实验四++细菌的接种培养法与生长现象的观察
生化反应生长现象
V
- VP（Voges-Proskauer）试验
+
葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇 →二乙酰→红色化合物
胍基化合物 葡萄糖→丙酮酸 × × 乙酰甲基甲醇
-
-
+
M
- 甲基红（methyl red）实验
甲基红 -
葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇
葡萄糖→丙酮酸
甲基红 +
-
+
C -枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验
实验二、细菌生长现象的观察
一、实验目的
掌握细菌在三种培养基中的生长现象 掌握细菌生化反应硫化氢试验和靛基质试验 熟悉细菌所产生的色素 熟悉紫外线灭菌原理和方法与药敏试验。
二、实验内容
细菌的接种方法
（1）琼脂斜面接种法：蛇形划线（或蛇蜒划线） （2）液体培养基接种法：研磨接种法（将接种环 上菌轻研磨于近液面的管壁上，后倾斜管使菌混 入）。 （3）平板划线接种法：分区划线（用腕力连续划 线）另平行划线法。 （4）半固体接种法：垂直穿刺法（垂直刺入固体 中心至管底处，然后循原路退出）。
细菌的生长现象
1、在液体培养基上的生长 混浊生长：大肠杆菌 沉淀生长：链球菌 表面生长：枯草杆菌 2、在固体培养基上 斜面：菌苔 平板：菌落 3、在半固体培养基上 线性生长：痢疾杆菌（无鞭毛） 扩散生长：伤寒杆菌的动力（有鞭毛）
硫化氢试验
伤寒杆菌与大肠杆菌 实验方法 1、将两种细菌分别接种于醋酸铅培养基中。 2、37℃孵育24小时，观察结果，培养基周 围呈黑褐色为阳性，证明产生硫化氢。
I 大肠埃希菌 产气杆菌 + -
M + -
实验四：细菌的接种、培养和分离技术
实验四：细菌的接种、培养和分离技术一、实验目的与要求：（1）掌握从环境土壤、水体、活性污泥等中分离培养细菌的方法;从而获得若干种细菌纯培养技能（2）掌握细菌纯种分离的方法：稀释平板分离法和平板划线法..（3）掌握几种接种技术：斜面接种技术、穿刺接种、稀释平板涂布法等..二、实验原理在土壤、水、空气或人及动、植物体中;不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起;当我们希望获得某一种微生物时;就必须从混杂的微生物类群中分离它;以得到只含有这一种微生物的纯培养;这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化..为了获得某种微生物的纯培养..一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同;而供给它适宜的培养条件;或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长;而抑制其他菌生长的环境;从而淘汰其他一些不需要的微生物;再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物;直至得到纯菌株..三、实验器材1、牛肉膏蛋白胨培养基2、盛9ml无菌水的试管;盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶;1ml和5ml无菌吸管;无菌培养皿；3、接种环;土样;酒精灯等..四、操作步骤1、倒平板将加热融化的牛肉膏蛋白胨培养基倒平板;并标明培养基的名称..2、贴标签接种前在试管上贴上标签;注明菌名、接种日期、接种人姓名等..贴在距试管口径2-3厘米的位置..3、点燃酒精灯..4、接种取接种环右手拿接种环如握钢笔一样、在火焰上将环端烧红灭菌;然后将有可能伸入试管的其余部分;均用火烧过灭菌..环冷却将灼烧过的接种环伸入菌种管;先使环接触边壁;使其冷却..取菌种待环冷却后轻轻沾取经稀释10倍的土壤悬液-环;然后将接种环移出菌种管;注意不要使环的部分碰到管壁;取出后不可使环通过火焰..接种在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环在平板上划线..划线的方法很多;但无论哪种方法划线;其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释;使形成单个菌落..常用的划线方法有下列二种：⑴用接种环以无菌操作挑取土壤悬液一环;先在平板培养基的一边作第一次平行划线3-4条;再转动培养皿约70°角;并将接种环上剩余物烧掉;待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线;再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线图A..划线完毕后;盖上皿盖;倒置于温室培养..⑵将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线图 B..划线完毕后;盖上皿盖;倒置温室培养..环灭菌将接种环烧红灭菌..5、挑菌将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到上述三种培养基的斜面上;分别置25℃和28℃温室中培养;待菌苔长出后;检查菌苔是否单纯;也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物;若有其他杂菌混杂;就要再一次进行分离、纯化;直到获得纯培养..四、注意事项1、实验操作过程中无菌操作..。
微生物实验-细菌培养、接种
尿素酶试验
产生氨使培养基变碱， 指示剂显红色，为阳性。 如：变形杆菌为阳性。
IMViC试验
IMViC试验
I - 吲哚（indol）试验 M - 甲基红（methyl red）试验 V - VP（Voges-Proskauer）试验 C -枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验
大肠埃希菌 产气杆菌
I M Vi C试验 ++ - - - ++
IMViC试验： 是吲哚、甲基红、V-P以及枸橼酸盐利用试验四者的合称。常用于肠道杆菌的鉴定。
实验小结
1、三类培养基
➢液体培养基——用于增菌； 均匀混浊、沉淀、表面生长
➢ 半固体培养基——观察动力；保存菌种（6个 月）；穿刺线，扩散生长
细菌培养接种法——平板划线法
菌种：混合菌液 材料：普通平板 用具：接种环 方法：分区划线
原始区域
1区 2区
4区 3区
