人K562细胞系染色体标本制备及核型初步分析
Hemin诱导K562细胞红系分化过程中BCRabl基因表达的变化及意义
中文摘要HEMIN诱导人白血病细胞K562红系分化过程中BCR/ABL的变化及其意义背景及目的目前，对于高铁血红素（Hemin）诱导人白血病K562细胞可以导致其向红系分化已经研究的十分明确，关于这一过程中比较明确的机制是利用高铁血红素（Hemin）促进红系特异性转录因子或辅因子的表达,但该过程中K562细胞的特异性融合基因BCR/ABL有无变化国内外尚未见明确报道。
本研究拟通过建立应用高铁血红素（Hemin）诱导K562细胞红系分化的模型，从而从宏观上（包括细胞形态的改变、细胞活性的改变），微观上（蛋白和基因水平上）分别探究这一过程中K562细胞所发生的变化及BCR/ABL融合基因的表达变化,以期待对于白血病细胞的红系分化的内在调控作进一步研究，并为酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosine Kinase Inhibitor, TKI）耐药的患者治疗提供新的思路。
方法1.分别应用不同浓度的高铁血红素（Hemin）（0、10、20、30、40、50μmol/L）刺激K562细胞24小时诱导其红系分化，光学显微镜下观察Hemin诱导前后K562细胞的形态变化；2.联苯胺染色法验证Hemin诱导K562细胞红系分化；3.采用CCK-8法分别检测0、10、20、30、40、50μmol/L浓度的Hemin诱导24小时后K562细胞的增殖活性；4.分别提取不同浓度组细胞的RNA及蛋白后做实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR)及蛋白质印迹分析（Western Blot）分别从基因和蛋白水平检测各组细胞中BCR/ABL融合基因的表达情况。
结果人白血病K562细胞经过不同浓度的Hemin（0、10、20、30、40、50μmol/L）的诱导24小时后，细胞形态与对照组相比体积变大，核浆比例减少，胞质增多；进行CCK-8活性检测发现各组细胞的增殖活性较对照组降低；将不同浓度的Hemin诱导后的K562细胞24小时后提取RNA进行实时荧光定量PCR检测发现BCR/ABL融合基因的表达下调且下调的程度与Hemin的浓度成正比；提取不同浓度Hemin诱导24小时后的K562细胞的蛋白，进行Western Blot分析发现随着Hemin浓度的升高融合基因蛋白的表达量逐渐减低。
染色体标本的制备及组型观察实验报告
染色体标本的制备及组型观察实验报告细胞生物学实验报告染色体标本的制备及组型观察1.实验目的：掌握染色体标本制作的基本方法；认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。
2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯（1）实验药品：蒸馏水、0.9% NaCl溶液、0.3% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素（2）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）制作染色体标本的意义：了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图染色体组型：把真核动物一个体细胞各染色体按长度、形状、着丝粒位置排列成一定顺序。
染色体核型：某一物种特有的一组或一套染色体的形态特征。
（2）染色体组型图的应用①鉴别生物种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；马64条②遗传病的诊断和研究：三体综合征（含三条21号染色体）、卵巢退化症（含45条染色体，比正常人缺少一条性染色体）、睾丸退化症（含47条染色体，比正常人多一条X或Y染色体）等因此，我们可以给孕妇抽取羊水检查器胎儿的染色体，做遗传病早期诊断。
（3）染色体标本的制作①观察：由于分裂期中期的染色体染色体凝集程度最高，因而我们应尽量使细胞停留在分裂期中期以便观察。
②细胞：为尽量看到多的染色体，我们应当选取具有旺盛分裂能力的细胞，这样的细胞可以来自:胸腺、骨髓、睾丸、小肠等。
我们在此实验中使用的是小鼠的精巢细胞。
在做人的染色体标本时，我们使用的是血液里的淋巴细胞。
③药物：PHA（植物细胞凝集素）：PHA具有促进细胞凝集和分裂的作用。
PHA可以使血液中的淋巴细胞还原至淋巴母细胞（只存在于骨髓中）秋水仙素：秋水仙素可以破坏微管的组装，纺锤体不能形成，细胞分裂停在中期。
与秋水仙素作用相同的药物还有长春花碱、鬼臼素、苯环己烯等。
可以促进胃管组装的药物有紫杉酚、重水等。
人类染色体标本制备及核型分析共44页文档
1、纪律是管理关系的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
5、教导儿童服从真理、服从集体，养 成儿童 自觉的 纪律性 ，这是 儿童道 德教育 最重要 的部分 。—— 陈鹤琴
61、奢侈是舒适的，否则就不是奢侈 。——CocoCha nel 62、少而好学，如日出之阳；壮而好学 ，如日 中之光 ；志而 好学， 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也，匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里，与其说好 的教师 是幸福 ，不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战，就可以享受胜利的喜悦 。——杰纳勒 尔·乔治·S·巴顿
实验四 人类染色体的识别及核型分析
G显带
}
}
人染色体标本经胰蛋白酶、Na0H、柠檬酸盐或尿 素等试剂处理后，再用Giemsa染色，可使每条染 色体上显示出深浅交替的横纹，这就是染色体的G 带。每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所 以G显带后，可以较为准确的识别每条染色体，并 可发现染色体上较细微的结构畸变。 一般认为，易着色的阳性带为含有AT多的染色体 节段，相反，含GC多的染色体段则不易着色。总 的来说，G显带的机理还未搞清.
