姜黄素与羟基脲对K562细胞的体外联合作用
姜黄素抑制K562细胞增殖的机制
山东 医药 ２０ ０ ８年第 ４ ８卷第 ４ １期
水平下 降 ， 高血 液 ｐ 值 ， 善循 环血 流 状 态 ， 提 Ｈ 改 增 加尿量 等 方 面 直 接 对 抗 内毒 素 和 Ｄ Ｃ 的 发 生 作 Ｉ 用 ］ 。这 些研 究结 果 的提 示 为我 们 在 抗 感 染 性 休 克 的治 疗 中加 用 参 麦 注 射 液 得 到 了 相 关 的 理论 基 础 ， 在本研究 结果 中得到相 关 的证 实 。 并 ［ 参考 文献 ］
［ 关键词 ］ 姜黄素 ； 白血病 ； 自吞噬作用 ； 微管相关蛋白质类 ； 线粒体 ［ 中图分类号 ］ Ｒ ９ ． ３２２ ［ 文献标识码 ］ Ｂ ［ 文章 编号 ］ １０ －６ Ｘ（０ ８ ４ － ９ － ０ ２２ ６ ２０ ）１０ ５０ ０ ２
近年来 ， 黄素 抗 肿瘤 作 用机 制 的 研究 大 多集 姜 中在诱 导 细胞 凋 亡 及 相 关 基 因表 达 等 方 面 。２ ０ ０５ 年 ９月 ～ ０ ６年 ３月 ， 们采用 Ｍ盯 法测 定姜黄 素 ２０ 我 对 Ｋ６ ５ ２细 胞 增 殖 的抑 制 作 用 ， 细胞 自噬 的 角度 从 探讨 姜黄 素抑制 Ｋ ６ ５ ２细胞增殖 的机制 。
姜黄素诱导K562细胞自噬的抗瘤作用研究
姜黄素诱导K562细胞自噬的抗瘤作用研究于鑫; 卢发强; 宗成国; 张卫军; 牟锐; 魏丹冰; 范世珍; 于波海【期刊名称】《《中国实验诊断学》》【年(卷),期】2019(023)011【总页数】5页(P1965-1969)【关键词】姜黄素; 自噬; 慢性粒细胞白血病; K562细胞; BCR-ABL融合基因【作者】于鑫; 卢发强; 宗成国; 张卫军; 牟锐; 魏丹冰; 范世珍; 于波海【作者单位】大连大学附属中山医院检验科辽宁大连 116001; 广州中医药大学深圳医院【正文语种】中文【中图分类】R733.7姜黄素(curcumin)是从植物姜黄根茎中提取的天然多酚化合物,是姜黄能发挥药理学作用的主要成分[1]。
大量研究表明姜黄素具有多种生物学功能,包括抗氧化、抗炎及抗肿瘤等特性。
姜黄素可通过选择性的细胞毒性对多种肿瘤细胞产生抗瘤效应,例如,抑制结肠癌和肺癌的肿瘤细胞增殖,减缓乳腺癌和肝癌等的发展,在肿瘤的临床治疗中具有广阔的应用前景[2,3]。
自噬(autophagy)是细胞内大分子和细胞器降解和循环利用的分解代谢过程,普遍存在于真核细胞中。
自噬是细胞在不利存活的环境中为保持细胞完整性的生存机制,同时也可作为细胞死亡的一种方式,称为Ⅱ型程序性细胞死亡。
慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)是骨髓恶性增殖性疾病,约有95%的病例有骨髓细胞的克隆性增殖,其特征是包含Ph染色体,导致BCR-ABL融合蛋白的产生[3,4]。
研究显示姜黄素对于肿瘤细胞的主要毒性作用是凋亡,自噬可能在肿瘤的发展过程中起到双重作用：促进或抑制肿瘤细胞的死亡[4]。
本课题以CML细胞系K562细胞为实验模型,研究姜黄素诱导细胞自噬在抗瘤过程中的作用,为临床治疗提供可靠的依据。
1 材料与方法1.1 细胞株K562细胞购自和元生物技术(上海)股份有限公司。
1.2 药物与试剂姜黄素,3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA),噻唑蓝(MTT),二甲基亚砜(DMSO)购自Sigma-Aldrich公司；RPMI-1640培养基,青-链霉素抗菌液购自美国GIBCO 公司；胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)购自以色列Biological Industries公司；TRIzol试剂购自美国Life Technologies公司；cDNA合成试剂盒购自美国Thermo Fisher公司；Wsetern Blotting ECM增强显色法检测试剂盒,SDS-PAGE凝胶配制试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；兔抗鼠LC3IgG,Beclin1 IgG购自日本MBL公司；GAPDH内参抗体购自北京中杉金桥公司；蛋白质定量试剂盒购自美国Bio-Rad公司。
姜黄素与 STI571对慢性粒细胞白血病细胞株K562作用的体外研究
与 低 剂 量 （． ，， ５＃ ｌＩ 的 Ｓ Ｉ７ 联 合 应 用 对 抑 制 Ｋ ６ ０ １０ １ ｍｏ／ ） Ｔ５ １ ５ ２细 胞 增 殖 呈 单 独 相 加 ； 较 大 剂 量 则 可 明显 协 同下 而
调 Ｐ １ Ｐ Ｃ 的表 达 水 平 。 ２０ ” 和 Ｋ 关键词 ： 姜黄素 ； Ｔ５ １ Ｓ Ｉ ７ ；白血 病 ， 样 ， 性 ；药 物 疗 法 ， 合 髓 慢 联 中 图分 类 号 ： Ｒ ８ ． １ Ｒ ３ ． ２ ２ ２ ７ ； ７ ３ ７ 文献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ： １ ７—ｌ４ ２０ ）５０ ２—４ ６ ２４ ９ （ ０ ６ ０ —４ ７ ０
１ １ １ 药 品 与试 剂 姜 黄 素 （ 海 试 剂 三 厂 ， 号 ． ． 上 批
９ ０ ２ ） 纯 度 ９ ， 解 于 二 甲 基 亚 砜 （ ＭＳ ８８ ５ ， ９ 溶 Ｄ Ｏ）
ｌｔ） 一种 小分 子 的 ２苯 胺 嘧 啶衍 生 物 ， 酪 氨 酸 ａｅ是 一 是 激 酶抑制 剂 ， 目前 临床 上主要 用 于治疗 Ｃ ＭＬ。随着 该 药 的应 用 ， 不 良反 应 及 耐药 问 题 相 继 出 现 ， 其 且
维普资讯
型 ＪＦ ｕｉｎ Ｍ ｅ ｉ ｉ ｄ Ｕｎｖ ａ
２０ ｅ ｖ。ｌ４ｏ ０６Ｓｐ
，
…
…
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４ ７ ２
姜 黄 素 与 ８ Ｉ 对 慢 性 粒 细胞 白血 病 细 胞株 Ｋ ６ Ｔ５ １ ７ ５ ２作 用 的体 外 研 究
方 法 锥 虫 蓝 排 染 法 计 算 Ｋ５ ２细 胞 增 殖 抑 制 率 ； ｅｔｒ ｌｔ 法 检 测 ６ Ｗ ｓ ｎ ｂｏ 方 ｅ
Ｃ ｒＳ ５ １以 及二 者联 合 应 用 对 Ｋ５２细 胞 Ｐ １ ｕ 、ＴＩ７ ６ ２Ｏ
解毒化瘀含药血清抗白血病细胞K562及K562／A的体外实验研究
解毒化瘀含药血清抗白血病细胞K562及K562／A的体外实验研究目的以解毒化瘀法立意,选取解毒化瘀中药复方,拟通过体外细胞培养证实其是否存在抗白血病细胞及多药耐药白血病细胞的作用。
方法采用MTT比色法,选择白血病细胞K562及阿霉素诱导的白血病多药耐药细胞株K562/A为靶细胞,观察不同浓度解毒化瘀含药兔血清对其细胞毒作用。
