生质体融合技术及其在育种中的应用
原生质体融合技术在遗传育种中的应用
体 形成率 。Ｃ ｓｅｏ ｏｔｒｎ等 报道 ， 在高 渗 Ｔ ｉ溶 液 中 ｒ ｓ
添 加 ｌ ５ 聚 乙烯 吡 咯烷 酮 （ ＶＰ 等 原生 质 体 扩 １ Ｐ ）
张 剂 ， 助 于 制 备 原 生 质 体 ； 加 ０ ０ ｍｏ／ 离 有 添 ． ２ ｌＩ 镁 子 ， 利 于原生质 体 的稳定 。 有
关 键 词 ：原 生 质 体 ；原 生 质 体 融 合 ；遗 传 育 种
中 图 分 类 号 ：Ｑ８ ３ ２ １ ３ ６ （ ０ ０ ０ —０ ５ ０ ｌＯ ２ ８ ２ １ ） ６ １ ６— ４
原 生质体 融合育 种 （ ｒｔｐａｔ ｕ ｉｎ ｐ ｏｏ ｌｓ ｆｓ ）是 ２ ｏ ０世
理融合 法 、 激光诱 导 融合 法 以及 在 电融 合技 术 上改
酶主要 为蜗 牛酶或 溶 菌 酶 ， 体根 据 所用 微 生 物 的 具 种 类而定 。彭 智 华 等 在 对 野 生 大杯 蕈 （ ｌ ｏｙ ｅ ］ Ｃ ｉ ｃ ｂ ｔ
ｍａ ｉ ａ 进 行 原 生 质 体 制 备 的 过 程 中 ， ２种 以 上 ｘｍ ） 将
原生 质体 的融合 问题 ， 这 一 技术 迅 速 扩展 到 了育 使
种领 域 。１７ ９ ９年 ， 牙 利 的 Ｐ ｓｉ 匈 ｅｔ 等 首 先 提 出 了
由于在 自然 条 件下 ， 生 质体 发生 融 合 的频 率 原 非 常低 ， 以在实 际 育种 过 程 中要 采 用 一定 的方法 所
２１ 年 第 ６ ００ 期
原 生 质 体 融合 技 术 在 遗 传 育 种 中 的 应 用
张子栋 ， 常胜 合 ， 湘熔 ， 董 杨飞 飞 ， 宗伟 ， 雁萍 ， 广 雍 李 王 秦
原生质体融合技术及其在果酒酵母育种上的应用
第１第 期 ２０ ９ ０年９ ３ 月 卷
ｌ ６３ ＝＝ Ｉ
原生质体融合技术及其在 果酒酵母育种上的应用
陈娟 阚建全 杨蓉生 杜木英 ， ， ， （． １西南 民族 大学生命科学 与技术 学院 ， 四川 成都 ６０ ４ ； ． １０ １２西南大学食品科学学 院 ， 重庆 ４ ０ １ ） ０ ７ ５
原 生质体 融合技 术 （ｒ ｏ ｌ ｔｕｉ ） 称为 细胞 ｐｏ ｐ ｓｆｓ ｎ 又 ｔ ａ ｏ 融合技术 ， 是指用 酶法 去除细胞 壁 ， 制成 由原生质膜包 被 的原生质体 ， 然后采用 物理 、 学或生物学方 法诱 导 化
了细胞融 合技术 的发展 ，使该技 术跃上 了新 的阶段 。
摘 要 ： 原 生质 体 融 合技 术 的研 究 进展 进 行 概 括 ， 述 该 技 术 的 重 要 环 节 ， 对 论 包括 遗 传 标 记 选择 、 生 质 体 制 备 、 生 原 再
和融合 以及融合子的鉴定等。通过分析其在降酸、 增香 、 嗜杀活性和抗氧化性等优 良性状整合上 的研 究结果， 表明原
作 中 ， 大地 推动了微生物研究的进程 。 极 ２ 原 生质体 融合技术
生质体 ， 并提 出了原生质体 的概念 。Ｅ ｄ ｄｙ和 Ｅ ｍ ｒ ｎ ｍ ｅｓ ｏ
又 以酶法相 继 制备 出 了酵母 菌 和丝状 真 菌细胞 的原
生质体 ， 为微生物 的细胞融合开辟 了道路 。１７ ９ ４年 ， 加 拿大籍华人高 国楠发现 聚乙二醇（ Ｅ 在 ｃ 参与下 Ｐ Ｇ） ａ 能促进植 物细胞原 生质体融合 ， 这一发 现极 大地促进
时首次发现了细胞融合现象 。１６ 年 ， 本 的 Ｏ ａ ａ ９０ 日 ｋ ｄｔ
原生质体在 遗传育种中的应用
植物组织培养读书报告原生质体培养及在遗传育种中的应用###学号：#######专业：####班级：####论文提交日期### 年## 月# 日原生质体培养及在遗传育种中的应用#######################################################摘要：原生质体技术包括原生质体植株再生、原生质体融合技术等，在植物育种应用工作中取得了一定的成果，对育种工作的发展起了非常重要的作用。
本文主要介绍原生质体及原生质体融合技术和这一技术在植物遗传育种中的应用。
关键词：原生质体融合遗传育种Protoplast culture and its application in genetic breeding###############################################Abstract：Protoplast techniques include protoplast plant regeneration and protoplast fusion technology etc. It has achieved some results in the application work of plant breeding, and has played a very important role in the development of breeding. This paper describes the protoplast and protoplast fusion techniques and the applications in plant genetics and breeding.Key words：Protoplast fusion genetic breeding0.关于原生质体原生质是有组织的生物活性物质，是细胞生命活动的物质基础，所有的原生质有相似的基本组成成分和特性。
