实验十二.青蛙骨髓染色体的制备及核型分析
实验五骨髓细胞染色体的制备及组型分析
实验五骨髓细胞染色体的制备及组型分析一、实验目的初步掌握骨髓细胞染色体的制片及染色技术，学习染色体组型分析方法，观察动物细胞染色体的数目和形态。
二、实验原理真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。
制备染色体标本是细胞遗传学最基本的技术，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交的先决条件。
染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。
小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织。
利用骨髓的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但其基本程序是简便的。
另外，在骨髓细胞中，有丝分裂指数相当高，因此可以直接得到中期细胞而不必象淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培养。
主要的中期相来自成红细胞系统，也来自各种骨髓母细胞。
单核细胞和淋巴细胞的分裂相是较少的。
不过，在染色体制片上已无法区别上述来源。
多倍体的中期相（4n、8n和16n）往往来自于巨核细胞。
对大型动物通常采用对骨骼、脊柱或胸骨穿刺术吸取红骨髓，小型动物多采用剥离术取股骨以获得骨髓细胞。
通过骨髓得到的染色体是比较简便的，一般也无需无菌操作。
在临床上多用于白血病的研究。
在实验条件下，这种染色体是机体内真实情况的反映，因此在药品检验、环境监测、食品检验等工作以及致畸、致癌、致突变等研究中，利用骨髓制片的方法易于观察毒性物质在体内对细胞和染色体的影响。
不过，在有些情况下，穿刺取骨髓较困难，或者希望对同一个体材料进行连续的对比取材，以观察药物或环境因素对人类或动物的影响及染色体的动态变化。
这时，采用外周血细胞而不伤害供血者直接制备染色体的技术就十分有利了。
在动物实验时，可在取材前经腹腔注射有丝分裂抑制剂，一般常用秋水仙素。
秋水仙素是从百合科秋水仙属的一个种——秋水仙的器官和种子内提炼出来的一种植物碱。
因有剧毒，故使用时要特别注意，切勿使药液进入眼内或口中。
染色体核型分析实验报告
染色体核型分析实验报告染色体核型分析实验报告染色体核型分析是一项重要的实验技术，它能够帮助我们了解个体的遗传特征以及染色体异常与疾病之间的关系。
本次实验旨在通过染色体核型分析，观察和分析不同个体的染色体组成，并探讨染色体异常与遗传疾病之间的关联。
实验过程中，我们选择了一组健康的个体作为研究对象，采集了其外周血样本。
通过细胞培养和染色体制备技术，我们成功地制备出了染色体悬液。
接下来，我们使用高倍显微镜观察了染色体的形态和数量。
在观察过程中，我们发现了不同个体之间染色体的差异。
正常情况下，人类细胞核中的染色体应该为23对，其中包括22对常染色体和一对性染色体。
常染色体是指除性染色体以外的其他染色体，它们负责携带遗传信息，决定了个体的大部分遗传特征。
性染色体则决定了个体的性别。
通过观察，我们发现了某些个体的染色体数量存在异常。
这种异常可能是由于染色体缺失、重复或结构异常等原因引起的。
染色体缺失是指染色体上的一部分或整个染色体丢失，而染色体重复则是指染色体上的一部分或整个染色体重复出现。
染色体结构异常则是指染色体上的片段发生断裂、倒位、交换等变化。
染色体异常与许多遗传疾病之间存在着密切的关系。
例如，唐氏综合征是由于21号染色体上的三个染色体引起的，患者通常具有智力发育迟缓、面部特征异常等症状。
另外，爱德华氏综合征是由于18号染色体异常引起的，患者通常出现心脏和肾脏畸形等问题。
通过染色体核型分析，我们可以准确地检测出这些染色体异常，为遗传疾病的诊断和治疗提供有力的依据。
除了遗传疾病，染色体核型分析还可以应用于其他领域。
例如，它可以用于法医学领域的亲子鉴定，通过比对父母与子女的染色体核型，确定亲子关系。
此外，染色体核型分析还可以用于评估环境因素对染色体的影响，例如辐射和化学物质对染色体的损伤程度。
总结起来，染色体核型分析是一项重要的实验技术，它可以帮助我们了解个体的遗传特征以及染色体异常与疾病之间的关系。
通过观察染色体的形态和数量，我们可以准确地检测染色体缺失、重复和结构异常等问题，并为遗传疾病的诊断和治疗提供依据。
牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察