结果解毒化瘀含药兔血清对K562及K562/A均有明显的抑制作用,且其对K562/A的细胞毒作用呈剂量依赖性。
结论解毒化瘀中药在抑制白血病细胞生长及白血病多药耐药细胞生长方面具有深入研究的价值。
标签：解毒化瘀;白血病;多药耐药;体外细胞培养1 材料与方法1.1 细胞株白血病细胞株K562在含10%FBS的IMDM培养基中培养。
阿霉素(ADR)诱导的白血病多药耐药细胞株K562/A[1],在含10%FBS的IMDM培养基中添加1 μg/ml的ADR 以维持其耐药性,实验前两周脱离ADR培养。
K562及K562/A均由中国医学科学院血液学研究所药理实验室提供。
1.2 药品及主要试剂IMDM 培养基,美国GIBCO公司产品; 四氮唑蓝(MTT),美国AMRESCO 公司产品;注射用盐酸多柔比星速溶型,Pfizer Italia S.r.l.公司产品。
1.3 实验方法1.3.1 含药血清的制作新西兰大白兔10只随机分为2组,分别为实验组和对照组。
实驗组以解毒化瘀中药汤剂灌胃,2次/d,连续3 d;对照组以等剂量生理盐水灌胃,2次/d,连续3 d。
于末次灌胃后2 h,心脏取血。
分离血清,将同组血清混匀,过滤分装,零下20℃保存备用。
1.3.2 MTT法检测含药血清的细胞毒作用按周氏改良MTT法[2]。
①接种细胞:分别收集K562及K562/A细胞悬液,离心,弃上清,用含2.5%血清的IMDM培养液配成单个细胞悬液,在EP 管中与占总体积50%,依不同比例稀释的含药血清混匀,并调整细胞浓度为1×105/ml,于96 孔板中每孔接种混悬液100 μl,另设对照孔、空白对照孔及调零孔; ②培养细胞:将96 孔板移入CO 2 培养箱中,37 ℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养48 h ; ③显色:48 h 后每孔加入MTT 液(5 g/L) 20 μl,CO 2 培养中,37 ℃、5%CO2、饱和湿度条件下继续培养4 h,每孔加入三联溶解液100 μl,37 ℃温箱中静置12 h,使结晶充分溶解;④比色:在酶标仪上测550 nm处光吸收度(OD550),实验重复3次。
姜黄素与STI571联合及序贯给药对K562细胞增殖的影响
配成 ２ ０ ｍｍｏ ｌ ／ Ｌ储存 液于 一２ ０ ℃ 储 存 备 用。 Ｓ ＴＩ ５ ７ １ （ 瑞 士诺 华 公 司 ） 经本 研 究 所萃 取 、 重 结 晶所 得， 纯度 ９ ９ ， 溶解于 Ｄ ＭＳ Ｏ， 配成 １ ０ ｍｍｏ ｌ ／ Ｌ， 于
一
干细胞 异常 的骨髓 恶 性 增殖 性 疾 病 在 我 国 ， Ｃ ＭＬ 约 占各 类 白血病 的 １ ５ ９ ／ ６ ～２ ０ ， 仅 次 于 急性 粒 细 胞
探索两药序贯给药 的不 同 果 。 协 同效 果 。 结果
Ｓ Ｔ Ｉ ５ ７ １联 合 应 用 对 Ｋ５ ６ ２细 胞 的 细 胞 毒 作 用 ； 锥 虫 蓝 排 染 法 检 测 药 物 序 贯 给 药 的 不 同效 果 ； 金 氏公 式 评 价 两 药 的 Ｃ ｕ ｒ 与Ｓ Ｔ Ｉ ５ ７ １单 独 作 用 均 抑 制 Ｋ ５ ６ ２细 胞 的 增 殖 ， 二 者 联 合 应 用 呈 协 同作 用 （ Ｑ ＞１ ． １ ５ ） ； 显 微
白血病 （ ＡＭ Ｌ ） 和 淋 巴细胞性 白血 病 （ ＡＬ Ｌ ） ， 占慢 性 白血病 的 ９ ５ ［ １ ］ 。 目前 针 对 该 病 的 发病 特 点 所 研
制的 Ｓ Ｔ Ｉ ５ ７ １ （ Ｇｌ ｅ ｅ ｖ ｅ ， Ｃ ＧＰ ５ ７ １ ４ ８ Ｂ ， ｉ ｍａ ｔ ｉ ｎ ｉ ｂ ｍｅ ｓ ｙ —
Ｓ Ｔ１ ５ ７ １ （ ０ ． １ ～０ ． １ ５ ｐ ． ｍｏ ｌ ／ Ｌ） 联 合 应 用 对抑 制 Ｋ５ ６ ２ 细胞增 殖 呈单独 相加 ， 而 与较 大剂 量 Ｓ ＴＩ ５ ７ １ （ ０ ． ２ ～
０ ． ８ ｐ ． ｍｏ ｌ ／ Ｌ ） 可 明显 协 同下 调 Ｐ ２ １ ０ 。 和 Ｐ ＫＣ 的
姜黄素调控自噬抑制K562细胞增殖的体外研究
ｐｒｏｔｅｉｎ ＬＣ３一ＩＩ／ＬＣ３一Ｉ ａｎｄ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ２１ ａｎｄ ｐ２７ ｗｅｒｅ ｄｅｃｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃｕｒｃｕ—
标 志 蛋 白 ＬＣ３一ＩＩ／ＬＣ３一Ｉ变 化 水 平 ；同 时 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分 析 ｐ５３，ｐ２１和 ｐ２７表 达 变 化 。结 果 姜 黄 素 能 以 时 间 、剂
量 依 赖 性方 式 抑 制 Ｋ５６２细胞 增 殖 ，与 ３一ＭＡ 对 照 组 相 比 ，ＬＣ３一ＩＩ／ＬＣ３一Ｉ比值 显 著 上 升 ，姜 黄 素 诱 导 Ｋ５６２细 胞 周 期
摘 要 ：目 的 研 究 姜 黄 素诱 导 自噬 对 Ｋ５６２细胞 增 殖 的影 响 。 方 法 采 用 １、５、１０、２Ｏ和 ４０ ＦＭ／Ｌ姜 黄 素 及 自噬
抑 制 剂 ３一Ｍ Ａ作 用 于 Ｋ５６２细 胞 ２４ ｈ，采 用 ＭＴＴ 实验 观察 Ｋ５６２细 胞 增 殖 变 化 情 况 ，随后 采 用 Ｗ ｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ检 测 自噬
ｍ ｉｎ ｃｏｕｌｄ ｉｎｈｉｂｉｔ Ｋ５６２ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅ Ｇ１ ｐｈａｓｅ ａｒｒｅｓｔ；ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＬＣ３一ＩＩ／ＬＣ３一１ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ；ｆｕｒｔｈｅｒｍ ｏｒｅ，Ｃｕｒｃｕｍ ｉｎ ｃｏｕｌｄ ａｌｓｏ ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｅ Ｋ ５６２ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐ５３，ｐ２１ ａｎｄ ｐ２７，ａｎｄ
论花色素对白血病细胞株K562 细胞增殖的影响
论花色素对白血病细胞株K562 细胞增殖的影响K562 细胞是一种分化极差、恶性程度较高的人红白血病细胞株。
研究证明,其在体外可被多种诱导剂诱导,可分别向红系、粒系、单核巨嗜细胞系及巨核细胞系分化。
花色素是一类分布十分广泛的植物色素,具有类黄酮的典型结构。
有研究表明,花色素对人乳腺癌、前列腺癌、结肠癌等肿瘤细胞具有生长抑制作用。