微生物原生质体融合育种技术及其应用
微生物原生质体融合育种技术及其应用摘要：工业微生物菌种选育在发酵工业中占有重要地位。
微生物原生质体融合(microbialprotoplast fusion)技术具有重组频率高、受结合型或致育型限制小以及遗传物质传递完整等优点,是微生物育种最常用的方法之一。
结合相关研究进展,分析了原生质体融合技术的组成,包括制备、再生、融合的影响因素以及融合子的筛选方法,重点评述了原生质体融合技术应用在微生物育种中的最新进展,以及微生物原生质体融合技术的发展前景。
关键词：微生物原生质体融合遗传育种基因组重组引言：微生物菌种是发酵工业中的一个关键因素,它决定了发酵过程的成败及某一发酵产品是否具有工业化价值。
自然界中的原始菌株大多不具有很高的工业化价值,因此需要对菌株进行选育和改良,以提高产品的质量,降低成本。
原生质体融合技术是起源于20世纪60年代的一项重要的菌种改良技术,是将亲株细胞分别去除细胞壁后进行融合,经基因组间的交换重组,获得融合子的过程。
与其他育种技术相比,原生质体融合技术具有重组频率高、受结合型或致育型限制小以及遗传物质传递完整且不需要完全了解作用机制等优点,因而被国内外微生物育种学者广泛应用。
1974年,匈牙利的Ferenczy成功将白地霉(Geotrichum candidum)营养缺陷型突变株的原生质体进行融合,使原生质体融合技术首次应用于微生物中。
接下来的几十年,该技术的基本实验方法逐步完善,现已作为一项十分有用的技术广泛应用于工业微生物菌种选育中。
本文就原生质体融合技术的过程及其应用于微生物育种方面的最新进展做了简要综述,并分析了目前存在的问题及未来的发展方向。
1 资料和方法：1.1 资料来源由第一作者在CNKI进行检索。
网址：/。
英文资料的检索时间范围为2007/2012；中文资料的检索时间范围为2007/2012。
英文检索词为“protoplast fusion、research、progressions”；中文检索词为“原生质体融合、应用、研究进展”。
植物原生质体融合的方法
植物原生质体融合的方法
植物原生质体融合技术是一种准确、灵活和快速的分子育种技术，它可以将一种植物中的遗传物质与另一种植物的遗传物质融合在一起，以获得更有效的育种方法。
下面介绍植物原生质体融合技术的基本概念和其应用：
一、植物原生质体融合技术的基本概念
1、原生质体的定义：原生质体（Protoplast）是指细胞原有的稳定的液体质结构，在植物细胞当中占据重要的分子物质，可以被用来搅拌，冷冻，施主或克隆植物细胞的核酸，蛋白质以及其他的分子物质。
2、破壁法的原理：破壁法是一种用于分离出植物原生质体的方法，它利用酶和/或静电力，这种酶使细胞壁细胞可以被剥离出来，从而形成原生质体。
3、原生质体融合技术：原生质体融合技术就是利用破壁法将不同植物的原生质体融合起来，以获得新的基因组的遗传材料，从而为植物的育种提供了新的思路。
二、植物原生质体融合技术的应用
1、引入新基因：原生质体融合技术可以有效地引入一些新的基因材料到植物细胞，从而改变植物的性状特征，从而获得抗逆性、抗病性、烘焙品质和其他重要特征，使植物更适应环境条件。
2、突变：通过将不同植物原生质体融合起来，可以引发基因突变，从
而获得新的外观形状或性状，更好地提高植物的繁殖力和适应性。
3、抗逆育种：原生质体融合技术可以有效地增强植物细胞体抗病性和抗逆性，从而大大提高植物的耐受性，使一些极端的环境能够更好地适应植物的生长和发育。
总而言之，植物原生质体融合技术旨在将宿主植物中基因携带的遗传改良物质融入受体细胞中，以获得更多优良育种材料，从而提高植物的适应性和抗逆性，从而提升作物的产量。
原生质体融合在微生物育种的应用与研究进展
原生质体融合在微生物育种的应用与研究进展作者：王瑶来源：《农村经济与科技》2016年第12期[摘要]原生质体融合技术是将带有遗传标记的亲本进行细胞融合，获得了具有双亲本优良性状的融合子。
在微生物育种中具有广泛的应用，能够改善菌种遗传特性，显著提高代谢产物的产量。
在农业，医学，食品，畜牧业等领域有具有很好的应用价值。
[关键词]原生质体；融合；微生物育种；应用；研究进展[中图分类号]Q933 [文献标识码]A1 原生质体融合的概述原生质体融合是将去除了细胞壁的细胞在某种作用下诱导融合成为融合子，融合后的细胞具有遗传信息量大，重组频率高，操作简便等诸多优点，而且克服了种间生殖隔离。
在微生物育种方面具有十分广阔的应用前景。
目前多采用PEG（聚乙二醇）和电刺激法来诱导细胞融合。
近些年来，激光诱导融合的方法也得到了一定的发展。
原生质体融合一般分为五步：亲本的选择；原生质体的制备；原生质体诱导融合；融合子的筛选；遗传特性的分析与鉴定。
目前多使用酶解法来进行细胞壁的去除。
使用的酶主要为溶菌酶或蜗牛酶。
影响原生质体制备的因素有很多，一般处于对数生长期的菌株较易进行原生质体的制备。