细菌培养接种法--斜面接种、液体接种、半固体
菌种：大肠杆菌或葡萄球菌斜面 材料：斜面、液体、半固体培养基 用具：接种环、接种针
液体培养基
斜面培养基
半固体培养基
结果观察——普通平板
结果观察——半固体培养基
1、 扩散生长：具有动力的 细菌,可见培养物扩散和培 养基变混浊。 即有鞭毛的细菌：由穿刺线 向外扩散生长（羽毛状或云 雾状）
2、原位生长：没有动力的 细菌，可见培养物没有扩散， 培养基仍然澄清。 即无鞭毛的细菌： 沿穿刺 线生长
2
1
1
细菌代谢产物观察
细菌的酶不一样，对营养物质的分解能力 不一样， 产生的代谢产物也不一样。
合作愉快
2011
➢ 固体培养基——分离纯化；保存菌种（1个月） 菌落、菌苔
纯培养细菌接种法实验报告
纯培养细菌接种法实验报告掌握纯培养细菌的接种方法，观察细菌的形态，生长特性和纯化程度。
实验原理：纯培养细菌是指将单一菌株分离出来，通过连续传代得到的同源菌种。
纯培养的细菌能够提供一致的实验结果，并且方便研究其生长和功能特性。
纯培养细菌接种法是一种常用的方法，通常有液体培养和固体培养两种。
实验步骤：1.准备培养基：根据细菌的要求，配制适当的培养基，如琼脂培养基或液体培养基。
对于液体培养基，需要将培养基装入试管、烧杯等容器中。
2.无菌操作：将所需器具、培养基等材料进行高压蒸汽灭菌或者使用紫外线灭菌。
确保材料的无菌状态，避免其它细菌或真菌的污染。
3.接种：将要纯培养的细菌（母菌）通过无菌针或无菌吸管取适量进行接种。
在液体培养基中，可以通过直接加入适量的细菌悬浮液；在固体培养基中，可以通过点菌法或线条法进行接种。
4.培养：将接种好的培养基放在适当的培养条件下，如适宜的温度、湿度和光照条件下培养。
对于液体培养基，可以摇床培养，对于固体培养基，需要反复翻转培养基以确保细菌均匀生长。
5.观察：在一定时间内观察培养基上的菌落生长情况，包括菌落形态、颜色、大小等。
通过目视观察可以初步判断是否得到纯培养的细菌。
6.纯化：从培养基上挑选一个特定的菌落，通过多次传代的方式得到纯培养的菌株。
每次传代时，都要选择单个菌落进行接种，并在新的培养基上培养。
7.保存：将得到的纯培养菌株进行保存，可以通过连续传代培养物、低温冷冻保存或制备滴度梯度等方法。
实验结果：根据纯培养细菌接种法进行实验后，可以观察到纯培养的细菌在培养基上的生长情况。
首先，通过目视观察可以初步判断得到的菌落是否为纯种。
例如，如果菌落形态、颜色和大小均一致，则说明可能是纯培养的细菌。
其次，可以通过显微镜观察菌液中的细菌形态和结构，进一步确认是否得到纯培养的细菌。
最后，可以通过分析菌株的生长特点和功能特性，对细菌进行进一步鉴定和研究。
实验结论：通过纯培养细菌接种法可以得到纯培养的细菌，该方法能够提供一致的实验结果，并且方便进行细菌的研究。
细菌接种培养与生长现象的观察
细菌接种培养与生长现象的观察细菌是一种微生物，它们在生命活动中具有重要的作用。
对细菌进行接种培养与生长现象的观察，可了解其生存繁殖机制，为防治疾病提供理论依据。
本文将介绍细菌接种培养和生长的观察现象。
一、细菌接种培养1.接种方法细菌的接种方法有三种：涂布法、坡面法和冲击法。
涂布法是将细菌培养基涂抹在培养皿中，接种样品后，使其均匀分布在培养基上。
坡面法是将细菌培养基倾斜放置，接种样品后，使其在培养基表面形成斜坡状。
冲击法是将细菌样品在明胶块或琼脂糖上泡发，然后将其取下，放置在含有特定养分的培养基上。
2.培养条件细菌的培养条件包括温度、pH值、营养物质、湿度等。
常见的细菌培养温度是37℃，pH值为7.0左右。
细菌所需的营养物质不同，有些能够利用简单的碳水化合物进行生长，而有些则需要更为复杂的营养物质。
湿度也是细菌生长的重要因素，过低或过高的湿度会对其生长产生影响。
二、细菌生长现象1.菌落形态细菌在培养基上生长后形成的结构称为菌落，其形态可分为几种。
点状菌落是呈圆点状的，直径不大于1毫米，表面光滑。
分叉菌落是分叉状的，呈不规则形状。
环状菌落是呈圆环状，表面光滑。
凝胶状菌落是呈3D立体状，表面光滑。
2.生长速度细菌的生长速度与其所处的环境和营养物质有关。
通常来讲，细菌越适应培养环境，生长速度越快。
细菌在生长初期，会出现一个对数生长期，此时细菌的增长速度很快。
随着时间的推移，细菌的生长速度逐渐减缓，并进入一个稳态生长期。
3.色素现象形成色素是细菌生长过程中的一种现象。
许多细菌在生长过程中会产生色素，并且不同颜色的色素会对其的生长产生影响。
一些菌株会生产出蓝色、红色或黄色的色素，有些则会产生紫色或绿色的色素。
4.抗菌性细菌在生长过程中还会表现出一种抗菌性，即细菌之间会形成菌斑，表现为一种聚集状的现象。
当培养基上的细菌密集到一定程度时，会形成一些特殊的结构，如粘液囊和生物膜，从而形成一种保护性屏障，使得细菌对外部环境的抵抗力增强。
细菌培养技术
只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。
细菌在半固体培养基中的生长现象
无动力 现象
有动力 现象
（四）接种方法
6.倾注培养法：用于细菌计数。
将上述已接种细菌的培养基置37℃恒温 培养箱中孵育18～24h，观察细菌的生 长现象。
三、细菌在培养基上的生长现象
1、细菌在固体培养基中的生长现象
菌落
定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖， 形成单一肉眼可见的细菌集团。
菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、 透明度、湿润度、黏度、溶血性。
细菌培养技术
南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心
实验内容
常用细菌培养方法。 细菌的分离培养和接种技术。 细菌生长现象观察。
一、常用细菌培养方法
需氧培养法（一般培养）
适用于需氧菌和兼性厌氧菌培养。 培养温度：37℃（采用恒温培养箱）。 培养时间：18～24h。
二氧化碳培养法
适用于奈瑟菌属和布鲁菌属等苛养菌培养。 可采用烛缸法、二氧化碳培养箱。
接种
接种后灭菌接种环
（四）接种方法
1.平板划线接种法：
目的：使混合的细菌呈单个分
散生长，形成单个菌落，以便 获得纯菌。
方法：
分区划线法：适用于含菌量 较多的标本。
连续划线法：适用于含菌量 较少的标本。
分区划线法
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
连续划线法
一、常用细菌培养方法
微需氧培养法