该条染色体长度/∑22条染色体长度+X染色体长
10 遗传学实验 2008-3
3、关于剪贴、原则排列
排列——原则： 从大到小； 短臂向上； 着丝粒在一条线上； 性染色体单排。
11
遗传学实验
2008-3
五、实验要求
} } }
编号 绝对 长度
1、对给出的图象进行测量、配对填表2。 2、按照Denver体制规定，分组贴图。
3 遗传学实验 2008-3
二、实验原理——人类染色体 实验原理——
}
}
}
2．人类的单倍体染色体组（n=23）上约有30000-40000 个结构基因。平均每条染色体上有上千个基因。各染色体 上的基因都有严格的排列顺序，各基因间的毗邻关系也是 较为恒定的。 人类的 24种染色体形成了24个基因连锁群，所以，染色体 上发生任何数目异常、甚至是微小的结构变异，都必将导 致许多获某些基因的增加或减少，从而产生临床效应。 染色体异常常表现为具有多种畸形的综合征，称为染色体 综合征，其症状表现为多发畸形、智力低下和生长发育异 常，此外还可看到一些特征性皮肤纹理改变。染色体畸变 还将导致胎儿死产或流产。染色体病已成为临床上较常见 的危害较为严重的病种之一，染色体病的检查、诊断已经 成为临床实验室检查的重要内容。
人K562细胞系染色体标本制备及核型初步分析
• 或者细胞系增殖至旺盛期，此时加入秋水仙素抑 制细胞分裂，使其停止在中期以获得足够的分裂集、低渗、固定、制片、染 色后镜下观察进行核型分析。
以外周血为例，实验流程如上
终止培养前2-4小时，加入秋水仙素
人K562细胞系染色体标本制备 及核型初步分析
医学遗传教研室 2016.11
实验目的
• 熟悉人类有核细胞（k562）染色体标本的 制备方法。
• 熟悉染色体核分裂相的初步分析。
实验原理
• 染色体:见于细胞有丝分裂过程中,通常利用有核细 胞（如外周血、细胞系、羊水、绒毛）制备染色 体标本，显微镜下观察。
↓
1200 rpm离心6-8min
↓
↓ 留少量固定液制成细胞悬液(沉淀高度的1-2倍)
↓ 滴片（1-2滴至凉玻片），干燥
↓ 吉姆萨染液染5min
↓ 冲洗玻片（背面）
↓ 风筒吹干
↓ 镜下观察
终止培养、收集、低渗、固定
滴片，吹干
染色，去浮色
如何使用显微镜
• 首先，肉眼观察玻片上染料的痕迹; • 然后，10倍镜下聚焦，微移载物台，将理想的核分裂相调
至视野中央； • 物镜切换为40倍,再次微调至视野清晰，并选择理想的核
分裂相调整至视野中央；挪开镜头，滴1滴镜油； • 物镜切换为100倍,微调至清晰图像,观察记录分析； • 使用后，关掉电源，用擦镜纸沾二甲苯脱镜油。
K562核分裂像
细胞染色体数目变异范围为 44～ 71, 干系核型为亚三倍体 ,染色体众数为 6 2± 2
④标本固定不充分：如固定液不新鲜，或甲醇、冰醋酸的质 量不佳，则染色体模糊，或残留胞浆痕迹，使背景不清；
人类染色体标本的制备及G显带核型分析
安徽医科大学基础医学院生物学教研室
[目的和要求]
1. 掌握染色体标本的制备方法和G显带技术。 2. 熟悉人类外周血淋巴细胞的培养方法及G显带 染色体的核型分析技术。
[实验原理]
染色体作为细胞遗传信息的载体，出现于有丝分 裂期。用于人类染色体标本制备的材料可为骨髓细胞、 外周血淋巴细胞、绒毛细胞、羊水细胞等。其中最简 便的就是抽取少量外周静脉血进行短期培养，经秋水 仙素处理（秋水仙素可阻断有丝分裂期细胞中微管的 聚集，使纺锤体不能形成，从而使有丝分裂停滞在中 期时相，此时染色体具有最典型的形态），再经低渗、 固定等处理，获得更多的中期分裂相以用于核型分析。
基因组与核型 基因组：生物体内单倍体染色体组成叫做生物体的 基因组(genome)，它代表了一个生物体染色体中储 存的全部遗传信息。 人类体细胞的正常核型
组 染色体号
1 2 3
主要特征
中央着丝粒染色体 亚中着丝粒染色体
大
A组 B组
4 ———— 5 6 ———— 12、X 13 ———— 15 17 16 18