脂肪组织 在小烧杯中加入6ml0.65 用镊子挑出， ％生理盐水，取带针头的玻璃 弃去，否则 注射器，吸入2ml 0.65％生理 容易堵塞注 盐水，将针头沿骨的长轴方向 射器。 从骨的一端刺入骨中，缓慢推 动注射器活塞，将骨髓细胞冲 洗到小烧杯中。此6ml的生理 盐水要反复使用，直到把所 注意： 冲洗时动作 有材料中的骨髓冲出为止。 要徐缓，以免溶液喷 出，损失骨髓细胞。 骨髓腔发白！
注：镜检
三、实验仪器耗材和试剂
每人：
复式双筒显微镜（带油镜）、Motic数码互动系统
每组
香柏油 / 二甲苯；搪瓷盘，剪刀，烧杯，小离心管，玻璃注射器
常备：擦镜纸/盖玻片；载玻片/镊子；记号笔；小片滤纸；移液器/吸头； （如缺少可至准备处补充） 实验材料：肉用成体牛蛙（两组1只）； 试剂： 0.65％生理盐水；
徐道觉
蒋有兴
人外周血淋巴细胞染色体（Giemsa 染色）
染色体显色技术
于1968年由瑞典Casperson首先建立。 是将未染色的中期染色体经过一定的预处理， 再用不同的方法及不同的染料处理染色体标本， 使染色体上出现明暗相间或深浅不同的明显而 稳定的斑带。 显带技术极大地促进了细胞遗传学的发展，使 每条染色体都可被准确识别和鉴定，甚至出现 小的染色体结构异常也可被检出。 分为两大类：
实验五
牛蛙骨髓染色体标本的 制备和观察
上海交大生命学院
一、学习目的
1、了解制备中期染色体标本的原理； 2、初步掌握制备动物骨髓染色体的操作方法； 3、观察试验动物染色体的特点和核型。
二、实验原理
染色体制片技术
根据细胞分裂的特点，将生物细胞分裂旺盛的组织 经适当技术处理后，即可获得细胞分裂期的染色体 标本。优良的染色体制片是进行染色体显带、组型 分析、原位杂交等实验的先决条件。
实验十二.青蛙骨髓染色体的制备及核型分析
• 【基本原理】 • 凡细胞处于活跃增殖状态，或经过各种处理后，
细胞就可以进入分裂的动物组织，可用于染色体 分析。在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的 组织之一。给动物注射一定量的秋水仙素即可使 许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规 的干燥法制备染色体，可得到大量的可分析的染 色体标本。
• 【实验结果】 • 在显微镜下，染色体被染成紫红色，胞
浆完全不着色。对于分散好的染色体, 其间 相互散开, 短臂收缩适中, 二条姐妹染色单 体大致平行分离, 着丝粒清晰可见。
• 【实验报告】 • 1．通过对自己制做的青蛙染色体标本观察，
总结青蛙染色体的形态特征。 • 2．对于分散好的染色体，进行染色体计数。 • 3．请你分析一下在本实验中造成染色体标 本制作不佳的可能原因有哪些？本实验成 败的关键是什么？秋水仙素在本实验中起 什么作用？
• 【实验用品】 • 1．器材：解剖器具、注射器、离心机、离
心管、恒温水浴箱、载玻片、酒精灯等； • 2．试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固 定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa染液等。 • 3．材料：青蛙
• 【方法步骤】
1.按青蛙体重4ug/g注射秋水仙素; 2.5小时后处死青蛙，取出股骨和胫骨，去肌肉。 3.用5-8毫升生理盐水冲洗骨髓腔至小烧杯中；移 至离心管，1000rpm，8分钟； 4.去上清，加0.075mol/LkCl低渗液至6毫升， 37℃，20分钟后离心，1000rpm, 8分钟； 5.去上清，加卡诺固定液至5毫升，室温20分钟； 1000rpm，8分钟； 6.重复5 7.去上清，加少量固定液。 8..滴片； 9.Gimesa染色：扣染观察。
蛙骨髓染色体标本
正确操作显微镜
正确操作显微镜，调整焦距、光线等参数，以确保观察结果的准 确性和清晰度。
观察后的处理
记录观察结果
对观察到的染色体形态、数量和结构进行详细记录。
整理保存
将观察后的蛙骨髓染色体标本进行整理和保存，以便 后续的研究和分析。
数据处理与分析
对观察结果进行数据处理和分析，提取有用的信息， 为相关研究提供支持。
细胞计数
复苏后对细胞进行计数，以确保细胞数量符合实 验要求。
3
染色体分析
在需要时，可以对复苏后的细胞进行染色体分析， 以评估染色体的结构和数目。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
运输
按照相关规定进行运输， 确保标本质量。
实验室处理
