细胞培养所用玻璃及塑料消毒
细胞培养的必备设施、常用器材
一、细胞培养的必备设施
（一）无菌实验室 防止微生物污染和有害因素的影响 工作环境清洁、空气清新、干燥和
无烟尘。
（二）超净工作台
（三）恒温培养箱 变通电热恒温培养箱 CO2培养箱
(四)其他设备 倒置显微镜 电热鼓风干燥箱 电子天平 恒温水浴箱 离心机 压力蒸汽消毒器 液氮储存罐
（三）血清
血清必须贮存于–20 ～ -70℃，若存放于4℃， 请勿超过一个月。
一般厂商提供之血清为无菌，不需再无菌过滤。 若发现血清有许多悬浮物，则可将血清加入培养 基内一起过滤，勿直接过滤血清。
瓶装(500ml) 血清解冻步骤(逐步解冻法): 20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室温下全溶 后再分装，一般以50 ml 无菌离心管可分装40～ 45 ml。勿直接由–20℃直接至37℃解冻，因温度 改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沈淀。
二、 灭菌
实验用玻璃血清瓶以铝箔纸包覆瓶盖， 高压蒸汽灭菌121℃, 15 lb, 20 分钟，置 于oven 中烘干。
实验用玻璃pasteur pipet 以干热灭菌 170℃, 4 小时。
吸管、培养瓶、手术器械等置饭盒内高 压蒸汽灭菌121℃, 15 lb, 20 分钟，置于 oven 中烘干。
（3）使用液（1×）配法
取母液甲和母液乙各一份，加双蒸水18份，以 115℃高压灭菌25分钟(以免葡萄糖破坏)，置 室温后4℃保存
（二）培养基（维持液、营养液）
目前常用的基础培养液均已商品化，如 RPMI1640，MEM，DMEM，F12等，可 根据培养需求合理选择，主要成分是氨 基酸、维生素、碳水化合物、无机离子 及其他一些辅助物质。
（三）橡皮器材（各种瓶或试管的塞子、 盖子）
玻璃实验器皿清洗方法
1 清洗在组织细胞培养中，体外细胞对任何有害物质都非常敏感,均能影响培养细胞的生长微生物产品附带杂物上次细胞残留物非营养成分的化学物质需要清洗的培养用品玻璃器皿的清洗胶塞的清洗塑料制品的清洗玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤清洗后的玻璃器皿干净透明无油迹不能残留任何物质浸泡：初次使用和培养使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡，以使附着物软化或被溶掉新的初次使用的玻璃器皿，在生产及运输过程中，玻璃表面带有大量的干固的灰尘，且玻璃表面常呈碱性及带有一些对细胞有害的物质等先用自来水简单刷洗，然后用5％稀盐酸液浸泡过夜，以中和其中的碱性物质再次使用的玻璃器皿则常附有大量刚使用过的蛋白质，干固后不易洗掉用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液面上刷洗：用毛刷沾洗涤剂刷洗，以除去器皿表面附着较牢的杂质刷洗要适度，过度会损害器皿表面光泽度浸酸：玻璃器皿浸泡到清洁液中清洁液对玻璃器皿无腐蚀作用，而其强氧化作用可除掉刷洗不掉的微量杂质浸泡时器皿要充满清洁液，勿留气泡或器皿露出清洁液面浸泡时间：一般为过夜，不应少于6 小时清洁液常用三种：重铬酸钾（g）浓硫酸（ml）蒸馏水（ml）强清洁液63∶1000∶200次强清洗液120∶ 200∶1000弱清洁液100∶ 100∶1000配制时应注意安全，须穿戴耐酸手套和围裙，并要保护好面部及身体裸露部分配制过程中可使重铬酸钾溶于水中，然后慢慢加浓硫酸。
并不停的用玻璃棒搅拌，使产生的热量挥发，配制溶液应选择塑料制品。
配成后清洁液一般为棕红色冲洗在使用后，刷洗及浸泡后都必须用水充分冲洗。
使之尽量不留污染或清洁液的残迹最好用洗涤装置如用手工操作需流水冲洗十次以上，每次水须灌满及倒干净，最好用蒸馏水清洗3-5 次，晾干备用胶塞的清洗新购置的瓶塞带有大量滑石粉及杂质，应先用自来水冲洗，再做常规处理常规清洗方法每次用后立即置入水中浸泡，用2% NaOH 或洗衣粉煮沸10-20 分钟（以除掉培养中的蛋白质），自来水冲洗，蒸馏水冲洗2-3次，晾干备用塑料制品的清洗塑料制品现多是采用无毒并已经特殊处理的包装，打开包装即可用，多为一次性物品必要时用2% NaOH 浸泡过夜，用自来水充分冲洗，再用5%盐酸溶液浸泡30 分钟，最后用自来水和蒸馏水冲洗干净，晾干备用消毒细胞培养的最大危险是发生培养物的细菌、真菌和病毒等微生物的污染常见原因：操作间或周围空间的不洁培养器皿和培养液消毒不合格或不彻底由于有关培养的每个环节的失误均能导致培养失败，故细胞培养的每个环节都应严格遵守操作常规，防止发生污染消毒灭菌方法物理消毒灭菌法紫外线：用于空气，操作台表面和不能使用其它法进行消毒的培养器皿，30min 湿热（高压蒸气灭菌法）：121℃，20min干烤：160℃, 2 小时过滤：0.22μm化学消毒灭菌法70%酒精主要用于操作者的皮肤，操作台表面及无菌室内的壁面处理1‰新洁尔灭主要用于器械的浸泡及皮肤和操作室壁面的擦试消毒抗生素主要用于培养用液灭菌或预防培养物污染2 细胞培养常用物品水水的制备： 细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。
进行细胞培养,如何对玻璃器皿进行清洗
细胞培养用的玻璃器皿清洗过程步骤：按浸泡→刷洗→浸酸→冲洗等四步程序进行。
①浸泡：新购进的玻璃器皿常带有灰尘，呈弱碱性，或带有铅、碑等有害物质，故先用自来水浸泡过夜、水洗，然后再用2%~5%盐酸浸泡过夜或煮沸 30min，水洗。
要领：培养用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能顺利进行。
用后的玻璃器皿常带有大量的蛋白质附着，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清水浸泡。