正常男性染色体G-显带核型
人类染色体G-显带特征口诀：
一秃二蛇三蝶飘 六号是个小白脸 十号长臂近带好 十三四十五 十六q2缢痕大 十八人小肚皮大 二十头重又脚轻 二十二头带小黑帽
四鞭炮五黑腰 七上八下九苗条 十一低来十二高 下、中、上 十七长臂带脚镣 十九一点腰 二十一象个葫芦瓢 X一担挑，Y是黑脚
[注意事项]
1. 染色体标本制备中的关键因素包括秋水仙素的用量 和作用时间、低渗和固定的处理。其中低渗时间很重要， 处理时间过长则细胞膜过早破裂导致染色体丢失，处理 时间不足则致染色体分散不好，不利于计数分析。 2. G显带过程中的关键因素包括胰蛋白酶的作用时间、 温度、pH等。其中胰蛋白酶溶液应37℃充分预热，溶液 pH应维持在6.8～7.2，以保证酶活性的发挥。另外消化 要适度，消化不足则带纹不清晰或不显示，消化过度则 带纹模糊甚至损失。
人类染色体标本制备及核型分析(1)
图像分析
核型描述与命名
将观察到的染色体图像进行数字化处理， 利用计算机图像分析技术对染色体进行自 动或半自动的识别、测量和分类。
根据染色体的形态、结构和数量特征，对 核型进行描述和命名，建立核型数据库。
数据解读与报告生成
数据解读
通过对核型数据的解读，可以了解待测生物体的遗传特征、染色体变异情况以及与疾病的关系等信息 。
更好的分裂相。此外，对于某些难以染色的标本，可以尝试使用不同的
染色方法和染色剂。
结果判读和数据分析方法
要点一
结果判读
根据染色体的形态、大小和着丝粒位置等特征进行识别。 对于异常染色体核型，需结合临床信息进行综合判断。
要点二
数据分析
采用专业的染色体核型分析软件对实验结果进行统计分析 。通过比较正常和异常核型的比例、染色体变异类型及频 率等指标，评估标本的质量和实验结果的可靠性。
伦理道德审查
在应用染色体标本制备及核型分析技术时，应进行严格的 伦理道德审查。这包括评估实验目的、样本来源、数据使 用等方面的合规性和合理性，确保技术的使用符合伦理道 德要求。
保护个人隐私和权益
在染色体标本制备及核型分析过程中，应严格保护个人隐 私和权益。这包括确保样本信息的保密性、限制数据使用 和共享范围、尊重个人知情权和选择权等方面的措施。
人类染色体标本制备及核型分析
汇报人：XX
目录
• 染色体标本制备基础 • 核型分析原理及方法 • 人类染色体异常类型及影响 • 实验操作技巧与经验分享 • 临床应用前景与挑战
01
染色体标本制备基础
染色体概念及结构
染色体定义
染色体是细胞核内具有遗传信息 的线性结构，由DNA、蛋白质和 少量RNA组成。
人白血病K562细胞红系分化的研究进展
:O’基因是公认 的 能 抑 制 肿 瘤 发 生 的 基 因"即 抑 癌基因的 重 要 成 员%\O%$ 细 胞 株 在 7% 有 学 者 将 野 生 型 :O’ 基 因转染 _@Q$P_R 阳 性 :O’ 阴 性 的 \O%$ 细 胞"发 现 在抗肿瘤药物 依 托 泊 甙 !0+):)*5-0#的 作 用 下":O’ 转 染细胞不能于细 胞 周 期 Z$ 期 停 滞 而 诱 导 其 凋 亡"这 一机制可能是 \O%$细胞特异的"也可能是 由于 \O%$ 细胞有很强的抗 Z$ 检 查 点 所 致 的 细 胞 周 期 停 滞"并 对高水平的 JXP 损伤有耐受性%用另一 抗 肿瘤 药 物 诺考达唑!6)9)-8D)90#捕 捉 转 染 细 胞 和 控 制 细 胞 的 有 丝分裂期"发 现 转 染 细 胞 有 丝 分 裂 指 数 显 著 升 高"阐 明了在依托泊甙 作 用 下":O’ 取 消 了 Z$ 检 查 点"减 少 2/4$检查点 蛋 白 与 依 托 泊 甙 诱 导 @J\& 酪 氨 酸 &O !c&O#的磷 酸 化"从 而 增 加 了 \O%$ 细 胞 对 依 托 泊 甙 的 凋 亡 敏 感 性 "使 凋 亡 发 生 %