温度、浓度、酶解时间、PH、缓冲液、培养基的成分及培养方式都会影响原生质体的制备。
在融合的时候，一定量的无机离子，如Ca2+和Mg2+都会促进原生质体的融合。
目前，多利用营养缺陷型作为遗传标记，抗药性或灭活的原生质体等作为遗传标记来筛选融合子。
2 原生质体融合在微生物育种的应用2.1 改良了菌种的遗传特性原生质体融合将两个亲本的遗传物质进行遗传重组，从而获得了具有亲本优良性状的新型菌株。
如凝集性酿酒酵母能够将发酵液中的絮状物凝集沉淀下去，改善酒的风味的同时，也增加了酒的澄清度。
但是凝集性酵母一般发酵度较低。
陈海昌等采取凝集性好和发酵度好的两个亲本菌株进行原生质体融合，获得的融合子具有双亲本的优点。
双歧杆菌是严格的厌氧菌，有利于肠道微生态平衡，但在有氧条件下极易死亡。
原生质体融合技术在微生物菌种选育中的应用
原生质体融合技术在微生物菌种选育中的应用作者：王小连邓佩佩来源：《中国化工贸易·下旬刊》2018年第02期微生物药物国家工程研究中心，河北省工业微生物代谢工程技术研究中心，河北石家庄050000）摘要：本文首先介绍原生质体融合技术的步骤，其次讨论分析了影响其融合、分离的因素，最后，讨论了该技术在微生物育种方面应用的发展趋势。
关键词：原生质体融合；微生物；菌种选育1 原生质体融合技术世间万物，各有不同，微生物也如此，形态、结构、遗传、生理等各个层面都有很大差异，但究其制备原生质体、及其融合程序颇有类似之处，特别是融合的步骤大体一致。
从程序角度讲，微生物原生质体的融合程序基本包括有五项：①原生质体的制备与形成；②融合作用；③形成融合子；④进行正变融合子的筛选；⑤进行保藏。
1.1 原生质体融合的关键步骤①原生质体化是第一个关键的步骤，可以实现原生质体的融合过程中去除遗传物质交换的障碍，使亲株原生质体化，并为制备原生质体做好提高融合率的准备；②原生质体在融合后，顺利再生形成完整的细胞，并可以筛选出稳定高产的重组子。
同时，再生率越高，表示筛选出正变菌种的机率就越高。
这是第二个关键性的步骤。
这两个步骤顺利通过，为遗传物质的交换与重组提供实现的途径，有利于形成融合子与重组子。
1.2 影响原生质体融合的因素原生质体在融合过程中，会受到许多因素影响，这些因素都与融合率有密切关系，此外，融合所需用聚合剂的种类、型号规格、剂量也是影响因素，处理融合的客观环境（比如：渗透压力、离子种类、离子浓度、酸碱值、温度、时间等），都直接影响其融合进程。
1.3 影响原生质体分离的因素①培养基成分：培养基与原生质体的释放量有明显关系，当培养基发生组分改变时，细胞生产状况也会受到影响。
有学者在培养草菇、银丝草菇的菌丝时，使用了PDA、PDA+10%稻草液、PMA、PQA、CYM等5种培养基，进而制备出了原生质体。
研究中发现，CYM培养基适合银丝草菇原生质体的分离，在培养糙皮侧耳次生菌丝体时，其他4种培养基在分离原生质体时，有明显差异。
体细胞融合技术及在水稻育种方面的应用
体细胞融合技术及在水稻育种方面的应用引言：水稻作为世界上最主要的粮食作物之一，在全球粮食安全中起着重要的作用。
为了提高水稻的产量和品质，科学家们不断探索新的育种方法。
体细胞融合技术作为一种重要的遗传改良方法，在水稻育种中得到了广泛应用。
本文将介绍体细胞融合技术的原理和水稻育种中的应用，并探讨其对水稻产量和品质的提高带来的潜力。
一、体细胞融合技术的原理体细胞融合技术是指将两个或多个体细胞合并成一个细胞，使得合并后的细胞具有多个细胞贡献者的遗传信息。
这项技术通过细胞融合剂的作用，使细胞膜破裂并融合，从而实现不同细胞的遗传物质的混合。
体细胞融合技术可以突破物种间的遗传障碍，克服传统育种方法中的限制，为育种提供了新的手段。
二、体细胞融合技术在水稻育种中的应用1. 提高抗病性：通过体细胞融合技术，可以将抗病水稻的抗病基因导入到优良品种中，从而提高水稻对病害的抵抗能力。
例如，将抗稻瘟病基因导入到高产优质水稻品种中，可以有效地提高水稻对稻瘟病的抗性，减少病害对产量的影响。
2. 提高耐逆性：体细胞融合技术可以将耐逆性相关的基因导入到水稻中，提高水稻对逆境的适应能力。
例如，将耐盐碱基因导入到水稻中，可以提高水稻对盐碱地的适应性，增加水稻在这些地区的种植面积。
3. 提高产量和品质：通过体细胞融合技术，可以将不同水稻品种的优良性状进行组合，创造出具有高产和优质的水稻品种。
例如，将高产水稻品种与优质水稻品种进行融合，可以同时提高水稻的产量和品质，满足人们对高产高质粮食的需求。
4. 创造新的水稻品种：体细胞融合技术可以实现不同物种间的杂交，创造出新的水稻品种。
这些新品种可能具有传统育种方法无法实现的优良性状，如耐病、耐逆、高产和优质等。
这为水稻育种带来了更多的可能性。
三、体细胞融合技术在水稻育种中的潜力体细胞融合技术在水稻育种中的应用已取得了一些成果，但仍有许多挑战需要克服。
首先，体细胞融合技术需要解决细胞融合效率低、杂种后代稳定性差等问题。
原生质体融合技术在马铃薯育种中的应用
原生质体融合技术在马铃薯育种中的应用马铃薯作为一种重要的粮食作物，在我国种植面积和产量都有着很大的增长，但是由于其短周期内产生大量的病虫害和环境适应性差等问题，对其进行育种是非常必要的。