②刷洗：用软毛刷、优质洗涤剂，刷去器皿上的杂质，冲洗晾干。
要领：浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗涤剂去器皿上的杂质、刷洗次太多，会损害器皿的表面光洁度，洗涤剂有使pH上升的趋势，所以易选用软毛刷和优质洗涤剂。
禁止用去污粉。
因其中含有砂粒。
会严重破坏玻璃器皿的光洁度。
特别注意刷洗瓶角部位。
酸浸之前要把洗涤剂冲干净。
③浸酸：将器皿浸泡于清洁液24h，如急用也不得少于4h。
清洁液由重铬酸钾、浓硫酸及蒸馏水配制而成，具有很强的氧化作用，去污能力很强。
经清洁液浸泡后，玻璃器皿残留的末刷洗掉的微量杂质可被完全清除。
④冲洗：先用自来水充分冲洗，吸管等冲流10min，瓶皿需每瓶灌满、倒掉，反复10次以上。
然后再经蒸馏水漂洗3次,不留死角。
晾干或烘干备用。
对已用过的器皿，凡污染者必先经煮沸30min或放3%盐酸中浸泡过夜，未污染者可不需灭菌处理，但仍要刷洗、清洁液浸酸过夜，冲洗等。
【附】清洁液的配制和使用注意事项1.清洁液(配方见表2-1)①选用耐酸塑料桶或不锈钢桶配制为宜。
②先将重铬酸钾溶于水（用玻璃棒搅拌助溶，有时不能完全溶解）。
③缓缓加入浓硫酸，切忌过急，否则将产热而发生危险(绝不可将重错酸饵液倒入浓硫酸中)。
④清洁液配好呈棕红色，待变绿色时表明失效。
由于清洁液的腐蚀性极强，配制与应用时必须小心，并做好防护。
2．矽酸钠洗液贮存液(×100)砂酸纳80克加偏磷酸钠9克加热溶在1000ml水中。
使用时用水稀释100倍，将器皿放入煮沸20min，冷却后冲洗，再用2%HCl浸泡2h 后，自来水冲洗。
细胞培养注意事项
细胞培养注意事项细胞培养是一项非常复杂和关键的实验技术，需要仔细选材、操作，使用特殊的设备和培养物质来维护和生长细胞。
以下是细胞培养方面的一些注意事项。
2.清洁卫生：细胞培养需要在无菌环境下进行，所以在实验同时需要注意整个实验室的清洁和卫生。
摆放培养皿前要用70%酒精消毒，实验前需要穿着实验服、手套以及戴着口罩和帽子，以避免细菌、病毒和其他污染物的污染。
3.玻璃器皿消毒：细胞培养中使用的各种玻璃器皿比如培养皿、移液管和试管等都需要高温干烤，以达到无菌状态，避免细菌的污染。
4.培养基的制备：培养基是细胞培养的重要环节，制备时应该按照说明书和协议的要求来配制各种含量的物质，这个过程中要避免任何可能的污染，同时要保持连续性的搅拌，以达到适当的均匀度。
5.细胞的处理：处理细胞的时候也需要注意无菌操作，用消毒工具取出细胞，避免使用手指抓取细胞，同时需要正确的切割和品种选择，否则会影响细胞分化和生长的快速性。
6.维护培养环境：在细胞培养过程中，需要保持适当的pH、温度、湿度和氧气含量，不同类型的细胞需要不同的培养条件，只有维持好了培养环境，细胞才能健康有效的生长。
7.对细胞进行质检：在细胞培养的过程中，每天需要对细胞进行质检，观察细胞的数量和形态、细胞的状态与否，在有必要时需要决定是否要加入新的元素来维护生长。
8.记录培养记录：每项实验操作完成后，都要详细记录实验的步骤、培养基的成分、培养条件和细胞的生长状况，以便可以及时分析可能出现的问题并作出相应的调整。
总之，细胞培养是一个耗时、复杂、困难的过程，它需要小心谨慎的选择，不断调整并做好记录。
坚持遵守这些注意事项和要求，才能保证细胞培养实验最好的效果和结果。
细胞培养用具的清洗、消毒方法
3、橡胶类具体操作： 新买/已用：用后立即用流水冲洗-洗涤剂浸泡3小时后刷洗（用纱 布或棉签）t自来水冲洗t5%稀盐酸浸泡过夜—双蒸水煮沸2~3次
10min/次）—包装烘干（50C）—待使用
4、镊子、剪刀
具体操作：
洗涤剂刷洗—自来水冲洗5~6次—75%医用酒精浸泡3小时—酒精
6.或高压蒸汽灭菌（湿热法），容器水分烘干-牛皮纸包内、报纸包外将容器口扎紧-
121C,30min高压灭菌—待使用
7.用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液面
2、塑料类
具体操作：
新买：一次性无菌塑料制品打开包装即可使用
已用：用后立即用流水冲洗-洗涤剂浸泡3小时后刷洗（用纱布或 棉签）—自来水冲洗—5%稀盐酸浸泡过夜—双蒸水煮沸2~3次
5.抗生素：主要用于培养用液灭菌或预防培养物污染。
常用的抗生素：青霉素（浓度是1OO^gml）
链霉素（100卩/ml）
附酸液配制：
酸液配制：重铬酸钾（g）：浓硫酸（ml）：蒸馏水（ml）
强清洁液63：1000:200
次强清洗液120：200：1000
弱清洁液（常用）100：100：1000
（危险！请勿单独配制此溶液）
已用：用后马上浸入洗洁精中浸泡一天7（带毒应浸入消毒水）—洗 涤剂刷洗后自来水冲洗（晾干或烘干50C）—浸酸（一天一夜）— 自来水冲洗25遍-蒸馏水洗5次-双蒸水洗3次（或再用单蒸水冲 洗5次）-干热灭菌（将温度升至150C后关闭烘箱密闭3h，待冷 却至常温）-待使用
1.新的初次使用的玻璃器皿，在生产及运输过程中，玻璃表面带有大量的干固的灰尘，且
3•配制溶液应选择塑料制品
4•配成后清洁液一般为棕红色
细胞培养无菌操作技术
❖ 塑料制品现多采用无毒并已特殊处理的包 装，打开包装即可用，多为一次性物品
❖ 清洗程序：使用器皿后立即用清水清洗， 浸于自来水过夜，用纱布或棉签和50℃ 清洗液刷洗，流水冲洗，晾干，浸于清洁 液15分钟，流水冲洗（15－20遍）,蒸馏 水浸洗三次，双蒸水泡24小时，晾干备 用。
实验九 培养器皿的清洗和消毒
实验九培养器皿的清洗和消毒【实验目的】掌握细胞培养所需器械、器皿的清洗和消毒方法；掌握细胞培养常用器材的包装要领和要求；掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作；了解化学消毒法的使用方法。