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国际检验医学杂志$""%年%月第$#卷第%期!I6+VR8? B0-!V,60$""%!W)9=$#!X)=%
人类染色体标本制备及核型分析
人类染色体标本制备及核型分析引言：一、人类染色体标本制备步骤：1.收集样本：收集需要研究的人类标本，可以是血液、组织、胎儿细胞等。
2.细胞培养：将收集的样本进行细胞培养，通常采用体外培养的方式，如使用无菌培养皿和细胞培养基。
3.处理样本：细胞培养达到一定数量后，可以使用震荡器等设备将细胞从培养皿上剥离下来，制备成单细胞悬液。
4.固定细胞：将细胞悬液进行固定处理，一般使用醋酸乙酯等有机溶剂将细胞固定在载玻片上。
5.染色：染色是核型分析的关键步骤，可以使用吉姆萨染色法、G显带染色法等多种染色方法，使染色体可见并呈现出特定的形态和颜色。
6.干燥和贴片：将染色的载玻片进行干燥处理，然后使用透明胶带将玻片贴到载玻片上。
二、核型分析方法：1.显微镜观察法：使用光学显微镜对染色体进行观察和分析，直接通过目视的方式判断染色体的形态和数量。
2.数字图像分析法：使用计算机图像分析系统对染色体图像进行数字化处理，通过计算机算法分析染色体的长度、形态、染色体异常等指标。
3.荧光原位杂交法（FISH）：利用标记有特定荧光标记物的探针与染色体特定区域发生互补结合，从而通过荧光显微镜观察染色体的特定区域。
4.光学显微镜配合显影法：使用特定的显影剂，使染色的染色体呈现出明亮的色带，详细观察和分析色带的大小、位置及形态等。
三、核型分析的意义：1.遗传病诊断：染色体核型异常与一些遗传疾病有关，通过核型分析可以确定染色体异常和遗传病的关联。
2.胎儿异常筛查：通过对孕妇的羊水或绒毛进行染色体核型分析，可以早期发现胎儿的染色体异常，如唐氏综合征等。
3.种群遗传学研究：核型分析可以用于研究人类群体的遗传多样性和进化关系，了解不同人群间的遗传差异。
4.基因定位：核型分析可以帮助确定染色体上的基因位置，进而研究与之相关的遗传疾病或性状。
结论：人类染色体标本制备及核型分析是一项重要的遗传学研究手段，通过制备标本和观察分析染色体，可以了解人类的遗传信息和与染色体异常相关的疾病。
人类染色体标本的制备与G显带核型分析报告
人类染色体标本的制备与G显带核型分析报告概述核型分析是指通过对细胞的染色体观察，了解它们的数量、形态，从而判断个体的性别以及是否存在染色体异常。
本文将介绍人类染色体标本的制备方法以及采用G显带染色技术进行核型分析的过程和结果。
材料与方法标本制备：1.通过体内生长的细胞系培养得到细胞，并将它们发送至染色体形态捕获系统实验室。
2.将收到的细胞进行样品准备。
先加入均浆剂净水，并初次混合。
待与细胞量相等的5％高马尔谷酸(Na2HPO4)特性缓冲液和1％偏硫酸，最后混合。
3.轻轻转动管子，并且离开它说较长时间，使得细胞得以与溶液完全变淡。
4.通过四氯化碳进行固定，直至样品中的细胞结构都没有被损坏。
5.利用各种化学剂处理样本，以预处理出更好的结构。
G显带染色：1.将钟室内的标本压片，使细胞的核形成按制定的标准排序，并在有机玻璃片底部粘贴。
2.加入如下染料：a. Giemsa液：Giemsa指的是罗马帝国时期的波尔多区Giemsa教授。
G显带染色技术将溶液中的Giemsa染色质直到他们的总量到达6倍于DNA总量。
Giemsa染料在滴定时间内还要使染色质呈现某些将染色质透过玻片清楚可见的颜色。
b. Sorenson’s Buffer：Sørensen’s缓冲液是一种被设计为模仿人类体液的缓冲液。
在G显带染色过程中，它发挥的作用是将不同颜色的细胞内组成分离出来，使得它们不会在一幅核型图像中混杂在一起。
3. 在加入染料后将玻璃片封起来，等待颜料与核相结合。
4. 将镜头放置在显微镜底座中，并通过显微镜观察标本。
分析：我们使用的显微镜是能见度很好的显微镜，能够让细胞结构非常清晰可见。
我们可以在屏幕上观察到标本图像。
