实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识
实验五大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(一)
2）大黄素的分离与精制
将提过大黄酸的氯仿液继续移至分液漏斗中，用PH10缓冲液（5%NaCO3溶
3）芦荟大黄素的分离和精制
余下氯仿液移至分液漏斗后，加5%NaCO3:5%NaOH (9:1) 碱水液200ml振
摇萃取2次，碱水液加HCl酸化，析出的沉淀过滤水洗干燥，用10ml乙酸乙 酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。
注意事项
①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在 于植物组织中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可 溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥 发，严防中毒； ②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去， 并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取 液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余 液进行下一步分离试验用。 ③ 分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步 最好用新鲜CHCl3，回洗碱水液。回洗液应弃去，可除去混 入碱液中的大黄素甲醚和大黄酚。 留取5ml的三氯甲烷提取液做总样，供最后层析鉴定用。
2．分离原理——pH梯度法
根据蒽醌苷元酸性强弱不同，选用不同的pH碱液进行分
步萃取，以分离酸度不同的蒽醌苷元。大黄酸连有COOH，酸性最强；大黄素连有β-OH，酸性第二；芦荟 大黄素连有苄醇-OH，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均 具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH3和-CH3，后者只连 有-CH3，因而后者酸性排在第四位。
1．大黄总蒽醌苷元的提取
大黄粉50g，置于500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和三氯甲烷250ml，
水浴回流提取4h，放置，冷却后过滤，残渣弃去，三氯甲烷提取液置于分液 漏斗中，分出酸水层，得三氯甲烷提取液。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。
由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。
2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。
具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。
以分离酸度不同的蒽醌苷元。
也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。
（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。
三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层丙酮精制橙色结晶（大黄素）节pH=2沉淀物（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 3大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl 0.25% NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL 圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL 分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸 R1=H R2=COOH大黄素 R1=CH3 R2=OH芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3大黄酚 R1=CH3 R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 5%Na大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl % NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。
大黄中的游离蒽醌类成分的提取方法
大黄中的游离蒽醌类成分的提取方法
提取大黄中的游离蒽醌类成分，可以采用以下步骤：
1. 酸水解：使用稀硫酸将大黄中的蒽醌苷水解成游离的蒽醌苷元。
这一步可以采用超声提取，以提高效率和使水解更加充分完全。
2. 提取游离蒽醌：利用游离的蒽醌可溶于热三氯甲烷的性质，用三氯甲烷加热回流将其提取出来。
3. 分离：采用pH梯度萃取法，根据各种蒽醌类化合物酸性的不同进行分离。
具体操作流程可以参考科研院所、大学等机构所发布的相关文献，或者请教相关化学专家，以确保提取的安全性。
中药化学实验指导—实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离与检识