【实验原理】清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。
体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。
细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。
清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。
如有毒的化学物质，哪怕残留0.1单位，也可能影响细胞生长。
灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。
【器材与试剂】1、玻璃器皿：移液管、离心管、培养瓶、玻璃瓶、培养皿、大橡皮塞、培养瓶盖。
2、实验器械：眼科剪、眼科镊。
3、仪器：超净工作台、干燥箱、高压蒸汽消毒锅，过滤器，过滤泵。
4、试剂：75%酒精、0.2%新洁尔灭、高锰酸钾、重铬酸钾、浓硫酸。
5、材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜：孔径为0.22“m。
【实验步骤】一、清洗1、玻璃器皿的清洗玻璃器皿清洗后不仅要求透明、无污迹，而且不能残留任何物质。
某些化学物质仅残留百万分之一毫克，就会对细胞产生毒性作用。
因此清洗质量的好坏直接影响到细胞培养成功与否,必须严格按照清洗的程序进行，以保证达到清洗的目的。
一般玻璃器皿清洗的程序包括：浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤。
（1）浸泡初次使用和培养用后的玻璃器皿都需先用清水浸泡，以使附着物软化或溶解。
新的玻璃器皿使用前应先用自来水简单刷洗，然后用5%稀盐酸溶液浸泡过夜，以中和其中的碱性物质。
用过的玻璃器皿往往粘有大量蛋白质，干燥后不易刷洗掉，故用后立即浸入清水中刷洗。
（2）刷洗将浸泡后的玻璃器皿放到洗涤剂（不用含沙粒的洗衣粉）水中，用软毛刷反复刷洗，注意不留死角，洗后晾干备浸酸。
细胞工程实验室常用的灭菌方法和原理
细胞工程实验室常用的灭菌方法和原理细胞工程实验室常用的灭菌方法有湿热灭菌、干热灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等。
以下是这些方法的原理和特点：
1. 湿热灭菌：是利用高温高压的水蒸气进行灭菌。
该方法能够有效地杀灭细菌、真菌和病毒等微生物，常用于培养基、实验器具等的灭菌。
其原理是在高温高压下，水蒸气的穿透力增强，能够使微生物的蛋白质变性，从而达到灭菌的效果。
2. 干热灭菌：是利用高温干燥空气进行灭菌的方法。
常用于玻璃器皿、金属器械等的灭菌。
其原理是在高温下，微生物的蛋白质和核酸会发生变性，从而失去生物活性。
3. 紫外线灭菌：是利用紫外线的杀菌作用进行灭菌的方法。
常用于实验室空气、操作台等的灭菌。
其原理是紫外线能够穿透微生物的细胞膜，使其DNA 发生损伤，从而阻止微生物的繁殖。
4. 过滤除菌：是利用过滤器过滤掉空气或液体中的微生物。
常用于不能耐受高温灭菌的液体或气体的灭菌。
其原理是过滤器能够阻止微生物通过，从而达到除菌的效果。
这些灭菌方法各有优缺点，在细胞工程实验室中，需要根据不同
的物品和实验要求选择合适的灭菌方法。
同时，为了确保灭菌效果，需要严格按照操作规程进行灭菌操作，并对灭菌效果进行检测和验证。
细胞培养室标准操作规程
细胞培养室标准操作规程一、器皿清洗1. 玻璃器皿清水浸泡——洗衣粉刷洗——自来水冲洗，烘干——浸酸过夜——自来水冲洗10次以上——蒸馏水浸泡，荡洗——三蒸水冲洗2次，烘干——包装，灭菌，备用。
2. 胶塞﹑塑料制品清水浸泡——洗洁精超声15分钟——清水超声15分钟——自来水冲洗，烘干——2%NaOH浸泡30分钟——自来水冲洗，烘干——1%HCl浸泡30分钟——自来水冲洗——蒸馏水浸泡，荡洗——三蒸水冲洗2次，烘干——包装，灭菌，备用。
3. 培养板*用后立即浸入水中——洗洁精超声20分钟——清水超声20分钟——自来水冲洗，烘干——浸酸6小时——自来水冲洗10次以上——蒸馏水浸泡，荡洗——三蒸水冲洗2次，烘干——浸入70%乙醇（盖盖以防乙醇挥发）消毒。
临用前取出，置超净台中，紫外照射过夜。
* 注意: 1．不宜用毛刷刷洗，如残留有附着物，可用脱脂棉蘸水拭掉，流水冲干净。
2．浸酸时间不要超过12小时,以防板被腐蚀。
3. 烘干温度不要太高。
二、灭菌1. 使用前，先检查主体内水位是否超过电热管。
2. 在加热开始时，放气阀垂直，使空气随加热由桶内逸出。
待有较急的蒸汽喷出时，即将放气阀拨回水平位置。
3. 当压力到达所需的范围时，调节调压器使压力稳定，并开始计时。
瓶皿 121-126℃ 15min器械 121-126℃ 10min橡胶 121℃ 15min溶液 121-126℃ 20-40min4. 灭菌完，要迅速使之干燥者，将灭菌器内的蒸汽通过放气阀迅速排出。
等压力为0时，再稍等1-2分钟，然后将盖打开，继续加热10-15分钟，使物品上残留的水蒸汽得到蒸发，随后关掉。
5. 灭菌液体时，应将液体装在玻璃瓶中，以不超过2/3体积为好，瓶口用胶塞封好，并用绳子把牛皮纸扎在瓶颈上，最后在上面扎根针，使瓶内的空气能自然泄出。
灭菌完，先关电源，等压力自然降为0时，再稍等几分钟，打开放气阀，排出余气后，才能将盖开启，开盖的同时迅速拔掉针头。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验技术实验医学研究中心编订2013-08实验一实验准备【目的】了解组织培养中实验器材的处理过程。
【概述】目前多数的实验室还达不到用后即弃的条件，常要反复使用一些器皿，在组织细胞培养中器材的清洗、消毒灭菌仍是重要环节，是一项繁重而艰苦的工作,而且工作量很大, 其主要目的是去除器皿上杂质及其对细胞生长有影响的物质及各种微生物。