在实验室中对标本进行处 理和观察，确保实验结果 的准确性和可靠性。
02 蛙骨髓染色体标本的制备
制备方法
采集蛙骨髓
选择健康成年蛙，通过注射器抽取骨髓。
细胞培养
将抽取的骨髓在培养基中培养，促进细胞分裂和 生长。
染色体制备
在细胞生长到一定阶段时，用固定液固定细胞， 再经过染色、脱水等步骤制备成染色体标本。
05 蛙骨髓染色体标本的保存
保存方法
低温保存
将蛙骨髓染色体标本保存在低温环境中，如冰箱或冷冻柜，以减缓 细胞代谢和微生物繁殖。
加入保护剂
在保存液中加入适当的保护剂，如二甲基亚砜（DMSO）或甘油， 以保持细胞结构和染色体的完整性。
定期更换保存液
定期更换保存液可以去除细胞代谢产生的有害物质，并保持保存液的 清洁度。
在细胞生物学研究中的应用
细胞分裂与分化研究
实验七 牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察
东北梅花鹿染色体R带带型
N带：专一显示染色体的核仁组织区 （nucleolus organizer region, NOR）
NOR一般位于染色体的次缢痕部位，是 rRNA基因（5SrRNA除外）部位。
硝酸银与NOR的蛋白质如nucleolin核仁 素、numatrix核基质素结合，呈黑色银 染物，这种银染阳性的核仁组织区称为 Ag-NOR。
Q带：70年代，瑞典化学家T. Caspersson首先应用
荧光染料喹吖因氮芥（quinacrine mustard）对 染色体标本染色，在荧光显微镜下每条染色体出现 了宽窄和亮度不同的纹，即荧光带。这些区带相当 于DNA分子中AT碱基对成分丰富的部分。
Q-banded metaphase spread from a phenotypically normal human male with an additional chromosome that is an isochromosome for
取骨
（2下肢, 1上肢）
剪去两端 膨大部分
6ml生理 盐水冲洗
离心 弃上清，
分装4管
3000rpm 5分钟
（1.2ml/管）
沉淀加
75μl生理
盐水悬浮
合并成
2管
每管加蒸 低渗
馏水1ml 20min
离心
3000rpm 5分钟
弃上清，
弃上清，
2 沉淀加
离心 沉淀加
1冰m醋l甲酸醇固-1固5m定in
3000rpm 5分钟
3．将骨髓冲出物中大块白色脂肪组织用针头挑 出，弃去。把6ml的骨髓细胞悬液转移至4只1.5ml 离心管中（每管1.2ml，如体积不满，可再加入适 量生理盐水，以保证离心平衡），3000转/分离心 5分钟。
人类染色体标本的制备及G显带核型分析
液，轻轻混匀，制成磨砂状悬液。 11.制片：取上述悬液1～2滴，滴至沾有冰水或干燥的
洁净载玻片上，吹散，过火，空气干燥。 12.37℃温箱放置3～4天或70℃烘烤2 h进行老化处
理，以备显带分析用。
【(二实)人验类染方色法体和的G步显带骤】
染色体的带纹是染色体标本经过特殊处理后，每条 染色体上沿纵轴显示出的一定数量、着色程度不同、 宽窄不等的横纹。染色体带是染色体固有的、稳定 的特征。染色体G显带是多种显带技术中的一种，是 将染色体标本经胰蛋白酶处理后再用吉姆萨 （Giemsa）染液染色。G显带技术因其方法简便， 重复性好，带纹清晰且可长期保存而应用最为广泛。
2. 超净工作台内将抗凝血加入RPMI-1640培养液中，
每 瓶加0.3～0.5 ml全血。轻轻混匀。 3. 37℃恒温培养箱静置培养72 h左右（培养24 h后水平 轻摇培养瓶一次，以悬浮混匀血细胞）。 4. 培养至68～72 h（即终止培养前2～4 h），每瓶加秋 水仙素(20 μg/ml)至终浓度0.1～0.2 μg/ml，轻摇 培养瓶混匀，继续培养2～4 h。 5. 终止培养，将培养物吹打混匀后转移到10 ml玻璃离 心管，配平，1800 rpm 离心6 min。
2. G显带过程中的关键因素包括胰蛋白酶的作用时间、 温度、pH等。其中胰蛋白酶溶液应37℃充分预热，溶 液pH应维持在6.8～7.2，以保证酶活性的发挥。另外 消化要适度，消化不足则带纹不清晰或不显示，消化过 度则带纹模糊甚至损失。
[作业与思考题]
1.简述人类染色体制备的操作过程和基本原理。 2.总结人类染色体制备过程中的关键步骤及注意
植 物血凝素（PHA）、秋水仙素(20μg/ml)、 0.075 mol/L氯化钾低渗液、0.85%生理盐水、 固定液（甲醇:冰醋酸=3:1，现配现用）、 Giemsa原液、0.25%胰蛋白酶溶液、磷酸盐缓冲 液。
青蛙骨骼染色透明标本的制作及应用
