动态浊度法测定多西他赛注射液中细菌内毒素的含量_祝清芬

Content Determination of Bacterial Endotoxin in Docetaxel Injection by Kinetic Turbidimetric Method ZHU Qing-fen，WEI Xia（Dept. of Pharmacology，Shandong Institute for Drug Control，Ji’nan 250101，China）
Tab 1
表 1 各厂家样品中有关物质含量测定结果 Content determination of related substances of sam-
ples from several manufacturers
批号
Y042Y01 Y037Y01 Y025Y01 R066-A001Y01 -08051901
A 液测定值/EU·mL－1 ＜0.03 ＜0.03 ＜0.03 ＜0.03 ＜0.03 0.07 0.12
B 液回收率/％ 54 103 148 157 143 119 97
样品稀释 3 倍时，样品较黏稠，测定结果较乱，因此，此组
数据弃去不用。由表 2 可见，稀释 6 倍及以上时，回收率均在 50％～200％，符合要求，但稀释 6 倍时回收率仅为 54％，因此 建议采用 12 倍（0.833 mg·mL－1）以上的稀释液进行检验。
动态浊度法测定多西他赛注射液中细菌内毒素的含量
祝清芬＊，魏 霞（山东省药品检验所药理室，济南市 250101）
中图分类号 R927.12；R979.1
文献标识码 A
文章编号 1001-040（8 2011）01-0054-02
摘 要 目的：建立测定多西他赛注射液中细菌内毒素含量的方法。方法：采用动态浊度法。确立细菌内毒素检查的标准曲线及 稀释倍数，通过测定供试液中外加内毒素的回收率进行干扰试验，确定样品检测浓度线性范围，并定量测定样品中的细菌内毒 素。结果：内毒素检测浓度线性范围为 0.031 25～2.0 EU·mL－（1 r＝－0.999 9）；样品在稀释 12～96 倍时对试验无干扰作用；细菌 内毒素回收率为 50％～200％；3 批样品的内毒素定量测定结果符合规定。结论：动态浊度法可用于多西他赛注射液中细菌内毒 素的定量检测。 关键词 多西他赛注射液；细菌内毒素；动态浊度法；含量测定
多西他赛（Docetaxel）是一种半合成的紫杉醇衍生物，近 年来用于治疗乳腺癌、卵巢癌和非小细胞肺癌等多种恶性肿 瘤，被认为是迄今疗效最显著的抗癌药物之一。多西他赛的 抗肿瘤机制与紫杉醇相同，都是通过促进细胞微管聚合而阻 止微管正常的生理解聚，影响细胞有丝分裂过程，因此对多种 肿瘤均有良好的生长抑制和诱导凋亡的作用，但多西他赛的 抗肿瘤效果和毒副作用要明显优于紫杉醇[1，2]。
ABSTRACT OBJECTIVE：To establishment a method for determine the concentration of bacterial endotoxin in Docetaxel injection. METHODS：Kinetic turbidimetric method was adopted to generate the standard curve and dilution rate of test sample. Bacterial endotoxin was added into test sample for interference test. Linear range and bacterial endotoxin in samples were determined. RESULTS：The linear range of bacterial endotoxin was 0.031 25～2.0 EU·mL－1（r＝－0.999 9）. The endotoxin test wasn’t interfered by 12～96 times diluted solution. The recovery rate of bacterial endotoxin was 50％～200％. The concentration of endotoxin in the 3 batches of samples met the requirements for bacterial endotoxins. CONCLUSION：The kinetic turbidimetric method is suitable for bacterial endotoxin test of Docetaxel injection. KEY WORDS Docetaxel in；Kinetic turbidimetric method；Content determination