其作用机制与抗氧化作用、抑制肿瘤细胞增殖、诱导癌细胞凋亡和分化等有关,且对机体无明显不良反应。
本研究通过体外培养K562 细胞,观察花色素对K562 细胞的形态变化,探讨花色素对K562 细胞关于增殖方面的作用,为临床上白血病的治疗提供新思路。
1 材料与方法1. 1 材料花色素( 购自上海惠诚责任有限公司) ; RPMI-1640 培养基( 美国GIBCO 公司) ; 新生牛血清( 杭州四季青生物工程材料有限公司) ; MTT 试剂盒( 武汉博士生物工程有限公司) ; CO2细胞培养恒温箱购于美国Forma Scientific 公司; 倒置相差显微镜( Olympus公司) ; 96 孔培养板( 美国Falcon 公司) ; 流式细胞仪( 美国Becton-Dickinson 公司) ; 自动酶标仪( BIORAD公司550 型) 。
K562 细胞为吉林医药学院检验学院细胞室冻存细胞,接种K562 细胞于含10%新生牛血清的RPMI-1640 完全培养基,37 ℃、5% CO2饱和湿度培养箱中培养,取对数生长期细胞用于试验。
1. 2 细胞培养常规传代培养K562 细胞至对数生长期,将对数生长期细胞分成5 组,以每孔1 105 接种于96 孔板中,24 h 后分别加入花色素,使终浓度分别为25、50、100、200 mg /L,并设置对照组,培养24 h 后于倒置显微镜下观察细胞状态并拍照。
1. 3 瑞氏染色观察常规传代培养K562 细胞至对数生长期,将对数生长期细胞分成5 组,24 h 后分别加入花色素使终度分别为25、50、100、200 mg /L,并设置对照组,培养24 h后收集各组细胞,离心800 r /min,5 min,弃上清,将细胞沉淀涂布于载玻片上,甲醇固定10 min 后取出,PBS 冲洗,自然晾干,滴加瑞氏染液1 min 后再加入等量的PBS,混匀,静置5 min 后,细流水洗,吸干,镜检观察并拍照。
药物诱导K562及HEL细胞珠蛋白基因表达前后细胞微小RNA的分离鉴定
药物诱导K562及HEL细胞珠蛋白基因表达前后细胞微小RNA的分离鉴定地中海贫血在世界范围内分布广，发病率高，危害大，长期以来其相关研究一直是生物医学研究的热点。
重型β地中海贫血可以被异常高表达的γ基因改善临床症状的现象，促使科学家围绕着如何阻止γ—珠蛋白基因向β—珠蛋白基因切换及如何重新激活已趋于关闭的γ—珠蛋白基因等问题开展了各种各样的研究工作。
已经发现一些正向作用元件与反向作用因子，如：SSE(stage selector element)、LCR(Local controlregion)及GATA-1、AP1、SP1、EKLF(Erythroid Kruppel-like factor)与NF-E2等与γ及β—珠蛋白基因的表达切换有关。
某些药物如羟基脲、丁酸盐等可以诱导γ—珠蛋白基因重新表达，但在临床应用过程中却呈现出个体差异。
研究发现，羟基脲可使cGMP增加，后者可能影响某些转录因子而干预γ—珠蛋白基因表达。
丁酸盐可抑制组蛋白去乙酰化酶的活性，还可以通过抑制ERK、激活p38信号转导通路而诱导K562细胞向红细胞系分化。
但其作用机理还有待进一步阐明。
近年来人们发现了一种新的基因调节因子—微小RNA。
微小RNA的片断大小在～22nt左右，包括siRNA、miRNA及属于miRNA的stRNA。
它们引起与其碱基互补的mRNA降解或翻译抑制，表现为基因转录后沉默。
已经在包括人类在内的许多生物体发现了它们的存在。
它们的功能涉及到基因组印记、RNA干扰、转录调控及选择性剪切等多个领域。
在小鼠骨髓造血细胞的分化过程中也发现有miRNA的参与。
在药物诱导HbF表达的过程中，是否有miRNA的参与，目前还未见相关报道。
尤其是人红白血病细胞K562，在羟基脲及丁酸盐诱导下发生了向红细胞系的分化，在个体发育及组织细胞分化过程中具有调节基因表达功能的miRNA是否也参与其中呢?另一株人红白血病细胞HEL可以在羟基脲诱导下发生β—珠蛋白基因的转录，但在蛋白质水平却无可检测到的β—肽链，这属于转录后基因沉默，具有这一调节功能的微小RNA是否也参与其中?为了解决这些疑问，我们试图从用药前后K562细胞及HEL细胞中分离微小RNA，以期发现可能参与诱导γ、β—珠蛋白基因表达的miRNA。
姜黄素联合PDTC体外抗白血病K562细胞的作用研究
姜黄素联合PDTC体外抗白血病K562细胞的作用研究高荧;于宜平;苗久旺;张钦德【摘要】目的探讨姜黄素联合PDTC体外抗K562细胞的作用.方法 MTT法检测姜黄素单独或联用PDTC后对K562细胞增殖活性的影响;Hoechst33342染色法观察细胞凋亡形态;Western blot法检测Cleaved Caspase 3的表达活性.结果 10 μmol·L-1姜黄素联合25 μmol·L-1的PDTC后,可显著提高对K562细胞增殖的抑制活性,并显示出诱导细胞凋亡的形态学特征,使细胞Cleaved Caspase 3表达增加.结论姜黄素联合PDTC可增强抗K562细胞作用,机制与诱导K562细胞凋亡作用有关.【期刊名称】《云南中医中药杂志》【年(卷),期】2018(039)001【总页数】3页(P72-74)【关键词】姜黄素;吡咯烷二硫代氨基甲酸盐;细胞凋亡;Caspase 3【作者】高荧;于宜平;苗久旺;张钦德【作者单位】山东中医药高等专科学校,山东烟台264199;山东中医药高等专科学校,山东烟台264199;山东中医药高等专科学校,山东烟台264199;山东中医药高等专科学校,山东烟台264199【正文语种】中文【中图分类】R285.5核因子-kappaB(nuclear factor-kappaB，NF-κB)与肿瘤细胞的增殖、凋亡有密切关系[1]。
研究表明，吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)特异性抑制NF-κB后，对人白血病K562细胞的增殖有抑制作用、并可诱导凋亡，还可逆转肿瘤耐药[2]。
姜黄素及其类似物抗K562细胞作用明确、且呈多靶点性，但存在不稳定、易降解、体内吸收差、低浓度下抑制活性较弱的缺点[3，4]。
采用高效低毒的中药活性成分与肿瘤化疗药联合应用以减少化疗药的用量、提高化疗效果、降低药物不良反应，是抗肿瘤药物研究的重要方向。
姜黄素对人类红白血病细胞（K562）的抑制及诱导分化作用
姜黄素对人类红白血病细胞（K562）的抑制及诱导分化作用孟秀香;宋振岚
【期刊名称】《大连医科大学学报》
【年(卷),期】1999(021)002
【摘要】用人类红白血病细胞（Ｋ５６２）为通过细胞计数、ＭＴＴ法测定，形态学观察、ＮＢＴ还原试验及联七胺反应等方法检测了不同浓度姜黄素对体外人Ｋ５６２细胞的作用。
结果表明，姜黄素对Ｋ５６２细胞有明显的抑制作用。
随浓度增加，抑制作用逐渐增强，形态学观察可见轻微诱导分化作用。