文章编号：１００３－８５０７（２００８）０９－１７００－０２中图分类号：Ｒ３２２－３３文献标识码：Ａ【实验技术及其应用】青蛙骨骼染色透明标本的制作及应用刘万胜，黄明辉，刘力华，郑登秀摘要：［目的］不通过一般解剖方法直接观察青蛙体内整体骨骼的形态和位置关系。
［方法］选活蛙经去内脏（去皮或不去皮）或清洁消化道后用９５％酒精或５％～１０％福尔马林液固定，然后脱水、脱脂、再脱水和染色。
［结果］使用化学药品和方法可以将青蛙骨骼染色制成透明标本，达到一般解剖方法难以观察到的青蛙整体骨骼的位置关系和形态。
［结论］本法可广泛应用于实验教学和陈列展览。
关键词：青蛙；透明标本；制作及应用ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮＡＮＤＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＯＦＴＨＥＤＹＥＩＮＧＴＲＡＮＳＰＡＲＥＮＴＳＰＥＣＩＭＥＮＯＦＦＲＯＧ’ＳＳＫＥＬＥＴＯＮＬＩＵＷａｎ－ｓｈｅｎｇ，ＨＡＮＧＭｉｎｇ－ｈｕｉ，ＬＩＵＬｉ－ｈｕａ，ｅｔａｌ．（ＹｏｎｇｚｈｏｕＶｏｃａｔｉｏｎａｌＴｅｃｈｎｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｙｏｎｇｚｈｏｕ４２５００６，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ｎｏｔｔｈｒｏｕｇｈｇｅｎｅｒａｌａｎａｔｏｍｉｃｍｅｔｈｏｄｓｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｆｏｒｍａｎｄｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｆｒｏｇ’ｓｓｋｅｌｅｔｏｎ．［Ｍｅｔｈｏｄｓ］Ｓｅｌｅｃｔｅｄａｌｉｖｅｆｒｏｇ，ａｂｓｃｉｓｅｄｉｔｓｉｎｎａｒｄｓ（ｆｌａｙｅｄｏｒｎｏｔｆｌａｙｅｄ）ｏｒｍａｄｅｉｔｆｉｘｅｄｗｉｔｈ９５％ａｌｃｏ－ｈｏｌｏｒ５％－１０％ｆｏｒｍａｌｉｎａｆｔｅｒｃｌｅａｎｅｄｔｈｅａｌｉｍｅｎｔａｒｙｃａｎａｌ，ｔｈｅｎｄｅｗａｔｅｒｅｄ，ｄｅｆａｔｔｅｄ，ｄｅｗａｔｅｒｅｄｉｔｏｎｃｅｍｏｒｅａｎｄｄｙｅｄｉｔ．［Ｒｅｓｕｌｔｓ］Ｕｓｉｎｇｃｈｅｍｉｃａｌｓａｎｄｍｅｔｈｏｄｓｃａｎｄｙｅｆｒｏｇ’ｓｓｋｅｌｅｔｏｎａｎｄｍａｋｅｉｔｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｓｐｅｃｉｍｅｎ，ｔｈｅｎｃａｎｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｒｅｌａ－ｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｆｏｒｍａｎｄｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｆｒｏｇ’ｓｓｋｅｌｅｔｏｎｉｎｓｔｅａｄｏｆｇｅｎｅｒａｌａｎａｔｏｍｉｃｍｅｔｈｏｄｓ．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］Ｉｔｓｈｏｕｌｄｂｅｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｅａｃｈｉｎｇａｎｄｅｘｐｏｓｉｔｉｏｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｆｒｏｇ；Ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｓｐｅｃｉｍｅｎ；Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ青蛙骨骼染色透明标本，可显示采用一般解剖方法难以观察清楚的结构。
青蛙骨髓细胞染色体标本的制备及染色体的核型分析
青蛙骨髓细胞染色体标本的制备及染色体的核型分析陈钧瑜（中山大学生命科学学院08级生物技术广州510275）摘要：染色体组型具有物种的特异性，它们在遗传过程中是相对稳定的，因此可以作为物种分类的基本依据之一。
本实验以青蛙的骨髓为材料，制备了青蛙骨髓细胞染色体标本，选择形态完好的中期分裂相进行拍照放大，用常规统计方法测量染色体的相对长度、臂比和着丝粒指数等。
结果表明青蛙骨髓细胞二倍染色体数目为26，可配成13对同源染色体，其中有5对大型染色体（相对长度>9%）和8对小型染色体（相对长度<7%）；8对为中部着丝粒染色体，其余5对为亚中部着丝粒染色体。