实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识（一）目的要求学习羟基蒽醌类化合物的提取分离和检识，通过实验要求：1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。
2.掌握用pH梯度萃取法分离不同酸性的羟基蒽醌类化合物。
3.掌握蒽醌类化合物的主要检识方法。
4.熟悉蒽醌类化合物的色谱检识方法。
5.了解用柱色谱法分离蒽醌类成分。
（二）主要化学成分的结构及性质大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim. ex Reg.和药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。
大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷，总含量约3％～5％。
1．大黄酸(rhein) 分子式C15H8O6，分子量284.21。
黄色针状结晶（升华法），mp.321～322℃，330℃分解。
能溶于碱水、吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚，几不溶于水。
2．大黄素(emodin) 分子式C15H10O5，分子量270.23。
橙色针状结晶(乙醇)，mp.256～257℃，能升华。
易溶于乙醇、碱水，微溶于乙醚、氯仿，几不溶于水。
3．芦荟大黄素(aloe-emodin) 分子式C16H10O5，分子量270.23。
橙色针状结晶（甲苯），mp.223～224℃。
易溶于热乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黄色；溶于碱液呈红色；氨水及硫酸中呈绯红色。
4．大黄酚(chrysophanol) 分子式C15H10O4，分子量254.23。
橙黄色六方形或单斜结晶（乙醇或苯），mp.196～197℃，能升华。
易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，极微溶于石油醚、冷乙醇，几不溶于水。
5．大黄素甲醚(physcion) 分子式C 16H 12O 5，分子量284.26。
砖红色单斜针状结晶，mp.203～207℃，溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。
天然药化大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
滤渣
滤液 滤液移入 500ml 的蒸馏烧瓶中，体积勿超 过瓶容积的 1/2， 常压下回收乙醇至糖浆状 （勿太稠厚） ，得乙醇总提物。加入乙醚 60ml（丙酮 10ml） ，时时振摇，将上层乙 醚液倾入另一三角烧瓶中，残渣加乙醚 40ml（丙酮 2ml） ，合并乙醚提取液。 总游离蒽醌
2．游离蒽醌的分离 乙醚提取物 （1）5%NaHCO3 水溶液萃取 3 次
OH
O
OH
CH3O O
CH3
大黄素-6-甲醚（Physcion） 4．大黄酚（Chrysophanol） 本品六方形或单斜形结晶（乙醇或苯） ，熔点 196℃；具升华性，几乎不溶于水，略溶 于冷乙醇，易溶于沸乙醇，溶于苯、氯仿、乙醚及丙酮等。
OH
O
OH
CH3 O
大黄酚（Chrysophanol） 5．芦荟大黄素（Aloe emodm） 橙色针状结晶（甲苯） ，熔点 223-224℃。易溶于热乙醚中。在乙醚及苯中呈黄色，氨 水及硫酸中呈绯红色。
OH HO O OH
OH
OH OO
O CH2 OO OH OH OH
OH HO O OH OH O OH
CH3 OH OH
芦丁(rutin)
槲皮素（quercetin）
CH2O H O
OH O
OH
OH
H OH
OH
CH3
H OH
OH OH
葡萄糖
鼠李糖
三、实验内容（12 学时） 1．芦丁的提取、精制 槐花米粗粉（60g） 置 1000ml 烧杯中，加水 600ml，加入石灰乳（大约 2-3g） ，搅拌， 调 PH8-9，加热至微沸，保持 30 分钟（维持 PH8-9）趁热先用脱 脂棉过滤，然后抽滤。
实验一大黄中游离蒽醌类成分提取、分离与鉴定
实验一 大黄中游离蒽醌类成分提取、分离与鉴定一、概述植物来源：大黄系蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L ）、唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxiam.ex Balf.）或药用大黄（Rheum offcianale Baill.）的干燥根及根茎。
大黄始载于《神农本草经》，列为下品。
历代本草均有记载。
大黄性寒，味苦，具有泻下、健胃、清热解毒等功效。
自古以来，大黄在植物泻下药中占有重要位置，是一味很早就被各国药典收载的世界性药材。
功效：大黄具有多方面的生物活性，其抗菌、抗感染及抗肿瘤活性有效成分主要为蒽醌类衍生物，如大黄酸、大黄素和芦荟大黄素；止血的主要有效成分为大黄酚；泻下的有效成分是结合型的蒽苷类。
蒽醌类衍生物占大黄总化学成分的3%～5%，该类成分少部分以游离状态存在，大部分与葡萄糖结合成苷的形式存在，其中有大黄酸葡萄糖苷、大黄素葡萄糖苷、芦荟大黄素葡萄糖苷、大黄素甲醚葡萄糖苷、大黄酚双葡萄糖苷，新鲜大黄中还含双蒽酮的番泻苷A 和番泻苷B 等。
此外，大黄中还含有鞣质等多元酚类化合物，含量在10%～30%之间，具止泻作用，与蒽苷的泻下作用恰恰相反。
主要化学成分的结构和理化性质：大黄中含有多种游离的羟基蒽醌及其与糖所形成的苷类化合物，已知的游离羟基蒽醌主要有以下5种化合物。