鉴于姜黄素对人类红白血病细胞兼有轻微诱经和增殖抑制人艇，提示姜黄素有可能应用于人类红白血病的治疗。
【总页数】3页(P98-100)
【作者】孟秀香;宋振岚
【作者单位】大连医科大学检验系;大连医科大学检验系
【正文语种】中文
【中图分类】R730.52
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1.雷公藤多甙对人类红白血病细胞株K562作用机制的研究 [J], 宋健辉;刘静;唐小玲
2.人类红白血病细胞株K562的诱导分化机制 [J], 张彦
3.冬凌草甲素对人红白血病细胞系K562细胞生长的抑制作用 [J], 冯长伟;潘祥林;邹俊晖;郭娟娟
4.土贝母苷甲对人红白血病细胞K562的诱导分化作用 [J], 刘姬艳;高营;于立坚;马润娣
5.苦参对K562红白血病细胞系诱导分化作用 [J], 秦建平;蒋纪恺;张彦;王霞文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
姜黄素对白血病K562细胞增殖抑制作用的研究
姜黄素对白血病K562细胞增殖抑制作用的研究
潘红宁;梁中琴;贾艳丽;李君
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2010(032)002
【摘要】目的:探讨姜黄素(curcumin)对白血病K562细胞增殖抑制的作用机制.方法:采用MTT法测定curcumin对K562细胞增殖的抑制作用;分别应用AO/EB和MDC荧光染色观察给药后凋亡和自噬的发生;检测LDH漏出率以观察用自噬特异性抑制剂3-MA后curcumin抑瘤作用的变化.结果:curcumin可显著抑制K562细胞生长,诱导其发生自噬和凋亡;给药后阻断自噬其细胞毒性作用减弱.结
论:curcumin能诱导白血病K562细胞的自噬和凋亡从而提高了抗癌的敏感性.【总页数】4页(P202-205)
【作者】潘红宁;梁中琴;贾艳丽;李君
【作者单位】苏州大学医学部药理学系、苏州大学衰老与神经疾病实验室,江苏,苏州,215123
【正文语种】中文
【中图分类】R285.6
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1.灵芪胶囊含药血清对人红白血病K562细胞增殖抑制作用影响的实验研究 [J], 华东;苏云明;肖佳音;王志国;刚宏林
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3.靶向MR-1基因shRNA表达载体的构建及其对白血病K562细胞增殖的抑制作用 [J], 赵午莉;任开环;李保卫;邵荣光
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姜黄素与 STI571对慢性粒细胞白血病细胞株K562作用的体外研究
姜黄素与 STI571对慢性粒细胞白血病细胞株K562作用的体外研究张昆仲;许建华;黄秀旺;吴丽贤;温彩霞;陈元仲【期刊名称】《福建医科大学学报》【年(卷),期】2006(040)005【摘要】目的研究姜黄素(Cur)、STI571以及二者联合应用对慢性粒细胞白血病细胞株K562的影响,探索两药的不同效果及联合应用机制.方法锥虫蓝排染法计算K562细胞增殖抑制率;Western blot方法检测Cur、STI571以及二者联合应用对K562细胞P210bcr/abl蛋白含量及其下游信号蛋白激酶C(PKC)的影响;用金氏公式评价两药的协同效果.结果 Cur和STI571联合应用对K562细胞呈剂量依赖性的抑制作用,协同指数Q值均＞0.85;Western blot显示,Cur和STI571联合应用对P210bcr/abl及PKC的下调呈明显增强作用.结论 Cur与低剂量(0.1,0.15μmol/L)的STI571联合应用对抑制K562细胞增殖呈单独相加;而较大剂量则可明显协同下调P210bcr/abl和PKC的表达水平.【总页数】4页(P427-430)【作者】张昆仲;许建华;黄秀旺;吴丽贤;温彩霞;陈元仲【作者单位】福建医科大学药学院临床药理研究所,福州,350004;福建医科大学药学院临床药理研究所,福州,350004;福建医科大学药学院临床药理研究所,福州,350004;福建医科大学药学院临床药理研究所,福州,350004;福建医科大学药学院临床药理研究所,福州,350004;福建省血液病研究所,福州,350001【正文语种】中文【中图分类】R282.71;R733.72【相关文献】1.人慢性粒细胞白血病bcr-abl基因反义寡核苷酸对K562细胞株的凋亡诱导作用研究 [J], 平娟;赵娜;王保全;申智慧;阴明星;庞晓斌;陈传波2.姜黄素与STI571联合及序贯给药对K562细胞增殖的影响 [J], 张昆仲;许建华;黄秀旺;温彩霞;吴丽贤;胡盈莹;陈元仲3.姜黄素联合STI571对K562细胞的作用及其对组蛋白去乙酰化酶8的影响 [J], 干定云;陈燕;何静4.姜黄素与索拉非尼联合对人肾癌细胞株786-O增殖抑制作用的体外研究 [J], 赵建通;张磊;刘文瞻;徐飞;郭明涛;路志民;肖波5.阿司匹林对人慢性粒细胞白血病细胞株K562的生长抑制作用 [J], 王芳妹;杨子剑;韩梅;胡翔;丁小凤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
姜黄素衍生物 C085抑制K562／G01细胞及 Bcr-Abl激酶的体外研究
姜黄素衍生物 C085抑制K562／G01细胞及 Bcr-Abl激酶的体外研究吴莺;吴丽贤;许建华【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2016(032)007【摘要】目的：研究姜黄素衍生物C085对K562／G01细胞及野生型和伊马替尼耐药型Bcr-Abl 激酶的作用，以期能找到一种对IM耐药点突变激酶有效的酪氨酸激酶抑制剂。
方法分别采用MTT法及流式细胞仪检测及观察C085对细胞增殖及凋亡的影响；应用Kinase-Glo®激酶发光检测试剂盒检测C085对4种Abl激酶（ WT、T135I、Y253F、Q252H）活性的影响；蛋白免疫印迹检测C085对Bcr-Abl和下游信号转导通路蛋白的磷酸化水平及其他凋亡相关蛋白表达的影响；JC-1荧光染色法检测C085对细胞线粒体膜电位的影响；集落形成法观察C085对CML病人骨髓CD34＋细胞增殖的影响。
结果 C085低浓度下即可抑制K562／G01的增殖，且可非ATP竞争性地抑制野生型及IM耐药点突变Abl 激酶的活性；C085可抑制Bcr-Abl的自磷酸化，下调下游信号转通路蛋白的磷酸化水平和凋亡相关蛋白的表达，作用强于IM，具有明显的量效关系；C085通过直接作用于线粒体的PT孔使其开放，激活凋亡相关蛋白，诱导细胞凋亡，促凋亡作用强于IM；镜下观察及集落数量统计发现，C085可对已经产生IM耐药的CD34＋祖／干细胞集落有明显的抑制作用。