青蛙骨髓细胞染色体核型公式为K(2n)=26 =13n=16m+10sm。
关键词：青蛙；骨髓细胞；染色体；核型1、引言核型一词首先由前苏联学者TA 列维茨基等在上世纪20 年代提出,它是指每种生物染色体的数目、大小和形态等特征的总和。
染色体核型或组型分析(Chromosome karyotype analysis) 是染色体研究中的一个基本方法。
染色体组型是细胞分类学的重要数据，也是从细胞遗传学角度了解物种间亲缘关系的有效途径，对染色体核型分析,不仅有助于了解生物的遗传组成、遗传变异规律和发育机制,而且对预测鉴定种间杂交和多倍体育种的结果、了解性别遗传机理以及基因组数、物种起源、进化和种族关系的鉴定都具有重要的参考价值[1]。
骨髓细胞具有丰富的细胞质和高度分裂能力，因此不必经体外培养，也不需要植物血球凝集素（PHA）的刺激，可直接观察到分裂的细胞。
经秋水仙素处理后，分裂的骨髓细胞被阻断在有丝分裂中期，再经离心、低渗、固定、滴片等步骤，便可制作出理想的染色体标本，是研究动物细胞遗传学的好材料。
用Giemsa染色法制备骨髓细胞染色体标本，所得标本清晰无缺失与重叠[2]，用显微拍摄技术采集染色体的电子图片信息，后期用Adobe公司的Photoshop软件优化处理照片[3]]，获得完整、清晰的染色体核型，并采用Levan[4]的方法进行核型分析。
蛙骨髓染色体标本的制备与观察
固定
以1000转/min,离心 转 离心 7min,弃上清，在沉淀 弃上清， 弃上清 物中加入4ml固定液， 固定液， 物中加入 固定液 适度吹打10min,再加 适度吹打 再加 入4ml固定液，静置 固定液， 固定液 20min,如此 次。 如此3次 如此
预固定
在低渗管中加 固定液， 入1ml固定液， 固定液 适度吹打5min 适度吹打
蛙骨髓染色体标本 的制备与观察
•
实验目的 实验原理 实验材料与药品 实验步骤 作业
•
•
•
•
实验目的
• 初步掌握动物组织细胞的固定、分 初步掌握动物组织细胞的固定、 析和染色体制备技术， 析和染色体制备技术，并观察动物染色 体组的形态特征， 体组的形态特征，以便进行染色体组型 分析
实验原理
• 大多数高等动植物都是二倍体， 大多数高等动植物都是二倍体，以2n 表示，每种生物的体细胞， 表示，每种生物的体细胞，都有其特定的 染色体组型，包括染色体的数目、大小、 染色体组型，包括染色体的数目、大小、 形态、着丝点的位置以及次缢痕、 形态、着丝点的位置以及次缢痕、随体的 有无等。 有无等。
取材
取洁净的股 骨、腓骨于盛有 0.4％KCl的小烧 ％ 的小烧 杯中剪碎
低渗
吸取中层的悬浮 液于低渗管中， 液于低渗管中， 加入0.4％ 加入 ％KCl至 至 7ml于37－40℃ 于 － ℃ 低渗40min 低渗
制冰片
将洁净的载玻片 洁净的载玻片 浸泡在蒸馏水中， 浸泡在蒸馏水中， 置于冰箱， 置于冰箱，用前 20min取冰块置于 取冰块置于 水面， 水面，制成冰 片
片
取细胞悬液于冰 片上方约50cm 片上方约 处滴片， 处滴片，立即过 火5－6次 － 次
〖医学〗动物骨髓细胞染色体标本的制备
实验材料
小鼠或青蛙
实验仪器、用具
天平 离心机 温箱 显微镜 酒精灯
注射器 解剖盘 解剖剪 刀片 离心管 吸管 烧杯 冰冻载玻片
方法和步骤
低渗处理
离心后加入适量蒸馏水,用吸管轻轻吹打成 细胞悬液,置37℃低渗20min
固定
沿管壁逐滴加入固定液,吹打成悬液,室温 固定20min,离心。重复此操作一次。最后 用少量固定液将沉淀悬浮。
式”近代发展起来的西医，20世纪西 医又发 展到“ 社会-心 理-生 物医学 ”或综 合医学 模式， 后基因 组时代 系统生 物学的 兴起， 形成了 系统医 学在全 球的迅 速发展 ，成为 继传统 医学、 西医学 之后中 、西医 学汇通 的未来 医学。 当代中 国医学 类专业 比较优 秀的学 校有北 京大学 、华中 科技大 学、郑 州大学 等学校 。
У
Ю砺厶 逑 - 东方医学和西方医学（即西医）的融 合形成 现代系 统医学 。该体 系所涉 及的一 切问题 不管从 广度上 ，还是 从深度 上，都 应该远 远超过 现有的 中西医 学理论 ，并将 现有中 西医学 理论纳 入自己 的理论 框架范 围之内 。为了 肩负起 这一历 史使命 ，原创 人生、 医学理 论体系 ——灵 魂医学 soul medicine应运而生，她不但从 宏观上 或战略 上圆满 解释并 解决了 存在于 人类医 学及人 文社会 科学史 上的一 切疑难 模糊问 题，而 且还能 够使人 们得以 启迪人 生，不 得不重 新认识 人类自 身、不 得不重 新认识 人类赖 以生存 的这个 多维世 界对象 的医学 科学， 故不能 解现今 医学分 为传统 医学、 基于“ 生物-医 学模
