人类染色体标本制备及核型分析

七上

7号染色体着丝粒染色浓。 • 短臂： 有3条深带，中间的一条深带窄而且着色极淡，有 时不明显，远侧近末段的深带着色浓而稍宽，宛如“瓶盖”， 这常常是辨别7号染色体的明显特征。此臂分为2个区，远侧 深带为2区1号带。 • 长臂： 有3条明显的深带，远侧近末段的一条深带着色较 淡，第2和第3深带稍接近。此臂分为3个区，近侧第1深带为 2区1号带；中段的第2深带为3区1号带。
四象鞭炮

4号染色体 • 短臂：可见1-2条深 带，短臂只有1个区。 • 长臂： 可见均匀分 布的4条深带，在处理 较好的标本上，在2、 3深带间还可显出一条 较窄的深带。此臂分 为3个区，近侧段第1、 2深带间的浅带为2区1 号带；远侧段第3、4 深带间的浅带为3区1 号带。

五黑腰
5号染色体 • 短臂： 可见1-2条深带， 其远侧的深带宽而且色 浓。此臂只有1个区。 • 长臂： 近侧段有一条 深带，染色较淡；中段 可见3条深带，染色较 浓；远侧段可见1-2条深 带，近末段的一条着色 较浓。此臂分为3个区， 中段第 2深带为2区1号 带；中段第3深带与远 侧段第1深带之间宽阔 的浅带为3区1号带。
八下

8号染色体 • 短臂： 有2条深带，其间有一条较明显的浅带，这是与10 号染色体相区别的主要特征。此臂分为2个区，中段浅带为 2区1号带。 • 长臂： 近侧段可见2-3条分界不明显的深带，远侧段有一 明显而恒定的深带。此臂分为2个区，中段深带为2区1号带。
九苗条

9号染色体着丝粒染色浓。 • 短臂：远侧段可见两条深带，在有的标本上融合成一条深 带。此臂分为2个区，近侧的第1深带为2区1号带。 • 长臂：可见两条明显的深带，次溢痕一般不着色，在有些 标本上呈现特有的狭长“颈部区”。此臂分为3个区，近中 段的一深带为2区1号带，远侧段的一深带为3区1号带。
溢痕远侧的浅带为2区1号带，中段第2深
带为3区1号带，远侧段第3深带为4区1号 带。
二蛇

2号染色体 • 短臂：可见4条深带， 中段的两条深带稍靠 近。此臂分为2个区， 中段第2、3深带之间 的浅带为2区1号带。 • 长臂：可见6-7条深 带，此臂分为3个区， 第2和第3深带之间的 浅带为2区1号带，第4 和第5深带之间的浅带 为3区1号带。

这种培养方法是Moorhead于1960年建立的。
在人类遗传分析中普遍采用外周血培养的方法 获取分裂的细胞，进而开展临床和基础遗传学 的研究。
这对于遗传疾病的检出以及遗传咨询等工作发 挥了重要作用。

（二）染色wk.baidu.com显带
人们将用各种不同的方法，以及用不同的染 料处理染色体标本后，使每条染色体上出现明暗 相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术 （banding technique）。

三蝶飞
3号染色体着丝粒染色浓。 在短臂和长臂的中短各有 一条明显而宽阔的浅带。 • 短臂：一般在近侧段可 见两条深带，远侧段可见 3条深带，其中远侧近端 部的一条较窄，且着色较 淡，这是区别3号染色体 短臂的显著特征。此臂分 为2个区，中段浅带为2区 1号带。 • 长臂：一般在近侧段和 远侧段各有一条较宽的深 带。在处理较好的标本上， 近侧段的深带可分为3条 深带，此臂分为2个区， 中段浅带为2区1号带。