在传统的马铃薯育种中，主要采用的是人工杂交和改良选育等方法，但是这些方法存在着繁琐、耗时、成本高等问题。
近年来，原生质体融合技术的应用在马铃薯育种中引起了广泛关注。
原生质体融合技术是指将两个或多个细胞的原生质体融合在一起，使得它们的细胞核融合，形成新的细胞体系。
该技术具有克服杂交障碍、扩大基因来源、提高遗传多样性等优点。
在马铃薯育种中，原生质体融合技术主要应用于以下几个方面。
一、提高抗病性马铃薯是一种容易感染病毒的作物，其中最为严重的是马铃薯Y 病毒。
在传统育种中，提高马铃薯的抗病性是非常困难的。
但是通过原生质体融合技术，可以将具有抗病性的品种与感病性品种进行融合，从而产生具有抗病性的新品种。
例如，将具有良好的抗病性的野生马铃薯与普通马铃薯进行原生质体融合，可以获得具有更强的抗病性的新品种。
二、提高产量和品质通过原生质体融合技术，可以将不同品种的马铃薯进行融合，从而产生具有更高产量和更好品质的新品种。
例如，将产量高、品质好的马铃薯品种与耐病、耐旱的野生马铃薯进行原生质体融合，可以获得具有高产量和优质品质的新品种。
三、提高逆境适应性马铃薯在生长过程中面临着许多逆境，例如干旱、高温、低温等。
通过原生质体融合技术，可以将具有逆境适应性的野生马铃薯与普通马铃薯进行融合，从而产生具有更好逆境适应性的新品种。
例如，在干旱地区，将野生马铃薯的原生质体与普通马铃薯进行融合，可以获得具有更强抗旱能力的新品种。
总之，原生质体融合技术在马铃薯育种中具有广泛的应用前景。
通过该技术，可以克服传统育种的限制，提高马铃薯的产量和品质，提高其逆境适应性和抗病性，从而为马铃薯产业的发展提供更好的支持。
原生质体融合技术及其在酿酒酵母菌株选育中的应用
所 用 的 酵 母 菌 只 能 产 生 体 积 分 数 为 @ EC85 E 的 乙 醇 ； 更高 , D (3， 的底物浓度和乙醇浓度对酵母菌生长和发酵会产生抑制作用。选 育耐高浓度酒精及底物的酵母，在超浓醪发酵生产高浓度酒精方 面具有良好的前景。这种工艺可以节省发酵和蒸馏过程中的能量 消耗， 提高设备利用率， 减少劳动强度和提高酒精产量。 （不耐高渗） 与蜂蜜酵母 （-;(/33"G; ） （ 能耐 !/,()++?FA将酿酒酵母 作为亲株进行原 生 质 体 融 合 获 得 融 合 子 在 79 H6 E 以上的葡萄糖） E葡萄糖培养基中产乙醇的速度为亲株的 7 倍和 F 倍。国内侯红漫 等 人 利 用 原 生 质 体 融 合 技 术 将 清 酒 酵 母 （-)..2)&%(4./G G)*/ 与 K 氏酿酒酵母 （-)..2)&%(4./G ./&/L"G")/ K） 融合也 获 得 了 I)J/ ） 耐较高酒精浓度的融合株 ?MA。
明了灭活的仙台病毒可诱发体内艾氏腹水癌细胞彼此融合，从而 开始了细胞融合的探索； 8=>> 年 ， -"F".R*" 与 \/&/+.R4 Y5Z 首 次 实 现 酵 第三届国际工业微生物遗传学讨论 母菌的原生质体融合； 8=>A 年， 会上， 把原生质体融合作为一种新的基因重组手段提出来， 引起全 世界的关注； 8=A6 年 ， I"((/&()++ 等 报 道 了 用 电 场 诱 导 细 胞 融 合 新技术； 8=AA 年张闻迪又报道了激光诱导动物细胞融合。 8=== 年， L+"/Q%U/RY7Z 等 人 用 电 场 诱 导 法 获 得 一 嗜 杀 性 酵 母 菌 株 ， 5665 年 国 内孙君社等 Y<Z利用电场 诱 导 原 生 质 体 融 合 技 术 对 产 酒 率 高 的 菌 株
原生质体融合技术在马铃薯育种中的应用
原生质体融合技术在马铃薯育种中的应用原生质体融合技术是一种基因工程技术，可以将不同品种甚至不同属的植物原生质体融合，从而获得具有多种优良性状的杂种。
在马铃薯育种中，原生质体融合技术被广泛应用于基因转化、特定性状改良以及多倍体育种等方面。
1.基因转化。
利用原生质体融合技术，可以将具有抗病、抗旱、抗虫等优良性状的基因导入马铃薯，从而提高其抗逆性能。
这种技术不仅可以快速获取高抗性马铃薯，还可以避免传统育种中的基因杂交和后代筛选过程。
2.特定性状改良。
原生质体融合还可以通过将不同类型的马铃薯原生质体融合，获得具有多种特定性状的杂种。
例如，将高产量和耐旱性等性状融合在一起，可以获得既高产又抗旱的马铃薯品种。
3.多倍体育种。
原生质体融合技术还可以实现多倍体育种。
在马铃薯育种中，多倍体常常具有更大的叶片和块茎，更高的产量和抗逆性能。
因此，通过原生质体融合育种，可以获得更具发展前景的多倍体马铃薯品种。
总之，原生质体融合技术在马铃薯育种中的应用，可以提高马铃薯的抗病抗逆性能，改良特定性状，甚至获得更具发展前景的多倍体品种。
这种技术的应用将有助于加速马铃薯栽培的进程，提高马铃薯产量和品质，满足不断增长的全球食品需求。
微生物原生质体融合育种技术及其应用分析
微生物原生质体融合育种技术及其应用分析摘要：细胞融合技术具有着操作简便、技术水平高等诸多优势，在现实中得到了越来越广泛的应用。
从应用领域来看，此项技术在农业、工业或者医药等诸多领域均取得了较大的进展。
此外，从应用作用来看，微生物原生质体融合育种技术在遗传互补、基因定位等方面也贡献着不可磨灭的力量。
