛选：使用尿素是唯一氮源的选择培养基培养。
(2)统计菌落数目：常用方法有稀释涂布平板法、显微镜直接计数法。
(3)细菌分离与计数的实验流程：土壤取样→配制培养基→微生物的培养与观察→细菌的计数。
三、分解纤维素的微生物的分离1．纤维素酶(1)组成：一种复合酶，它至少包括三种组分，即C 1酶、C X 酶和葡萄糖苷酶。
(2)作用：纤维素――→C 1酶C X酶纤维二糖――→葡萄糖苷酶葡萄糖。
2．筛选方法(1)方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
(2)培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。
3．实验流程土壤取样：富含纤维素的环境选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的数量梯度稀释涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落：产生纤维素酶的菌落周围出现透明圈[效果自评组合式设计]一、在小题集训中洞悉命题视角(1)根据物理状态的不同，培养基只有液体培养基和固体培养基两种类型。
(×) (2)培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种成分。
(√)(3)在配制培养基时，除满足营养需求外，还应考虑pH 、O 2及特殊营养物质的需求。
(√) (4)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。
(√)(5)筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的唯一氮源。
(√) (6)统计样品中的活菌一般用平板划线法。
(全国版)19版高考生物一轮复习生物技术实践第2讲微生物的培养与应用学案
第2讲 微生物的培养与应用(对应学生用书第236页)[识记—基础梳理]1．培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
(2)营养构成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。
此外还需要满足微生物生长对pH 、氧气以及特殊营养物质的要求。
(3)①种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。
②下表为某微生物培养基的成分该培养基中可以为微生物提供碳源的是葡萄糖，因为此培养基中加入了琼脂，故该培养基为固体培养基。
2．无菌技术(1)关键：防止外来杂菌的入侵。
(2)不同对象的无菌操作方法(连线)：[答案] ①—b —Ⅰ ②—b —Ⅱ ③、④—a ⑤—a —Ⅲ、Ⅳ ⑥—b3．大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算―→溶化―(2)纯化大肠杆菌的方法①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。
②纯化大肠杆菌的关键步骤：接种。
③接种方法：下图甲可表示用平板划线法接种获得的平板；下图乙可表示用稀释涂布平板法接种获得的平板。
④纯化原理：上图甲菌体的分散是通过一系列的连续划线操作实现的；上图乙菌体的分散是通过一系列的梯度稀释和涂布平板操作实现的。
4．菌种的保藏方法(1)临时保藏法：对于频繁使用的菌种，先接种到试管的固定斜面培养基上培养，然后放入4 ℃的冰箱中保藏。
(2)甘油管藏法：对于需要长期保存的菌种，先将菌液转入灭菌后的甘油中，混匀后放在－20 ℃冷冻箱中保存。
[教材边角知识] 选修 1 P18“旁栏小资料”,微生物的接种方法只有平板划线法和稀释涂布平板法吗？微生物接种的核心是什么？__________________________________________________________________________________________________________________________________【提示】不是，微生物的接种技术还包括斜面接种、穿刺接种等方法，其核心是防止杂菌的污染，保证培养物的纯度。
高考生物一轮复习 第十二单元 生物技术实践 第二讲 微生物的培养与应用学案 新人教版
第二讲 微生物的培养与应用[考纲展示]1．微生物的分离和培养 2.某种微生物数量的测定 3.培养基对微生物的选择作用 4.微生物在其他方面的应用授课提示：对应学生用书第277页 一、微生物的实验室培养 1．培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
(2)营养构成：水、无机盐、碳源、氮源和生长因子。
(3)类型：根据物理性质可分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基；根据功能可分为选择培养基和鉴别培养基。
2．无菌技术(1)含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。
(2)关键：防止外来杂菌的入侵。
(3)方法⎩⎨⎧消毒⎩⎪⎨⎪⎧煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法灭菌{灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸气灭菌3．大肠杆菌的纯化培养 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。
(2)纯化大肠杆菌 ①关键的步骤是接种。
②纯化培养方法：平板划线法和稀释涂布法。
③纯化培养原理：在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。
二、土壤中分解尿素的细菌的分离和计数1．分离原理：土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起催化作用。
以尿素为唯一氮源的培养基能促进分解尿素的细菌的生长和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生长，从而将目的菌分离。
2．统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。
3．实验流程：土壤取样→制备培养基→微生物的培养与观察→细菌的计数。
三、分解纤维素的微生物的分离 1．纤维素酶(1)组成：纤维素酶是一种复合酶，它包括C 1酶、C X 酶和葡萄糖苷酶。
(2)作用2．菌种筛选(1)方法：刚果红染色法。