二、G显带标本的核型分析
一秃二蛇三蝶飞，四象鞭炮五黑腰。 六号短臂小白脸，七上八下九苗条。 十号长臂三条带，十一低来十二高， 十三十四十五号，三个一样一二一。 十六长臂近点深，十七远端带脚镣。 十八人小肚皮大，十九中间一点腰。 二十头重脚底轻，二十一象葫芦瓢。 二十二一点Y黑腰，X pq 一肩挑。
三、内容与操作
一、染色体G显带标本的制备
1. 采血：采血过程中严格执行无菌操作。 2．接种：超净工作台内 0.3～0.5ml 轻轻水平摇动混匀。 ３．培养：5%CO2，37℃±5℃恒温箱培养64-65 小时；卡介苗注射器(5号针头)向培养瓶中加入 20μg/ml秋水仙素（0.01%）一滴，轻轻摇匀，放 回温箱继续培养至68小时。
实验三
人类染色体标本制备 及核型分析
一、目的与要求
1、掌握人类外周血细胞常规核型的标本制备 方法； 2、掌握胰酶法G显带的技术； 3、掌握G显带核型分析的基本过程和技术； 4、熟悉快速线条图的绘制； 5、了解染色体自动分析系统的原理和使用方法。
二、基本原理
（一）染色体标本制备
外周血中的淋巴细胞几乎都是处在 G0 期或 G1 期，一般情 况下是不分裂的。 当在培养基中加入植物血凝素（ phytohemagglutinin, PHA ）时，这种小淋巴细胞受到刺激后转化为淋巴母细 胞，并开始进行有丝分裂。 经过短期培养后，用秋水仙素处理、低渗、固定、滴片 和染色，就可获得大量中期分裂相的细胞，制片后可以 清楚地对染色体进行观察。
13、染色：37℃预温的Giemsa工作液染色 1－2分钟，自来水冲洗，气干。 14、镜检：低倍镜下选择分散良好的长度 适中的分裂相转换油镜观察，若染色体未出 现带纹，则为显带不足；若染色体边缘发毛 为显带过头，此时应根据具体情况增减胰蛋 白酶处理时间重新处理一张标本。

注意事项
玻片完全干后，才可置油镜下进行观察。 每次显带均应做予实验处理，以决定正确 的显带时间，不可盲目处理所有玻片。 显带效果的判断，应多观察几个长度适中 的分裂相,不能仅凭1、2个分裂相的显带效 果决定下一步显带时间。

15号染色体着丝粒和短臂染色浓。 •长臂： 中段有一条明显的深带，染色较浓。在有 的标本上其近侧段可见1-2条 淡染的深带。此臂 分为2个区，中段深带为2区1号带。
十六长臂近点深

16号染色体中央着丝粒和次缢痕染色浓。 • 短臂： 中段有一条着色较淡的深带，在有的标 本上可见两条深带。此臂只有 一个区。 • 长臂： 除次缢痕外有两条深带，远侧段的一条 有时不明显。此臂分为2个区，中段深带为2区1 号带。



4、离心：10分钟（1500转／分），弃上清液，留 下沉淀物。 5、低渗：6～8m1预温37℃的0.075M KCl溶液， 沉淀细胞重重冲散，37℃水浴箱30-35分钟。 6、预固定：1ml新配制的固定剂，轻轻冲打， 37℃水浴箱中静置5分钟。 7、离心：1500转／分离心10分钟，弃上清液。 6．第一次固定：固定液6～8m1，沉淀物轻轻冲 打均匀，37℃水浴箱中静置固定10分钟。 7、第一次离心10分钟(1500转／分)，弃上清液。 8、 重复第6、7步。
十号长臂三条带

10号染色体着丝粒染色浓。 • 短臂： 近中段有一条深带。此臂只有1个区。 • 长臂： 可见明显的3条深带，近侧的一条着色最 浓。该长臂上的这3条明显的深带是与8号染色体 相区别的一个主要特征。此臂分为2个区，近侧段 的第1深带为2区1号带。
十一低来

11号染色体着丝粒染色浓。 • 短臂：近中段可见一条宽的深带，在处理较好的标本上，这条深带可分 为两条较窄的深带。此臂只有1个区。 • 长臂：近侧有一条深带，紧贴着丝粒，近中段可见一条明显的较宽的深 带，在这条深带与近侧深带之间有一条宽阔的浅带。在处理较好的标本 上，近中段的这条较宽的深带可分成两条较窄的深带，两深带之间有一 条很窄的浅带，后者虽常不明显，但却是分区上的一个界标。在有些标 本上近末端处尚可见一条窄的浅色的深带。此臂分为2个区，界标即2区1 号带为上述近中段两深带之间的那条很窄的浅带。
2、有人认为，染色体显带现象是染色 体本身存在着带的结构。比如用相差显微 镜观察未染色的染色体时，就能直接观察 到带的存在。用特殊方法处理后，再用染 料染色，则带更加清楚，随显带方法不同， 显出来的带特点也不一样，说明带的出现 又与染料特异结合有关。
一般认为，易着色的阳性带为含有 AT多的染色体节段，相反，含GC多 的染色体段则不易着色。总的来说， G显带的机理还未搞清。