我们首先计算出图像中每个单独的染色体的数目以及它们的大小和形状。
在一张图像上，我们可以很容易地区分每个单独的染色体，并根据它们的大小、形状和位置来确定它们在细胞核中的位置。
结果我们的细胞核型分析结果显示，这个体细胞核内的染色体数目为46个。
人类染色体标本制备及核型分析
显微镜使用与图像采集
显微镜类型
用于核型分析的显微镜主要有光学显微镜和电子显微镜两种 。
图像采集方法
通过显微镜观察染色体标本，使用相机或图像采集卡等设备 获取染色体图像。
染色体识别与计数
染色体识别
根据染色体的形态、大小、着丝粒位置等特征进行识别。
染色体计数
对识别出的染色体进行计数，得到细胞内的染色体数目。
遗传病预防
通过基因编辑等技术手段，对某些遗传病进行预防，降低后代患病 风险。
生育能力评估
对不孕不育患者进行染色体核型分析，评估其生育能力。
案例分析：成功解决遗传问题案例分享
案例一
一对夫妇因多次自然流产寻求遗传咨询，通过染色体核型分析发现女方存在染色体平衡易位，经过遗传咨询和辅助生 殖技术治疗，成功生育健康宝宝。
人类染色体标本制备及核型 分析
汇报人：XX
目录
• 染色体标本制备基础 • 人类染色体标本制备步骤 • 核型分析基本知识与技术 • 人类染色体异常类型与识别 • 临床应用与案例分析 • 实验注意事项与质量控制
01
染色体标本制备基础
染色体概念及结构
染色体定义
染色体是细胞核中容易被碱性染料染成深色的物质，主要是由DNA和蛋白质组 成，在细胞分裂间期呈染色质状态，进入分裂期则高度螺旋化呈短棒状的染色 体。
异常染色体识别技巧
01
观察染色体形态
异常染色体可能表现出形态上的 不规则，如断裂、缺失或重复等 。
02
分析核型图像
通过核型分析软件对染色体进行 排序和比对，识别异常染色体的 存在。
03
应用荧光原位杂交 技术
利用特定序列的荧光探针与染色 体上的目标序列进行杂交，从而 准确识别异常染色体。
慢性髓细胞性白血病K562细胞适体的筛选与鉴定
【摘 要 】目的 : 筛选并鉴定出慢性髓细胞性白血病 ( CML ) K562细胞的寡核苷酸适体. 方法 : 体外合成长度为 88 个碱 筛细胞 ,利用指数富集的配基系统进化 ( SELEX)技术筛选出 与 CML K562细胞特异结合的适体. 将筛选得到的适体回收 纯化后连接 pGEM 2T质粒载体 ,经蓝白筛选后 ,随机挑选 24 个克隆子进行序列测定. 采用荧光标记引物法检测 ssDNA 文 库与 K562细胞的亲和力 ,并用 Clustal 2. 05和 DNA sis V 2. 5 软件对适体序列进行一级结构同源性分析和二级结构预测. 结果 : 经过 13 轮循环筛选 , CML K562 细胞适体 的 A 值 从 0. 12上升到 1. 25,至第 13轮 A 值无明显增高. 一级结构分析 无同源序列 ,但可分为 6个家族 ,其中 5个家族各自具有保守 序列 ,家族 6无保守序列. 二级结构分析表明 ,适体形成的茎 环 、凸环结构可能是与 K562 细胞特异性结合的结构基础. 结论 : 利用 SELEX技术成功筛选出高亲和性的 CML K562细 胞适体. 【关键词 】白血病 ,髓样 ,慢性 ; K562细胞 ; SELEX;适体 【中图号 】R34 【文献标识码 】A
0 引言
指数富集的配基系统进化 ( systematic evolution ligands by exponential enrichm ent, SELEX) 技术经过 多轮筛选可获得高亲和力 、强特异性的寡核苷酸片 段. 近几年来 SELEX技术在实验诊断和疾病治疗 [ 1 ] 等方面的应用取得了较大进展 ,目前 SELEX技术已 经成功运用于许多靶物质的筛选 ,如蛋白质 、核酸 、金 属离子等 ,成功运用于如炭疽芽孢杆菌等许多疾病的 实验室检测 ,一些适体药物已经进入临床前期或临床 期试验 ,并逐步成为一类新型药物 [ 2 ] . 由于有关以白 血病细胞为靶分子筛选适体的研究还少见报道 ,目前 临床尚缺乏慢性髓细胞性白血病 ( chronic myelognous leukem ia, CML ) 的 特 异 性 基 因 诊 断 技 术. 我 们 以
