细胞培养技术实用篇2讲课文档
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1. 细胞种类：小鼠胚胎成纤 维细胞
2. 培养的天数：4d； 3. 放大倍数：倒置显微 镜；
4. 培养基种类： 1640+10%X小牛血清； 5. 细胞状态与特征简述:细 胞呈长梭形，贴壁生长
第三十四页，共111页。
几种细胞的原代培养图示
神经元原代培养:神经元是高度分化 的细胞,在体外培养条件下难以增 殖.因此,目前神经元的培养主要用于 原代培养. 神经元胞体呈圆形或长杆状,核大 而圆,核仁明显.可见有细小突起从胞 体长出. 培养液中需加入高浓度的葡萄糖,以利 于神经元的生长.
第十九页，共111页。
▪ EDTA能与细胞上的钙、镁离子结合形成整合物， 利用结合后的机械力使细胞变圆而分散细胞或 使贴壁细胞从瓶壁上脱离。
▪ 缺点是细胞易裂解或贴壁细胞从瓶壁上脱离时呈 片状，有团块，常不单独使用，可与胰蛋白酶混 合使用(1：1或2：1)，既利于细胞脱壁又利于细胞 分散。可降低胰酶的用量和毒性作用。
接触抑制（contact inhibition）：细胞汇合相互接触
后失去运动的现象
第七页，共111页。
由于体外培养的
细胞没有抗感染能力， 因此防污染是决定培
养成功的首要条件。 一切操作需要保证
无菌和有条不紊。
第八页，共111页。
制定好实验计划和操作程序
有关数据的计算要事先做好。 准备各种所需器材和物品，清点无误后将其放置在操
第三十页，共111页。
组织块培养法
(1) 取材、修剪、组织剪或切成1mm3左右的小 块。 (2)将 剪切好的组织小块用眼科镊送入培 养 瓶内。
25ml培养瓶(底面积约为17.5cm2）以20一30小块
为宜。 (3) 放置2—4h待组织小块贴附后．将培养瓶慢慢翻
转平放、静止培养
第三十一页，共111页。
第十六页，共111页。
对细胞间的蛋白质水解，使细胞离散。
消化效果与PH值、温度、酶浓度和组织块大小与硬 度有关。
适于消化细胞间质较少的软组织，能有效地分离肝、 肾、甲状腺、羊膜、胚胎组织、上皮组织等。而对 含结缔组织较丰富的组织，如乳腺、滑膜、子宫、 纤维肉瘤、肿瘤组织等无效．但若与胶原酶合用能 增加其对组织的分离作用 。
用PBS液洗涤1-2次；放入另一 培养皿中，将组织剪成1mm3大
小的块。
第二十六页，共111页。
细胞培养法方法与步骤
3) 消化及分散组织块：将上述清洗过的组织放入
无菌试管内，加入5～6倍量的0.25％胰蛋白酶液 （pH7.4 ～ 7.6），置37℃水浴中消化20 ～ 40min，
每隔10min摇动一次，直到组织块变得疏松，粘 稠，且颜色略变为白色为止。取出试管，加入
操作
进行培养时，动作要准确敏捷
不能太快，否则空气流动增加污染机会。
不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要用 火焰烧灼消毒或取备品更换。
第十三页，共111页。
组织细胞取材及培养的基本要求
取材的组织用培养液浸泡，4℃运送，24h内尽快培养。 取材时应严格无菌操作，避免对组织的机械损伤，尽量
去除脂肪、神经、结缔、坏死组织，污染组织可用青链 霉素和制霉菌素漂洗。 原代培养，特别是正常细胞的培养，应采用营养丰富的培 养液。 一般来讲,胚胎组织较成熟个体的组织容易培养;分化低的较 分化高的组织容易生长;肿瘤组织较正常组织容易培养。取 材时应尽量选用易培养的组织进行培养。
培养细胞的生长测定方法
细胞冻存和复苏
第四页，共111页。
细胞培养中的常用术语
组织培养(Tissue Culture)： 指的是从体内取出 组织，模拟体内生理环境，使之生存和生长并维 持其结构和功能的方法。
器官培养（Organ Culture）： 培养的是器官的原 基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、 生长和保持一定功能的方法。
细胞培养技术实用篇
第一页，共111页。
பைடு நூலகம்
细胞培养的优点
活细胞：长时间、直接观察、研究活细胞的形态、 结构和生命活动
可控制：
选择特定的细胞种类、性质、阶段
可控制调节条件：物理、化学、生物等
可采用各种研究技术、记录方法
样品均一性：来源于同一组织同一种细胞
经济、规模
第二页，共111页。
局限性
钙镁离子和血清抑制其活性。 常用剂量为0.25%，PH8，温度37℃
第十七页，共111页。
水解结缔组织中胶原蛋白成分，对上皮细胞影 响不大。
产品有Ⅳ Ⅶ Ⅸ等型，分别适用于分离肝细胞、