【材料】1.玻璃器皿：培养瓶，血清瓶，试管，吸管2.塑料器皿：枪头，EP管【操作步骤】（一）玻璃器皿的处理玻璃器皿用于培养细胞、细胞冻存、培养用液的存放等。
提供细胞生长的玻璃表面不但要清洁干净，而且要带适当电荷。
苛性碱清洗剂会使玻璃表面带的电荷不适于细胞附着，需以HCL或H2SO4中和。
清洗玻璃器皿不仅要求干净透明、无油迹，且不能残留任何毒性物质。
为了保证清洗的质量，一般玻璃器皿的处理分为六个个步骤。
1.浸泡：新的玻璃器皿首先用自来水初步刷洗，5％稀盐酸溶液中浸泡过夜。
使用过的玻璃器皿用1‰的新洁尔灭或清水浸泡。
泡时应将器皿完全浸入水中，使水进入器皿内而无气泡空隙遗留。
2.刷洗：一般多用毛刷和洗涤剂或洗衣粉进行洗涤，以去除器皿内外表面的杂质。
3.浸酸：酸就是清洁液，由浓硫酸、重铬酸钾及蒸馏水桉一定比例配制而成,具有很强的氧化作用，去污能力很强，对玻璃器皿无腐蚀作用。
经清洁液浸泡后，玻璃器皿残留的未刷洗掉的微量杂质可被4.流水灌满、倒掉，须重复十次以上，然后，再用蒸馏水漂洗2～3次，最后用三蒸水漂洗一次。
烤箱内烘干备用。
5.包装：包装的目的是防止消毒灭菌后再次受到污染，所以经清洗烤干的器材应严格包装后再进行消毒灭菌处理。
6.消毒灭菌：包括干热消毒和湿热消毒。
干热消毒一般在烤箱中进行，主要用于消毒玻璃器皿，需加温到160℃，保持90～120min方能杀死芽孢。
湿热消毒是一种有效的消毒方法,一般使用高压蒸汽灭菌器进行消毒。
因物品不同，其有效灭菌压力和时间不同，一般物品（如布类、金属器械、玻璃器皿等）消毒的要求是101.33kpa（相当于15磅,121℃）20min，某些培养用液、橡胶制品、塑料器皿等要求为67.55kpa (相当于10磅,115℃)10min。
细胞培养室守则
细胞培养室安全和操作守则（2份）
细胞培养室不同于其他实验室，要求在无菌条件下进行实验。
所以每位做细胞培养的同人都要严格无菌操作，保持无微生物污染，以便实验顺利进行。
一、准备室
1、严格遵守培养器皿的洗刷、浸酸和消毒制度。
2、准备室分污染区和清洁区，污染区：是待清洗的器皿。
清洁区：是器皿浸酸经水冲洗干净后，待消毒的器皿。
3、塑料制品勿用高压锅或烤箱消毒，可包装好后用钴60
照射消毒。
4、培养瓶盖、橡胶塞子和细胞过滤器，要求分装包裹后用
高压锅消毒0.15mpa 20分钟。
5、玻璃器皿可用烤箱消毒（160℃ 2.5-3小时）
6、使用高压锅消毒要按规定操作，有专人看管，以保证安
全。
二、观察和操作室
1、进入操作室必须戴好口罩、帽子和鞋套（或换好拖鞋）
方可入内。
2、实验前洁净台要紫外线消毒30-40分钟，并登记在登记
本上。
3、正确使用细胞室的各种仪器
a、显微镜：按显微镜使用须知操作。
b、离心机：使用前要将待离物品平衡好后再离心，拨
动旋钮要慢。
c、二氧化碳培养箱：（1）开关门要快，不可将门长时
间敞开着。
（2）培养液如果洒在培养箱内要及时清洁（用75%
酒精或0。
1%新洁尔灭）以防细菌污染。
（3）培养箱内水盘每周换一次，由值周人员负责。
4、细胞在培养过程中，如果发现瓶内液体浑浊，请不要打
开瓶盖，及时处理，以防污染。
5、实验结束后用75%酒精清洁台面，将实验物品摆放整齐，
及时清洗用过的器皿。
6、如果发现问题及时找工作人员联系。
实验室细胞培养器皿的洗涤与消毒
实验室器皿的洗涤与消毒第一节洗涤一、玻璃器皿的洗涤在分析工作中，洗涤玻璃仪器不仅是一项必须做的实验前的准备工作，也是一项技术性的工作。
仪器洗涤是否符合要求，对检验结果的准确和精密度均有影响。
不同的分析工作有不同的仪器洗净要求，我们以一般定量化学分析为主介绍仪器的洗涤方法。
（一）洁净剂及使用范围最常用的洁净剂是肥皂，肥皂液（特制商品），洗衣粉，去污粉，洗液，有机溶剂等。
肥皂，肥皂液，洗衣粉，去污粉，用于可以用刷子直接刷洗的仪器，如烧杯，三角瓶，试剂瓶等；洗液多用于不便用于刷子洗刷的仪器，如滴定管，移液管，容量瓶，蒸馏器等特殊形状的仪器，也用于洗涤长久不用的杯皿器具和刷子刷不下的结垢。
用洗液洗涤仪器，是利用洗液本身与污物起化学反应的作用，将污物去除。
因此需要浸泡一定的机会充分作用；有机溶剂是针对污物属于某种类型的油腻性，而借助有机溶剂能溶解油脂的作用洗除之，或借助某些有机溶剂能与水混合而又发挥快的特殊性，冲洗一下带水的仪器将不洗去。
如，甲苯，二甲苯，汽油等可以洗油垢，酒精，乙醚，丙酮可以冲洗刚洗净而带水的仪器。
（二）洗涤液的制备及使用注意事项洗涤液简称洗液，根据不同的要求有各种不同的洗液。
将较常用的几种介绍如下。
1.强酸氧化剂洗液强酸氧化剂洗液是用重铬酸甲（K2Cr2O7）和浓硫酸（H2SO4)配成。
K2Cr2O7在酸性溶液中，有很强的氧化能力，对玻璃仪器又及少有侵蚀作用。
所以这种洗液在实验室内使用最广泛。
配制浓度各有不同，从5~12%的各种浓度都有。
配制方法大致相同：取一定量的K2Cr2O7（工业品即可），先用约1~2倍的水加热溶解，稍冷后，将工业品浓H2SO4所需体积数徐徐加入K2Cr2O7不溶液中（千万不能将水或溶液加入H2SO4中），边倒边用玻璃棒搅拌，并注意不要溅出，混合均匀，俟冷却后，装入洗液瓶备用。
新配制的洗液为红褐色，氧化能力很强。
当洗液用久后变为黑绿色，即说明洗液无氧化洗涤力。
例如,配制12%的洗液500mL。
细胞培养瓶注意事项
细胞培养瓶注意事项细胞培养瓶是进行体外细胞培养的基本工具之一，能提供细胞生长所需的营养物质和适宜的环境。
为保证细胞的正常生长和纯度，使用细胞培养瓶需要注意以下几个方面：1. 选择合适的瓶子尺寸和材质：细胞培养瓶有不同的尺寸和材质可选，常见的尺寸包括25、75、150和250毫升等。
选择合适的尺寸要根据培养细胞的数量和所需营养物质量来决定。
