高致病性PRRSVJL-04/12株核衣壳蛋白的表达与抗原性分析

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的 高效表 达 , 经S DS - P AG E和 We s t e r n b l o t 对 表达 产物 的特 性进 行 分 析 , 利 用 GS T 柱 纯化表 达蛋 白 , 并 免 疫 小 鼠, E L I S A检 测其 刺激 产生抗 体 的能 力一 抗 原的免 疫原 性 。结果 表 明 , 0 . 1 mmo l / L的 I P TG、 2 8℃诱 导 4 h可 高效诱 导重组 蛋 白的表 达 , 在表 达上 清 中 目的蛋 白达 4 O , 原核 表 达的重 组 N 蛋 白可诱 导小 鼠产 生抗 体, 抗 体效 价 为 1: 2 5 6 。原核 表 达的 N蛋 白与 P R R S V 具有 相 同的抗 原性 。 关键 词 : 猪繁 殖与呼吸 综合 征病 毒 ; 核 衣 壳蛋 白 ; 原核 表达 ; 纯化
王凤 雪 , 刘 莹, 杨 勇 , 朱 洪伟 , 孙 娜 , 刘 杏 , 程世鹏 , 温 永俊
( 中 国农 业 科 学 院特 产 研 究 所 / 特种经济动物分子生物学重点实验室 , 吉林长春 1 8 0 1 2 2 )
摘 要 : 为获得 高浓度 、 高质 量 的 有效 原核 表 达 蛋 白作 为 E L l S A 诊 断抗 原 , 通过 R T — P C R 法扩 增 猪繁 殖 与呼吸 综合征 病毒 ( P RR S V) J L 一 0 4 / 1 2株 的核 衣 壳蛋 白 ( N 蛋 白) 基 因并克 隆到 原核 表 达载体 p GE X 一 6 P 一 1 中, 转入 到 大肠 埃希 茵 B L 一 2 1感受 态细胞 , 经I P T G 诱导 表达 , 通过 温度 和 I P TG 浓度 的优 化 , 进行 重 组蛋 白
动物 医学进 展 。 2 0 1 5 , 3 6 ( 1 0 ) : 6 0 — 6 4
Pr o gr e s s i n Ve t e r i na r y Me d i c i ne
高致病性 P R R S V J L _ O 4 / 1 2株核衣 壳蛋 白的表达与抗原性分析
t i v e a n d r e s p i r a t o r y s y n d r o me v i r u s, P RR S V) 引 起
定基础 。
1 材 料 与 方 法
1 . 1 材 料
怀孕 母 猪 繁 殖 障 碍 和 仔 猪 的 呼 吸 道 症 状l 1 ] , 2 0 0 6 年, 导致猪 无名 高 热 的 高致 病 性 猪 繁 殖 与 呼 吸 综 合
1 . 1 . 1 病毒、 载体 和 细 菌
P R RS V J L 一 0 4 / 1 2由 中
国农 业科 学 院特产研 究所 特种 经济 动 物分 子 生物 学
国家 重点 实验 室 ( 以下简称 “ 本 实验 室 ” ) 自吉林 地 区
造成 5 O 以上 高死 亡 率 的 巨大 经济 损 失 , 尽 管 随后
和反 应原 性[ 3 _ 6 _ 。因此 , N 蛋 白常 常作 为 P R RS V 感
R Na s e i n h i b i t o r 、 P f u DN A 聚合 酶 , I n v i t r o g e n公 司 产 品 。限制 性 内 切 酶 B a mH I和 No t I, NE B公 司产 品 。P VD F膜 , F i l l i p o r e 公 司产 品 ; P C R清 洁试
征病 毒 ( Hi g h l y p a t h o g e n i c p o r c i n e r e p r o d u c t i v e a n d r e s p i r a t o r y s y n d r o me v i r u s , HP — P R RS V) 给养 猪业
中图分类号 : ¥ 8 5 2 . 6 5 9 . 6 文献标识码 : A 文章编号 : 1 0 0 7 — 5 0 3 8 ( 2 0 1 5 ) 1 0 — 0 0 6 0 — 0 5
猪 繁 殖 与 呼 吸综 合 征 病 毒 ( P o r c i n e r e p r o d u c —
l i B L 2 1 ( D E 3 ) p l y s S菌株 由本实 验室 保存 。
1 . 1 . 2 主要 试剂 TRI z o l Re a g e n t 、 M— MLV 酶 、
P R RS V N 蛋 白编 码 基 因 高 度 保 守l _ 2 ] , 并且 N 蛋 白 含有 丰 富 的 抗 原 决定 簇 , 是P R RS V 感染 猪 体 后 刺 激产 生抗 体最 多 最久 的蛋 白 , 具 有 良好 的 免 疫 原 性
工程 技术 服务 有 限公 司产 品 ; P i e r c e @GS T S p i n P u i —
的源自文库效 EL I S A检 测试 剂盒 及简 易 、 快 速 且成 本 低 的 P R RS抗体 检测 产 品势在 必行 。本 研 究采 用 基 因 工 程技 术构 建 表达 N 蛋 白的 重组 质粒 , 在 大肠 埃 希 菌 内获 得高 效可溶 性表 达 , 利用 G S T 纯化 柱 纯化 表 达
推 出的高 致病性 P R RS V 疫 苗对 猪 群 内 P RR S进 行 了较好 的防控 , 但 不 可 否认 , 建 立 高效 的 P R RS V抗 体监 测 方 法 也 是 P RR S防 控 中不 可 或 缺 的 条 件 。
某猪 场分 离和保 存 。表 达载体 p G E X 一 6 p 一 1 、 E. C O —
剂盒, 质 粒小 提 试剂 盒 , DNA 胶 回收 试 剂 盒 , AX Y—
G E N 公 司产 品 ; P r e s c i s s i o n蛋 白 酶 , 上 海 生 工 生 物
染 的检 测抗 原 。 目前 商 品化 的 P RR S抗 体 检测 试 剂
盒 主 要 为 进 口产 品 , 成 本高 。因此 , 研 发 国 产 低 成 本
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