(2)原理纤维素分解菌 ↓⎭⎪⎬⎪⎫刚果红纤维素→红色复合物――→纤维素酶红色消失、出现透明圈。
即：使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
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第二讲微生物的培养与应用[基础知识·系统化]知识点一微生物的实验室培养1．培养基2．无菌技术3．大肠杆菌的纯化培养知识点二土壤中分解尿素的细菌的分离知识点三分解纤维素的微生物的分离1．实验原理2．实验流程[基本技能·问题化]1．据某微生物培养基的配方表回答下列问题(1)此培养基按物理性质划分属于液体培养基，因为没有凝固剂(如琼脂)；按功能划分属于选择培养基，因为没有碳源，只有自养型微生物才能生长(利用空气中的CO2)。
(2)此培养基含有的微生物的营养成分包括水、无机盐和氮源三类，若加入氨基酸，则它可充当的营养成分包括碳源、氮源和生长因子。
(3)若要观察微生物的菌落特征，培养基中应添加的成分是凝固剂(琼脂)。
(4)若用该培养基来分离尿素分解菌，应除去表中①成分(填表中序号)，加入尿素和不含氮元素的有机物。
2．下图是倒平板的操作，请据图填空(1)请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。
(2)甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。
(3)丁中的操作需要等待平板冷却凝固后才能进行。
3．据两种接种方法产生的培养效果图完成下列问题(1)获得图A效果和图B效果的接种方法分别是稀释涂布平板法、平板划线法。
(2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象。
提示：最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灭菌。
采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灭菌。
4．连线以下几种选择培养基和鉴别培养基及其应用考点一培养基及微生物的纯化培养技术命题点(一) 培养基的成分、功能和制备1．(2016·全国卷Ⅰ)空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。
某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。
实验步骤如下：①配制培养基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；②制作无菌平板；③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；④将各组平板置于37 ℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。
回答下列问题：(1)该培养基中微生物所需的氮来源于______________________。
若要完成步骤②，该培养基中的成分X通常是____________。
(2)步骤③中，实验组的操作是_______________________________________________________________________________________________________________________。
(3)若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了__________现象。
若将30(即36－6)个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法______________(填“正确”或“不正确”)。
解析：(1)牛肉膏和蛋白胨中均含有氮元素，因此微生物所需的氮来源于牛肉膏和蛋白胨。
若要完成步骤②，需要进行倒平板操作，用到的是固体培养基，所以培养基中要有琼脂。
(2)该实验的空白对照组为不进行处理的无菌平板，实验组的操作为将各无菌平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露相同时间。
(3)若空白对照组的平板上出现了菌落，说明实验过程中出现了污染现象。
空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，导致实验变量不唯一，不能确定实验组平板上的菌落是否仅由教室内不同高度空气中的微生物形成，因此不能求出实验组的菌落平均值。
答案：(1)牛肉膏、蛋白胨琼脂(2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间(3)污染不正确2．(2016·全国卷Ⅲ )某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。
分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。
回答下列问题：(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用__________对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是______________________________________________。
(2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有______________________和____________________。
分离纯化时应挑选出________________的菌落作为候选菌。
(3)乳酸菌在－20 ℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的________________(填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。
解析：(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，这样既可避免杂菌污染，又可将乳酸菌分散成单个细胞，以便在培养基表面形成单个菌落。
(2)乳酸的积累影响乳酸菌的增殖，加入碳酸钙可以中和乳酸菌代谢(无氧呼吸)过程中产生的乳酸，另外，乳酸和碳酸钙反应，进而导致碳酸钙分解形成透明圈，有利于乳酸菌的鉴别和分离。
(3)对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