此外，细胞培养瓶的材质可分为玻璃和塑料，玻璃瓶更适合长期培养和维持细胞稳定性，而塑料瓶则适用于短期细胞培养。
2. 消毒和清洗：在使用细胞培养瓶之前，必须对其进行消毒。
常用的消毒方法包括高温蒸汽灭菌、紫外线照射和化学消毒剂等。
消毒后需要用去离子水或无菌PBS等清洗瓶子，以确保瓶内没有残存的消毒剂和杂质。
3. 黏附剂的涂布：某些细胞需要黏附于培养瓶表面生长，因此需要在瓶子内涂布一层黏附剂（例如明胶、聚-L-赖氨酸或胶原蛋白等），黏附剂的选择应根据细胞类型和实验要求来确定。
涂布时需均匀涂布，避免气泡和漏涂。
4. 培养基的配制和更换：细胞培养瓶内需要加入合适的培养基来提供营养物质和维持细胞生长所需的环境。
培养基的配制需要精确的配方和浓度，通常应为无菌状态。
培养基的更换一般在细胞密度达到70-80%时进行，避免细胞过密导致窒息。
5. 控制培养条件：细胞培养瓶需要放置在恒温、无菌的培养箱中进行培养。
温度通常为37，CO2水平和湿度要调整到适宜的范围，以满足特定细胞的生长需求。
定期检查和校准培养箱的温度和湿度，确保其稳定和准确。
6. 避免交叉污染：细胞培养瓶是培养细胞的基本装置，因此在使用和处理过程中必须要注意避免交叉污染。
使用无菌操作技术进行培养，避免瓶口和周围环境接触。
在取用细胞时，使用专门的无菌吸管或移液器，避免直接接触培养基或表面。
7. 定期检查和观察：细胞培养瓶内的细胞需要定期观察和检查，以确保其正常生长和健康状态。
观察细胞的形态、颜色和增殖情况，并检查瓶内是否有细菌、真菌等异常污染。
培养皿的使用方法和注意事项
培养皿的使用方法和注意事项培养皿是生物实验室中常用的实验器材，用于培养微生物、植物细胞、动物细胞等。
正确的使用方法和注意事项对于实验结果的准确性和实验人员的安全都非常重要。
下面将介绍培养皿的使用方法和注意事项。
1. 选择合适的培养皿。
在选择培养皿时，首先要根据实验需要选择合适的材质和规格的培养皿。
常见的培养皿材质有塑料和玻璃两种，根据实验需要选择透明度和耐热性适宜的培养皿。
另外，根据培养细胞的数量和种类选择合适规格的培养皿，以确保培养效果。
2. 消毒处理。
在使用培养皿之前，需要对培养皿进行消毒处理，以防止外界微生物的污染。
常见的消毒方法包括高温蒸汽消毒和紫外线照射消毒。
消毒后的培养皿要放置在无菌工作台上，避免再次受到污染。
3. 培养基的加入。
在使用培养皿进行培养实验时，需要将培养基均匀地倒入培养皿中，避免气泡和结块的产生。
倒入培养基后，要轻轻晃动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿的底部。
4. 细胞的接种。
在培养皿中接种细胞时，需要注意使用无菌技术，避免细胞受到外界微生物的污染。
接种细胞时，要使用无菌的吸管或移液器，避免直接接触培养皿。
5. 培养条件的控制。
在进行培养实验时，需要严格控制培养条件，包括温度、湿度、气体成分等。
根据不同的细胞类型，选择合适的培养条件，以促进细胞的生长和增殖。
6. 注意事项。
在使用培养皿时，需要注意以下几点事项：避免培养皿受到外力撞击，以免培养基溅出或培养皿破裂。
在培养过程中，定期观察培养皿内的细胞生长情况，及时调整培养条件。
使用完毕的培养皿要进行正确的处理，避免对环境造成污染。
总结。
培养皿是生物实验中不可或缺的实验器材，正确的使用方法和注意事项对于实验结果的准确性和实验人员的安全至关重要。
在使用培养皿时，需要选择合适的培养皿、进行消毒处理、正确加入培养基、严格控制培养条件，并注意避免培养皿受到外力撞击。
希望本文介绍的使用方法和注意事项能够帮助实验人员正确、安全地使用培养皿进行实验。
细胞培养玻璃制品清洗流程
细胞培养玻璃制品清洗流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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材料：清洗液（例如Decon 90或7X）。
组织培养中的清洗、消毒灭菌技术
组织培养中的清洗、消毒灭菌技术组织培养中的清洗、消毒灭菌技术清洗植物组织培养用的各种玻璃器皿，特别是培养瓶和盛培养基的器皿，一定要严格清洗，以防油污、重金属离子、酸、碱等有害物质残留在瓶内，影响培养物的生长。
使用过的玻璃器皿应及时清洗，先将污物如培养基、培养物倒掉，再浸入水中，然后洗涤。
玻璃器皿的洗涤，可根据器皿的污染程度和性质，采用不同的方法，通常有碱洗法和酸洗法。
凡有微生物污染的器皿，必须先进行高压消毒和煮沸，以杀死菌体，否则会产生孢子飞扬，污染环境，给组织培养带来严重困难。
器皿洗净后，应烘干或晾干，放在规定的地方，便于取用。
常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类，即：物理方法如干热、湿热、射线处理、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施；化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。
这些方法和药剂要根据工作中的不同材料不同目的适当选用湿热灭菌培养基在制备后的24h内完成灭菌工序。
高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸气不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。
在o．1mpa的压力下，锅内温度达121℃。
在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
注意完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底。
高压灭菌放气有几种不同的做法，但目的都是要排净空气，使锅内均匀升温，保证灭菌彻底。