R 1 R 2 大黄酸COOH H 大黄素 OHCH3 芦荟大黄素 CH2OHH 大黄素甲醚 OCH3CH3 大黄酚CH3 H 大黄酸,C 15H 8O 6,黄色针晶，m.p321～322℃(330℃分解)。
可溶于碱水，微溶于乙醇、苯、三氯甲烷、乙醚和石油醚，不溶于水。
大黄素,C 15H 10O 5,橙黄色针晶（乙醇），m.p256～257℃。
可溶于碱水，微溶于乙醚、三氯甲烷，不溶于水。
芦荟素甲醚，橙色针晶（甲苯），m.p223～224℃。
可溶于乙醚、苯及碱水，不溶于水。
大黄素甲醚，专红色单斜针状结晶（苯），m.p205～207℃。
大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄（Rhizoma Rhei）是一种常用中药，主要含有蒽醌类化合物，如大黄素、大黄酚、大黄酸等。
提取、分离和鉴定大黄中的蒽醌类化合物的常用方法如下：
1. 提取：将大黄粉末与适量的乙醇或乙醚等有机溶剂进行浸泡提取，较常用的是乙醚提取。
在恒温搅拌的条件下，将大黄与乙醚按一定比例混合30分钟以上，然后进行过滤，过滤液即为提取液。
2. 分离：提取液中含有大黄中的多种化合物，其中包括蒽醌类化合物。
为了分离和纯化蒽醌类化合物，通常采用柱层析、薄层层析等技术。
柱层析是将提取液通过填料（如硅胶、活性炭等）柱进行洗脱，根据化合物在柱上的亲疏性和相互间作用力的差异，逐步分离目标化合物。
薄层层析则是将提取液涂抹在硅胶或其他载体上的薄层，再通过浸泡，将化合物分离开。
3. 鉴定：分离到目标化合物后，可以通过理化性质和光谱分析进行鉴定。
常用的鉴定方法有红外光谱（IR）、质谱（MS）和核磁共振（NMR）等。
红外光谱可以用于确定化合物的官能团，质谱可以用于分析分子的质量和结构信息，核磁共振则可以提供化合物的详细结构信息。
以上是大黄中蒽醌类化合物的提取、分离和鉴定的常用方法，通过这些方法可以对大黄中的蒽醌类化合物进行有效地提取、分离和鉴定。
大黄中游离蒽醌的提取和含量测定
然后用752式紫外—分光光度计测定500nm—520nm的吸光度。
再取提取出来的游离蒽醌按照上面方法测定吸光度
2，标准对照法
六 数据处理
2，标准对照法
Beer定律A=ELC,因标准溶液与供试品溶液是同物质，同仪器，及同一波长于厚度相同的吸收池中测定，顾L和E都相同，所以有
C样=A样C标\A标 大黄中游离蒽醌含量的计算式为： 含量﹪﹦m样/m大黄×100﹪
七 注意事项及讨论
a 理想的标准曲线应该是一条通过原点的直线。如若不过原点的原因可能有 （1）空白溶液的选择不当； （2）显色反应的灵敏度不够； （3）吸收池的光学性能不一致等。 b 采用标准曲线应注意的问题： （1）制备一条标准曲线至少应6-9个点，并不得随意延长。 （2）待测液浓度应包括在标准曲线范围内；不然则应进行适当的稀释或浓缩，或改变稀释池的厚度。 （3）供试品试液和对照品试液必须使用相同的溶剂系统和显色系统，并在相同的条件下进行测定。
02
试剂 大黄粉末、 1.8-二羟基蒽醌标准品、 氯仿溶液、甲醇溶液、醋酸镁。四 仪器和试剂源自五 实验内容与步骤05
06
03
04
01
02
<2>开始实验
（二）游离蒽醌含量的测定
取上面所制备的1.8-二羟基蒽醌标准溶液加入吸收池中。
取醋酸镁甲醇溶液于另一个吸收池作为空白溶剂调整透光率100%和吸光度为0。
大黄中游离蒽醌的提取和含量测定
202X
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演讲人姓名
一 实验背景
03
掌握标准曲线的测绘步骤及原理。
02
会用紫外—分光光度计测1，8-二羟基蒽醌及游离蒽醌的吸光度。
大黄游离蒽醌实验报告
大黄游离蒽醌实验报告大黄游离蒽醌实验报告大黄游离蒽醌实验报告引言：大黄是一种常见的中药材，被广泛用于治疗便秘和胃肠道问题。
它的主要成分是蒽醌类化合物，其中最主要的成分是大黄素。
本实验旨在通过提取大黄中的大黄素，并通过游离蒽醌实验验证提取物中的有效成分。
实验步骤：1. 材料准备：我们使用的材料包括大黄粉末、乙醇和氯化钠。
2. 提取大黄素：首先，我们将大黄粉末与乙醇混合，并在常温下搅拌30分钟，以使大黄素充分溶解。
然后，用滤纸过滤混合物，收集滤液。
接下来，将滤液转移到蒸发皿中，用低温蒸发法除去乙醇，得到提取物。
3. 游离蒽醌实验：我们将提取物与氯化钠溶液混合，并用酸性醇溶液进行萃取。
然后，我们将萃取液进行离心分离，并收集上层溶液。
最后，我们用紫外可见光谱仪测量上层溶液的吸光度，以确定其中游离蒽醌的含量。
实验结果：通过游离蒽醌实验，我们测量了提取物中游离蒽醌的含量。
根据测量结果，我们发现提取物中的游离蒽醌含量为XX mg/mL。
这表明我们成功地从大黄中提取出了游离蒽醌，并且提取物中的游离蒽醌含量较高。
讨论：大黄素是一种具有抗炎、抗菌和抗氧化等多种药理作用的物质。
游离蒽醌实验是一种常用的方法，用于检测大黄素的含量。
通过本实验，我们确定了大黄提取物中游离蒽醌的含量，这为进一步研究大黄的药理作用提供了基础。
然而，本实验存在一些局限性。
首先，我们只测量了游离蒽醌的含量，而没有对其他蒽醌类化合物进行测量。
因此，提取物中可能还存在其他有效成分。
其次，我们只使用了一种提取方法，可能有其他更有效的提取方法可以提高提取物中游离蒽醌的含量。
结论：本实验成功地从大黄中提取出了游离蒽醌，并通过游离蒽醌实验测量了其含量。
提取物中游离蒽醌的含量为XX mg/mL。
这为进一步研究大黄的药理作用提供了基础。
然而，还需要进一步研究以确定提取物中其他有效成分的含量，并尝试其他更有效的提取方法。
总结：大黄游离蒽醌实验是一种常用的方法，用于检测大黄中游离蒽醌的含量。
实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离与检识.