遗传学实验
实验三人类和动物染色体标本的制备及核型分析一、人类体细胞染色体组型分析【实验目的】掌握人类体细胞染色体组型分析的方法。
【实验原理】核型（karyotype）是指一个细胞内的整套染色体按照一定的顺序排列起来所构成的图像。
通常是将显微摄影得到的染色体照片剪贴而成。
正常细胞的核型能代表个体的核型。
组型（idiogram）是以模式图的方式表示，它是通过对许多细胞染色体的测量取其平均值绘制而成的，是理想的，模式化的染色体组成。
代表了一物种染色体组型的特征。
核型的研究对人类医学遗传研究及临床应用，对探讨动植物起源、物种间亲缘关系，鉴定远缘杂种等方面都有重大意义。
染色体的特征以有丝分裂中期最为显著，所以一般都分析中期分裂相。
根据染色体着丝粒位置的不同，可将染色体分为中部着丝粒染色体（m），亚中部着丝粒染色体（sm），亚端部着丝粒染色体（st），端部着丝粒染色体（t）。
对任何一个染色体的基本形态学特征来说，重要的参数有三个：1．相对长度（relative length），指单个染色体长度与包括Ｘ（或Ｙ）染色体在内的单倍染色体总长之比，以百分率表示。
相对长度＝每个染色体的长度/单倍染色体＋X染色体总长度×1002．臂指数（am index ）：指长臂同短臂的比率，即臂指数＝长臂长度/ 短臂长度按Levan（1964）的划分标准：臂指数在1.0 ～1.7 之间称中部着丝粒染色体（m）；臂指数在 1.7～3.0 之间称亚中部着丝粒染色体（sm）；臂指数在3.0 ～7.0 之间称亚端部着丝粒染色体（st）；臂指数＞7.0 者为端部着丝粒染色体（t）。
３．着丝粒指数（centromere index），指短臂占该染色体长度的比率，它决定着丝粒的相对位置。
着丝粒指数＝短臂长度/该染色体总长×100按Levan（1964）的标准划分：着丝粒指数在50.0～37.5 之间称中部着丝粒染色体（m）；指数在37.5～25.0 之间称亚中部着丝粒染色体（sm）；指数在25.0～12.5 之间称亚端部着丝粒染色体（st）；指数在12.5～0.0 之间称端部着丝粒染色体（t）。
干货染色体核型分析技术
干货染色体核型分析技术染色体核型分析技术在遗传学研究特别是在人类染色体疾病的临床诊断方面有着十分广泛的应用，也是用于探明生物遗传与变异，染色体组演化和种属将亲缘关系的基本方法。
掌握染色体核型分析技术在促进正确解读生物的遗传多样性方面发挥着十分重要的作用。
今天，小编就带领大家深度解读一下染色体核型分析技术及如何来制作一张漂亮的染色体核型分析图。
背景知识核型（Karyotype）：亦称染色体组型，是指生物体细胞有丝分裂中期染色体组的表型，是染色体数目、大小、形态特征的总和。
体细胞具有两组同样的染色体，成为常染色体(2n)表示，与性别直接相关的染色体，称为性染色体。
每个配置带有一组染色体，叫做单倍体，用n表示，两性配子结合后，形成二倍体细胞。
核型分析：是按照染色体的数目、大小和着丝粒位置、臂比、次缢痕、随体等形态特征，对生物核内的染色体进行配对、分组、归类、编号等分析的过程。
核型图：为一个物种的核型模式，将染色体组全部染色体逐条按其长短、形态、类型特征规律性排列。
染色体形态分类：着丝点两侧部分称为染色体臂。
如两臂相等，则称为等臂染色体。
如两臂不相等，则分别称为长臂和短臂。
根据染色体着丝粒位置不同，可将染色体分为中部着丝粒（m）、亚中部着丝粒（sm）、亚端部着丝粒（st）和端部着丝粒（t）等不同形态，部分染色体具有随体和次缢痕。
辨别各对染色体时的常用形态指标是：测量染色体的长度、确定着丝点的位置、副缢痕及随体的有无。
染色体的长度较不固定，受遗传、环境因素的影响较大，但一般认为在一个细胞内的各条染色体的伸长和缩短是同比的。