常用方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到o．05mpa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。
三次放气后，关阀再通电，压力表上升达0．1-0．15mpa 时，维持15-20min。
对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。
而培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间。
对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。
怎样正确使用细胞培养耗材
怎样正确使用细胞培养耗材一、玻璃器材常用的玻璃器材有各种规格的玻璃瓶、培养瓶、培养皿、吸管、离心管等。
无论是初次使用还是培养后重复使用的玻璃器材均需要进行消毒处理。
首次使用的玻璃器材应先用自来水初步刷洗，然后用稀盐酸溶液（1%）浸泡过夜，再用自来水冲洗，最后处理方法与重复使用的器皿的处理。
重复使用的玻璃器皿的处理步骤：（1）刷洗。
用软毛刷和优质中性洗涤剂刷洗，去除器皿内外表面的杂质。
刷洗时注意不要用力过重，以防损坏器皿内表面光洁度，影响细胞生长；也不能留有死角。
器皿数量大时，可使用超声波清洁装置，冲洗干净后晾干。
（2）清洁液处理。
将刷洗晾干后的玻璃器皿放入硫酸-重铬钾清洁液中。
清洁液配方如下，见下表：该清洁液具有高度腐蚀性，操作时必须穿长筒胶靴，戴防酸橡皮手套，围裙和眼镜，以防清洁液溅出而灼伤。
在配液时还需注意将酸缓慢放入水中，以防酸遇水放热产生酸溅出或使玻璃及陶制容器裂开而使清洁液外泄。
切勿将水加入酸中，以防酸溅出。
常用清洁液为75%和50%两种。
将玻璃器皿放入时最好装入塑料网袋内，再浸入清洁液中，玻璃瓶内不要残留气泡。
一般浸泡12~24小时后取出。
在清洁液中取出的器皿先用自来水冲洗10次以上，再用单蒸水冲洗三次以上，最后用双蒸水（或去离子水）冲洗1~2次，晾干，包装杀菌。
一般用121℃磅高压蒸气灭菌20分钟。
玻璃滤器使用后及时用自来水冲洗滤器表面的剩余物，然后用单蒸水浸泡，除去滤板内堵塞杂物，若用滤膜则将滤膜丢弃，加4N盐酸浸泡12小时以上，用自来水冲洗，再用单蒸水抽滤2次，双蒸水(或去离子水)抽滤冲洗、包装、121℃高压蒸气灭菌20分钟。
也可用5%洁消精浸泡20分钟后，再按上述方法冲洗和灭菌。
二、塑料器材体外培养细胞中塑料器皿的使用越来越多，有进口的，也有国产的。
主要有多孔培养板、培养皿、培养瓶及吸嘴。
多孔培养板有4孔、6孔、24孔、96孔等规格可供选择。
多数为进口产品，已消毒灭菌密封包装，使用时只需打开即可。
细胞培养用器械的清洗和消毒
一、新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。
2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。
4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g：浓硫酸200ml：蒸馏水1000ml）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次，最后蒸馏水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。
5.烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。
6.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向15磅时，维持20-30分钟。
7.高压消毒后烘干二、旧的玻璃器皿的洗消：1．刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液（洗涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。
2.泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液（酸液），12小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗（避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗），再用蒸馏水冲洗3次。
3.烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸（油光纸）等包装，以便于消毒储存及防止灰尘和再次被污染。
4.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内，盖好盖子，打开开关和安全阀，随着温度的上升安全阀冒出蒸气，当蒸气成直线冒出3-5分钟后，关闭安全阀，气压表指数随之上升，当指针指向15磅时，调节电开关维持20-30分钟即可。
（玻璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻盖上）5.烘干备用：因为高压消毒后器皿会被蒸气打湿，所以要放入烤箱内烘干备用。
金属器皿不能泡酸，洗消时可先用洗涤剂刷洗，后用自来水冲干净，然后用75％酒精擦拭，再用自来水，然后用蒸馏水冲洗，再烘干或空气中晾干。
放入铝制盒内包装好在高压锅内15磅高压（30分钟）消毒，再烘干备用。
橡胶和制品通常处理方法是：先用洗涤剂洗刷干净，再分别用自来水和蒸馏水冲干净，再用烤箱烘干，然后根据不同品质进行如下的处理程序：1 . 针式滤器帽不能泡酸液,用NaOH泡6-12小时,或者煮沸20分钟,在包装之前要装好滤膜两张，安装滤膜时注意光面朝上(凹向上)，然后将螺旋稍微拧松一些，放入铝盒中在高压锅内15磅30分钟消毒，再烘干备用。