适用于空肠弯曲菌、幽门螺杆菌等微需氧菌 培养。
可采用抽气换气法。
厌氧培养法
适用于专性厌氧菌培养。 厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、
硫乙醇酸盐法等。
细菌检验技术—细菌的培养技术及培养现象的观察(微生物检验课件)
5.进行培养基的分装、细菌接种都要在生物安全柜中进 行，注意生物安全，防止污染。 6.无菌吸管头上应塞有棉花，不用口吹或吸液体。 7.实验室的所有感染性物品未经消毒灭菌不能拿出实验 室，应经消毒处理。 8.操作者要注意个人防护，穿好工作服，必要时戴好帽 子、口罩、手套等，离开时要更衣、消毒、洗手。 9.桌面、操作台需及时用消毒液擦干净。
❖ (三)接种与分离技术 ❖ 1.平板划线法：⑴分区划线法
❖ (二)连续划线法
❖ 2.斜面接5.倾注法
7 涂布接种法
三、细菌的培养方法
❖ 1.普通培养法 ❖ 2.CO2培养法 ❖ 3.微需氧培养法 ❖ 4.厌氧培养法
❖ 四、细菌的生长现象 ❖ (一)菌落
细菌的人工培养
一、无菌操作技术 二、接种方法 ❖ (一)接种针和接种环
取细菌的用具。 ❖ (二)无菌室
提供无菌环境。
二、无菌技术
1.无菌室使用前的消毒：打开紫外灯照射 30min-1小时，或用5%的石炭酸喷雾消毒。
2.所用物品均应在使用前严格灭菌。使用时不 得触摸、碰撞未经灭菌的物品。
3.无菌的试管、瓶子打开后应在火焰上通过 2-3次，尽快盖好，或尽量靠近火焰；管、瓶 口切忌朝上暴露于空气下。
(二)细菌在液体中的生长现象 ❖ 1.均匀混浊 ❖ 2.沉淀生长 ❖ 3.表面生长 (三)细菌在半固体中的生长现象 ❖ 沿穿刺线生长。 ❖ 穿刺线两侧云雾状混浊。
细菌在液体培养基中的生长现象
细菌在半固体培养基中的生长现象
无动力 现象
有动力 现象
细菌的接种与培养原理
细菌的接种与培养原理
细菌的接种与培养是指将细菌菌种接种到合适的培养基上，提供适宜的环境，使其能够生长和繁殖。
接种方法一般有涂布法、点状接种法、块状接种法和浸液接种法等。
其中，涂布法是常用的一种方法。
首先，将细菌培养基倒在无菌的培养皿上，使其均匀分布在表面上。
然后，用培养环或无菌铁棒，将细菌菌液均匀涂布在培养基表面上。
点状接种法则是利用无菌针或针管，在培养基表面插入菌液滴，形成若干个细菌点。
块状接种法是将细菌菌液均匀分布在培养基上，再用细菌圈或无菌铁棒在培养基上划圈，形成若干个细菌块。
浸液接种法是将细菌菌液倒入培养基中，使之均匀分布。
培养基的选择十分重要，通常根据细菌的生活习性和营养要求来确定。
培养基可分为无机盐基质和有机物基质两大类。
无机盐基质包括无机盐、水和少量有机物。
有机物基质包括如葡萄糖、氨基酸等有机物，用于满足细菌的营养需求。
培养基的
pH值也需要控制在适当的范围内，通常为pH 6-8之间。
接种后，细菌菌种需要放置于适宜的温度和湿度下培养。
不同的细菌株对温度和湿度的要求也有所不同。
一般来说，细菌在30-37摄氏度下生长最好。
在培养过程中，还需要定期观察细
菌的生长情况，如菌落形态、大小、颜色等，并进行相关的细菌鉴定工作。
细菌的接种与培养是进行细菌学研究和应用的基础。
通过合适的接种和培养方法，可以获得足够的细菌菌量，进行各种实验
和研究。
同时，也可以利用培养后的细菌进行鉴定、检测和生产等工作。
实验四细菌在培养基中的生长表现与生化实验
可以采用更先进的基因组学和蛋白质组学技术，对细菌的基 因和蛋白质表达进行分析，以更深入地了解细菌的生长机制 。
THANKS
感谢观看
学习并掌握生化实验的基本操作
学习并掌握生化实验的基本操作，如 细菌接种、培养基制备、菌落计数等 。
了解生化实验中常用的试剂和仪器， 并掌握其使用方法。
02
CATALOGUE
实验材料
细菌菌种
大肠杆菌
一种常见肠道细菌，可用于研究 肠道微生物生态和抗生素敏感性
。
金黄色葡萄球菌
一种常见皮肤和呼吸道细菌，可用 于研究其致病性和药物敏感性。
生长。
培养细菌
将接种后的培养基放入恒温培 养箱中，设定适宜的温度和湿
度，进行细菌培养。
观察记录
定时观察细菌的生长情况，记 录生长曲线、菌落形态等信息
。
生化实验操作
试剂准备
根据实验需求，准备所需 的生化试剂和器材。
实验操作
按照实验步骤进行生化实 验，记录实验过程中的现 象和数据。
结果分析
根据实验结果，分析细菌 的生化特性，如酶活性、 代谢产物等。
总结词
生长动力学参数
详细描述
通过生长曲线的分析，可以计算出细菌的生长速率、最大 生长量和倍增时间等生长动力学参数。这些参数对于评估 细菌的生长特性和优化培养条件具有重要意义。
总结词
生长曲线比较
详细描述
比较不同菌株或不同培养条件下细菌的生长曲线，可以分 析它们之间的差异和特点。通过比较，可以深入了解不同 菌株的生长特性和适应性，为菌株筛选和优化提供依据。
生化实验结果分析
总结词
糖发酵实验
详细描述
通过糖发酵实验，可以观察到细菌对不同糖类的利用能力 和代谢特点。分析实验结果，可以初步判断细菌的生化特 性，为菌种鉴定和分类提供依据。
细菌生长现象的观察实验报告
细菌生长现象的观察实验报告摘要：本实验旨在观察细菌生长的现象，并通过实验结果分析细菌的生长规律和影响因素。
实验中选取了不同环境条件下的培养基，通过定期观察细菌数量的变化，分析不同因素对细菌生长的影响。
实验结果表明，温度、营养物质和pH值是影响细菌生长的重要因素。
引言：细菌是微生物中具有重要生物学功能和应用价值的生物体。
了解细菌的生长规律对于研究微生物学、生物工程以及医学领域具有重要意义。
本实验通过观察细菌在不同环境条件下的生长情况，旨在深入了解细菌的生长规律和影响因素。
材料与方法：1. 实验材料：- 细菌培养基：含有丰富营养物质的琼脂培养基、含有特定营养物质的琼脂培养基。
- 细菌培养物：选择一种常见的细菌作为实验对象。
- 培养皿：用于装载培养基和培养细菌。
- 恒温箱：控制实验环境温度。
- pH计：用于测定培养基的pH值。
2. 实验方法：- 准备不同环境条件下的培养基，如不同营养物质浓度或pH值不同的培养基。
- 将培养基倒入培养皿中，待培养基凝固后，用接种环将细菌接种于培养基表面。
- 将接种好的培养皿置于恒温箱中，控制温度为30℃。
- 每隔一定时间，取出培养皿观察细菌生长情况，并记录细菌数量。
- 重复以上步骤，改变培养基的不同条件，进行对比观察。
结果与讨论：1. 温度对细菌生长的影响：在恒温箱中，分别设置不同温度条件下的培养基进行观察。
结果显示，在30℃条件下，细菌生长最为迅速，数量逐渐增加；而在较低温度下，细菌生长缓慢；在高温条件下，细菌生长受到抑制，数量较少。