本文对此项技术应用中的不足与未来应用趋势展开了相应分析。
以供相关工作者参考。
关键词：微生物原生质体；融合育种；应用问题；应用趋势从划分来看，微生物原生质体融合育种技术属于细胞融合的一个重要组成部分。
此项技术最早由上世纪七十年代的基因重组技术发展而来。
此项技术融合优势较为显著。
在实际融合过程中，细胞壁会被去除，使得原生质体的膜具有着较好的融合性，进而为细胞壁与细胞核的高效融合创造了良好条件。
在现实中，此项技术成为改造细胞强有力的技术。
一、微生物原生质体融合途径目前微生物原生质体融合途径可以被划分为化学法、电融合、激光诱导融合等方式方法。
首先，化学法。
自上世纪七十年代开始，化学法被应用到大豆或大麦等植物的原生质体融合后，化学法被广泛应用到微生物原生质体融合中。
从应用成效来看，融合速度快、质量高、且使用范围较为广泛，并在多数的微生物细胞原生质体融合中得到了有效运用。
其次，电融合。
此项技术是对上世纪八十年代的细胞改良技术的进一步发展。
通过将电学与生物学融合应用，出现了高成效的原生质体融合效果。
且随着时代的不断发展，此项技术不仅在动植物细胞融合中得到了应用，也在多类微生物细胞改良中起到了良好的成效。
最后，激光诱导融合。
此项技术是在二十世纪八十年代的激光诱导融合技术基础之上发展而来。
随着技术水平的不断提升，以及时代的不断发展，此项技术多被应用于微生物原生质体融合中。
从应用优势来看，此项技术具有着较小的毒性与损伤性。
然而，由于此项技术设备较为昂贵，且操作起来较为复杂，在现实中未得到较为广泛的引用。
同时，将激光微术技术应用到微生物原生质体融合中，不仅融合效率较低，且不具备较高的选择性。
原生质体融合技术在L-谷氨酸菌株育种中的应用
谷 氨 酸 发 酵 优 良生 产 菌 株 Ｆ ０ １ ７ （ 酸 率 Ｍｏ — ８ 产
１ ． ／ Ｏ ｍ１和 Ｆ ８ １８产 酸率 １ ．ｇ ｌＯ ） ３３ ｌＯ ） Ｍ９ — ９ （ ｇ ０５ ／ Ｏ ｍ１
４ ０ ０Ｏ ５ Ｍｇ Ｌ ．２ ｇ Ｈ２ ．０ ｇ Ｃ ２００ ４ Ｃａ ２０Ｏ ｇ Ｆ Ｓ ＣＬ ． ｅ Ｏ４ １ ７
的共 同作用 下 ，促使 原 生质 体融 合 而达 到杂 交 的
目的。该技 术是 把具 有 遗传 标记 的两 亲本 菌 株进
０ ０ ｇ琼 脂 １ ．ｇ水加 至 １０ ｍｌ ．４ Ｏ ５０ ００
高渗 营养 琼脂 ： Ｎ 在 Ａ中加入 ０ ｍｏ １ ． ｌ 蔗糖再 ５ ／
生培 养 基 ： Ｈ Ｎ ３ｇＭｎ １・ ２ ０ ， ＨＰ ４ ． ， Ｎ ４ Ｏｌ ， Ｃ２Ｈ ０４ ｇ Ｋ ２Ｏ ５ ３ｇ 葡 萄糖 ３ ｇ Ｋ ｚＯ １ ｇ ０ ， Ｈ Ｐ ． ，琼 脂 ２ ． ，琥 珀 酸 钠 ５ ０ｇ ０
高 渗 溶 液 ：蔗糖 一 顺 丁烯 二 酸一 镁 一Ｄ ａｅ ｎ ｓ
行培养， 将菌 体 移入 高渗 溶液 中 ， 用溶 菌酶 水 解 细
胞壁 ， 制成 一定 的原 生质 体 ， 两 亲株 原 生质 体在 将
高渗 溶 液 中等 量 混 合 ，加 入 ３ ％－ ０ ０ ４ ％分 子量 为 １０ ～ ０ ０的 Ｐ Ｇ溶 液 和 Ｃ 同作 用促 进 原生 ０ ０ ６０ Ｅ ａ共 质体 融 合 ， 心 除 去 Ｐ Ｇ， 当稀 释 后 移 接 到 再 离 Ｅ 适 生培 养基 后 ， 过 细 胞 壁再 生 ， 经 形成 异 核 体 菌 落 ， 进 一 步分离 二倍 体或 重组 体 菌落 ，最后 对 重 组体 进 行 生产 性 能 、 理 、 化 和 遗传 特 性 分 析 ， 选 生 生 筛
植物原生质体技术在植物育种中的应用
植物原生质体技术在植物育种中的应用植物原生质体技术是利用植物的胚、组织和细胞作为原材料，通过一系列特殊处理方法得到的一种无细胞壳的裸细胞体系。
原生质体中有许多重要的细胞器和生理代谢过程，可以被用来进行植物育种。
这种技术是目前广泛应用于植物性状改良和基因工程研究的一种非常重要的技术。
植物原生质体技术的核心思想在于选择优良的母本和父本，通过雄性和雌性不育的方法将两者结合在一起，再通过原生质体培养技术进行育种。
通过这种方法，可以有效地提高植物产量、抗病性、耐旱性等优良性状，达到优化植物性状的目的。
植物原生质体技术在植物育种中的应用可以分为以下三个方面：1. 品种改良通过拟南芥、水稻、玉米等多种植物的原生质体培养，可以选择出具有抗旱、抗病、耐寒、高产等多种优秀性状的品种。
例如，在拟南芥中，可利用原生质体技术培育出抗蘑菇病、丰产性等多种优良品种，为植物育种提供了更多有利基础材料。
2. 基因工程通过利用原生质体技术，可以在植物中导入外源基因，实现对植物DNA的改编。
这种技术广泛运用在植物抗虫、抗病、耐旱等优化性状的育种当中。
例如，在小麦中导入抗蚜虫基因，可以显著提高小麦的收成，为农业生产发展提供了强有力的技术支持。
3. 生物制剂植物原生质体技术还可以应用于生物制剂的生产。
利用细胞培养技术，植物细胞中的代谢产物如酶、激素、蛋白质和其他生物活性物质等可以被大量生产。
例如，使用原生质体技术生产逆境胁迫下的植物蛋白质，可以为生命科学提供重要的研究基础材料，有助于深入探究植物逆境适应机理。