胰岛、脂肪细胞及纤维组织。 钙镁离子和血清不影响活性，PH6.5-7 常用剂量为200U/ml
第十八页，共111页。
▪ EDTA工作液的浓度为0.02％，用不含钙、镁 PBS配制。
第二十页，共111页。
从直接取自生物体细胞、组织或器官开始的培养， 即将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种 酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机 械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中 培养，使细胞得以生存、生长和繁殖的过程。
细胞系（cell line）：原代培养物经首次传代成功
后即为细胞系
第六页，共111页。
细胞培养中的常用术语
细胞株（cell strain）：通过选择法或克隆形成法从原
代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养物 称细胞株。
汇合（confluent）：细胞相互连接成片占据所有底物 面积。
进入原代培养室需彻底洗手还要戴口罩、着消毒衣帽。
专用鞋或带鞋套
第十一页，共111页。
火焰消毒
在无菌环境进行培养或做其它无菌工作时，首先要点 燃酒精灯。
按装吸管帽、打开或封闭瓶口等，都需在火焰近处 并经过烧灼进行。
如实验用品需火焰灭菌，冷却后接触培养细胞， 以防烧死细胞。
第十二页，共111页。
一些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等 用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。
第十页，共111页。
洗手和着装
原则上和外科手术相同。
仅做观察不做培养操作时，可穿着细胞培养室内紫外线照
射30min的清洁工作服
在利用超净台工作时，因整个前臂要伸入箱内，应着长袖 的清洁工作服，并于开始操作前要用75％酒精消毒手。
第二十一页，共111页。
原代培养细胞
组织和细胞刚刚离体，生物学特性未发生很大变 化，仍具有二倍体遗传性，最接近和反映体内生 长特性，是药物测试、细胞分化等实验的很好对 象；
原代细胞培养也是建立各种细胞系（cell line)或细
胞株（cell strain）必须经过的阶段。
原代细胞培养多由各种细胞成分组成，比较复杂，即 使是经过处理后的细胞，也仍具有异质性
作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒。 避免开始实验后，因物品不全往返拿取而增加污染
机会。
第九页，共111页。
消毒
地面每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面—次(拖布要专 用)，紫外线照射消毒30-50min
超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。然后紫 外线消毒30min。
消毒时工作台面上用品布局合理，不要过多或重叠放置， 否则会遮挡射线降低消毒效果。
化学法：胰蛋白酶、胶原酶、EDTA法 细胞悬液的分离方法：低速离心法、密度梯度离
心法
第十五页，共111页。
细胞悬液的分离方法
低速离心法： 血液和体液等细胞悬液5001000rpm离心5-10min。离心速度过大、时间过长， 会造成细胞损伤和死亡。
密度梯度离心法： 用离心法将细胞分到不同 密度的梯度介质中，再分别吸出各层细胞。适 于分离密度不等的细胞。常用介质有Ficoll 400，Percoll，泛影葡胺等。
细胞的传代培养
根据细胞生长的特点，传代方法有2种。
悬浮生长细胞传代
5ml培养液，用吸管反复吹打组织块，使其分 散成细胞悬液，将细胞悬液用两层灭菌纱布过 滤至另一烧杯中。
第二十七页，共111页。
细胞培养法方法与步骤
4)计数与稀释:从过滤的细胞悬液中取出适量滴于血细 胞计数板上，按白细胞计数法进行计数；计数后用培 养液稀释，稀释后的浓度一般以每毫升含3 ～5×105 个细胞为宜。 5)分装与培养：将稀释好的细胞悬液分装于细胞培养 瓶 or 培养皿中，盖好，做好标记，置于37℃ CO2培 养箱中培养。
组织块接种后l-3天，游出细胞数很少,组织块的粘
贴不牢固。观察、移动过程中要注意动作轻巧。 尽量不要引起液体的振荡而产生对组织块的冲击 力使其漂起。
在原代培养的1-2d内要持别注意观察，是否有细菌、
霉菌的污染。一旦发现，要及时清除，以防给培 养箱内的其它细胞带来污染。
原代培养3-5d需换液一次，去除漂浮的组织块和 残留的血细胞，以免影响原代细胞的生长。
