AOAC2002抗性淀粉（中文翻译）

AOAC2002抗性淀粉（中文翻译）
抗性淀粉的测量
C.实验试剂
(a)马来酸钠缓冲液：0.1M,pH6.0.取23.2g的马来酸溶解在1600ml的蒸馏水中，用4M(160g/L)的NaOH调节pH值到6.0 ，加入0.6gCaCl2.2H2O和0.4g的叠氮化钠，然后定容到2L。

4℃保存1年。

(b)马来酸钠缓冲液：1.2M,pH3.8,69.6ml的冰醋酸溶解在800ml 的蒸馏水中，用4M的NaOH调节pH值到3.8.用蒸馏水定容到1L。

室温下保存1年。

(c)马来酸钠缓冲液：100mM,pH4.5.5.8ml的冰醋酸溶解在900ml的蒸馏水中，用
4M的NaOH调节pH值到4.5，最后用蒸馏水定容到1L,4℃下保存1年。

(d)氢氧化钾溶液：2M,取112.2KOH溶解在900ml的去离子水中，定容到1L
(e)IMS溶液：50%V/V。

取500ml的乙醇（95%或99%）或工业甲基化酒精（IMS,变性乙醇；95%乙醇加5%的甲醇），用水定容到1L,密封保存1年。

(f)AMG储备液：12ml,3300U/ml溶解在50%的甘油中，呈粘性。

在4℃下保存5年。

（注：1U:在40℃，pH4.5的条件下，AMG分解可溶性淀粉产生1μmol 的葡萄糖所需要的酶量）。

(g)淀粉葡萄糖苷酶稀释液：300U/ml，将2ml的AMG储备液用
0.1M,PH马来酸缓冲液C(a)稀释到22ml,等分为5ml冷冻保存在聚丙烯管中，使用时可以反复冻融，-20℃下保存5年。

(h)胰a-淀粉酶（10mg/ml）+AMG(3U/ml)：1g的胰a-淀粉酶加100ml马来酸缓冲液C(a),搅拌5min,加1.0mlAMG（300U/ml），搅拌离心，＞1,500g,10min。

小心倒出上清液。

现配现用。

(i)葡萄糖氧化酶-过氧化物酶-氨基安替比林溶液（GOPOD）:制
备GOPOD通过稀释50ml的缓冲液到1.0L,用部分稀释缓冲液溶解冻干的GOPOD混合液，将小瓶内的酶液转移到1.0L的容量瓶中，用稀释缓冲液定容到1.0L.
葡萄糖氧化酶＞12000U/L;
过氧化物酶＞650U/L;
4-氨基安替比林溶液0.04mM
4℃保存2~3月，-20℃保存＞2年
缓冲液的制备：
溶解136gkH2PO4,42gNaOH,30g的4-羟基苯甲酸，溶解在900ml水中，用1MHCL和2MNaOH调节pH7.4,稀释到1L,添加0.4g 叠氮化钠混合至溶解。

4℃保存3年。

3ml的GOPOD混合液，0.1ml葡萄糖标准液（1mg/ml,0.2%苯甲酸为溶剂），
0.1ml.0.1M的马来酸钠缓冲液[CI],20min显色完全。

＞1h显色依旧稳定。

试剂（f）,(h)和（i）在RS试剂盒中。

D 样品的制备
将约50g的样品（谷物，低压冻干的植物，食品）研磨，过孔径1.0mm的筛。

将样品装入广口瓶中，混匀，工业淀粉粉末的精细度比较好，无需研磨。

新鲜食品的粉碎（如：灌装蚕豆，香蕉，土豆）通过手切或绞肉机粉碎到能通过 4.5mm的筛子，水分含量的测定方法AOAC925.10(15),新鲜的样品先经过冻干，然后通过AOAC925.10方法烘干。