因此，目前一般用相对长度来表示每条染色体的长度。
细胞分裂中期为染色体形态结构最典型的时期，通过选取伸展良好，形态清晰，有代表性细胞分裂相进行高倍拍摄，用于核型分析图片。
实验原理染色体标本制备为核心分析的关键，通常情况下，利用外周血淋巴细胞进行核型分析。
正常情况下，人体外周血淋巴细胞不再分裂，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴细胞转化成淋巴母细胞，使其恢复增殖能力。
细胞学自主实验 染色体核型分析
人体外周血淋巴细胞培养、染色体制备及染色体核型分析09级一班 3组摘要：细胞培养是指在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。
外周血中的小淋巴细胞几乎都处于G1期或G0期的非增殖状态。
体外培养时经一定剂量的植物血凝素（PHA）刺激，T淋巴细胞可转变为淋巴母细胞，重新进入增殖周期，进行有丝分裂。
处于增殖期的培养淋巴细胞经过秋水仙素处理，可停留在分裂中期或早中期，这一时期的染色体形态为棒状结构，是观察分析染色体的最佳时期一、实验目的1．学习人体细胞离体培养的方法；2．掌握制作人染色体标本的方法；3．观察人类染色体的形态和染色体数目；4．熟悉染色体核型分析。
二、实验原理细胞培养是一种程序复杂而又要求十分严谨的实验技术。
要使细胞在体外长期生存，必须模拟体内环境，共给细胞存活所必需的条件。
如供给适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖以及有关的生长因子；氧气及适宜的温度；注意调节其外环境的酸碱度（pH）与渗透压；以及为排除细胞代谢产物的危害，保持良好适宜的外环境而进行必需的传代等等。
所有这一切条件与操作都要保持在无菌条件下进行。
外周血淋巴细胞是不能增殖的分化细胞群，在体外无菌培养条件下，若于培养基中植物凝集素(PHA)则可刺激处于G。
期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞，重新获得有丝分裂的能力，经一段时间的培养即可获得大量分裂期细胞以供染色体分析。
秋水仙素(或秋水酰胺)可通过干扰微管组装而抑制纺锤丝形成，使细胞分裂顺利进入后期而停滞于中期，从而可在短期内积累大量最适于进行染色体分中期分裂相。
此外，秋水仙素还能使染色单体缩短、分开，使染色体呈现明显形而利于辨认与观察。
染色体标本制备过程中有两个重要环节，其原理是：(1)低渗处理：目的是使水分通过细胞膜向细胞内渗入，导致转化的淋巴细胞染色体进一步分散而利于分析。
同时，低渗处理还可使红细胞质膜破裂，经后血影浮于上清中被去除，后续的固定过程主要针对淋巴细胞，改善了淋巴细胞的固定质量及标本质量。
耐STI571的K562细胞株的建立及生物学特性考察
耐STI571的K562细胞株的建立及生物学特性考察目的：建立1株耐STI571的K562细胞，并对其生物学特性进行研究分析，探讨耐药机理。
方法：通过递增STI571药物浓度的方法，成功建立1株耐STI571人白血病细胞株K562/R，并采用RT-PCR、Western-blot、免疫组化、基因测序等生物学手段对其进行耐药机理进行分析。
结果：K562/R细胞株在STI571浓度高达1 μmol/L水平，仍能稳定生长，繁殖旺盛。
K562/R细胞株耐STI57程度较亲代K562细胞多达235倍，该耐药细胞株对HHT﹑VCR﹑DNR具有不同程度的交叉耐药性，与亲代K562细胞比较差异有统计学意义（P＜0.05）。
与亲代敏感株K562细胞相比，其BCR-ABL基因表达上调，BCR-ABL蛋白及其激酶过度表达。
结论：成功建立耐STI571人白血病细胞株K562/R，并对其生物学特性的研究，为STI571耐药机制的进一步深入研究和抗耐药抑制剂的筛选提供了有效的平台。