第三十五页，共111页。
三、传代培养(passage or subculture)
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和， 为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大， 就必须进行传代（再培养）。不论是否稀释， 将细胞以一个培养瓶转移或移植到另一个培养
瓶即称为传代或传代培养(passage)。
第三十六页，共111页。
6)观察：逐日检查培养物是否污染，观察细胞生长情况。 待细胞已基本长成致密单层时，即可进行传代培养。
第二十八页，共111页。
细胞培养法注意事项
取材的组织最好尽快培养，若不能及时培养，可将组织浸泡于培养液
内放置于冰浴或40C冰箱。若组织块很大，应先将其切成1cm2以下的小块再低 温保存，但时间不能超过24小时，因放置时间长或组织块太大都易造成 细胞的死亡；
细胞培养(Cell Culture)： 培养物是单个细胞和细
胞群。
第五页，共111页。
细胞培养中的常用术语
原代培养（primary culture）：从体内取出细胞 或组织的第一次培养。
传代（passage）也称再培养。无论是否稀释，将细 胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传 代或传代培养。也称再培养。
（heterogeneous),主要表现在细胞形态和大小不一
第二十二页，共111页。
悬浮细胞培养法
器官培养法 组织块培养法
细胞培养法
第二十三页，共111页。
悬浮细胞培养法
对于悬浮生长的细胞．如白血病细胞、淋巴细 胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫
细胞无须消化，可采用低速离心分离,直接培养。
为了便于以后鉴别原代组织的来源和观察细胞体外培养与原 组织的差异性，原代取材同时保留组织学和电镜标本，对供 体来源、部位及一般情况做记录。
第十四页，共111页。
组织材料的分离
机械法：适于较柔软的组织，如脑、脾、淋巴结、 胸腺等。剪切组织为1mm3碎块后，置于组织匀浆器
研磨或用注射器针芯挤压后过不锈钢筛网。
第三十二页，共111页。
几种细胞的原代培养图示
1.细胞种类：人肺 部 成 纤 维 细 胞 ；2.培养的天数：2d -> 4d -> 7d;3.放大倍数： 200倍 ；4.培养基种类：1640+10%胎牛血清；5.细胞状态与特征简述:细胞呈梭形，贴壁生长;
第三十三页，共111页。
几种细胞的原代培养图示
人工模拟的条件和体内实际情况仍不完全相同
缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和 细胞相互间的影响
体外培养的细胞生活在缺乏动态平衡的环境环 境中，必然发生变化。
第三页，共111页。
本章主要内容
细胞培养的基本操作技术 原代培养(primary culture)
传代培养(subculture) 体外培养细胞的影响因素 细胞培养污染及对策
取材时严格无菌操作。用预先消毒好的器皿和带有少量培养液的培养瓶
进行取材。所取组织要尽量避免紫外线照射或接触任何化学试剂及有害药 物如碘、汞等。
3. 取材时要细心去除组织中的血液、结缔组织、脂肪及坏死组织等。
修剪和切碎过程中，为避免组织干燥，可将其浸泡于少量培养液中；
第二十九页，共111页。
组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代 培养方法，也是早期采用培养细胞的方法，故也被 称为组织培养(tissue culture)。
第二十四页，共111页。
指组织、器官原基，以至整个器官或其一 部分在体外的维持或生长，它们可以分化 与保持原来的结构与功能。
第二十五页，共111页。
1) 动物处死：将出生2～3d乳鼠，
用脱颈方法处死。用酒精棉球 擦拭解剖部位。
2) 取材及剪切：在无菌条件下将
组织取出，置于无菌培养皿中， 剪去多余的组织（脂肪等），
2. 培养的天数：4d； 3. 放大倍数：倒置显微 镜；
4. 培养基种类： 1640+10%X小牛血清； 5. 细胞状态与特征简述:细 胞呈长梭形，贴壁生长
第三十四页，共111页。
几种细胞的原代培养图示
神经元原代培养:神经元是高度分化 的细胞,在体外培养条件下难以增 殖.因此,目前神经元的培养主要用于 原代培养. 神经元胞体呈圆形或长杆状,核大 而圆,核仁明显.可见有细小突起从胞 体长出. 培养液中需加入高浓度的葡萄糖,以利 于神经元的生长.