这说明温度是影响细菌生长的重要因素，合适的温度可以促进细菌生长，过高或过低的温度会抑制细菌的繁殖。
2. 营养物质对细菌生长的影响：使用不同浓度的培养基进行观察，结果显示，营养物质浓度越高，细菌生长越旺盛；而营养物质浓度过低，则会限制细菌的生长。
这表明，营养物质的丰富性对于细菌的生长具有重要意义，充足的营养物质可以提供细菌所需的能量和物质基础。
微生物的接种实验报告
微生物的接种实验报告微生物的接种实验报告一、引言微生物是一类极小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们广泛存在于自然界中的各个环境中，对生态系统的平衡和人类健康具有重要影响。
本实验旨在通过接种微生物的方式，观察其在不同培养基条件下的生长情况，为微生物研究提供一定的参考。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 细菌培养基：含有营养物质的琼脂培养基、大肠杆菌培养基、葡萄球菌培养基。
- 真菌培养基：含有蔗糖和琼脂的培养基。
- 病毒培养基：含有细胞培养基和病毒接种液的培养基。
- 微生物接种液：细菌、真菌、病毒接种液各一份。
2. 实验方法：- 准备好所需的培养基和接种液。
- 将细菌培养基倒入培养皿中，用接种针分别从细菌接种液中取出适量的细菌，均匀涂抹在培养基上。
- 将真菌培养基倒入培养皿中，用接种针分别从真菌接种液中取出适量的真菌，均匀涂抹在培养基上。
- 将病毒培养基倒入培养皿中，用接种针分别从病毒接种液中取出适量的病毒，滴在培养基上。
- 将培养皿密封好，放置在恒温培养箱中，保持适宜的温度和湿度。
- 观察培养皿中微生物的生长情况，记录相关数据和现象。
三、实验结果与分析1. 细菌生长情况：在琼脂培养基上，细菌呈现出白色或黄色的圆形菌落，生长迅速，菌落边缘清晰。
大肠杆菌在大肠杆菌培养基上呈现出金黄色的菌落，而葡萄球菌在葡萄球菌培养基上呈现出乳白色的菌落。
这说明不同的细菌对培养基的要求有所不同，不同的培养基能够提供不同的营养物质，从而影响细菌的生长。
2. 真菌生长情况：在含有蔗糖和琼脂的培养基上，真菌呈现出丰富的菌丝生长，形成了类似蜘蛛网状的结构。
这说明真菌对蔗糖等碳源的利用能力较强，能够迅速生长和繁殖。
3. 病毒生长情况：由于病毒需要依赖宿主细胞进行复制和生长，因此在培养基上无法直接观察到病毒的生长情况。
但我们可以通过观察宿主细胞的变化来间接判断病毒是否感染了宿主细胞。
如果宿主细胞出现异常形态、细胞质变化或细胞溶解等现象，可以初步判断宿主细胞可能受到病毒感染。
细菌的接种方法及生长现象观察实验报告
细菌的接种方法及生长现象观察实验报告实验名称：细菌的接种方法及生长现象观察实验实验目的：了解不同细菌接种方法，观察其生长现象并熟悉对不同细菌的鉴别方法。
实验原理：实验中使用的细菌主要有大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，这两种细菌的形态、生理和生化特性都有所不同，因此可以通过对其生长情况和代谢产物鉴定分离。
实验步骤：1. 准备培养基和实验用具。
将脑心涂片培养基、大肠杆菌培养基和营养琼脂培养基准备好，并消毒使用的培养器具。
2. 细菌样本预处理。
将所选的样本细菌用无菌的移液管分别接种到脑心涂片培养基和大肠杆菌培养基中。
每个细菌样本接种三个孔，并标记清楚。
3. 处理营养琼脂培养基。
制作营养琼脂培养基，分装至不同的培养皿中，并在上面像钟表一样标记12个点，以备后续接种使用。
4. 接种细菌。
分别使用病原菌的直接接触法、匀涂法和滴定法，接种到不同的培养皿中。
对于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别接种两次，每个接种方法分别接种一次，可共接种12个孔。
5. 确认培养基接种位置和标记结果。
将接种好的培养皿放入培养箱中保持适宜的培养环境，隔一段时间观察细菌生长情况，并对产生的代谢产物做出初步的鉴别。
实验结果观察：1. 直接接触法：以金黄色葡萄球菌为例，直接将其接种到营养琼脂培养基的中心，使用此方法，菌落数量较多，生长范围较窄，生长感觉较短。
2.匀涂法：以大肠杆菌为例，使用平均划线的方式涂抹菌液到琼脂平板上并再次划线，此方法效果更好，生长期较长。
3. 滴定法：以大肠杆菌为例，使用无菌的移液器抽取一定的菌液滴到琼脂平板上，此方法的生长效果也较好，但抽取的菌量要严密掌控。
实验结论：通过试验了解到使用不同接种方法得到细菌生长的结果也有所不同，每种接种方法都有其特定的优缺点，根据不同的需求可以选择最适合的方法。
细菌的生长速度和数量可以通过直接观察培养基上的菌落情况来判断，而细菌产生的代谢产物则可以用生化史实的方式作出初步鉴别，对于细胞形态和细胞结构等特征的鉴别可以通过显微镜技术进一步观察分析。
细菌接种_实验报告
一、实验目的1. 掌握细菌接种的基本操作方法。
2. 熟悉无菌操作技术。
3. 观察细菌在不同培养基上的生长现象。
二、实验原理细菌接种是将纯培养的细菌转移到新的培养基上，使其在适宜的环境中进行繁殖。
无菌操作技术是保证实验结果准确性的关键。
通过观察细菌在不同培养基上的生长现象，可以了解细菌的生长特征和代谢产物。
三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌等。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基、营养肉汤培养基、糖发酵培养基等。
3. 实验器材：接种环、接种针、酒精灯、无菌棉签、培养皿、试管、显微镜等。
四、实验步骤1. 准备工作（1）将菌种从保藏瓶中取出，置于37℃恒温箱中复苏。
（2）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、营养肉汤培养基、糖发酵培养基等。
2. 无菌操作（1）点燃酒精灯，用无菌棉签蘸取少量酒精，在火焰上方烧灼，待棉签干燥后，用于点燃接种环。
（2）用接种环从复苏的菌种中取出一环细菌，置于培养基表面。
（3）用接种环轻轻划线，使细菌均匀分布在培养基表面。
3. 观察生长现象（1）将接种后的培养基置于37℃恒温箱中培养24小时。
（2）观察细菌在不同培养基上的生长现象，包括菌落形态、颜色、大小等。
（3）用显微镜观察细菌的菌体形态和排列。
4. 结果分析（1）牛肉膏蛋白胨固体培养基上的菌落为白色、圆形、光滑、湿润。
（2）营养肉汤培养基中的细菌生长旺盛，菌液浑浊。