总之，植物原生质体技术在植物育种中具有广泛的应用前景，特别是对于具有异质不亲和性、双倍体、难种植种等的植物，原生质体技术可以提供新的选育渠道，为植物育种研究提供了新的思路。
未来，借助先进的技术手段和质量控制水平的提高，植物原生质体技术将进一步发挥作用，促进植物育种技术的创新和进步。
微生物原生质体融合育种技术及其应用与展望
融合的优势十分明显 ，当进行融合时，细胞壁 被去除后 ，原生质体的膜就变得极易融合，没
有极性 ，整个细胞质和细胞核发生相互融合 ，
１原生质体融合的程序
主要包括 ：ａ ． 原生质体的制备及再生 ；ｂ ． 对原生质体进行灭活 ；Ｃ ｏ 对原生质体 的纯化 ；
建筑与预算
ＣＯＮ ＳＴ ＲＵ ＣＴｌ ｏＮ Ａ ＮＤ ＢＵＤＧＥ Ｔ
Ｄ Ｏ Ｉ ： １ ０ ． １ ３ ９ ９ ３ ／ ｊ ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． ｊ ｚ ｙ ｙ ｓ ． ２ ０ １ ７ ． １ ０ ． ０ ０ ８
２ ０ １ ７ 年第 １ ０ 期
微生物原生质体融合育种技术及其应用与展望
王佳蕊 ，魏
（ 沈阳建筑大学
炜
市政与环境工程学院 ，辽宁 沈 阳）
摘 要 ：细 胞融合 技术 ，其遗传信 息量大 ，且不 受亲缘关 系 的影 响 ，更 能将双 亲的优 良性状遗传 到 自 身 ，只需定 向筛选双亲遗传 性状的融合子 ， 操作 十分简单 ，因此拥有 了广 阔的应用 前景。在工业 、医 药 、农 业等诸多领域 中获得 了开创性的进展 ，不断 扩大其应用的领域 。这项技术 既对基 因的定位 、遗 传 的互补 、核质关 系 、基 因的调 控 、细胞的棉 衣 、疾病 的发 生 、废水 的处理 、膜蛋 白动力学 等领域 中提供了强有 力的处理手段 ，又在免疫 学 、发育 生物学 、遗传 学特别是克 隆抗体 、微生 物菌种选育 、 基 因图谱的绘 制等诸多方 面 ，都具有 重要的意义 。 本 文综述 了原生 质体 的融合程 序 ，及原 生质融合
差异小 ，而且菌丝的活力高 ， 形成原生质体便
变性 ，从而使酶活性受到影 响甚至是消失 ；而
原生质体融合技术在微生物遗传育种中的应用
原生质体融合技术在微生物遗传育种中的应用摘要原生质体融合技术是微生物遗传育种中的一项重要技术，它具有遗传信息传递量大，不受亲缘关系的影响，可有目的地选育理想的融合株，便于操作等优点，在遗传育种中具有广阔的应用前景。
文章从原生质体融合的特点以及融合技术应用等方面进行了综述。
关键词原生质体；原生质体融合；遗传育种’原生质体融合就是将两个亲株的细胞壁分别通过酶解作用加以剥除，使其在高渗环境中释放出只有原生质膜包被着的球状原生质体。
然后将两个亲株的原生质体在高渗条件下混合，由聚乙二醇助融，使它们相互凝集，通过细胞质融合接着发生两次基因组之间的接触、交换、遗传重组，在再生细胞中获得重组体。
两个具有不同基因型的细胞，采用适宜的水解酶剥离细胞壁后，在融合剂作用下，两原生质体接触，融合成为异核体，经过繁殖复制进一步核融合，形成杂合二倍体，再经过染色体交换产生重组体，达到基因重组的目的，最后对重组体进行生产性能，生理生化和遗传特性分析。
一、原生质体融合的特点1.杂交频率较高由于原生质体没有细胞壁的障碍，而且在原生质体融合时加入融合促进剂PEG，所以微生物原生质体间的杂交频率都明显高于常规杂交方法。
2.受接合型或致育性的限制较小由于两亲株中任何一株都可能起受体或供体的作用，因此有利不同种属间微生物的杂交。
另外，出于原生质体融合是和致育性没有关系的细胞杂交，所以其受接合型或致育性的限制就比较小。
3.重组体种类较多由于原生质体融合后，两个亲株的整套基因组之间发生相互接触.有机会发生多次交换，可以产生各种各样的基因组合而得到多种类型的重组体二、原生质体融合技术的应用在微生物育种中，常根据不同需求通过原生质体融合技术培育出优质、高产、抗逆性强等优点的微生物菌种。
1.标记菌株的筛选用于原生质体融合的亲本需要携带遗传标记，以便于重组体的检出。
常用营养缺陷型和抗性作为标记，也可以采用热致死，孢子颜色，菌落形态作为标记。
实际时究竟采用哪种遗传标记，要根据实验目的来确定。
原生质体融合技术在遗传育种中的应用_张子栋
收稿日期:2009-12-11基金项目:国家自然科学基金项目(10505018);农业部核技术农业应用项目(200803034)作者简介:张子栋(1986-),男,河南淮阳人,在读硕士研究生,研究方向:离子束生物工程。
E-mail:zhangzidong1986@ *通讯作者:常胜合(1974-),男,河南唐河人,副教授,博士,主要从事微生物基因功能方面的研究。
原生质体融合技术在遗传育种中的应用张子栋,常胜合*,董湘熔,杨飞飞,李宗伟,王雁萍,秦广雍(郑州大学河南省离子束生物工程重点实验室,河南郑州450052)摘要:综述了原生质体的制备与再生因素、原生质体融合的促融方法、选择性遗传标记方法以及原生质体融合技术在遗传育种中的应用,并且展望了原生质体融合育种的发展前景。
关键词:原生质体;原生质体融合;遗传育种中图分类号:Q813.2 文献标识码:A 文章编号:1004-3268(2010)06-0156-04 原生质体融合育种(protoplast fusio n)是20世纪60年代发展起来的基因重组技术。