（二）实验内容-提取与分离 一、提取
1.水解。
大黄 加20％硫酸加 热12h，水洗至 中性。 水解后大黄
注：目的。 1.水解：将大黄中 蒽醌苷水解成游离蒽醌， 便于有机溶剂提取。 2.水洗至中性：便 于下一步用碱性缓冲溶 液萃取。（或提取后用 水洗去有机溶剂中余 酸。）
2.提取。
水解后大黄 臵索氏提取器中（滤 纸筒包扎），用连续 提取装臵提取，提取 液体为氯仿。提取8h 以上，致索氏提取器 中提取液体近无色为 止。 氯仿提取液体 注：1、氯仿用量不宜超过烧瓶 的2/3并应加沸石。2、氯纸筒 高度应适宜。3、进、出水连接。
实验一
大黄中游离蒽醌的提取 分离与检识
（一）实验原理
本实验是根据大黄中的羟基蒽醌苷经 酸水解成游离羟基蒽醌，而游离羟基蒽醌 不溶于水，可溶于氯仿、乙醚等亲脂性有 机溶剂的性质，用氯仿从水解液中将游离 羟基蒽醌提取出来，再利用各游离羟基蒽 醌的酸性不同，采用pH梯度萃取法将其分 离。其中大黄酚和大黄素甲醚的酸性十分 近似，用pH梯度萃取法难以分离，可利用 两者的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行 分离。
二、分离
略
氯仿液1
加pH为9.9的缓 冲溶液。萃取
碱水液
氯仿液2
浓盐酸调pH至3，静臵
沉淀 抽滤 大黄素 注：缓冲液为为碳酸氢钠-碳酸钠缓冲液，并一次加入。
4.分离芦荟大黄素（同分离大黄酸）。
注：萃取液为5％碳酸钠-5％氢氧化钠（9∶1），可分 次加入。
5.分离大黄酚和大黄素甲醚（同分离大黄酸）。
注：萃取液为3氢氧化钠，可分次加入。
3.2抽滤瓶的使用：
①开始顺序：减滤纸（大 小应合适）→安装分液漏斗 （分液漏斗下斜口应对准抽气 口）→连接真空泵→打开真空 泵→抽滤。 ②结束时顺序：先拔掉抽 滤瓶上与真空泵连接的像皮管， 再拆除装臵。否则真空泵中的 水回因为压力较抽滤瓶中空气 的压力大而流入抽滤瓶。
大黄提取分离实验报告
一、实验目的1. 熟悉大黄中蒽醌类成分的提取和分离方法。
2. 掌握pH梯度提取法的原理和操作技术。
3. 学习蒽醌类化合物的鉴定方法。
二、实验原理大黄是一种常用的中药材，具有清热解毒、活血化瘀、泻火凉血等多种功效。
大黄中的主要有效成分是蒽醌类化合物，包括游离蒽醌和蒽醌苷。
本实验采用pH梯度提取法，利用蒽醌类化合物在不同pH值下的溶解度差异进行分离。
三、实验材料1. 材料：大黄药材（掌叶大黄或唐古特大黄）2. 试剂：浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、浓硝酸、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、硅胶G、CMC等3. 器械：粉碎机、索氏提取器、分液漏斗、烧杯、滴管、橡皮管、球形冷凝管、30cm层析缸、标本瓶、布氏漏斗、抽滤瓶、普通滤纸、薄层板、喷雾器、广泛pH试纸等四、实验步骤1. 粉碎：将大黄药材切片剪碎，用粉碎机粉碎得到大黄粗粉，经80目筛子过筛。
2. 酸解：取大黄粗粉50g，加入100ml浓硫酸，搅拌均匀，于索氏提取器中加热回流3小时，使蒽醌苷水解成苷元。
3. 水洗、抽滤、干燥：将酸解液过滤，用蒸馏水洗涤滤渣，抽滤，将滤液浓缩至约20ml，蒸干，得大黄蒽醌提取物。
4. 萃取结晶：将大黄蒽醌提取物用乙醚萃取，萃取液浓缩至干，得大黄蒽醌结晶。
5. 硅胶薄层层析：取大黄蒽醌结晶适量，加适量石油醚溶解，点于硅胶薄层板上，用苯-乙醚（8:2）为展开剂进行层析，晾干后观察斑点。
6. 纤维素柱层析：将硅胶薄层层析得到的大黄蒽醌结晶，用石油醚溶解，上柱，用苯-乙醚（8:2）为洗脱剂进行柱层析，收集各组分。
7. 鉴定：取各组分适量，加2%的氢氧化钠溶液1ml，观察颜色变化，鉴定游离蒽醌的种类。
五、实验结果1. 通过实验，成功提取出大黄中的蒽醌类化合物。
2. 通过硅胶薄层层析和纤维素柱层析，将大黄蒽醌类化合物分离为多个组分。
3. 通过鉴定，确定了大黄中游离蒽醌的种类，包括大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酸等。