表 1 细菌内毒素标准曲线及可靠性分析（n＝3） Tab 1 Standard curves of bacterial endotoxin and reliabili-
ty analysi（s n＝3）
内毒素浓度/EU·mL－1 2.0 0.5 0.125 0.031 25 0（阴性对照）
平均反应时间/s 592 843
1 仪器与材料
BET-48G 细菌内毒素测定仪（天大天发科技有限公司）。 多西他赛注射液（齐鲁制药有限公司，批号：9110012TB、 9110022TB、9110032TB，规格：40 mg·mL－1，每瓶附专用溶剂
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中国药房 2011 年第 22 卷第 1 期
3.0 mL，试验前每瓶加专用溶剂 3.0 mL 溶解后作为供试品原 液）；细菌内毒素工作标准品（中国药品生物制品检定所，批 号：150601-200965，规格：每支 180 EU）；动态比浊法鲎试剂
（湛江安度斯生物有限公司，批号：0812182，可测内毒素范围： 0.01～10 EU·mL－1，规格：每支 1.25 mL）；细菌内毒素检查用 水（BET 水，湛江博康海洋生物制品有限公司，批号：090608， 规格：每支 5 mL）。
1 216 1 769 ＞3 600
RSD/％ 2.93 5.66 6.31 7.33
2.2 最大可稀释倍数（MVD）的确定
取本品 1 支，加所附溶剂溶解后，含多西他赛浓度为 10 mg·mL－1。本品细菌内毒素限值（L）为 0.3 EU·mg－1，标准曲线 最低浓度（λ1）为 0.031 25 EU·mL－1，供试品的 MVD＝cL/λ1＝ 0.3 EU·mg－1×10 mg·mL－1/0.031 25 EU·mL－1＝96 倍。 2.3 干扰试验
原料提供厂家
有关物质检查 单一最大杂质量/％ 杂质总量/％
广州白云山光华制药股份有限公司
2.02
6.43
杭州民生药业集团有限公司
2.24
6.79
桂林南药股份有限公司
2.33
6.23
安斯泰来制药（中国）有限公司
2.54
7.36
通过对交沙霉素有关物质测定方法的研究，拟建立一种 灵敏、高效、专属的检查方法，可以进一步提高产品质量标准，
＊副主任药师。研究方向：药品检验、药理学、药物安全性评价。 电话：0531-81216530。E-mail：microzhu2003@
对交沙霉素在生产和正常贮藏过程中可能含有或产生的杂质 进行监控，这将对提高产品的质量、安全性及稳定性产生重大 意义。
参考文献
[ 1 ] 欧盟药典委员会.欧洲药典[S].6.0 版.斯特拉斯堡：欧洲 药品质量管理局，2008：2 204、2 205.
[ 3 ] 日本药典委员会.日本药局方[S].第 15 版.东京：日本药品 和医疗器械局，2006：587、588.
[ 4 ] 国家食品药品监督管理局.进口药品注册标准（JX20020131） [S].2002.
（收稿日期：2010-01-29 修回日期：2010-03-15）
· 54 · China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 1
[ 2 ] Office of the British Pharmacopoeia Commission. British Pharmacopoeia 2008[S]. Published on the Recommendation of the Medicines Commission，2008：1 233、1 234.
2 方法与结果[3，4]
2.1 细菌内毒素标准曲线的建立和可靠性分析 用 BET 水将细菌内毒素标准品进行稀释，使其最终细菌
内毒素浓度分别为 2.0、0.5、0.125、0.031 25 EU·mL－1，各取 0.1 mL，分别加到预先加有 0.1 mL 鲎试剂的反应管内，混合均匀，
插入细菌内毒素检测仪内进行检测，每一浓度重复 3 管，同时 做阴性对照（NC）。以平均反应时间的对数（lgT）为纵坐标，内 毒素浓度的对数（lgc）为横坐标，绘制标准曲线。标准曲线回 归方程为 lgT ＝－0.263 38 lgc+2.849 18（r＝－0.999 9（绝对值 应大于 0. 980）），平行管之间的 RSD 均小于 10％，阴性对照的 反应时间大于标准曲线最低浓度的反应时间，细菌内毒素标 准曲线成立。细菌内毒素标准曲线及可靠性分析结果见表 1。