通过2个遗传性状不同的亲株原生质体融合从而达到杂交的目的。
1960年,法国的Barsi 研究小组在进行2种不同动物细胞混合时发现了自发融合现象,同时日本的Dkada 发现仙台病毒可诱发内艾氏腹水病细胞彼此融合,从而开始了细胞融合的探索。
1974年,匈牙利的Fereczy 等[1]采用离心力诱导的方法实现了白地霉(Cr eotr ichum candid um )营养缺陷型突变株原生质体的融合;随后人们相继用NaCl 、KCl 和Ca(NO 3)2等作为诱变剂进行融合,但融合率比较低。
1978年,国际工业微生物遗传学讨论会提出了原生质体的融合问题,使这一技术迅速扩展到了育种领域。
1979年,匈牙利的Pesti 等[2]首先提出了运用融合育种技术提高青霉素产量的报告,从而开创了原生质体融合技术在遗传育种中的应用,综述如下。
原生质体融合技术及其在微生物育种中的应用
原生质体融合技术及其在微生物育种中的应用摘要:原生质体融合技术是微生物遗传育种上的一项重要技术，它具有遗传信息传递量大，不受亲缘关系的影响，可有目的地选择亲株以选育理想的融合株，便于操作等优点，在菌种选育中具有广阔的应用前景。
本文从原生质体的制备及其影响因素、原生质体融合的促融方法、原生质体融合子的筛选以及融合技术在微生物菌种选育中的应用等方面进行了综述以及微生物原生质体融合技术的发展前景与展望。
关键词: 原生质体融合; 菌种选育; 生物技术; 应用发展前景与展望原生质体融合育种(proloplas} Iusion)是20世纪60年代发展起来的基因重组技术。
通过两个遗传性状不同的亲株原生质体融合从而达到杂交目的。
1960年法国的B ars研究小组在培养两种不同动物细胞混合时发现了自发融合现象，同时口本的Dkada发现仙台病毒可诱发内艾氏腹水病细胞彼此融合，从而开始了细胞融合的探索。
1974年匈牙利的Fereczy采用离心力诱导的方法实现了白地霉(Creolrichum carol irlrmv)营养缺陷型突变株原生质体的融合;随后人们相继用NaC1KCl和Ca(N03)2等作为诱变剂进行融合，但融合率比较低;1978年国际工业微生物遗传学讨论会提出了原生质体的融合问题，使这一技术迅速扩展到了育种领域;1979年匈牙利的Pesti首先提出了运用融合育种技术提高青霉素的产量的报告，从而开创了原生质体融合技术在工业微生物育种实际工作中的应用。
从此，原生质体融合育种广泛应用于霉菌、酵母菌、放线菌和细菌，并从株内、株间发展到种内、种间，打破种属间亲缘关系，实现属间、门间，甚至跨界融合。
1原生质体融合技术简介原生质体融合就是用水解酶除去遗传物质转移的最大障碍---抢田胞壁，释放出只有原生质膜包被着的球状原生质体，然后用物理或化学方法诱导遗传特性不同的两亲本原生质体融合，经染色体交换、重组而达到杂交的目的，经筛选获得集双亲优良性状于一体的稳定融合子。
探析原生质体融合技术在微生物菌种选育中的运用2200字
探析原生质体融合技术在微生物菌种选育中的运用2200字文章以原生质体融合技术为研究对象，从原生质体融合技术的一般步骤，能够对原生质体融合及分离动作产生影响的因素分析入手，结合原生质体融合技术与微生物菌种选育的共性特征，对其在微生物菌种选育中的四方面应用问题（①.菌种遗传特性的改良；②.菌种发酵特性的优化；③.菌种质粒的有效转移；）进行了较为详细的分析与阐述，并据此论证了将原生质体融合技术合理运用于微生物菌种选育工作在进一步提高微生物菌种选育工作质量与工作效率的过程中所起到的至关重要的作用与意义。
毕业原生质体融合技术；菌种选育；微生物；运用从理论上来说，原生质体融合技术是指在人为方式作用下，引导遗传性状完全不同两个细胞主体当中的原生质体发生一定程度的融合行为，最终获取有着双亲遗传性质及遗传性状的一种稳定性重组子。
可以说，原生质体融合技术的成功研发将传统意义上微生物领域中有关与种界的诸多界限一一打破，远缘菌株在此种技术的作用之下同样能够实现可靠地基因重组。
与此同时，遗传物质的传递行为在原生质体融合技术的作用之下显得更加系统与完整，遗传物质获取基因重组的机率较传统意义上的重组机率而言要高得多。
这也正是其能够应用于微生物菌种选育工作当中的最根本原因。
笔者现结合实践工作经验，就这一问题谈谈自己的看法与体会。
1原生质体融合技术概述1.1原生质体融合技术的一般步骤分析。
首先，为达到原生质体有效融合的目的，相关工作人员需要做的第一步在于确保亲株原生质的体化过程顺利进行，进而更为有效的对原生质体进行制备作业。
换句话来说，原生质的体化作业是确保整个原生质体融合技术有效开展的基础与根本；其次，相关工作人员必须明确一点――原生质体在经过融合性动作之后需要再生高质量的细胞壁，以此确保营养体细胞形成中的完整性，最终保证原生质体融合中的产重组子是高质量与高效率的。
这也就意味着：细胞原生质体再生率如何提升应当成为相关工作人员在进行原生质体融合技术当中需要解决的一大关键问题，这也正是原生质体融合过程顺利完成的核心；最后，原生质体的融合需要相关工作人员为其营造一个较为优越的融合环境，这包括了内部融合环境与外部融合环境两个方面，以此确保遗传物质的交换与重组行为能够始终在稳定且可靠的环境下运行。