第十九页，共111页。
▪ EDTA能与细胞上的钙、镁离子结合形成整合物， 利用结合后的机械力使细胞变圆而分散细胞或 使贴壁细胞从瓶壁上脱离。
▪ 缺点是细胞易裂解或贴壁细胞从瓶壁上脱离时呈 片状，有团块，常不单独使用，可与胰蛋白酶混 合使用(1：1或2：1)，既利于细胞脱壁又利于细胞 分散。可降低胰酶的用量和毒性作用。
接触抑制（contact inhibition）：细胞汇合相互接触
后失去运动的现象
第七页，共111页。
由于体外培养的
细胞没有抗感染能力， 因此防污染是决定培
养成功的首要条件。 一切操作需要保证
无菌和有条不紊。
第八页，共111页。
制定好实验计划和操作程序
有关数据的计算要事先做好。 准备各种所需器材和物品，清点无误后将其放置在操
第三十页，共111页。
组织块培养法
(1) 取材、修剪、组织剪或切成1mm3左右的小 块。 (2)将 剪切好的组织小块用眼科镊送入培 养 瓶内。
25ml培养瓶(底面积约为17.5cm2）以20一30小块
为宜。 (3) 放置2—4h待组织小块贴附后．将培养瓶慢慢翻
转平放、静止培养
第三十一页，共111页。
第十六页，共111页。
对细胞间的蛋白质水解，使细胞离散。
消化效果与PH值、温度、酶浓度和组织块大小与硬 度有关。
适于消化细胞间质较少的软组织，能有效地分离肝、 肾、甲状腺、羊膜、胚胎组织、上皮组织等。而对 含结缔组织较丰富的组织，如乳腺、滑膜、子宫、 纤维肉瘤、肿瘤组织等无效．但若与胶原酶合用能 增加其对组织的分离作用 。
用PBS液洗涤1-2次；放入另一 培养皿中，将组织剪成1mm3大
小的块。
第二十六页，共111页。
细胞培养法方法与步骤
3) 消化及分散组织块：将上述清洗过的组织放入
无菌试管内，加入5～6倍量的0.25％胰蛋白酶液 （pH7.4 ～ 7.6），置37℃水浴中消化20 ～ 40min，
每隔10min摇动一次，直到组织块变得疏松，粘 稠，且颜色略变为白色为止。取出试管，加入
操作
进行培养时，动作要准确敏捷
不能太快，否则空气流动增加污染机会。
不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要用 火焰烧灼消毒或取备品更换。
第十三页，共111页。
组织细胞取材及培养的基本要求
取材的组织用培养液浸泡，4℃运送，24h内尽快培养。 取材时应严格无菌操作，避免对组织的机械损伤，尽量
去除脂肪、神经、结缔、坏死组织，污染组织可用青链 霉素和制霉菌素漂洗。 原代培养，特别是正常细胞的培养，应采用营养丰富的培 养液。 一般来讲,胚胎组织较成熟个体的组织容易培养;分化低的较 分化高的组织容易生长;肿瘤组织较正常组织容易培养。取 材时应尽量选用易培养的组织进行培养。
培养细胞的生长测定方法
细胞冻存和复苏
第四页，共111页。
细胞培养中的常用术语
组织培养(Tissue Culture)： 指的是从体内取出 组织，模拟体内生理环境，使之生存和生长并维 持其结构和功能的方法。
器官培养（Organ Culture）： 培养的是器官的原 基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、 生长和保持一定功能的方法。
细胞培养技术实用篇
第一页，共111页。
பைடு நூலகம்
细胞培养的优点
活细胞：长时间、直接观察、研究活细胞的形态、 结构和生命活动
可控制：
选择特定的细胞种类、性质、阶段
可控制调节条件：物理、化学、生物等
可采用各种研究技术、记录方法
样品均一性：来源于同一组织同一种细胞
经济、规模
第二页，共111页。
局限性
钙镁离子和血清抑制其活性。 常用剂量为0.25%，PH8，温度37℃
第十七页，共111页。
水解结缔组织中胶原蛋白成分，对上皮细胞影 响不大。
产品有Ⅳ Ⅶ Ⅸ等型，分别适用于分离肝细胞、
胰岛、脂肪细胞及纤维组织。 钙镁离子和血清不影响活性，PH6.5-7 常用剂量为200U/ml
第十八页，共111页。
▪ EDTA工作液的浓度为0.02％，用不含钙、镁 PBS配制。
第二十页，共111页。