结论C085可抑制K562／G01细胞的生长可能与其抑制Bcr-Abl蛋白激酶活性，下调相关信号通路；直接作用于线粒体的PT孔使其开放，激活凋亡相关蛋白，诱导细胞凋亡有关。
C085对IM敏感及耐药的白血病细胞均有杀伤作用，有望克服IM的耐药而成为新的TKI。
%Aim To find newkinase inhibitors that o-vercome the imatinib resistance in the treatment of chronic myeloid leukemia ( CML ) by synthesizing C085, a novel derivative of curcumin , and testing its activities against wild-type( WT) and imatinib-resistant mutant Abl kinases , as well as in imatinib-resistant CML cells in vitro.Methods Cell proliferation and apoptosis were examined using MTT assay and flow cy-tometry, respectively;Kinase activity was measured u-sing Kinase-Glo Luminescent Kinase Assay Platform in recombinant WT and mutant ( Q252H, Y253F, and T315I) Abl kinases.The phosphorylation levels of Bcr-Abl initiated signaling proteins were analyzed using Western blotting .Colony forming units ( CFU ) growth was used to test the effects of C 085 on human leukemia progenitor/stem cells.Results C085 suppressed the growth of imatinib-resistant K562/G01 cells and po-tently inhibited both WT and mutant ( Q252H, Y253F, and T315I) Abl kinase activities in a non-ATP com-petitive manner with the values of IC 50 at low nanomole levels.C085 dose-dependently down-regulated Bcr-Abl kinase activity in K562/G01 cells as judged by auto-phosphorylation and Stat 5 , Crkl phosphorylation , and inhibited the phosphorylation of downstream targets Raf,Mek and Erk with protein content reducing .C085 could directly impact mitochondrial PT hole and make it open, which prevents the activation of caspase cas-cade reaction and induces the apoptosis .Furthermore, C085 significantly suppressed CFU growth , implicating that C085 could inhibit human leukemia progenitor/stem cells.Conclusion C085 may inhibit K562/G01 cells through inhibiting Bcr-Abl kinase activity and down-regulating the downstreamsignal proteins .Di-rectly acting on mitochondrial PT hole and then activa-ting apoptosis-associated proteins are also involved in the pro-apoptotic effect of C085.C085 is a promising compound for the treatment of CML patients with Bcr-Abl kinase domain mutations that confer imatinib re-sistance .【总页数】8页(P1004-1011)【作者】吴莺;吴丽贤;许建华【作者单位】福建医科大学药学院福建省天然药物药理学重点实验室，福建福州350122; 福建医科大学药学院天然药物学系，福建福州 350122;福建医科大学药学院福建省天然药物药理学重点实验室，福建福州 350122;福建医科大学药学院福建省天然药物药理学重点实验室，福建福州 350122【正文语种】中文【中图分类】R282.71;R329.24;R329.25;R345.57;R733.7;R979.1【相关文献】1.姜黄素调控自噬抑制K562细胞增殖的体外研究 [J], 于波海;于鑫;王鑫;滕旭2.姜黄素衍生物C085对K562细胞的作用及机制研究 [J], 吴莺;陈瑞家;吴丽贤;许建华3.姜黄素衍生物对K562细胞酪氨酸激酶活性的影响 [J], 许娇红;张志强;刘洋;许建华4.姜黄素衍生物Fm04抑制K562细胞增殖及其对P210bcr/abl信号通路的影响[J], 李娜;吴丽贤;温彩霞;黄秀旺;许建华5.BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂STI571选择性诱导K562细胞凋亡 [J],因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
姜黄素诱导K562细胞凋亡及其对细胞周期各时相影响
