人类染色体G显带标本的制备

Giemsa染料是噻嗪--曙红染料，染色体的着色有赖 于在原位形成噻嗪--曙红（2∶1）的沉淀物。着色 首先取决于二个噻嗪分子同DNA结合，在此基础 上再结合一个曙红分子，其次取决于一个疏水环 境，以利于染料沉淀而着色。通过胰酶的显带预 处理可除去阴性G带区的疏水蛋白，或使它们的结 构变成更亲水状态。由此可知，在G显带中抽取的 蛋白往往是疏水的，且主要来自阴性G带区。
人类染色体G带歌谣：
一秃二蛇三蝶飘，四像鞭炮五黑腰；六号像个 小白脸，七盖八下九苗条，十号长臂近带好， 十一低来十二高；十三、四、五一二一；十六 长臂缢痕大，十七长臂带脚镣，十八白头肚子 饱；十九中间一点腰，二十头重脚飘飘；二十 一好象黑葫芦瓢，二十二头上一点黑；X染色 一担挑，Y染色长臂带黑脚。
试剂及器材
试剂：胰蛋白酶、0.4%酚红、5% NaHCO3、 Giemsa原液、pH7.4磷酸盐缓冲液，0.85%生理 盐水。
器材： 37℃恒温水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴 头。
实验步骤
取胰酶25mg，溶解于盛有50 ml0.85%生理盐水的 染色缸中，置37℃恒温水浴箱中，加入0.4%酚红2 滴，混匀，以5% NaHCO3调节pH为6.6-7.0。
实验步骤
待 胰 酶 液 温 度 升 至 37℃ 后 ， 将 染 色 体 标 本 片 （37℃烘箱烤片）放入胰酶液中，并轻轻摆动， 数秒（视烤片时间而定）后取出，立即自来水冲 洗。
实验步骤
染色：pH7.4磷酸盐缓冲液
Giemsa原液
0.5 ml
染色8-10分钟。
自来水冲洗，空气干燥，镜检。
4.5 ml
注意事项
良好的培养效果为，标本片上中期分裂相要多， 且染色体分散要好。
染色体长度应能适应显带分析技术百度文库要求。
G显带成败之关键取决于胰酶液的浓度和处理时间 之搭配。
实验结果
低倍镜下可看到中期分裂相，进而转至高倍 镜及油镜下观察，可见23对染色体较为饱 满，分布均匀，着色较好，沿染色体长轴可 显出深浅不同的G带横纹。
原理
常规制备的染色体标本经烤片后，用热碱、各 种蛋白酶、尿素、去垢剂或其它溶液等预处理 再以Giemsa 染色，在油镜下可看到染色体两 臂显示出着色深浅不同的横纹。最常用的是胰 蛋白酶法。
可能的机理是：G带区含有较丰富的A-T 对， 在间期核呈固缩状态，而且是DNA晚复制区之 一。Giemsa染料在G带区是与DNA结合，而且 与结合DNA的染色质非组蛋白有关。