⌒ SARS、禽流 感面前 竟束手 无策， 在糖尿 病、癌 症、心 脑血管 疾病、 尿毒症 等相当 多疾病 面前更 是不得 不求助 或借助 中医治 疗。一 个是疗 效不确 实，一 个是有 些甚至 相当多 疾病无 法治疗 ，这就 是中西 医学结 合的缘 由。然 而，由 于二者 是两套 理论、 两股道 上跑的 车，风 马牛不 相及， 从理论 上讲就 没薪
5-牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察
报告成绩实时记录成绩实验五牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察学生姓名学号班级座位号：同组同学日期：年月日备注：【Introduction】（1）简述染色体显色技术：将没有染色的中期染色体经过预处理后，再用不同的方法和染料处理，使染色体上出现明暗相间或深浅不同的明显而稳定的斑带。
每条染色体都可被准确识别和鉴定，甚至染色体结构异常也可被检出。
染色体显色技术分为两大类，一类是产生的染色带分布在整个染色体上，如G、Q和R带；另一类是只能使少数特定的区域显带，如C、T和N带。
染色体显色技术极大地促进了细胞遗传学的发展，使每条染色体都可被准确识别和鉴定，甚至出现小的染色体结构异常也可被检出。
（2）制备中期染色体标本的原理和应用：识别染色体的形态特征的最佳时期是细胞有丝分裂中期和早后期。
这时染色体收缩程度最大，形态最稳定，并且分散排列、易于计数。
如果在同一时间内获得不同物种的染色体标本，就可以了解不同物种之间的染色体水平的异同；或者在同一时间内获得同一物种不同技术处理条件下的染色体标本，还可以了解不同技术处理对染色体的影响。
【Materials & methods】实验仪器：复式双筒显微镜（带油镜）；Motic数码互动系统；擦镜纸/盖玻片；载玻片/镊子；记号笔；小片滤纸；移液器/吸头；香柏油/二甲苯；搪瓷盘，剪刀，烧杯，小离心管，玻璃注射器；离心机，一次性手套，骨剪（实验班公用），冰箱（0℃）。
实验材料：肉用成体牛蛙（两组1只）。
实验试剂：0.65％生理盐水；甲醇—冰醋酸(3:1)固定液；蒸馏水；自来水;Giemsa染液。
实验操作：1．动物前期处理：牛蛙称重→注射秋水仙素→3.5~4小时后麻醉→取牛蛙→肢解。
2．取骨髓：剪下四肢→剔骨→剪开骨髓腔→生理盐水冲洗→分四个离心管离心→弃去上清液→生理盐水吹打沉淀物→合并于一管。
3．低渗：每管加蒸馏水1 ml→吹打混匀→30度下静置20 min。
4．固定：离心→弃去上清液→加甲醇-冰醋酸固定液l ml→固定15分钟→吹打悬浮→重复上面步骤一次→离心→弃去上清液→吹打悬浮。
动物骨髓细胞染色体标本的制备
细胞生物学综合性实验
动物骨髓细胞染色体标本的制备及 NOR的观察
骨髓细胞具有丰富的细胞 质和高度分裂能力，可直接观 察到分裂细胞，是研究动物细 胞遗传学的好材料。
实验目的
掌握动物骨髓细胞染色体标本的制备技 术 观察染色体的数目以及形态特征 熟悉银染法显示动物细胞NOR的原理和 方法，并了解NOR在细胞中分布情况
Giemsa染液染色30min，镜检
注意事项
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
低渗处理是实验成败的关键 处理和操作过程中注意要有利于细胞完 整和染色体的伸展、分散
作业
绘出骨髓细胞分裂中期染色体核型图 指出染色体数目（2n）
NOR的显示实验步骤
快速银染法(可选）：
在染色体标本上滴加含 1% 甲酸的 2% 明 胶水溶液 3 滴，再加 50% 硝酸银 3 滴，混合 后盖上盖片，将标本置于 60℃恒温台上处 理至液体为棕黄色为止，自来水冲洗，空 气干燥，镜检。
实验材料
小白鼠或青蛙
实验仪器、用具
天平 离心机 温箱（或水浴锅） 显微镜 酒精灯
注射器（1ml） 解剖盘 解剖剪 刀片 离心管 吸管 烧杯 冰冻载玻片
试剂1
Carnoy固定液（现用现配）
甲醇：冰醋酸=3：1
生理盐水 0.1%秋水仙素溶液
NOR的显示实验步骤
氨银染色法（建议）
标本上滴加4-8滴50%硝酸银溶液，立即覆以盖玻 片，放入潮湿密封的培养皿中，37℃温箱中2448h，或50℃2-5h 流水冲去盖玻片，蒸馏水洗2次，室温晾干 加4d氨银溶液和4d3%甲醛溶液（pH4.5）于染色 体标本上，立即覆以盖玻片，室温12min 流水冲去盖玻片，蒸馏水洗净 2%Giemsa染色10-15min 水洗，空气干燥，镜检。