大黄中游离蒽醌的提取和含量测定
分光光度法
利用游离蒽醌在特定波长下具有特征吸收光谱的性质，通 过比较标准品和样品的吸光度值，计算游离蒽醌的含量。
薄层色谱法
基于不同物质在薄层板上的吸附和展开性能不同进行分离，通 过显色反应呈现特定颜色，测量斑点面积并与标准品比较，确
定游离蒽醌的含量。
测定过程
高效液相色谱法
01
制备大黄提取液、过滤、进样、色谱分离、检测、数据处理和
通过测量大黄提取液在特定波长 下的吸光度，计算游离蒽醌的含 量，操作简便，适合大量样品分 析。
薄层色谱法
将大黄提取液点在薄层板上，通 过展开、显色和测量斑点面积， 计算游离蒽醌的含量，适用于定 性分析和少量样品定量分析。
测定原理
高效液相色谱法
基于不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异进行分离 ，通过紫外检测器检测蒽醌类化合物的特征吸收光谱，确定其
抗氧化作用
大黄中的多种化合物具有抗氧化作用，可以清除 自由基，保护细胞免受氧化损伤。
ABCD
抗炎作用
大黄中的苯乙烯苷类化合物具有抗炎作用，可以 抑制炎症介质的释放，减轻炎症反应。
抗肿瘤作用
研究表明，大黄中的某些化合物可以抑制肿瘤细 胞的生长和扩散。
02
游离蒽醌的提取
提取方法
溶剂提取法
01
利用有机溶剂如乙醇、乙醚等从大黄中提取游离蒽醌
对大黄中游离蒽醌提取和含量测定的展望
01
深入研究
02
扩大应用范围
03
加强国际交流与合作
未来可以进一步深入研究大黄中游离 蒽醌的提取工艺、含量测定方法以及 药效作用机制，提高对大黄的认知水 平和应用能力。
可以将大黄中游离蒽醌的提取和含量 测定方法应用到其他中药材中，推动 中药材的质量控制和标准化发展。
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定实验目的和要求1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。
2．掌握PH梯度法的原理及操作技术。
3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。
4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。
实验方法1．大黄总蒽醌苷元的提取注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。
所以要用酸水解使其生成苷元。
蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥发，严防中毒；②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去，并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。
氯仿提取液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余液进行下一步分离试验用。
2．总蒽醌苷元分离方案的设计1)大黄总蒽醌苷元的纸色谱2) 蒽醌类成分的缓冲纸色谱试验3)最佳萃取剂及其用量的确定4)蒽醌类成分各种萃取剂用量的确定5)新分离方法的设计3．蒽醌类成分的分离与精制①大黄酸的分离与精制将含有总游离蒽醌的氯仿液450ml移至1000ml的大分液漏斗中，加PH8缓冲液275ml振摇萃取，静置至彻底分层，放出氯仿液后，到出碱水液至置250ml烧杯中，加HCl酸化至PH=3，待黄色沉淀析出完全后，过滤、干燥，干燥后的样品加冰醋酸10ml加热使溶，趁热过滤，滤液静置，析出黄色针晶为大黄酸，过滤即得纯品。
②大黄素的分离与精制将提过大黄酸的氯仿液继续移至分液漏斗中，用PH9.9缓冲液275ml振摇萃取，彻底分层后，分出碱水层，并用HCl酸化至PH=3，析出棕黄色沉淀，过滤，沉淀经干燥后，用10ml 冰醋酸加热使溶，趁热过滤，析出橙色大针晶，过滤后，即得大黄素纯品。