姜黄素诱导K562细胞凋亡及其对细胞周期各时相影响回学军;孙冬;于庭;李树岩;吴东辉【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2008(012)007【摘要】目的探讨姜黄素诱导人红白血病细胞(K562)凋亡机制及其对细胞周期各时相变化.方法应用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术检测不同浓度的姜黄素对K562细胞增殖抑制率.细胞周期及凋亡率变化,并通过电子显微镜观察其亚细胞结构改变.结果姜黄素对K562有明显的增殖抑制作用,且呈剂量依赖性,流式细胞术结果显示,G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,电子显微镜结果显示,细胞空化,线粒体肿胀,染色质趋边凝集.结论姜黄素对K562细胞有明显的抑制作用,阻止G1期细胞向S期细胞转化进程,诱导K562细胞凋亡.【总页数】3页(P851-853)【作者】回学军;孙冬;于庭;李树岩;吴东辉【作者单位】吉林大学第二医院,吉林,长春130041;吉林大学第二医院,吉林,长春130041;吉林大学第二医院,吉林,长春130041;吉林大学第二医院,吉林,长春130041;吉林农业大学职工医院【正文语种】中文【中图分类】Q2【相关文献】1.榄香烯诱导SHG-44细胞凋亡和对细胞周期各时相的影响 [J], 李英夫;宣兆博;廉晓宇2.苯乙酸钠联合热疗诱导Hep-2细胞凋亡及其对细胞周期各时相的影响 [J], 徐艳霞;陈鸥;赵明;程鹤香;孙立群;付仲鹰;韩岚3.姜黄素诱导Hep-2细胞凋亡及其对细胞周期各时相的影响 [J], 孙立群;陈鸥;赵明;韩岚4.榄香烯诱导Hep-2细胞凋亡及其对细胞周期各时相的影响 [J], 刘跃明;孙立群;王义5.苯乙酸钠诱导SW480细胞凋亡及其对细胞周期各时相的影响 [J], 孙鹏达;房学东;朱甲明;靳衡因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
姜黄素对K562细胞TopoI作用的研究
姜黄素对K562细胞TopoI作用的研究吴秋玲;陈燕;陈卫华;何静【期刊名称】《临床血液学杂志》【年(卷),期】2006(19)6【摘要】目的:观察姜黄素对白血病细胞株K562细胞拓扑异构酶TopoI表达的影响。
方法:流式细胞术及RT-PCR法分析姜黄素作用K562细胞后TopoⅠ蛋白及mRNA含量的变化。
结果:TopoI在K562细胞中高表达,TopoI蛋白的平均荧光强度为84.31±4.26,显著高于阴性对照组3.82±0.17(P<0.01);流式细胞术及RT-PCR 法均提示姜黄素能显著抑制TopoⅠ的表达,25μmol/L姜黄素能抑制K562细胞TopoI蛋白的表达超过一半以上,并且随着剂量的增加,姜黄素的抑制作用逐步增强。
结论:姜黄素可通过抑制TopoI的表达来抑制K562细胞的增殖,是一种新的TopoI 抑制剂,具有良好的临床应用前景。
【总页数】3页(P352-354)【关键词】姜黄素;K562细胞;拓扑异构酶Ⅰ【作者】吴秋玲;陈燕;陈卫华;何静【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所【正文语种】中文【中图分类】R97【相关文献】1.姜黄素联合PDTC体外抗白血病K562细胞的作用研究 [J], 高荧;于宜平;苗久旺;张钦德2.姜黄素对白血病K562细胞增殖抑制作用的研究 [J], 潘红宁;梁中琴;贾艳丽;李君3.姜黄素衍生物C085对K562细胞的作用及机制研究 [J], 吴莺;陈瑞家;吴丽贤;许建华4.姜黄素与 STI571对慢性粒细胞白血病细胞株K562作用的体外研究 [J], 张昆仲;许建华;黄秀旺;吴丽贤;温彩霞;陈元仲5.姜黄素诱导K562细胞自噬的抗瘤作用研究 [J], 于鑫; 卢发强; 宗成国; 张卫军; 牟锐; 魏丹冰; 范世珍; 于波海因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
姜黄素抑制k562细胞生长并诱导凋亡机制的研究
姜黄素抑制k562细胞生长并诱导凋亡机制的研究王西阁;胡姬婷;栾斌;汤有才;王晓格【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2009(49)49【摘要】目的探讨姜黄素抑制人类红白血病细胞(k562细胞)生长并诱导凋亡的机制及其对细胞凋亡相关基因BCL-XL和BAK表达的影响.方法把不同浓度姜黄素加入k562细胞,流式细胞仪检测其凋亡及其细胞周期的变化,RT-PCR方法检测BCL-XL和BAK mRNA的表达,免疫组化方法检测BCL-XL和BAK蛋白的表达.结果姜黄素可以对k562细胞有较明显的增殖抑制作用,且呈剂量依赖,流式细胞术结果显示姜黄素浓度在100 μmol/L时作用24、48 h后,凋亡率高于对照组(P＜0.05);随着姜黄素浓度增加,作用于k562细胞后可以使其倍增时间明显延长,G1期细胞增多,S期细胞减少;RT-PCR结果显示姜黄素能下调k562细胞BCL-XL表达,上调BAK mRNA的表达(P＜0.05),免疫组化法发现姜黄素可以降低BCL-XL表达,升高BAK的表达(P＜0.05).结论姜黄素对k562细胞的生长有较明显的抑制作用,且呈一定时间与剂量关系,并促进k562细胞凋亡,可能和下调BCL-XL的表达和上调BAK的表达相关.【总页数】3页(P73-75)【作者】王西阁;胡姬婷;栾斌;汤有才;王晓格【作者单位】郑州大学第三附属医院,郑州450052;郑州大学第三附属医院,郑州450052;郑州大学第三附属医院,郑州450052;郑州大学第三附属医院,郑州450052;郑州大学第三附属医院,郑州450052【正文语种】中文【中图分类】R733.7【相关文献】1.苦参碱抑制慢性粒细胞白血病K562细胞生长和诱导凋亡作用研究 [J], 吕晓霞;蒋丽佳;范静;王朵勤;唐敏;夏蕾;马玲娣2.柠檬醛抑制NB4细胞生长并诱导凋亡机制的研究 [J], 程歆;夏海龙;陈晓文3.地塞米松对K562细胞增殖抑制作用及诱导凋亡机制的研究 [J], 刘畅;金丹婷;钟梁;刘北忠;王东生;郝坡;王翀;王春光4.白花蛇舌草醇提取物对K562细胞的生长抑制及诱导其凋亡的研究 [J], 朱大诚;赵志冬;高永涛;周军;欧阳永伟5.姜黄素抑制硝普钠诱导的大鼠软骨细胞凋亡机制研究 [J], 袁伟;卞阳阳;朱恒杰;程少文;彭磊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Celecoxib对羟基脲抗K562细胞增殖作用的增敏效应和机制
