常用pH缓冲液 缓冲液缓冲范围

资料]常用pH缓冲溶液的配制和pH值
常用pH缓冲溶液的配制和pH值
一、常用溶液的配制
（一）溶液配制注意事项
1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。

工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。

2．药品称量要精确。

3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。

４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。

（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液
1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。

2．1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。

3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。

（三）0.15Mol/L PB 液 Na 2HPO 4·2H 2O 分子量=175.05 0.15Mol/L 溶液含26.7g/L 。

Na 2HPO 4·12H 2O 分子量=358.22 0.15Mol/L 溶液含53.7g/L 。

NaH 2PO 4·H 2O 分子量=138.00 0.15Mol/L 溶液含20.7g/L 。

NaH 2PO 4·2H 2O 分子量=156.03 0.15Mol/L 溶液含23.4g/L 。

（四）0.2Mol/L PB 缓冲液
0.2Mol/L Na2HPO4·2 H2O溶液35.61g/L
Na2HPO4·12 H2O溶液含71.64g/L
0.2Mol/LNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/L
NaH2PO4·2 H2O溶液含31.21g/L
欲配0.1Mol/L PB缓冲液则在0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。

欲配制PBS液时，则在溶液中加0.85％的NaCl溶液即可。

（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）
（0.15Mol/L PH 7.2）
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.15g
（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）
KH2PO4 0.2g
将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌
10min~15min，存在4℃冰箱中备用。

此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗
涤细胞培养物。

（六）硼酸盐缓冲液（Borate saline buffer）
1．硼酸（Ｈ3BO3）
0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1 000ml。

2．硼砂（Na2B4O7）
0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1 000ml。

（七）巴比妥缓冲液
1．pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液
巴比妥钠 47.6g
蒸馏水 3 000ml
1.17N HCl 55.0ml
（1.17 N HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水）
⑴ 将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。

⑵ 加1.17 N HCl 55ml。

⑶ 用HCl调节pH到8.2，并加蒸馏水至4 265ml。

2．pH8.4 0.06Mol/L巴比妥缓冲液
巴比妥 1.84g
巴比妥钠 10.30g
加蒸馏水至 1 000.00ml
3．pH8.6 0.06Mol/L巴比妥缓冲液
巴比妥 1.66g
巴比妥钠 12.76g
加蒸馏水 1 000.00ml
（八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液见表附表5
（九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（Tris—HCl缓冲液）
不同pH，0.05Mol/L
25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加хml0.1NHCl，加水稀释至100ml（见下表）
三羟甲基氨基甲烷（Tris）
分子量=121.14
0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1 000ml。

0.1NHCl：取HCl8.6ml，加水至1 000ml。

（十）0.5Mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液
NaHCO3 3.70g
Na2CO3 0.60g
溶于600.00ml蒸馏水中即得。

不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。

最好小量配制。

（十一）甘油磷酸缓冲液
1．配制pH8.0磷酸缓冲液
0.1Mol/L Na2HPO4 94.50ml
0.1N NaH2PO4 5.50ml
混合即可
2．9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。

用途：用于免疫荧光试验。

（十二）Hank’s液
1．贮存液
NaCl 80.00g
KCl 4.00g
Na2HPO4·12 H2O 1.52g
KH2PO4 0.60g
葡萄糖 4.00g
0.4％酚红液 50.00ml
双馏水加至 100.00ml
115℃高压灭菌15min，冰冻保存。

2．工作液
贮存液 1份
双馏水 9份
115℃高压灭菌15min。

临用时用灭菌的5.6％NaHCO3液调pH值至7.2左右（溶
液呈橙红色）。

（十三）萘（钠）氏试剂（Nessler’s reagent）
配方1：氯化汞 6.0g
碘化钾 12.4g
20％NaOH 30ml
加蒸馏水至 100ml
配方2：碘化汞 11.5g
碘化钾 8g
蒸馏水 50ml
（完全溶解后）过滤，加20％NaOH 50ml。