（3）糖发酵培养基上的细菌在糖类周围形成透明圈，表明细菌能够发酵糖类。
五、实验结果1. 大肠杆菌在牛肉膏蛋白胨固体培养基上形成白色、圆形、光滑、湿润的菌落。
2. 金黄色葡萄球菌在牛肉膏蛋白胨固体培养基上形成金黄色、圆形、凸起、不透明的菌落。
3. 枯草芽胞杆菌在牛肉膏蛋白胨固体培养基上形成白色、圆形、凸起、不透明的菌落。
4. 营养肉汤培养基中的细菌生长旺盛，菌液浑浊。
5. 糖发酵培养基上的细菌在糖类周围形成透明圈。
六、实验结论1. 通过细菌接种实验，掌握了无菌操作技术，确保了实验结果的准确性。
细菌接种实验报告
一、实验目的1. 掌握无菌操作技术，建立无菌观念。
2. 掌握细菌的接种、分离培养方法和接种环的制作方法。
3. 熟悉细菌生长现象的观察方法。
二、实验原理细菌接种是将细菌从一培养物转移到另一培养基的过程，目的是为了分离纯化菌种、扩大培养或进行细菌学研究。
无菌操作是保证实验结果准确性的关键。
三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等。
2. 培养基：固体琼脂培养基、液体培养基。
3. 器械：接种环、接种针、酒精灯、无菌棉签、无菌试管、无菌吸管、无菌培养皿、无菌试管架等。
四、实验方法1. 无菌操作技术培训：学习无菌操作的基本原则和操作步骤，包括手部消毒、试管口消毒、接种环消毒等。
2. 接种环制作：将白金丝或电热镍铬丝制成直径约2-4mm、长度约5-8cm的接种环。
3. 细菌接种：（1）斜面接种：将接种环在酒精灯火焰上灼烧，待其红热后，迅速蘸取少量菌液，然后在无菌斜面培养基上划线，形成菌落。
（2）液体接种：将接种环在酒精灯火焰上灼烧，待其红热后，迅速蘸取少量菌液，然后滴入无菌液体培养基中。
4. 细菌培养：（1）斜面培养：将接种好的斜面培养基放置在恒温培养箱中，37℃培养24小时。
（2）液体培养：将接种好的液体培养基放入摇床中，37℃、150 r/min培养24小时。
5. 细菌生长现象观察：（1）斜面培养：观察菌落生长情况，包括菌落大小、形状、颜色等。
（2）液体培养：观察菌液浑浊程度、菌落生长情况等。
五、实验结果1. 斜面培养：菌落生长良好，呈圆形、白色，边缘整齐。
2. 液体培养：菌液浑浊，菌落生长旺盛。
六、实验分析1. 通过无菌操作技术，保证了实验结果的准确性。
2. 掌握了细菌的接种、分离培养和观察方法。
3. 了解了细菌的生长现象，为后续细菌学研究奠定了基础。
七、实验总结本次实验成功完成了细菌接种、分离培养和观察，掌握了无菌操作技术、细菌接种方法和细菌生长现象观察。
在实验过程中，要注意以下几点：1. 严格遵守无菌操作原则，防止污染。
细菌接种实验报告总结(3篇)
第1篇一、实验背景细菌接种实验是微生物学实验中的重要内容，通过对细菌进行分离、纯化和接种，我们可以研究细菌的生长、代谢、形态和生理特性。
本实验旨在通过学习细菌接种技术，掌握无菌操作的基本原则，了解细菌在不同培养基上的生长情况，为后续的微生物学研究打下基础。
二、实验目的1. 掌握无菌操作的基本原则，建立无菌观念。
2. 熟悉细菌的接种、分离培养方法和接种环的制作方法。
3. 观察细菌在不同培养基上的生长情况，了解细菌的生理特性。
4. 分析实验结果，提高实验技能。
三、实验方法1. 准备培养基：本实验选用三种培养基，分别为琼脂培养基、含有抗生素的琼脂培养基和富含糖分的琼脂培养基。
2. 细菌接种：采用平板划线分离法、斜面接种法、液体培养基接种法和穿刺接种法进行细菌接种。
3. 观察与记录：观察细菌在不同培养基上的生长情况，记录菌落形态、颜色、大小等特征。
四、实验结果与分析1. 平板划线分离法：通过连续划线接种，将混合菌分离成单菌落。
观察发现，菌落形态、颜色、大小等特征各异，表明分离效果良好。
2. 斜面接种法：用接种环取单个菌落，从培养基斜面底部向上划一条直线，然后从底部向上作连续曲线划线。
观察到菌落生长均匀，斜面顶端菌落较密集。
3. 液体培养基接种法：用接种环取菌少许，在试管内壁与液面交接处的管壁上轻轻研磨，使细菌混合于培养液中。
观察到菌液均匀，无沉淀物。
4. 穿刺接种法：用接种针取细菌少许，从半固体培养基中央，平行于管壁垂直刺入，接近管底但不可接触管底，然后接种针沿原路退出。
观察到菌落生长良好，无细菌扩散。
五、实验总结1. 本实验成功掌握了无菌操作的基本原则，确保了实验结果的准确性。
2. 通过学习细菌接种技术，了解了不同接种方法的特点和适用范围。
3. 观察了细菌在不同培养基上的生长情况，为后续的微生物学研究提供了基础数据。
4. 在实验过程中，发现了实验操作中的不足，如接种环消毒不彻底、培养基制备不规范等，为今后的实验提供了改进方向。
细菌接种的实验报告
细菌接种的实验报告标题：细菌接种的实验报告摘要：本实验旨在研究细菌接种对生物体生长和发育的影响。
通过将细菌接种到不同的培养介质中，观察其对生物体的影响，并分析其原因。
结果显示，细菌接种能够促进生物体生长和发育，同时也有可能对其造成不利影响。
引言：细菌是微生物界中最主要的生物之一，其对生物体的影响广泛而复杂。
通过不同的接种方法和培养条件，我们可以研究细菌对生物体的各种影响，探索其作用机制。
本实验中，我们选取了不同类型的细菌，并将其接种到合适的培养介质中，以观察其对生物体的影响。
材料与方法：1. 实验材料：细菌液悬液、培养基、试管、培养皿等。
2. 实验步骤：a. 准备不同类型的培养介质。
b. 打开细菌液悬液瓶盖，使用移液器将一定量的细菌液悬液接种到试管中。
c. 使用移液器将细菌液悬液滴到培养基上。
d. 将装有培养基的培养皿密封，并将其放置于恒温培养箱中。
e. 观察培养皿中生物体的生长和发育情况，并记录结果。
结果与讨论：在实验中，我们将不同类型的细菌接种到培养基中，观察其对生物体的影响。
结果显示，细菌接种能够促进生物体生长和发育，但同时也可能对其造成不利影响。
首先，我们注意到接种细菌后的生物体生长速度较快。
与未接种细菌的对照组相比，接种组生物体的体重增长更快，体形也更加健壮。
这说明细菌对生物体的生长和发育有积极的促进作用。
我们推测，这可能是由于细菌能够分解培养基中的有机物质，提供额外的营养物质给生物体，从而促进其生长。
其次，我们观察到细菌接种对生物体的发育有重要影响。
在接种组中，生物体的形态和功能发育较好，器官发育更加完整，反应能力也更强。
这表明细菌接种能够刺激生物体的发育过程，促进器官和系统的形成。
这种促进可能是通过细菌产生的代谢产物或对环境的影响实现的。
然而，细菌接种也可能对生物体造成不利影响。
我们观察到，在一些接种组中，生物体出现了异常反应或病态症状。