Celecoxib对羟基脲抗K562细胞增殖作用的增敏效应和机制刘定胜;张广森【期刊名称】《中南大学学报（医学版）》【年(卷),期】2004(029)005【摘要】目的:确定celecoxib对羟基脲的抗K562细胞增殖作用是否存在增敏效应并探讨其分子机制.方法:用低剂量celecoxib(40 μmol/L)、羟基脲(10 mmol/L)以及二者合用分别干预K562细胞,用MTT试验、DNA裂解片段分析、Western 印迹及RT-PCR技术分析药物对K562细胞增殖、凋亡的影响和机制.结果:40μmol/L celecoxib与10 mmol/L羟基脲共同干预K562细胞,较之单用低剂量的Celecoxib或羟基脲抑制K562细胞增殖活力和诱导细胞凋亡效应更明显.Celecoxib联合羟基脲可明显抑制K562细胞环氧化酶-2(COX-2)蛋白和mRNA表达.结论:Celecoxib对羟基脲的抗K562细胞增殖作用具有增敏效应,其机制可能与药物下调K562细胞COX-2表达有关.【总页数】5页(P495-499)【作者】刘定胜;张广森【作者单位】中南大学湘雅二医院血液科/分子血液病研究室,长沙410011;中南大学湘雅二医院血液科/分子血液病研究室,长沙410011【正文语种】中文【中图分类】R979.1【相关文献】1.阻断Hh信号通路活性增敏Let-7抑制三阴性乳腺癌细胞增殖的作用及机制研究[J], 牛云霞;张博;王培礼;肖国栋;刘大鹏;蒙锦莹2.低表达Nrf2增敏奥沙利铂抗H460细胞增殖作用 [J], 辛爱;任环宇;唐修文3.阿司匹林对顺铂抗卵巢癌作用增敏效应的体外实验研究 [J], 王艳;王立;王战云;计红萍4.姜黄素联合阿霉素对肝癌PLC/PRF/5细胞增殖凋亡及化疗药物增敏的作用及机制研究 [J], 刘学飞;张俊梅;徐龙5.Celecoxib在人癌裸鼠移植瘤抗癌与放射增敏的作用机制研究 [J], 高晓会;于世英;许三鹏;袁响林;徐姣珍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
姜黄素衍生物对K562细胞酪氨酸激酶活性的影响
姜黄素衍生物对K562细胞酪氨酸激酶活性的影响许娇红;张志强;刘洋;许建华【期刊名称】《福建医科大学学报》【年(卷),期】2010(044)003【摘要】目的研究姜黄素(Cur)衍生物对K562细胞酪氨酸酶激活性的影响,从中筛选酪氨酸激酶(PTKs)抑制剂.方法以PGT[聚谷氨酸钠∶酪氨酸(4∶1)]为激酶反应底物包被96孔酶标板,以磷酸化酪氨酸特异性单克隆抗体为第一抗体,应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测反应体系中加入的K562细胞裂解液PTKs对反应底物PGT的酪氨酸残基磷酸化的程度,以此测定K562细胞裂解液中的PTKs活性.在此反应体系中加入不同浓度的Cur衍生物,观察对PTKs活性的影响.结果对Cur衍生物进行筛选,得到4种PTKs抑制剂,分别为Cur衍生物FM0815、FM0817、FM0822及FM0824.4个Cur衍生物对PTKs活性的抑制均明显强于Cur,且呈量效、时效关系.结论 Cur衍生物FM0815、FM0817、FM0822及FM0824具有显著的PTKs活性抑制作用.【总页数】4页(P165-167,171)【作者】许娇红;张志强;刘洋;许建华【作者单位】福建医科大学,药学院,药理学系,福州,350004;福建医科大学,新药研究所,福州,350004;福建医科大学,药学院,药物化学系,福州,350004;福建医科大学,药学院,药理学系,福州,350004;福建医科大学,新药研究所,福州,350004【正文语种】中文【中图分类】R282.710.5;R977.3;R345.5【相关文献】1.姜黄素衍生物FM17对K562细胞增殖影响及其与P210bcr/abl激活的信号途径关系 [J], 陈云艳;许建华2.苦参碱对K562细胞蛋白酪氨酸激酶及磷酸酶活性的影响 [J], 刘北忠;蒋纪恺;何於娟;张彦;刘小珊3.姜黄素衍生物Fm04抑制K562细胞增殖及其对P210bcr/abl信号通路的影响[J], 李娜;吴丽贤;温彩霞;黄秀旺;许建华4.抗ABL胞内抗体对K562细胞酪氨酸激酶活性的影响 [J], 徐冬;付晓达;魏枫5.姜黄素衍生物FM17对K562细胞增殖影响及其与P210^bcr/ab1激活的信号途径关系 [J], 陈云艳;许建华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
姜黄素与伊马替尼体外协同抗慢性粒细胞白血病的分子机制研究的开题报告
姜黄素与伊马替尼体外协同抗慢性粒细胞白血病的分子机制研究的开题报告一、研究背景慢性粒细胞白血病 (CML) 是一种源于骨髓干细胞的克隆性肿瘤，其致病基因 BCR-ABL1 活性蛋白的存在是 CML 的重要表征，而且已被广泛认为是 CML 的病理学机制之一。
目前，伊马替尼是一种用于治疗 CML的常规药物。
但是，由于药物耐受性和副作用等问题，寻求具有相对慢增殖率和较强药效的天然化合物是CML治疗研究的热点之一。
姜黄素作为一种广泛存在于植物中，具有多种生物活性的相对温和天然产物，被认为有可能成为CML治疗的理想补充药物。
二、研究目的本项目旨在研究姜黄素与伊马替尼的协同抗CML 作用及其分子机制，为进一步探索姜黄素在 CML 治疗中的潜在作用提供理论基础。
三、研究方法1.细胞培养及处理：人类 CML 培养细胞K562将用于本实验。
K562细胞将分为4组处理：对照组、伊马替尼组、姜黄素组、联合组。
2.检测细胞增殖和凋亡：本研究将使用CCK-8和Annexin V-FITC/PI 双染色法检测各组细胞的增殖和凋亡情况。
3.检测细胞周期变化：细胞周期的变化将通过FLUORESCENT-PLUS流式细胞术检测。
4.检测相关信号通路蛋白的表达：使用蛋白质印迹分析法检测各组细胞中相关信号通路蛋白的表达情况，例如 BCR-ABL1 的活性、磷酸化ERK、AKT 和 p38MAPK等。
四、预期结果1.合作作用：组合处理姜黄素和伊马替尼将明显增强对白血病细胞K562的抑制作用。
2.细胞周期的改变：组合处理下细胞周期的变化将比伊马替尼单独处理更明显, CML 细胞的增殖能力将显著下降。
3.相关信号通路蛋白表达的变化：组合处理将会显著地减少活性BCR-ABL、降低ERK和AKT的磷酸化水平, 并增加 P38MAPK 的磷酸化水平，细胞凋亡相关的 Bax 和 Cleaved Caspase-3 将会增加，而 Bcl-2 将会减少。
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文章编号:1000-2235(2000)03-0228-03姜黄素与羟基脲对K 562细胞的体外联合作用赵 蓉1 许建华2 柯丹如2 林 溪2 陈元仲3摘要: 目的 了解姜黄素与羟基脲合用对人白血病K 562细胞的体外作用。
方法 采用M T T 法测定药物的体外杀伤作用,应用A O/EB 荧光染料染色观察药物诱导细胞凋亡,金氏公式进行联合用药分析。
结果 姜黄素5,10 g /ml,羟基脲25,50 g/ml 同时给药,对K 562细胞可产生单纯相加的协同杀伤效果。