E.抗性淀粉的测量
(a)非抗性淀粉的溶解和水解
i:准确的称取100±5mg的样品至具塞试管中（16×125mm），轻碰管壁，确保样品降到底部。

ii每管中加4.0ml胰a-淀粉酶(10mg/ml)和AMG(3U/ml)[C （h）]。

iii拧紧管帽，用涡旋仪混匀,水平放置在水浴摇床上，震荡。

iv 37℃，连续摇晃16h（200次/min）。

v 将试管从水浴摇床上取出，擦干试管表面水分，打开管帽，加入4ml 99%的乙醇或99%的IMS,蜗旋仪上混匀。

Vi将各管在1,500g(约：3,000rpm)离心10min(不加盖)
Vii小心倒出上清液，用2ml50%的乙醇或IMS[C(e)]重悬，在蜗旋仪上混匀，再添加6ml50%IMS,混匀，1,500g离心10min。

ix弃去上清液，重复vii步骤一次。

x小心的去掉上清液，倒置管上的吸水纸，吸取多余的液体。

（b）抗性淀粉的测量
i向每个管中添加一个磁力搅拌子（5×15mm）和2ml,2MKOH[c(d)]并重悬沉淀（溶解抗性淀粉），在冰水浴中搅拌20min.
ii 添加8ml,1.2M的马来酸缓冲液（pH3.8）[c(b)]到每一个管中，在磁力搅拌器上搅拌，立即添加0.1ml的AMG(3300U/ml)[c(f)]混匀，将管子放置在50℃的水浴锅上水浴。

iii 在蜗旋仪中间歇搅拌30min。

iv样品中抗性淀粉的含量＞10%
将管中的物质转移到100ml的容量瓶中，使用清水清洗管子，当用洗瓶清洗时，使用外部磁铁保持磁力搅拌子停留在管中，用清水定容到100ml混合均匀，1,500g离心10min.
v样品中抗性淀粉的含量＜10%
将管子直接离心，1,500g离心10min（不稀释），对上面的样品，管中的最终体积约为10.3ml(如果分析的是湿样品，体积会有很大的不同，补充的量应该计算在内)
vi等量的转移0.1ml（两个平行），稀释液或未稀释液的上清液转移到玻璃管中(16×100mm),加3.0ml的GOPOD溶液处理并在50℃下保温20min.
vii 在510nm测定吸光值，溶液为空白。

F 非抗性淀粉（可消化）的测量
i将[E(a)vii]步的上清液用50%乙醇清洗[E(a)ix和x],用水将体积定容到100ml。

ii取0.1ml的溶液（2个平行），加3ml的GOPOD[C(i)],50℃保温20min。

iii 在510nm处比色。

iv计算非抗性淀粉的总量。

G 计算
计算抗性淀粉，非抗性（可溶）淀粉，总淀粉含量（%，干重）抗性淀粉（g/100g样品）（RS%>10%）:
= DE x F x 100/0.1 x 1/1000 x 100/W x 162/180
= DE x F/W x 90.
抗性淀粉（g/100g样品）（RS%＜10%）
= DE x F x 10.3/0.1 x 1/1000 x 100/W x 162/180
= DE x F/W x 9.27
非抗性（可溶）淀粉（g/100g样品）
= DE x F x 100/0.1 x 1/1000 x 100/W x 162/180
= DE x F/W x 90.
总淀粉=抗性淀粉+非抗性淀粉
注：DE=OD值
F=吸光值转换为μg数（100μg 的葡萄糖与GOPOD反应的吸光值且F=100μ葡萄糖/100μg葡萄糖与GOPOD反应的吸光值）。

100/0.1 =体积校正（从100ml中取0.1ml）.
1/1000=μg转换为mg
W= 样品分析的干重
=湿重×（100-水分含量）/100
100/W=样品中抗性淀粉的转换因子
162/180=葡萄糖转换为淀粉的转换因子。

10.3/0.1 =体积校正（10.3ml中取0.1ml）,样品中包含0-10%的RS，溶液没有被稀释终浓度为10.3ml。