染色体标本制作技术有下述四大发现：
一、美籍华人徐道觉(1952)从助手工作中的失误发 现采用蒸馏水低渗处理分裂细胞可使染色体展开； 二、Tjio(1956)发现秋水仙素可使分裂的细胞停止 在中期； 三、LiJ．G．发现PHA(phytohemagglutin)(植物 血球凝集素)可使淋巴细胞转化为淋巴母细胞，呈 分裂状态； 四、标本的空气干燥法使细胞和染色体展平。
十二高

12号染色体着丝粒染色浓。 • 短臂： 中段可见一条深带，此臂只有一个区。 • 长臂： 近侧有一条深带紧贴着丝粒。中段有一条宽的深 带，这条深带与近侧深带之间有一条明显的浅带，但与11 号染色体比较，这条浅带较窄，这是鉴别11号与12号染色 体的一个主要的特征。在处理较好的标本上，中段这条较 宽的深带可显出3条较窄的深带，且正中一条着色较浓。在 有些标本上，远侧段还可见1-2条窄的染色较淡的深带。此 臂分为2个区，中段正中着色较浓的深带为2区1号带。
研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、 Na0H、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再 用Giemsa染色，可使每条染色体上显示出 深浅交替的横纹，这就是染色体的G带。每 条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所 以G显带后，可以较为准确的识别每条染色 体，并可发现染色体上较细微的结构畸变。
关于G显带的机理目前有多种说法，较常 见的有 1、Lee等（1973）认为染色体上与DNA 结合疏松的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染 色后这些区段成为浅带，而那些组蛋白和 DNA结合牢固的区段可被染成深带。

六号短臂小白脸

6号染色体着丝粒染色浓。 • 短臂： 中段有一条明显而 宽阔的浅带，近侧段和远侧 段各有一条深带，近侧段的 深带紧贴着丝粒。在处理较 好的标本上，远侧段的深带 可分为2条深带。此臂分为2 个区，中段的明显而宽阔的 浅带为2区1号带。 • 长臂：可见5条深带，近侧 的一条紧贴着丝粒。远侧段 末段的一条深带窄而且着色 较淡。此臂分为2个区，第2 和第3深带之间的浅带为2区1 号带。
一秃
1号染色体中央着丝粒和次缢痕染色深。 • 短臂：近侧段和中段各有一条深带，其 中段深带稍宽，在处理较好的标本上，
远侧段可显出2-3条淡染的深带。此臂分
为3个区，近侧的深带为2区1号带，中段 深带为3区1号带。 • 长臂：次溢痕紧贴着丝粒，染色浓。其 远侧为一宽的浅带，中段和远侧段各有 两条深带，以中段第2深带染色较浓，中 段两条深带稍靠近。此臂分为4个区，次
十三十四十五号， 三个一样一二一

13号染色体着丝粒和短臂染色浓。 • 长臂： 可见4条深带，第1和第4深带较窄、染色 较淡；第2和第3深带较宽、染色较浓。此臂分为 3个区，第2深带为2区1号带，第3深带为3区1号 带。

14号染色体着丝粒和短臂染色深。 • 长臂： 近中段和远侧段各有一条较明显的深带。 在处理较好的标本上其近侧可显出一条深带，其 中段可显出一条着色较淡的深带。此臂分为 3个 区，近侧第2条深带为2区1号带，远侧第4深带为 3区1号带。
9、 制片：留固定液0.2ml～0.4ml，轻轻 冲打制成细胞悬液。冰冻载波片，滴管口 距离载玻片10～15cm，每片2～3滴。 10、烤片：75℃烤箱烤3小时。自然冷却。



11、胰酶预温：立式染色缸中磷酸缓冲液100ml （ 1／15M NaH2PO4 80.8 ml ，KH2PO4 19.2ml)，2.5％的胰蛋白酶原液1ml配成0.025％ 的工作液。37℃的恒温水浴箱内预温。 12、显带：不断轻轻摆动，使胰酶作用均匀，处 理时间25～90秒钟左右（较陈旧标本时间适当延 长，随着处理标本数量增加，胰酶逐渐消耗，胰 酶作用时间逐渐延长，精确的时间自行摸索）。 取出标本片，立即用37℃预温的生理盐水轻轻漂 洗两次，去除片子上的胰酶溶液。
十七远端带脚镣

17号染色体着丝粒染色浓。 • 短臂： 中段有一条深带。此臂只有一个区。 • 长臂： 远侧段可见一条深带，这条深带与着丝 粒相连的深带之间为一明显而宽的浅带。此臂分 为2个区，上述浅带为2区1号带。
十八人小肚皮大

18号染色体 • 短臂： 一般为浅带。此臂只有一个区。 • 长臂： 近侧和远侧各有一条明显的深带。此臂分 为2个区，两条带之间的浅带为2区1号带。