③芦荟大黄素的分离和精制余下氯仿液移至分液漏斗后，加5%NaCO3:5%NaOH (9:1) 碱水液540ml或用0.5%KOH540ml振摇萃取，碱水液加HCl酸化，析出的沉淀过滤干燥，用10ml乙酸乙酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。
大黄中游离开蒽醌的提取分离
3.分离大黄酸。
氯仿提取液体 加pH为8的缓冲 溶液。萃取
碱水液 沉淀 抽滤 大黄酸
氯仿液1
浓盐酸调pH至3，静置
注：缓冲液为为柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，并一次加入。 缓冲液为为柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，并一次加入。
3.1分液漏斗的使用：
① 检漏：洗净后，晾干，下口活塞涂抹 凡士林，旋至透明，检漏，上口活塞包一滤纸 条，放置待用。② 萃取时，两相溶液应充分 混合，放气，振摇分液漏斗时，下口活塞柄应 朝上。③ 放出下层液体时，应用手握住活塞 旋转，以免活塞滑落使溶液漏出。④ 放出下 层液体时，应打开上口活塞。
6.分离大黄酚和大黄素甲醚（同分离大黄酸）。
萃取除去芦荟大黄素后余下的氯仿层，再用3％氢氧化钠 溶液500 m1分二次萃取，至碱水层无色为止，合并碱水层， 加盐酸酸化至pH 3，析出黄色沉淀，过滤，水洗至中性， 干燥，为大黄酚和大黄素甲醚混合物，留作柱色谱分离的 样品。余下氯仿液水洗至中性，蒸馏回收氯仿。
（二）实验内容-提取与分离
图1.大黄提取分离流程图
1.水解。
大黄 加20％硫酸加 热，水洗至中 性。 水解后大黄
注：目的。 1.水解：将大黄中 蒽醌苷水解成游离蒽醌， 便于有机溶剂提取。 2.水洗至中性：便 于下一步用碱性缓冲溶 液萃取。（或提取后用 水洗去有机溶剂中余 酸。）
2.提取。
水解后大黄 置索氏提取器中（滤 纸筒包扎），用连续 提取装置提取，提取 液体为氯仿。提取8h 以上，致索氏提取器 中提取液体近无色为 止。 氯仿提取液体 注：1、氯仿用量不宜超过烧瓶 2/3并应加沸石 并应加沸石。 的2/3并应加沸石。2、氯纸筒 高度应适宜。 出水连接。 高度应适宜。3、进、出水连接。
氯仿液1 加pH为9.9的缓 冲溶液。萃取
实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离及鉴定
实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离及鉴定大黄种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（RheumPalmatum.L ）、 大黄R.officinale Baill ）及唐古特大黄（R.tanguticum Maxiim et Regll ）的根茎及根。
蒽醌类化合物在植物体内主要以苷的形式存在，其中有大黄酸-葡萄糖苷；大黄素甲醚-葡萄糖苷；芦荟大黄素-葡萄糖苷；大黄素-葡萄糖苷；大黄酸双葡萄糖苷等。
此外尚含鞣质类成分如葡萄糖没食子鞣质，儿茶鞣质、没食子酸等。
大黄中还含有属于双蒽酮的番泻苷A 及番泻苷B 。
蒽苷内服后有致泻、清热解毒作用，尤其是大黄酸葡萄糖苷有较强的致泻作用。
游离的羟基蒽醌如大黄酸、大黄素有明显的抗菌活性。
1．大黄酸（OOOHOHCOOH3．大黄素甲醚（Physcion ）OOOHOHCH 3H 3CO4．大黄酚（ChrysophanolOOOHOHCH 35．芦荟大黄素（Aloe emodin ）OOOHOHCH 2OH[目的要求]：1．掌握蒽醌及蒽醌衍生物的理化性质及提取分离方法。
2．掌握双相酸水解的原理及操作。
3．掌握液－液萃取的原理及操作。
4．掌握制备薄层的原理及操作。
5．掌握蒽醌类成分的各类检识方法。
[实验原理]（*此项内容由学生自行预习、归纳并整理） [实验内容]一、大黄中总游离蒽醌成分的提取分离1. 双相酸水解2. pH梯度萃取法3. 制备薄层分离取沉淀Ⅲ适量，加甲醇1ml使溶解，条状点样于硅胶G制备薄层板上，以石油醚－乙酸乙酯（8：2）为展开剂，展开，取出，晾干，定位，刮取色谱带，用适量甲醇溶解，滤过，回收溶剂至干，依次得样品Ⅲa、Ⅲb、Ⅲc。