这说明不同类型的细菌接种对不同生物体可能有不同的影响，有些细菌甚至可能是病原微生物。
实验四 细菌接种培养法与生长现象观察
实验四细菌的接种培养法与生长现象的观察【目的和要求】1．掌握无菌技术，建立无菌观念；明确无菌操作时注意要点。
2．掌握细菌的接种、分离培养方法和接种环的制作方法。
3．熟悉细菌生长现象的观察方法。
【试剂与器材】1．菌种：葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌等。
2．培养基：固体、半固体、液体培养基。
3．其他：温箱、酒精灯、接种环、接种针、L形玻棒、打火机、记号笔等。
【实验内容】一、细菌的接种工具1．接种环和接种针：其结构包括环（针）、金属柄、绝缘柄三部分（见图4-1）。
其中环（针）部分最佳材料为白金丝，因其受热和散热速度快，硬度适宜，不易生锈且经久耐用，但因为价格昂贵而限制了其应用。
目前实验室常用的是经济实用的300~500W电热镍鉻丝。
一般要求接种环长5~8cm，直径为2~4mm，定量接种环的容量为0.001ml。
图4-1 接种环和接种针接种环（针）在使用之前需检查镍鉻丝是否呈直线，若有弯曲，需用吸管或接种环的另一端将其压直；若环不圆，可将镍鉻丝前端放在吸管尖部缠绕一圈，再将镍鉻丝突出的部分朝内压紧。
接种环用于固体、液体培养基的接种，接种针用于半固体培养基的接种。
2．L形玻棒：由直径2~3mm的玻璃棒弯曲成L形制成。
在使用之前用厚纸包扎后置高压蒸汽灭菌，或沾取无水乙醇后在火焰上烧灼灭菌。
主要用于液体标本涂布接种。
二、细菌的接种方法1．液体培养基的接种该法主要用于细菌的增菌培养或进行细菌的生化反应。
方法：（图4-2）（1）先将接种环在火焰上烧灼灭菌，待冷却后挑取少许细菌。
（2）左手拿试管，右手持接种环，用右手其余手指将试管塞打开，试管口通过火焰烧灼灭菌。
（3）将接种环在贴近液面的管壁上上下碾磨数次，使细菌均匀分布于培养基中。
（4）将试管口灭菌后加塞，接种环烧灼灭菌后放回原处。
（5）在试管上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。
图4-2 液体培养基接种法2．半固体培养基的接种该法可用于保存菌种、观察细菌的动力或进行细菌的生化反应。
细菌接种培养实验报告
一、实验目的1. 掌握细菌接种培养的基本原理和操作方法。
2. 熟悉无菌操作技术，建立无菌观念。
3. 了解细菌在不同培养基上的生长现象及结果记录。
二、实验原理细菌接种培养是将纯种细菌接种到含有营养成分的培养基中，使其在适宜的环境下繁殖生长，以获得纯种细菌。
无菌操作技术是防止细菌污染的重要手段，要求操作者在操作过程中保持无菌状态。
细菌在不同培养基上的生长现象及结果记录有助于鉴定细菌种类。
三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌（E. coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、营养琼脂平板、营养肉汤3. 实验器材：无菌操作台、接种环、接种针、酒精灯、火焰灯、无菌试管、无菌培养皿、恒温培养箱、显微镜等。
四、实验步骤1. 无菌操作台的准备（1）将无菌操作台清洁干净，用75%酒精消毒。
（2）将实验器材放置在无菌操作台上，确保实验器材无菌。
2. 菌种活化（1）将菌种从冰箱中取出，置于37℃恒温培养箱中活化。
（2）待菌种活化后，用接种环或接种针挑取单个菌落，接种于牛肉膏蛋白胨培养基上。
（3）将接种后的培养基放入37℃恒温培养箱中培养24小时。
3. 细菌接种（1）将活化后的菌种接种于营养琼脂平板上，采用平板划线法进行接种。
（2）将接种后的平板放入37℃恒温培养箱中培养24小时。
4. 细菌生长现象观察（1）观察平板上的菌落特征，如菌落大小、形状、颜色、边缘等。
（2）观察肉汤中的细菌生长情况，如浑浊度、沉淀等。
5. 结果记录与分析（1）记录菌落特征、肉汤中的细菌生长情况。
（2）分析实验结果，判断菌种种类。
五、实验结果与分析1. 菌落特征（1）大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润、透明，边缘整齐。
（2）金黄色葡萄球菌菌落呈圆形、突起、不透明、黄色，边缘整齐。
2. 肉汤中的细菌生长情况（1）大肠杆菌肉汤呈浑浊，有少量沉淀。
（2）金黄色葡萄球菌肉汤呈浑浊，有较多沉淀。
根据实验结果，可以判断所接种的菌种分别为大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。
细菌在培养基中的生长现象结果观察
细菌在培养基中的生长现象结果观察细菌是一类微小的单细胞生物，它们广泛存在于自然界中的各种环境中，如水、土壤、空气等。
在实验室中，我们可以通过在培养基中培养细菌，观察它们的生长现象结果，从而了解它们的生物学特性和行为。
培养基是一种含有营养物质的人工培养环境，可以为细菌提供充足的营养和生长所需的条件。
细菌在培养基中生长的过程可以分为四个阶段：潜伏期、对数增长期、稳定期和死亡期。
潜伏期是指细菌刚接种到培养基中后，需要一定的时间来适应新环境和激活生理活动，此时细菌数量较少，生长速度较慢。
对数增长期是细菌生长最快的阶段，此时细菌数量呈指数增长，每个细菌细胞分裂成两个新的细胞，形成一个密集的菌落。
稳定期是指细菌数量达到最大值，此时细菌数量不再增加，细菌的生长速度和死亡速度相等，细菌菌落的大小也趋于稳定。
死亡期是指细菌数量开始下降的阶段，细菌的死亡速度逐渐超过生长速度，细菌数量逐渐减少，最终导致细菌菌落的消失。
在培养细菌的过程中，我们还可以观察到一些其他的生长现象，如变色现象、产生气泡和分泌物等。
这些现象可以反映细菌的代谢活动和生物学特性，对于深入研究细菌的生长机制和生态学意义具有重要意义。
变色现象是指细菌在培养基中产生颜色的现象，常见的有荧光、色素和脱氧胆酸等。
荧光是指某些细菌在特定的波长下产生荧光反应，这种现象可以用于快速检测食品、环境和医疗领域中的细菌污染；色素是指某些细菌在培养基中产生的颜色，如金黄色葡萄球菌就会产生金黄色的菌落，这种现象可以用于快速鉴定和区分不同种类的细菌；脱氧胆酸是指某些细菌在培养基中分解胆盐，产生脱氧胆酸，从而产生颜色变化，这种现象可以用于鉴定肠道细菌和肠道细菌感染。
产生气泡和分泌物是指细菌在培养基中产生气泡、泡沫和分泌物的现象，这些现象可以反映细菌的代谢活动和生长状态。
例如，某些细菌会产生气泡，这是因为它们分解培养基中的糖类，产生二氧化碳气体；某些细菌则会分泌胶质物质，形成粘稠的菌落，这种现象可以帮助细菌在培养基上附着和生长。