青蛤染色体制备及核型分析
青蛤染色体制备及核型分析段海宝1,2，陈义华3，董志国1,2*，张敏1,2，葛红星1，魏敏1,2，周丽青4，符翔超1，孙泽鹏2(1. 江苏海洋大学，江苏省海洋生物资源与环境重点实验室，江苏连云港 222005；2. 江苏海洋大学，江苏省海洋生物技术重点实验室，江苏连云港 222005；3. 上海海洋大学, 水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室，上海 201306；4. 中国水产科学研究院黄海水产研究所，农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室，山东青岛 266071)摘要：以青蛤成体鳃组织和性成熟的雌、雄青蛤性腺为材料，采用常规制片方法，分别制备青蛤二倍体染色体和单倍体染色体，统计染色体数目。
结果显示，青蛤二倍体与单倍体染色体数目分别为2n=38和n=19；核型分析发现，青蛤核型组成为11m+6sm+2st，NF=76，未发现性染色体和随体染色体。
本研究以青蛤成熟性腺为制备材料，成功制备单倍体染色体，与青蛤二倍体染色体互相印证，弥补了以往研究的不足，进一步丰富了对青蛤染色体数目及核型组成的认知。
同时，也为青蛤染色体水平全基因组测序组装提供更加科学的基础资料。
关键词: 青蛤；染色体；性染色体；单倍体；核型分析中图分类号: S 917.4文献标志码: A青蛤(C y c l i n a s i n e n s i s)属瓣鳃纲(Lamellibranchia)，帘蛤目(Venerida)，帘蛤科(Veneridae)，是我国南北沿海习见的一种肉质鲜美、营养丰富的经济滩涂贝类[1]。
近年来，随着近海环境的恶化和青蛤种质资源的退化，使得青蛤自然资源日益减少。
但由于其巨大的商业潜在价值，迫切需要发掘青蛤优良的种质资源，而开展良种选育需要遗传学和生物学基础作为支撑。
染色体是遗传物质的载体，是研究细胞遗传学的基础[2]。
对染色体的研究，不仅可以在分类系统中探讨其地位，了解系统演化过程，还可以为一些重要养殖种类杂交育种及分子生物学研究等提供理论依据和实践指导[3]。
骨髓细胞染色体的制备与观察
实验七骨髓细胞染色体的制备与观察[实验目的]1.小白鼠等骨髓细胞染色体的制备，初步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体的方法。
2. 熟悉染色体的形态、种类及青蛙、小白鼠等动物染色体的数目或类别。
[实验原理]骨髓细胞是具有旺盛分裂能力的细胞，从这些分裂细胞中，可观察到处于分裂中期的染色体，能对一种动物染色体的形态特征、数目进行准确的观察和分析。
由于骨髓直接涂片观察到的分裂相少，效果差，因此要对骨髓细胞进行必要的处理。
这个处理方法称为低渗法，其基本要求首先是要获得较多的中期分裂相。
秋水仙素对分裂期纺锤丝的形成具有破坏作用，当动物被注射适量的秋水仙素后，处于分裂增殖中的骨髓细胞由于纺锤丝不能形成，中期染色体不能正常趋向两极，到达后期、末期，因而大量的细胞处于观察染色体形态最佳的分裂中期。
其次是要能够清楚的观察染色体的形态。
为了达到此目的，取出的骨髓细胞要经过低渗（kcl溶液）使细胞膨胀、染色体适当的分散。
固定（甲醇、冰醋酸）使染色体保持完好的形态。
染色（giemsa液）使染色体易分辨、观察。
制备优良的标本可获得满意的观察效果。
利用动物骨髓制作染色体观察标本取材容易，不需培养，不需无菌操作，比较简便，是生物学实验教学中常用的方法。
一般选用的动物有青蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠等。
[实验用品]1. 动物：青蛙或小白鼠、大白鼠、蟾蜍，雌雄均可。
2. 试剂：0.02﹪秋水仙素、0.075mol/l氯化钾 (kcl)、3:1甲醇、冰醋酸固定液、吉姆萨（giemsa）染液、香柏油或液体石蜡、二甲苯。
3. 器材：解剖盘、小镊子、剪刀、注射器（2ml、5ml各一支）、刻度离心管、玻璃吸管、预冷载玻片、染色缸、玻片盒、量筒（10ml、50ml、100ml各一支），恒温水浴箱，盘架天平（配备等大的小烧杯两个）、电吹风、显微镜、吸水纸、擦镜纸、酒精灯、火柴。
[实验内容与方法]一、试剂配制1. 0.02﹪秋水仙素溶液：秋水仙素2mg，灭活生理盐水（蛙类0.65﹪、哺乳类0.85﹪的nacl）10ml溶解，避光保存。
染色体标本的制备及组型观察 实验报告
细胞生物学实验报告染色体标本的制备及组型观察1.实验目的：掌握染色体标本制作的基本方法；认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。