二、蒽醌类化合物的鉴定1．化学检识（1）Brontrager’s反应取样品适量，加2％NaOH溶液数滴，观察颜色变化。
（2）醋酸镁反应取样品适量，加乙醇数滴使溶解，滴加0.5％醋酸镁乙醇溶液数滴，观察颜色变化。
（3）浓硫酸反应取样品适量，滴加浓硫酸，观察颜色变化。
大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定
实验一大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定实验编号:1日期:学时数: 6学时地点:任课教师:实验目的:掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法实验原理:大黄中有多种游离蒽醌及其苷类,总含量约2-5%。
主要有大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚以及它们的葡萄糖苷等。
从大黄中提取分离游离蒽醌时,先用20%硫酸加热使苷类水解，保留滤饼，滤饼用乙醚加热回流提取总蒽醌苷元（游离蒽醌），提取液作TLC鉴识。
实验对象:大黄主要仪器、试剂:电热套、烧杯、20%硫酸、薄层硅胶G 、0.5%CMC-Na。
实验操作步骤:酸水解：取大黄10g ,粉碎，加20%硫酸水溶液100ml，水浴上加热3-4小时,抽滤,滤饼水洗后自然干燥。
铺薄层硅胶G板: 薄层硅胶G :0.5%CMC-Na(1:3)实验注意事项:①加热温度不要太高。
②溶液保持微沸，防止药渣炭化。
③不断搅拌。
后记:实验一大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定实验编号:2日期:学时数: 6学时地点:任课教师:实验目的:1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。
2.掌握蒽醌类的色谱鉴别方法。
实验原理:大黄中有多种游离蒽醌及其苷类,总含量约2-5%。
主要有大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚以及它们的葡萄糖苷等。
从大黄中提取分离游离蒽醌时,先用20%硫酸加热使苷类水解，保留滤饼，滤饼用乙醚加热回流提取总蒽醌苷元（游离蒽醌），提取液作TLC鉴识。
实验对象:大黄滤饼主要仪器、试剂:电热套、圆底烧瓶、冷凝管、乙醚、硅胶薄层板、石油醚、乙酸乙酯实验操作步骤:总羟基蒽醌苷元的提取：取干燥滤饼，放入100ml圆底烧瓶中，加入乙醚50ml,回流提取3－4小时，得乙醚提取液。
乙醚提取液经薄层层析检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。
薄层板为硅胶G-CMC-Na,展开剂为石油醚（60-90℃）－乙酸乙酯（７：３），直立展开。
实验注意事项:①加热回流时电热套电压小于50v。
实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离与检识【精选-PPT】
实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识【精选-PPT】实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识一. 实验目的1. 熟悉并掌握大黄中游离蒽醌的提取分离与检识的基本原理和方法；2. 学会用硅胶柱层析法分离大黄提取物中的游离蒽醌；3. 学会用TLC法检测游离蒽醌的纯度和确定游离蒽醌的Rf值；4. 了解游离蒽醌的酸碱性质。
二. 实验原理游离蒽醌：是大黄素（还有大黄酸、甙）的主要成分之一。
它是一种有机物，结构中有两个官能团——酮基和芳环。
它的化学性质是一种具有两个官能团的酮类化合物，也是一种大环芳香族化合物，具有吸氧性，容易被还原为蒽醌酚，具有明显的紫外吸收，所以在一般试验室条件下，易被检测到。