细菌在培养基中的生长现象结果观察
细菌在培养基中的生长现象结果观察细菌是一类微生物，它们能够在各种环境中生存和繁殖。
在实验室中，我们可以使用培养基来提供必要的养分和环境来观察细菌的生长现象。
在培养基中，细菌的生长现象受到多种因素的影响，如温度、pH值、营养物质等。
本文将以细菌在培养基中的生长现象结果观察为主题，介绍细菌在不同条件下的生长表现。
细菌在培养基中的生长通常可以分为四个阶段：潜伏期、对数生长期、稳定期和死亡期。
在潜伏期中，细菌需要适应新环境，其生长速度较慢。
对数生长期是细菌生长最快的阶段，细菌数量呈指数增长。
稳定期中，细菌数量趋于稳定，生长速度逐渐降低。
死亡期中，细菌数量开始下降，直至细菌全部死亡。
在培养基中，细菌的生长速度受到多种因素的影响。
其中最重要的因素是温度。
不同种类的细菌对温度的适应范围不同，但一般来说，细菌的最适生长温度为37℃左右。
当温度过高或过低时，细菌的生长速度将受到影响。
此外，pH值也对细菌的生长速度有影响。
不同种类的细菌对pH值的适应范围也不同，但一般来说，细菌的最适生长pH值在7左右。
营养物质也是细菌生长的必要条件，不同种类的细菌对营养物质的需求也不同。
一些细菌需要特定的营养物质来生长，如某些细菌需要铁元素才能生长。
在实验室中，我们可以使用不同种类的培养基来观察细菌在不同条件下的生长表现。
常见的培养基包括营养琼脂、大肠杆菌培养基、血琼脂培养基等。
以营养琼脂为例，该培养基包含了多种营养物质，能够满足大部分细菌的生长需求。
当我们将细菌接种到营养琼脂中后，可以观察到在37℃下，大部分细菌会在24小时内进入对数生长期。
在稳定期中，细菌数量趋于稳定，但不会达到最大值。
随着时间的推移，细菌数量会逐渐降低，进入死亡期。
除了温度、pH值和营养物质，其他因素也会对细菌的生长速度产生影响。
例如氧气浓度、水分含量、辐射等。
在实验室中，我们可以通过对这些因素进行控制，来观察细菌在特定条件下的生长现象。
细菌在培养基中的生长现象是受多种因素影响的。
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实验四细菌的接种培养法与生长现象的观察【目的和要求】1．掌握无菌技术，建立无菌观念；明确无菌操作时注意要点。
2．掌握细菌的接种、分离培养方法和接种环的制作方法。
3．熟悉细菌生长现象的观察方法。
【试剂与器材】1．菌种：葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌等。
2．培养基：固体、半固体、液体培养基。
3．其他：温箱、酒精灯、接种环、接种针、L形玻棒、打火机、记号笔等。
【实验内容】一、细菌的接种工具1．接种环和接种针：其结构包括环（针）、金属柄、绝缘柄三部分（见图4-1）。
其中环（针）部分最佳材料为白金丝，因其受热和散热速度快，硬度适宜，不易生锈且经久耐用，但因为价格昂贵而限制了其应用。
目前实验室常用的是经济实用的300~500W电热镍鉻丝。
一般要求接种环长5~8cm，直径为2~4mm，定量接种环的容量为0.001ml。
图4-1 接种环和接种针接种环（针）在使用之前需检查镍鉻丝是否呈直线，若有弯曲，需用吸管或接种环的另一端将其压直；若环不圆，可将镍鉻丝前端放在吸管尖部缠绕一圈，再将镍鉻丝突出的部分朝内压紧。
接种环用于固体、液体培养基的接种，接种针用于半固体培养基的接种。
2．L形玻棒：由直径2~3mm的玻璃棒弯曲成L形制成。
在使用之前用厚纸包扎后置高压蒸汽灭菌，或沾取无水乙醇后在火焰上烧灼灭菌。
主要用于液体标本涂布接种。
二、细菌的接种方法1．液体培养基的接种该法主要用于细菌的增菌培养或进行细菌的生化反应。
方法：（图4-2）（1）先将接种环在火焰上烧灼灭菌，待冷却后挑取少许细菌。
（2）左手拿试管，右手持接种环，用右手其余手指将试管塞打开，试管口通过火焰烧灼灭菌。
（3）将接种环在贴近液面的管壁上上下碾磨数次，使细菌均匀分布于培养基中。
（4）将试管口灭菌后加塞，接种环烧灼灭菌后放回原处。
（5）在试管上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。
图4-2 液体培养基接种法2．半固体培养基的接种该法可用于保存菌种、观察细菌的动力或进行细菌的生化反应。
方法：（图4-3）（1）先将接种针在火焰上烧灼灭菌，待冷却后挑取少许菌落。
（2）左手拿试管，右手持接种针，将试管塞打开后，试管口通过火焰灭菌，将接种针从培养基的中心向下垂直穿刺接种至试管底上方约5mm处（勿穿至管底），然后由原穿刺线退出，（3）将试管口灭菌后加塞，接种针烧灼灭菌后放回原处。
（4）在试管上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。
图4-3 半固体培养基接种法3．平板划线接种法该法可将标本中的多种细菌分散成单个菌落，有利于细菌的分纯和进一步鉴定。
方法：（1）连续划线法（图4-4）1）先将接种环在火焰上烧灼灭菌，待冷却后挑取少许菌落。
2）左手斜持平板，用手掌托着平板底部，五指固定平板边缘，在酒精灯旁以拇指、食指和中指将平板盖撑开大约30~45°角，将已挑取细菌的接种环先在平板一侧边缘均匀涂布，然后运用腕力将接种环在平板上自上而下，来回划线。
划线要密，但不能重叠，充分利用平板的面积，不能划破琼脂表面，并注意无菌操作，避免空气中的细菌污染。
3）划线完毕，将平板扣入平板盖，接种环烧灼灭菌后放回原处。
4）在平板底上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。
图4-4 固体培养基连续划线法（2）分区划线法（图4-5）1）先将接种环在火焰上烧灼灭菌，待冷却后挑取少许菌落。
2）同上法将平板盖打开约30~45°角，将已挑取细菌的接种环在平板一端（1区）内作来回划线，再在2、3、4区依次划线，每区的划线须有数条线与上区交叉接触，每划完一区是否需要烧灼接种环依标本中的菌量多少而定，每区线间需保持一定距离，线条要密而不重复。
3）划线完毕，将平板扣入平板盖，接种环烧灼灭菌后放回原处。
4）在平板底上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。
图4-5 固体培养基分区划线法4．斜面培养基接种法（图4-6）斜面培养基主要用于细菌的纯培养，以进一步鉴定细菌或保存菌种。
（1）将接种环（或接种针）在火焰上烧灼灭菌，待冷却后以无菌操作挑取少许菌落。