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细胞培养所用玻璃及塑料制品的清洗与消毒1 清洗在组织细胞培养中，体外细胞对任何有害物质都非常敏感,均能影响培养细胞的生长微生物产品附带杂物上次细胞残留物非营养成分的化学物质需要清洗的培养用品玻璃器皿的清洗胶塞的清洗塑料制品的清洗玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤清洗后的玻璃器皿干净透明无油迹不能残留任何物质浸泡：初次使用和培养使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡，以使附着物软化或被溶掉新的初次使用的玻璃器皿，在生产及运输过程中，玻璃表面带有大量的干固的灰尘，且玻璃表面常呈碱性及带有一些对细胞有害的物质等先用自来水简单刷洗，然后用5％稀盐酸液浸泡过夜，以中和其中的碱性物质再次使用的玻璃器皿则常附有大量刚使用过的蛋白质，干固后不易洗掉用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液面上刷洗：用毛刷沾洗涤剂刷洗，以除去器皿表面附着较牢的杂质刷洗要适度，过度会损害器皿表面光泽度浸酸：玻璃器皿浸泡到清洁液中清洁液对玻璃器皿无腐蚀作用，而其强氧化作用可除掉刷洗不掉的微量杂质浸泡时器皿要充满清洁液，勿留气泡或器皿露出清洁液面浸泡时间：一般为过夜，不应少于6 小时清洁液常用三种：重铬酸钾（g）浓硫酸（ml）蒸馏水（ml）强清洁液63∶1000∶200次强清洗液120∶200∶1000弱清洁液100∶100∶1000配制时应注意安全，须穿戴耐酸手套和围裙，并要保护好面部及身体裸露部分配制过程中可使重铬酸钾溶于水中，然后慢慢加浓硫酸。
并不停的用玻璃棒搅拌，使产生的热量挥发，配制溶液应选择塑料制品。
配成后清洁液一般为棕红色冲洗在使用后，刷洗及浸泡后都必须用水充分冲洗。
使之尽量不留污染或清洁液的残迹最好用洗涤装置如用手工操作需流水冲洗十次以上，每次水须灌满及倒干净，最好用蒸馏水清洗3-5 次，晾干备用胶塞的清洗新购置的瓶塞带有大量滑石粉及杂质，应先用自来水冲洗，再做常规处理常规清洗方法每次用后立即置入水中浸泡，用2% NaOH 或洗衣粉煮沸10-20 分钟（以除掉培养中的蛋白质），自来水冲洗，蒸馏水冲洗2-3次，晾干备用塑料制品的清洗塑料制品现多是采用无毒并已经特殊处理的包装，打开包装即可用，多为一次性物品必要时用2% NaOH 浸泡过夜，用自来水充分冲洗，再用5%盐酸溶液浸泡30 分钟，最后用自来水和蒸馏水冲洗干净，晾干备用消毒细胞培养的最大危险是发生培养物的细菌、真菌和病毒等微生物的污染常见原因：操作间或周围空间的不洁培养器皿和培养液消毒不合格或不彻底由于有关培养的每个环节的失误均能导致培养失败，故细胞培养的每个环节都应严格遵守操作常规，防止发生污染消毒灭菌方法物理消毒灭菌法紫外线：用于空气，操作台表面和不能使用其它法进行消毒的培养器皿，30min 湿热（高压蒸气灭菌法）：121℃，20min干烤：160℃, 2 小时过滤：0.22μm化学消毒灭菌法70%酒精主要用于操作者的皮肤，操作台表面及无菌室内的壁面处理1‰新洁尔灭主要用于器械的浸泡及皮肤和操作室壁面的擦试消毒抗生素主要用于培养用液灭菌或预防培养物污染2 细胞培养常用物品水水的制备：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。
需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净细胞培养基市场上可提供干粉培养基和液体培养基干粉培养基需使用者自己配制并灭菌，其优点是价格便宜。
缺点是配制过程繁琐，质量不易控制液体培养基是由专业厂家按标准规模化生产，不仅质量得到保证，而且使用十分方便常用的培养基种类RPMI-1640（标准型）、DMEM-高糖（标准型）、DMEM-低糖（标准型）、McCoys 5A、M199、F10等细胞培养基应用选择选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考：(1 ）建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。
可以查阅参考文献，或在购买细胞株时咨询。
(2) 其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。
(3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。
如小鼠细胞株多选RPMI1640 。
(4) 用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐。
制备1000mlRPMI 1640培养基RPMI 1640 干粉培养基10.4g（1包）蒸馏水400ml↓磁力搅拌至完全溶解↓加三蒸馏水定容至1000ml在超净台内无菌条件下，用灭菌后的并置有0.22μm孔径滤膜的过滤器除菌，并分装成200ml/瓶，-20℃保存备用。
用前取一瓶溶解，每200ml培养液加灭活的小牛血清至终浓度为10%，即加22ml。
再加青霉素和链霉素至终浓度各为100U/ml。
------- 细胞培养液血清热灭活：56℃, 30 分钟加热已完全解冻的血清热灭活目的：灭活血清中的补体成分。
如果不做细胞因子和免疫相关的实验，建议血清不要灭活。
因为热处理会造成血清沉淀物显著增多，还会影响血清的质量。
灭活后严重影响细胞生长速度，且细胞贴壁率降低。
血清中的沉淀物絮状物：血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成，这些絮状物不会影响血清本身的质量。