大黄提取物中游离蒽醌的提取分离与检识方法：①提取：将大黄粉末催化加热于浓H2SO4溶液中，经水蒸气蒸馏、提取、分液提取游离蒽醌。
②分离：用硅胶柱层析法分离游离蒽醌。
硅胶柱层析法的原理是根据不同的化学性质，通过分配系数，用不同的溶剂作为流动相，将混合物的成分逐一分离出来，从而达到分离的目的。
③检测：用TLC法检测游离蒽醌的纯度和确定游离蒽醌的Rf值。
三. 实验仪器与药品仪器：天平、电热板、恒温水浴、溶液振荡器、玻璃试管、吸滤瓶、硅胶柱、白瓷漏斗、蒸馏器、滴定管、吸管、刮刀、紫外分光光度计等。
药品：大黄提取物、浓H2SO4、90%乙醇、十氢蒽醌、石英硅胶等。
四. 实验步骤1. 提取游离蒽醌取2g大黄粉末加入25ml浓H2SO4液中，加少量的多元醇作为催化剂，保持温度在98℃左右，反应2.5小时。
冷却后将混合液加入烧杯中，加入50ml蒸馏水振荡搅拌。
放置沉淀，用滤纸过滤得到粗品，洗涤过滤渣用水，过滤液集中。
去除多余的水分，用90%乙醇提取游离蒽醌。
2. 硅胶柱层析分离在硅胶柱中装入3g石英硅胶，用去离子水洗涤柱，然后用90%乙醇填充柱床5-10ml，使之不能流出。
将上述提取物均匀地吸入硅胶柱中，柱头用90%乙醇堵住，用90%乙醇洗涤柱。
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3.2抽滤瓶的使用：
①开始顺序：减滤纸（大小 应合适）→安装分液漏斗（分 液漏斗下斜口应对准抽气口） →连接真空泵→打开真空泵→ 抽滤。
②结束时顺序：先拔掉抽滤 瓶上与真空泵连接的像皮管， 再拆除装置。否则真空泵中的 水回因为压力较抽滤瓶中空气 的压力大而流入抽滤瓶。
4.分离大黄素（同分离大黄酸）。
氯仿液1
加pH为9.9的 缓冲溶液。萃 取
碱水液
氯仿液2
浓盐酸调pH至3，静置
沉淀 抽滤
大黄素
注：缓冲液为为碳酸氢钠-碳酸钠缓冲液，并一次加入。
4.分离芦荟大黄素（同分离大黄酸）。
注：萃取液为5％碳酸钠-5％氢氧化钠（9∶1），可分 次加入。
5.分离大黄酚和大黄素甲醚（同分离大黄酸）。
注：萃取液为3氢氧化钠，可分次加入。
二、分离
略
实验一
大黄中游离蒽醌的提取 分离与检识
（一）实验原理
本实验是根据大黄中的羟基蒽醌苷经 酸水解成游离羟基蒽醌，而游离羟基蒽醌 不溶于水，可溶于氯仿、乙醚等亲脂性有 机溶剂的性质，用氯仿从水解液中将游离 羟基蒽醌提取出来，再利用各游离羟基蒽 醌的酸性不同，采用pH梯度萃取法将其分 离。其中大黄酚和大黄素甲醚的酸性十分 近似，用pH梯度萃取法难以分离，可利用 两者的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行 分离。
（二）实验内容-提取与Leabharlann 离一、提取1.水解。
大黄 加20％硫酸加 热12h，水洗 至中性。
水解后大黄
注：目的。
1.水解：将大黄中蒽 醌苷水解成游离蒽醌， 便于有机溶剂提取。
2.水洗至中性：便于 下一步用碱性缓冲溶液 萃取。（或提取后用水 洗去有机溶剂中余酸。）
2.提取。
水解后大黄
置索氏提取器中（滤 纸筒包扎），用连续 提取装置提取，提取 液体为氯仿。提取 8h以上，致索氏提 取器中提取液体近无 色为止。 氯仿提取液体
注：1、氯仿用量不宜超过烧瓶 的2/3并应加沸石。2、氯纸筒 高度应适宜。3、进、出水连接。
3.分离大黄酸。
氯仿提取液体
加pH为8的缓 冲溶液。萃取
碱水液
氯仿液1
浓盐酸调pH至3，静置
沉淀 抽滤
大黄酸
注：缓冲液为为柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，并一次加入。
3.1分液漏斗的使用：
① 检漏：洗净后，晾干，下口活塞涂抹凡 士林，旋至透明，检漏，上口活塞包一滤纸条， 放置待用。② 萃取时，两相溶液应充分混合， 放气，振摇分液漏斗时，下口活塞柄应朝上。 ③ 放出下层液体时，应用手握住活塞旋转， 以免活塞滑落使溶液漏出。④ 放出下层液体 时，应打开上口活塞。