从直接取自生物体细胞、组织或器官开始的培养， 即将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种 酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机 械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中 培养，使细胞得以生存、生长和繁殖的过程。
细胞系（cell line）：原代培养物经首次传代成功
后即为细胞系
第六页，共111页。
细胞培养中的常用术语
细胞株（cell strain）：通过选择法或克隆形成法从原
代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养物 称细胞株。
汇合（confluent）：细胞相互连接成片占据所有底物 面积。
进入原代培养室需彻底洗手还要戴口罩、着消毒衣帽。
专用鞋或带鞋套
第十一页，共111页。
火焰消毒
在无菌环境进行培养或做其它无菌工作时，首先要点 燃酒精灯。
按装吸管帽、打开或封闭瓶口等，都需在火焰近处 并经过烧灼进行。
如实验用品需火焰灭菌，冷却后接触培养细胞， 以防烧死细胞。
第十二页，共111页。
一些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等 用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。
第十页，共111页。
洗手和着装
原则上和外科手术相同。
仅做观察不做培养操作时，可穿着细胞培养室内紫外线照
射30min的清洁工作服
在利用超净台工作时，因整个前臂要伸入箱内，应着长袖 的清洁工作服，并于开始操作前要用75％酒精消毒手。
第二十一页，共111页。
原代培养细胞
组织和细胞刚刚离体，生物学特性未发生很大变 化，仍具有二倍体遗传性，最接近和反映体内生 长特性，是药物测试、细胞分化等实验的很好对 象；
原代细胞培养也是建立各种细胞系（cell line)或细
胞株（cell strain）必须经过的阶段。
原代细胞培养多由各种细胞成分组成，比较复杂，即 使是经过处理后的细胞，也仍具有异质性
作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒。 避免开始实验后，因物品不全往返拿取而增加污染
机会。
第九页，共111页。
消毒
地面每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面—次(拖布要专 用)，紫外线照射消毒30-50min
超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。然后紫 外线消毒30min。
消毒时工作台面上用品布局合理，不要过多或重叠放置， 否则会遮挡射线降低消毒效果。
化学法：胰蛋白酶、胶原酶、EDTA法 细胞悬液的分离方法：低速离心法、密度梯度离
心法
第十五页，共111页。
细胞悬液的分离方法
低速离心法： 血液和体液等细胞悬液5001000rpm离心5-10min。离心速度过大、时间过长， 会造成细胞损伤和死亡。
密度梯度离心法： 用离心法将细胞分到不同 密度的梯度介质中，再分别吸出各层细胞。适 于分离密度不等的细胞。常用介质有Ficoll 400，Percoll，泛影葡胺等。
细胞的传代培养
根据细胞生长的特点，传代方法有2种。
悬浮生长细胞传代
5ml培养液，用吸管反复吹打组织块，使其分 散成细胞悬液，将细胞悬液用两层灭菌纱布过 滤至另一烧杯中。
第二十七页，共111页。
细胞培养法方法与步骤
4)计数与稀释:从过滤的细胞悬液中取出适量滴于血细 胞计数板上，按白细胞计数法进行计数；计数后用培 养液稀释，稀释后的浓度一般以每毫升含3 ～5×105 个细胞为宜。 5)分装与培养：将稀释好的细胞悬液分装于细胞培养 瓶 or 培养皿中，盖好，做好标记，置于37℃ CO2培 养箱中培养。
组织块接种后l-3天，游出细胞数很少,组织块的粘
贴不牢固。观察、移动过程中要注意动作轻巧。 尽量不要引起液体的振荡而产生对组织块的冲击 力使其漂起。
在原代培养的1-2d内要持别注意观察，是否有细菌、
霉菌的污染。一旦发现，要及时清除，以防给培 养箱内的其它细胞带来污染。