姜黄素与羟基脲同时给药诱导K 562细胞凋亡率高于羟基脲单独用药,低于姜黄素单独用药。
结论 姜黄素与羟基脲同时联合用药可产生单纯相加的协同杀伤效用,姜黄素可部分逆转K 562细胞对羟基脲诱导凋亡的抗药性。
关键词: 姜黄素;羟基脲;药物协同作用;抗肿瘤活性;K 562细胞株;白血病,幼红细胞,急性中图分类号:R282.71;R 979.19;R329.24;R 730.21 文献标识码: A收稿日期:2000-04-24基金项目:福建省自然科学基金资助项目(C992001)作者单位:福建医科大学,福州 350004 1.肿瘤研究室,2.临床药理研究所,3.福建省血液病研究所作者简介:赵 蓉(1957～),女,实验师. 姜黄素(Curcumin ,Cur )系从姜科植物姜黄中提取的酚性色素,因其抗突变、抗促癌作用而渐渐受到人们的重视。
前文报道[1]Cur 与5-氟脲嘧啶合用,对人慢性粒细胞白血病K562细胞不论在细胞杀伤还是诱导凋亡方面,均显协同作用。
羟基脲在临床上用于治疗慢性粒细胞白血病,文献报道K 562细胞对羟基脲诱导凋亡有显著的抗药性[2]。
Cur 可否逆转K 562细胞对羟基脲诱导凋亡的抗药性,未见文献报道。
本文探讨两药对K 562细胞的体外联合作用,为姜黄素的深入研究及应用奠定基础。
1 材料与方法1.1 药品与试剂 Cur 按文献[3]由本所从福建建阳地区所产姜黄(Curcuma L onga L.)中提取、分离,经硅胶薄层鉴定,与标准品的比移值相同。
羟基脲(hy dro xyurea ,HU )Sigm a 产品,吖啶橙(AO )及溴乙锭(EB )为Fluka 公司产品。
RPM I 1640培养基为GIBCO 产品。
胎牛血清、小牛血清为上海轻工所产品。
MT T 为华美生物工程公司产品。
酶标仪550为BIO -RAD 产品。
1.2 细胞株及培养条件 人慢性粒细胞白血病K562细胞株为本室保种,用内含5%胎牛血清、8%小牛血清及100IU /ml 青霉素、100 g /m l 链霉素的RPM I 1640培养基培养、传代,取对数生长期细胞用于实验。
1.3 不同浓度的Cur 与HU 对体外培养细胞杀伤作用的测定 在96孔培养板上,接种K562细胞,接种量(0.5～2)×104个/孔,同时加入等体积不同浓度组合的Cur 、HU ,37℃,5%CO 2培养48h,加入5m g /m l 的M TT 溶液20 l /孔,继续培养4h 后,加入裂解液(10%SDS 、5%异丁醇,用HCl 调至pH 4.5),37℃放置过夜,用酶标仪测各孔的A 550值。
1.4 不同浓度的Cur 与HU 诱导细胞凋亡作用的测定 细胞加入不同浓度Cur 、HU 溶液培养48h 后,用AO/EB 混合荧光染料染色,按文献[4]的方法,计数凋亡细胞的个数,在荧光显微镜下可见4种细胞。
活细胞:核染色质被AO 染成绿色并呈正常结构;早期凋亡细胞:核染色质着绿色并呈固缩状或圆珠状;晚期凋亡细胞:膜受损,核染色质被EB 染成桔红色并呈固缩状或圆珠状。
分类计数100个细胞,计算凋亡率(早期凋亡细胞数+晚期凋亡细胞数/计数细胞总数×100%)。
1.5 数据分析 按金正钧公式[q=Ea+b/Ea+Eb -Ea ×Eb ][5]评价两种药物合用是否有协同或拮抗作用。
式中Ea+b 为合用药物的有效率,Ea 、Eb 分别为A 药、B 药单独用药的有效率。
若q 值在0.85～1.15范围内,为两药合用单纯相加,q 值> 1.15为增强,q 值<0.85则表示两药合用有拮抗作用。
2 结 果2.1 不同浓度Cur 、HU 对K562细胞体外杀伤作用(表1) 对K 562细胞体外杀伤,Cur 5,10 g /ml 分别为20.6%,57.7%,HU 25,50 g/m l 分别为228J ou rnal of Fu jian M edical Un iversity Vol.34 No.3 S ep,200012.4%,16.3%,当两者合并用药时,其抑制率均高于Cur、HU单独用药,但其0.85<q< 1.15,说明Cur、HU不同浓度对K562细胞体外杀伤呈相加作用。
表1 Cur与HU对K562细胞杀伤的共同作用C ur HU( g/ml)OD值抑制率(%)q00 1.300±0.05850 1.032±0.03420.6±0.0261000.550±0.07457.7±0.056025 1.139±0.06512.4±0.050050 1.088±0.05216.3±0.0405250.918±0.07029.4±0.0540.966 5500.907±0.00930.2±0.0060.900 10250.480±0.04763.0±0.036 1.001 10500.473±0.04363.6±0.0330.9852.2 Cur、HU不同浓度诱导K562细胞凋亡(表2)表2 Cur与HU诱导K562细胞凋亡Cu r HU( g/ml)凋亡率(%)q值0005027100700254050352580.26855070.2411025230.3231050570.804Cur5,10 g/ml诱导K562细胞凋亡率分别为27%,70%,HU25,50 g/ml诱导K562细胞凋亡率仅为4%,3%,当两药合用时,其联合用药的凋亡率高于HU单独用药,而低于Cur单独用药,说明Cur对HU诱导K562细胞凋亡有一定的促进作用,可在一定程度上逆转K562细胞对H U诱导凋亡的抗药性,这种逆转的趋势随Cur浓度的升高而增强。
反之HU对Cur诱导K562细胞凋亡呈现一定的拮抗作用。
这种拮抗作用随Cur浓度的升高而下降。
尽管q值随Cur浓度的升高而升高,但在本文的条件下q值仍<0.85,故Cur与HU同时合用,在诱导K562细胞凋亡效果方面还未达到相加的标准,仍属拮抗范畴。
3 讨 论本文结果表明,Cur与H U对K562细胞的体外联合用药可产生相加的细胞毒效果,但在诱导K562细胞凋亡方面,Cur虽可部分逆转K562细胞对HU诱导凋亡的抗药性,且逆转趋势随Cur浓度的升高而增强。
但在本文的条件下还未能达到相加的协同诱导凋亡效果。
这一现象提示Cur除诱导细胞凋亡外,还可能通过其他机制与HU产生相加的联合作用,值得深入研究。
K562细胞由于含有bcr-abl融合基因,该基因编码分子量为210kD的产物蛋白p210bcr-abl,具有很强的酪氨酸蛋白激酶活性[6],可抑制药物引起的细胞DNA损伤与诱导凋亡信号通路的偶联[7],所以K562细胞对包括HU在内的多数化疗药物诱导凋亡产生抗药性。
已知Cur为受体酪氨酸蛋白激酶的抑制剂[8],本文结果表明,Cur可部分逆转HU对K562细胞诱导凋亡的抗药性,提示Cur可能对p210bcr-abl的酪氨酸蛋白激酶活性也有一定的抑制作用,有待进一步证实。
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