可用离心3000rpm, 5 分钟去除，也可不用处理显微镜下“小黑点”：经过热处理过的血清，沉淀物的形成会显著增多。
有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”，常误认为血清受污染。
一般情况下，此小黑点不会影响细胞生长，但如果怀疑血清质量，则应立即停止使用，更换另一批号的血清平衡盐液体组织细胞培养中常用的基本液体，可以维持渗透压、调节pH值、供给细胞生存所需的能量和无机离子成分用于洗涤组织、细胞等PBS（Phosphate-Buffered Sallines）KCl 0.20gKH2PO4 0.20gNaCl 8.00gNa2HPO4·7H2O 2.16gDPBS（Dulbecco’s Phosphate-Buffered Sallines）标准型CaCl2(anhyd.)(无水氯化钙) 0.10gKCl 0.20gKH2PO4 0.20gMgCl2·6H2O 0.10gNaCl 8.00gNa2HPO4·7H2O 2.16gD-Hanks’ 平衡盐溶液(D-Hanks Balanced Salt Solutions, D-HBSS)KCl 0.40gKH2PO4 0.06gNaCl 8.00gNaCO3 0.35gNa2HPO4 0.048gD-Glucose 1.00gPhenol Red 0.01g消化液分离组织和分散细胞常用的有胰蛋白酶和二乙胺四乙酸二钠(EDTA)两种溶液单独或混合使用胰蛋白酶溶液主要作用：使细胞间的蛋白质水解，使细胞相互离散消化细胞时，加入一些血清或含血清的培养液，能终止消化作用胰蛋白酶溶液配制称取胰蛋白酶粉末置烧杯中，用少许D-Hanks 平衡盐溶液调成糊状，再补足D-Hanks 平衡盐溶液，搅拌混匀，置室温4 小时或冰箱过夜，不断搅拌振荡次日，先用滤纸粗滤，再进行过滤除菌，分装入瓶中，-20℃保存备用（以免分解失效），常用浓度为0.25% （0.1%-0.5%）胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可用碳酸氢钠溶液调pH 至7.2 左右EDTA·4Na 溶液一种化学螯合剂，对细胞有一定的离散作用，而且毒性小，价格低廉，使用方便常用工作液浓度为0.02%。
注意：使用EDTA 处理细胞后，要用平衡盐液冲洗干净，因残留的EDTA 会影响细胞生长EDTA 溶液配制：用D-Hanks’ 平衡盐溶液溶解后，高压蒸汽灭菌，分装成小瓶，4℃冰箱保存pH 调整液NaHCO3 溶液常用浓度为7.5%。
配制时用三蒸水溶解后，过滤除菌或高压灭菌，分装，4℃保存HEPES（分子量238.31）溶液一种弱酸，中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸，对细胞无毒性主要作用:防止培养基pH迅速变动。
在开放式培养条件下，观察细胞时培养基脱离了5%CO2的环境，CO2气体迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此时可以维持pH7.0左右。
一般在进行克隆化培养时要添加HEPES使用终浓度一般为10-50mmol/L常配成1M 储存液：用20ml 双蒸水溶解4.76克HEPES，过滤除菌或高压灭菌，分装小瓶，4℃保存。
使用时可向100ml培养液中加入2ml HEPES浓缩液，终浓度为20mmol/L谷氨酰胺补充液谷氨酰胺在细胞代谢过程中起重要作用，合成培养基中都要添加，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定容易降解，4℃下放置7天即可分解约50%，所以都是在使用前添加配制好的培养液（含谷氨酰胺）在4℃放置2周以上时，要重新加入原来量的谷氨酰胺，故需单独配制谷氨酰胺，以便临时加入培养液内使用终浓度为1-4mmol/L一般配制为100倍浓缩液，即浓度为200mmol/L（29.22g/L），配制方法为：谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后（应加温30℃），过滤除菌，分装小瓶，-20℃保存，使用时可向100ml培养液中加入0.5-2ml谷氨酰胺浓缩液，终浓度为1-4mmol/L酚红大多数培养液中使用酚红作为pH 指示红色表示中性pH，黄色代表酸性pH，紫色表示碱性pH在一些特殊培养液中不含酚红因为已有一些研究表明：酚红能模拟类固醇激素（尤其是雌激素）样作用抗生素溶液抗生素使用种类与浓度：工作浓度储存温度杀灭细菌penicillin 100 u/ml -20℃G(+)streptomycin 100 ug/ml -20℃G(+) 、G(-)gentamicin 50 ug/ml - 20℃G(+) 、G(-)、支原体amphotericin B 2.5 ug/ml -20℃真菌nystatin 50 ug/ml -20℃真菌器材和液体的准备细胞培养用的玻璃器材培养瓶、吸管等在清洗干净以后，装在铝盒和铁筒中，160℃，2小时干烤灭菌后备用手术器材、瓶塞、配制好的PBS液15磅，121℃，20分钟蒸气灭菌MEM培养液、小牛血清、消化液用G6滤器负压抽滤后备用无菌操作中的注意事项在无菌操作中，一定要保持工作区的无菌清洁操作前无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟操作时，小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行哺乳动物细胞冷冻保存冷冻保存要点冷冻过程要缓慢。
4℃30－60 分钟→-20℃30 分钟→-80℃16－18 小时（或过夜）→液氮长期保存冻存细胞必须处在对数生长期，活力大于90％，无微生物污染。