原代培养3-5d需换液一次，去除漂浮的组织块和 残留的血细胞，以免影响原代细胞的生长。
第三十五页，共111页。
三、传代培养(passage or subculture)
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和， 为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大， 就必须进行传代（再培养）。不论是否稀释， 将细胞以一个培养瓶转移或移植到另一个培养
瓶即称为传代或传代培养(passage)。
第三十六页，共111页。
6)观察：逐日检查培养物是否污染，观察细胞生长情况。 待细胞已基本长成致密单层时，即可进行传代培养。
第二十八页，共111页。
细胞培养法注意事项
取材的组织最好尽快培养，若不能及时培养，可将组织浸泡于培养液
内放置于冰浴或40C冰箱。若组织块很大，应先将其切成1cm2以下的小块再低 温保存，但时间不能超过24小时，因放置时间长或组织块太大都易造成 细胞的死亡；
细胞培养(Cell Culture)： 培养物是单个细胞和细
胞群。
第五页，共111页。
细胞培养中的常用术语
原代培养（primary culture）：从体内取出细胞 或组织的第一次培养。
传代（passage）也称再培养。无论是否稀释，将细 胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传 代或传代培养。也称再培养。
（heterogeneous),主要表现在细胞形态和大小不一
第二十二页，共111页。
悬浮细胞培养法
器官培养法 组织块培养法
细胞培养法
第二十三页，共111页。
悬浮细胞培养法
对于悬浮生长的细胞．如白血病细胞、淋巴细 胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫
细胞无须消化，可采用低速离心分离,直接培养。
为了便于以后鉴别原代组织的来源和观察细胞体外培养与原 组织的差异性，原代取材同时保留组织学和电镜标本，对供 体来源、部位及一般情况做记录。
第十四页，共111页。
组织材料的分离
机械法：适于较柔软的组织，如脑、脾、淋巴结、 胸腺等。剪切组织为1mm3碎块后，置于组织匀浆器
研磨或用注射器针芯挤压后过不锈钢筛网。
第三十二页，共111页。
几种细胞的原代培养图示
1.细胞种类：人肺 部 成 纤 维 细 胞 ；2.培养的天数：2d -> 4d -> 7d;3.放大倍数： 200倍 ；4.培养基种类：1640+10%胎牛血清；5.细胞状态与特征简述:细胞呈梭形，贴壁生长;
第三十三页，共111页。
几种细胞的原代培养图示
人工模拟的条件和体内实际情况仍不完全相同
缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和 细胞相互间的影响
体外培养的细胞生活在缺乏动态平衡的环境环 境中，必然发生变化。
第三页，共111页。
本章主要内容
细胞培养的基本操作技术 原代培养(primary culture)
传代培养(subculture) 体外培养细胞的影响因素 细胞培养污染及对策
取材时严格无菌操作。用预先消毒好的器皿和带有少量培养液的培养瓶
进行取材。所取组织要尽量避免紫外线照射或接触任何化学试剂及有害药 物如碘、汞等。
3. 取材时要细心去除组织中的血液、结缔组织、脂肪及坏死组织等。
修剪和切碎过程中，为避免组织干燥，可将其浸泡于少量培养液中；
第二十九页，共111页。
组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代 培养方法，也是早期采用培养细胞的方法，故也被 称为组织培养(tissue culture)。
第二十四页，共111页。
指组织、器官原基，以至整个器官或其一 部分在体外的维持或生长，它们可以分化 与保持原来的结构与功能。
第二十五页，共111页。
1) 动物处死：将出生2～3d乳鼠，
用脱颈方法处死。用酒精棉球 擦拭解剖部位。
2) 取材及剪切：在无菌条件下将
组织取出，置于无菌培养皿中， 剪去多余的组织（脂肪等），