在3 mL的甘油瓶中，装入1 mL 甘油后灭菌。
将1 mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在－20 ℃的冷冻箱中保存。
答案：(1)无菌水泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落(2)鉴别乳酸菌中和产生的乳酸(或酸) 具有透明圈(3)甘油[重难点拨]常用选择培养基与鉴别培养基实例归纳命题点(二) 无菌技术的操作3．(2014·江苏高考节选)为了获得β胡萝卜素产品，某小组开展了产β胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。
请回答下列问题：(1)实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是________________________________；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该______________________。
(2)为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是______________。
(3)右图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙指示的依①安全阀、放气阀、压力表②放气阀、安全阀、压力表③安全阀、放气阀、温度表④放气阀、安全阀、温度表(4)为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是_____________________________________。
解析：(1)实验室常用的灭菌方法是干热灭菌和湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)，在实验前应用牛皮纸或干净的报纸包扎器皿。
(2)酵母菌是真菌，对青霉素具有抵抗能力，青霉素主要抑制细菌、放线菌的生长。
(3)图中甲为安全阀，乙为放气阀，丙为压力表。
(4)接种的平板上未见菌落生长，说明接种不成功，原因可能是接种环灼烧后未冷却，使菌株因温度过高而被杀死。
答案：(1)干热灭菌和湿热灭菌(高压蒸汽灭菌) 用牛皮纸(报纸)包扎器皿 (2)抑制细菌(放线菌)的生长 (3)①(4)接种环温度过高，菌种被杀死 [重难点拨] 全面比较消毒和灭菌命题点(三) 微生物的培养与纯化4．(2017·江苏高考)苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。
小明同学准备依据如图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。
请回答下列问题：(1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K 2HPO 4、MgSO 4、苯酚和水，其中可作为碳源的有____________。
(2)将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐________，以达到富集酚降解菌的目的。
若上图平板中菌落过于密集，应进一步____________，以便于菌落计数与分离。
制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加________。
(3)右图为连续划线法示意图，在图中____________(填图中序号)区域更易获得单菌落。
(4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚残留量。
先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1～5号比色管的苯酚浓度应分别为____________。
如果废水为________(填序号：①5 ②10 ③20)倍后，再进行比色。
解析：(1)富集培养基中蛋白胨、苯酚都是含碳的有机物，可作为碳源。
(2)欲富集酚降解菌，随转接次数的增加，应逐渐增加培养基中苯酚的含量；若接种培养后平板上菌落过于密集，则应进一步稀释后再进行涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落计数与分离；平板培养基是固体培养基，除含有水、营养物质(碳源、氮源、无机盐等)外，还需添加琼脂作为凝固剂。
(3)利用连续划线法接种时，最后的划线区域(③)中，菌体的密度较小，容易获得单菌落。
(4)因系列浓度梯度中6号比色管中苯酚浓度为1 mg/L，故1～5号比色管中的苯酚浓度应分别为0 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L；根据题意，废水为50 mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，要使稀释后的苯酚残留液浓度介于0～1 mg/L，需将残留液稀释20倍左右。
答案：(1)蛋白胨、苯酚(2)增加稀释涂布凝固剂(3)③(4)0、0.2、0.4、0.6、0.8 ③5．(2014·全国卷Ⅱ)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。
回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。
在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。
据此可得出每升水样中的活菌数为________个。
(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。
操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。
这样做的目的是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
(3)示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。
结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。
分析其原因是：振荡培养能提高培养液中____________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高______________的利用率。