（2）左手拿试管，打开试管塞后，试管口通过火焰灭菌，再将取有细菌的接种环由斜面底部向上划一直线，再由下至上在斜面上作曲线划线。
（3）试管口灭菌后加塞，接种环烧灼灭菌后放回原处。
（4）在试管上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。
图4-6 斜面培养基接种法5．涂布接种法本法主要用于活菌计数和药敏试验。
（1）活菌计数：取一定稀释度的菌液0.1ml滴在平板上，用无菌L型玻璃棒将液滴涂布均匀，盖上平板盖，经35℃培养18~24h后计数菌落，则每毫升所含活菌数=菌落数×10×稀释倍数。
（2）直接涂布法：多用于纸片法和管碟法药敏试验。
先配制一定浓度的菌液，用无菌棉签蘸取菌液后，在管壁上将多余的液体挤去，在MH琼脂平板上按三个方向均匀涂布3次，最后沿平板边缘涂一周。
盖上平板盖，置室温放置5min使平板表面稍干，然后用无菌镊子将药敏纸片贴在培养基表面，或向竖在平板表面的牛津小杯内加入不同浓度的药物，经35℃培养18~24h后观察结果，测定抑菌圈直径，按判断标准判定结果。
6．倾注培养法此法常用于标本或样品中活菌计数。
（1）方法：1）将标本用无菌生理盐水稀释成不同浓度：10-1、10-2、10-3、10-4、10-5等。
2）取不同稀释度的标本各1ml分别注入直径90mm无菌平皿，迅速加入溶化并冷却至约50℃的营养琼脂15ml，轻轻转动平板使之充分混匀，待凝固后翻转平板。
3）置35℃温箱孵育18~24h，计数菌落形成单位（colony forming unit，CFU），按下式算出每ml标本中的细菌数：1ml标本中的活菌数=全平板CFU×稀释倍数7．细菌接种的注意事项（1）细菌接种过程中需注意无菌操作，避免污染，因此每一步操作均需严格按要求进行。
操作时不宜说话或将口鼻靠近培养基表面，以免呼吸道排出的细菌污染培养基。
（2）所有操作均需在酒精灯火焰附近进行，平皿盖、试管塞、瓶塞均应拿在手上打开（具体见前述），禁止将盖或塞事先取下放置在桌面上。
（3）取菌种前灼烧接种针（环）时要将镍鉻丝烧红，烧红的接种针（环）稍事冷却再取菌种，以免烧死菌种。
（4）取菌时注意菌落不要取得太多，应蘸取而不宜刮取，否则平板划线很难分离出单个菌落。
（5）平板划线时注意掌握好划线的力度和角度，用力不能过重，接种环和培养基表面大约呈30~40°角，划线要密而不重复，充分利用培养基，并注意不能划破平板。
半固体培养基接种时注意穿刺线要直，并沿原穿刺线退出。
（6）接种完毕后，需在培养基上做好标记再放置温箱孵育。
废弃的有菌材料（如玻片、有菌的平板、试管、吸管等）均需灭菌后再清洗。
发生有菌材料污染应及时进行消毒处理。
三、细菌的培养方法1．需氧培养法该法适用于需氧菌和兼性厌氧菌。
将接种后的培养基（试管放试管架上，平板底上盖下）置35℃培养箱，培养18-24h。
大多数细菌生长速度快，在孵育18~24h后即可见到生长现象，但若标本中的菌量少或生长速度慢的细菌（如结核分支杆菌），则需培养3~7天甚至4~8周后才能观察到生长现象。
2．CO2培养法（1）CO2孵育箱：能自动调节箱内CO2的浓度和温度，使用方便。
（2）烛缸法：取一有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨口处上涂上凡士林。
将接种后的培养基放入缸中，并在缸内放一支点燃的蜡烛，加盖密封。
随着缸内蜡烛燃烧产生的CO2增加，蜡烛逐渐自行熄灭，此时缸内的CO2浓度约为5~10%，置35℃培养箱孵育18~24h 后观察结果。
（见图4-7）图4-7 烛缸法（3）化学法（重碳酸钠-盐酸法）：按每升容积重碳酸钠0.4g与1mol/L盐酸0.35ml 比例，分别将二种试剂置于容器内，将容器放置在标本缸中，密封后倾斜容器，使二种试剂接触混合产生CO2。
该法适用于奈瑟菌和布鲁菌等苛养菌的培养。
3．微需氧培养：先用真空泵将容器内的空气排尽，再注入5%O2、10%CO2、85%N2的混合气体，然后置于35℃培养箱孵育后观察结果。
该法适用于空肠弯曲菌、幽门螺杆菌等微需氧菌的分离培养。
4．厌氧培养法：（1）厌氧罐培养法：用理化方法使容器内形成无氧环境，用于专性厌氧菌培养。
常用的方法有抽气换气法和气体发生袋法。
1）抽气换气法：将已接种的培养基放入真空干燥缸或厌氧罐中，再放入催化剂钯粒和指示剂美蓝。
先用真空泵将缸内抽成负压99.99kPa（750mmHg），再充入无氧氮气，反复三次，最后充入80%N2、10%H2和10%CO2混合气体，若缸内呈无氧状态，则指示剂美蓝为无色。
每次观察标本后需重新抽气换气，用过的钯粒经160℃2h干烤后可重复使用。
2）气体发生袋法（Gas-pak法）：该法需以下二种容器：厌氧罐——是由透明聚碳酸酯或不锈钢制成，盖内有金属网状容器，其内装有厌氧指示剂美蓝和用铝箔包裹的催化剂钯粒；气体发生袋——是一种铝箔袋，其内装有硼氢化钠-氯化钴合剂、碳酸氢钠-柠檬酸合剂各1丸和1张滤纸条，使用时剪去特定部位，注入10ml水，水沿滤纸渗入到二种试剂中，发生下列化学反应，产生H2和CO2。
立即将气体发生袋放入罐内，密封罐盖，使气体释放到罐中。
C6H8O7+3NaHCO3→Na3(C6H5O7)+3H2O+3CO2↑NaBH4+2H2O→NaBO2+4H2↑（2）厌氧袋法：厌氧袋是用无毒透明、不透气的复合塑料薄膜制成。
袋中装有催化剂钯粒和2支安瓿，分别装有H2、CO2发生器（化学药品，成分同上）、指示剂美蓝。
使用时将接种细菌的平板放入袋中，密封袋口，先将袋中装有化学药品的安瓿折断，几分钟后再折断装有美蓝的安瓿，若美蓝为无色则表示袋内已处于无氧状态，置35℃温箱孵育。
（3）需氧菌共生法：将已知专性需氧菌（如枯草芽胞杆菌）和待检厌氧菌分别接种到2个大小相同的平板上，将两者合拢，缝隙用透明胶密封，置35℃温箱培养，需氧菌生长过程中消耗氧气，待氧气耗尽后，厌氧菌即开始生长。
（4）平皿焦性没食子酸法：按每100ml容积加入焦性没食子酸1g和2.5mol/LNaOH 10ml （也可用Na2CO3）的比例，先将焦性没食子酸放入平皿盖背面的灭菌纱布中，再滴入NaOH，立即将接种细菌的平板扣上，用熔化的石蜡密封平皿和平皿盖的缝隙，置35℃温箱培养。
（5）庖肉培养基法：将庖肉培养基上面的石蜡熔化，用毛细管吸取标本后接种于培养基中，待石蜡凝固后置37℃孵育。
用于培养基中的肉渣可吸收氧气，石蜡凝固后起隔绝空气的作用，从而使培养基内呈无氧状态。
（6）厌氧手套箱培养法：厌氧手套箱是目前国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作。