2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯（1）实验药品：蒸馏水、0.9% NaCl溶液、0.3% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素（2）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）制作染色体标本的意义：了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图染色体组型：把真核动物一个体细胞各染色体按长度、形状、着丝粒位置排列成一定顺序。
染色体核型：某一物种特有的一组或一套染色体的形态特征。
（2）染色体组型图的应用①鉴别生物种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；马64条②遗传病的诊断和研究：三体综合征（含三条21号染色体）、卵巢退化症（含45条染色体，比正常人缺少一条性染色体）、睾丸退化症（含47条染色体，比正常人多一条X或Y染色体）等因此，我们可以给孕妇抽取羊水检查器胎儿的染色体，做遗传病早期诊断。
（3）染色体标本的制作①观察：由于分裂期中期的染色体染色体凝集程度最高，因而我们应尽量使细胞停留在分裂期中期以便观察。
②细胞：为尽量看到多的染色体，我们应当选取具有旺盛分裂能力的细胞，这样的细胞可以来自:胸腺、骨髓、睾丸、小肠等。
我们在此实验中使用的是小鼠的精巢细胞。
在做人的染色体标本时，我们使用的是血液里的淋巴细胞。
③药物：PHA（植物细胞凝集素）：PHA具有促进细胞凝集和分裂的作用。
PHA可以使血液中的淋巴细胞还原至淋巴母细胞（只存在于骨髓中）秋水仙素：秋水仙素可以破坏微管的组装，纺锤体不能形成，细胞分裂停在中期。
与秋水仙素作用相同的药物还有长春花碱、鬼臼素、苯环己烯等。
可以促进胃管组装的药物有紫杉酚、重水等。
④空气干燥：使细胞与染色体易于分离⑤低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体距离变大，易于分离、展平。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
• 【实验结果】 • 在显微镜下，染色体被染成紫红色，胞
浆完全不着色。对于分散好的染色体, 其间 相互散开, 短臂收缩适中, 二条姐妹染色单 体大致平行分离, 着丝粒清晰可见。
• 【实验报告】 • 1．通过对自己制做的青蛙染色体标本观察，
总结青蛙染色体的形态特征。 • 2．对于分散好的染色体，进行染色体计数。 • 3．请你分析一下在本实验中造成染色体标 本制作不佳的可能原因有哪些？本实验成 败的关键是什么？秋水仙素在本实验中起 什么作用？
实验十二.青蛙骨髓染色体的制备及 核型分析
• 【课前预习】 • 了解各步骤的原理
• 【目的要求】 • 1．掌握动物骨髓染色体的制备的基本过程，
了解操作步骤的原理； • 观察染色体的特点。
• 【基本原理】 • 凡细胞处于活跃增殖状态，或经过各种处理后，
细胞就可以进入分裂的动物组织，可用于染色体 分析。在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的 组织之一。给动物注射一定量的秋水仙素即可使 许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规 的干燥法制备染色体，可得到大量的可分析的染 色体标本。
• 【实验用品】 • 1．器材：解剖器具、注射器、离心机、离
心管、恒温水浴箱、载玻片、酒精灯等； • 2．试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固 定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa染液等。 • 3．材料：青蛙
• 【方法步骤】
1.按青蛙体重4ug/g注射秋水仙素; 2.5小时后处死青蛙，取出股骨和胫骨，去肌肉。 3.用5-8毫升生理盐水冲洗骨髓腔至小烧杯中；移 至离心管，1000rpm，8分钟； 4.去上清，加0.075mol/LkCl低渗液至6毫升， 37℃，20分钟后离心，1000rpm, 8分钟； 5.去上清，加卡诺固定液至5毫升，室温20分钟； 1000rpm，8分钟； 6.重复5 7.去上清，加少量固定液。 8..滴片； 9.Gimesa染色：扣染观察。