用途：检测溶液中氨离子。

（十四）阿氏（Alsever’s）液
葡萄糖 2.05g
柠檬酸钠 0.80g
氯化钠 0.42g
蒸馏水 100ml
溶解后，以10%柠檬酸调节pH至6.1，过滤，分装，10磅10min灭菌，4℃保存。

（十五）青、链霉素混合液（简称S．P．液或双抗液）
青霉素（40万U） 5支
链霉素（200万μg） 1支
分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10℃~-20℃冰箱保存备用（1万单位μg/ml）。

临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉
素100ug/ml。

（十六）洗液（清洁液）
配方1：重铬酸钾 150g
蒸馏水 300ml
浓硫酸 3 000ml
将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。

此为
强洗液。

盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上
眼镜和厚胶皮手套，以保安全。

洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。

如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。

配方2：浓硫酸 50%
蒸馏水 50%
重铬酸钾 5%
此为中等强度洗液。

配方3：重铬酸钾 100g
蒸馏水 1 000ml
加热溶解，冷却后缓慢加入
工业硫酸 100ml
此液为弱洗液，为棕红色。

使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，
经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效。

缓冲液名称及常用浓度????????????????????? 缓冲pH范围??????????????????????? 主要物质分子量
MES (2吗啉代乙磺酸)????????????????????????
5.5-
6.7??????????????????????????? 195.2
Bis-Tris??????????????????????????????????????????
5.8-7.2??????????????????????????? 209.2
HEPES???????????????????????????????????????????
6.8-8.2??????????????????????????? 238.3
PIPES????????????????????????????????????????????
6.1-
7.5??????????????????????????? 302.4
MOPS????????????????????????????????????????????
6.5-
7.9??????????????????????????? 209.3
Tricine???????????????????????????????????????????
7.4-8.8???????????????????????????? 179.2
TEA (三乙醇胺)??????????????????????????????
7.4-8.3??????????????????????????? 149.2
甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05mol/L）?????? 2.2-5.0????????????????????? 甘氨酸Mr=75.07
邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05mol/L） 2.2-3.8????????????????? 邻苯二甲酸氢钾Mr=204.23
磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液??????????????????? 2.2-8.0?????????????????? 磷酸氢二钠Mr=141.98
柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液?????????????? 2.2-6.5????????????????????? 柠檬酸Mr=192.06
柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/L）?? 3.0-6.6??????? 柠檬酸Mr=192.06? 柠檬酸钠Mr=257.96
乙酸-乙酸钠缓冲液（0.2mol/L）????????? 3.6-5.8???????????? 乙酸钠Mr=81.76???? 乙酸Mr=60.05
邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液????????? 4.1-5.9???????????????????? 邻苯二甲酸氢钾Mr=204.23
磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2mol/L）? 5.8-8.0?
磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液（1/15 molL）4.92-8.18?
磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05mol/L）???? 5.8-8.0??????
巴比妥钠-盐酸缓冲液(18℃)????????????? 6.8-9.6???????????????????? 巴比妥钠Mr=206.18
Tris-盐酸缓冲液(0.05mol/L? 25℃)??? 7.10-9.00???????? 三羟甲基氨基甲烷（Tris）Mr=121.14
甘氨酸-氢氧化钠缓冲液(0.05mol/L)??? 8.6-10.6???????????????????? 甘氨酸Mr=75.07
硼砂-氢氧化钠缓冲液(0.05mol/L)??????? 9.3-10.1??????????? 硼砂Na2B4O7?10H2O Mr=381.43
碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.1mol/L)?????? 9.16-10.83????? 碳酸钠Mr=286.2?? 碳酸氢钠Mr=84.0
碳酸钠-氢氧化钠缓冲液(0.025mol/L)??? 9.6-11.0?
磷酸氢二钠-氢氧化钠缓冲液???????????????? 10.9-12.0??
氯化钾-盐酸缓冲液（0.2mol/L）??????????? 1.0-2.2?????????????? 氯化钾Mr=74.55
氯化钾-氢氧化钠缓冲液（0.2mol/L）???? 12.0-13.0?????????????? 氯化钾Mr=74.55。