白血病（leukemia），俗称的血癌，是由多种病因诱发的一类造血干细胞克隆性恶性疾病，国内的发病率约为10万分之2.76，为儿童和35岁以下成人死亡的主要病因[1-2]。
慢性髓性白血病（CML）是一种起源于造血干细胞的恶性增生性疾病，临床上分期有慢性期、加速期和急变期[3]。
该疾病，主要是由于BCR-ABL基因的变异致使BCR-ABL融合蛋白的异常表达，进而使得细胞分裂的方式不再受正常控制，促使白细胞的异常增殖进而导致该疾病的发生[4-5]。
CML在国内占各类白血病的15%～20%，占各种慢性病的95%，病程一般持续4年左右，随着疾病进展对治疗的逐渐不敏感，因此该疾病对我国人口健康造成了很大的危害[6]。
STI571，商品名为格列卫（Glivec或Gleevec）为近年来开发的基因靶向治疗药物，根据CML的分子发病机制，以BCR-ABL蛋白激酶的ATP结合位点结构为基础，通过计算机辅助设计，人工合成了ABL激酶的ATP结合位点竞争性抑制剂，是针对CML特异的分子异常进行的一种靶向分子药物。
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↓
1200 rpm离心6-8min
↓
↓ 留少量固定液制成细胞悬液(沉淀高度的1-2倍)
↓ 滴片（1-2滴至凉玻片），干燥
↓ 吉姆萨染液染5min
↓ 冲洗玻片（背面）
↓ 风筒吹干
↓ 镜下观察
终止培养、收集、低渗、固定
滴片，吹干
染色，去浮色
如何使用显微镜
• 首先，肉眼观察玻片上染料的痕迹; • 然后，10倍镜下聚焦，微移载物台，将理想的核分裂相调
④标本固定不充分：如固定液不新鲜，或甲醇、冰醋酸的质 量不佳，则染色体模糊，或残留胞浆痕迹，使背景不清；
⑤玻片去污不彻底，冷冻不够，使细胞悬液不能均匀附着以 致细胞大量丢失，或染色体分散不佳。
思考题
• 核型制备的常见材料有哪些？ • 哪些人需要核型检查报告？ • PHA，秋水仙素，低渗液，固定液的作用？ • 是否可通过核型初步判断个体性别？
至视野中央； • 物镜切换为40倍,再次微调至视野清晰，并选择理想的核
分裂相调整至视野中央；挪开镜头，滴1滴镜油； • 物镜切换为100倍,微调至清晰图像,观察记录分析； • 使用后，关掉电源，用擦镜纸沾二甲苯脱镜油。
K562核分裂像
细胞染色体数目变异范围为 44～ 71, 干系核型为亚三倍体 ,染色体众数为 6 2± 2
↓
收集培养物至离心管，离心（配平，1200 rpm, 6min）
↓
实 验
用吸管弃上清，加8ml 0.075mol/L KCl，吹打混匀
↓ 37℃，低渗20min
步
↓
骤
加1ml 固定液预固定小心吹打，混匀 ↓
1200 rpm离心6-8min（注意配平）
↓
弃上清，加8ml固定液，室温固定20-30min
• 通常情况下，少量外周血(0.5ml)做短期培养，至 72h细胞进入增殖旺盛期，
• 或者细胞系增殖至旺盛期，此时加入秋水仙素抑 制细胞分裂，使其停止在中期以获得足够的分裂 期细胞。
实验过程
• 细胞培养、收集、低渗、固定、制片、染 色后镜下观察进行核型分析。
以外周血为例，实验流程如上
终止培养前2-4小时，加入秋水仙素
外周血核分裂相 46，XX
【标本质量不佳的原因】
①秋水仙素处理不当：浓度不够或处理时间不足，结果分裂 相太少；浓度过高或处理时间过长，染色体过于缩短难于 分析；
②低渗处理不当：时间过长，细胞膜往往过早破裂，染色体 丢失；低渗处理不够，则染色体分散不佳，难以计数分析；
③离心速度不合适：收集细胞时离心速度太低易丢失细胞； 低渗后离心速度过高，使分裂相过早破裂，完整分裂相减 少；
人K562细胞系染色体标本制备 及核型初步分析
医学遗传教研室 2016.11
实验目的
• 熟悉人类有核细胞（k562）染色体标本的 制备方法。
• 熟悉染色体核分裂相的初步分析。
实验原理
• 染色体:见于细胞有丝分裂过程中,通常利用有核细 胞（如外周血、细胞系、羊水、绒毛）制备染色 体标本，显微镜下观察。