原生质体融合技术在微生物菌种选育中的应用
［１］ 中国天津食品网．“中国天津食品网”介绍 ［ＥＢ／ＯＬ］．（ ２００６－ ８－ ４） ［２００８ － ８ － ２５］． ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｔｊｆｏｏｄ．ｃｏｍ．ｃｎ／ｎｅｗｓ／ｎｅｗｓ＿ｄｅｔａｉｌ．ａｓｐ？ｉｄ ＝ １２１２１ 收稿日期：２００８－ ０８－ １４
综述
食品研究与开发
稳定剂的性质影响着裂解酶的反应活性。不同的裂解
１．３．１ 培养基成分
酶需要不同性质的渗透压稳定剂才能得到最佳的效
培养基成分的改变，直接或间接地影响着细胞壁 果。方芳等在分离台湾根霉原生质体时以糖醇为渗透
的状况，对原生质体的释放量也有显著影响。李东屏等 压稳定剂，酶解初期有原生质体释放，而 ３ ｈ～４ ｈ 后菌
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
食品安全方面的需要。为了有效配合本市食品安全工 作，普及食品安全、饮食健康知识，于 ２００６ 年将 ２００３ 年创刊的《食品生产力》内部刊物进行全新改版，改版 后其内容更加突出食品安全，年发行量由 １ ２００ 本扩 大到 ３ ０００ 本，深受食品企业和消费者青睐。开展技术 咨询服务是“中心”为食品企业服务的又一特点，除网 站服务外，几年来他们通过具备 ＱＳ 认证资质的 ４ 名 高级工程师，先后为千余家企业提供了认证咨询，不但 使这些企业取得了认证资格，而且全面提升了企业的 产品质量和管理水平。为了提高食品企业从业人员专 业技能和综合素质，于 ２００４ 年注册了“天津市新科职 业培训学校”，具备了食品检验工、冷食操作工、熟肉制 品操作工、营养配餐员共 ４ 项劳动部门的发证资质，同
２００８ 年 １０ 月
１７４ 第 ２９ 卷第 １０ 期
食品研究与开发
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第!卷第"期#$$%年&$月西安联合大学学报’()*+,-(./0’,+1+02341+053*60278(-9!:(9"!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!;<29#$$%文章编号：&$$=>???/（#$$%）$">$$$@>$@收稿日期：#$$%A $#A #=基金项目：西安文理学院科研基金资助项目（#$$&%$）作者简介：罗雯（&B ?"—），女，江西南昌人，西安文理学院化学与生命科学系讲师，博士9微生物原生质体融合技术及其在育种中的应用罗雯&，陈志勤#（&C 西安文理学院化学与生命科学系，陕西西安?&$$!@；#C 西安东风仪表厂，陕西西安?&$$!@）摘要：原生质体融合又称体细胞杂交，它具有遗传信息传递量大，不受亲缘关系的影响，可有目的地选择亲株以选育理想的融合株，便于操作等优点，在遗传育种中具有广阔的应用前景9本文就原生质体融合的方法，融合子的筛选，以及该技术在微生物遗传育种中的应用作一综述9关键词：原生质体；融合；育种中图分类号：D B %#文献标识码：E原生质体融合技术具有许多常规杂交方法无法比拟的独到之处［&］：由于去除了细胞壁，原生质体膜易于融合，即使没有接合、转化和转导等遗传系统，也能发生基因组的融合重组；融合没有极性，相互融合的是整个胞质与细胞核，使遗传物质的传递更为完善；重组频率高，易于得到杂种；存在着两株以上亲株同时参与融合并形成融合子的可能［#］；较易打破分类界限，实现种间或更远缘的基因交流［%］；同基因工程方法相比，不必对试验菌株进行详细的遗传学研究，也不需要高精尖的仪器设备和昂贵的材料费用等9由于以上优点，迄今，这项技术不仅在基础研究方面，而且在实际应用上，均取得了引人注目的成绩9随着生物学研究手段的不断创新，该技术的基本实验方法逐步完善9经过多年的实际应用，证明微生物原生质体融合确是一项十分有用的育种技术［"］9&原生质体融合&B ?"年，F 3*3+<G 7等［@］首先报道了采用离心力诱导的方法促使白地霉（!"#$%&’()*’+,-&-+*）营养缺陷型变株的原生质体融合9但是这种方法获得的融合率极低，仅为!H &$A ?!!H &$A !9同年，高国楠等人［!］在研究植物原生质体融合时发现聚乙二醇（I J K ）能有效地诱导融合，且融合频率得到显著提高9I J K 诱导融合的作用被证明同样适用于动物细胞和微生物原生质体，从而微生物原生质体融合技术迅速建立起来9这种以I J K 为融合剂的化学诱导原生质体融合的方法至今仍成功地为人们所使用9&B ?=年，L 0M M 3*M ,++［?］报道了电融合技术，#$世纪=$年代初电融合技术得到了进一步发展9其原理是：在短时间强电场的作用下，细胞膜发生可逆性电击穿，瞬时失去其高电阻和低通透性，然后在数分钟内恢复原状9当可逆电击穿发生在两个相邻细胞的接触区时，即可诱导它们的膜相互融合，从而导致细胞融合9该技术具有操作简单，无化学毒性，对细胞损伤小，融合同步，可在显微镜下观察融合过程以及融合率高等优点9近年来，该技术在微生物中的应用日渐增多［=!&$］，其实验条件在探索中不断改进［&&!&%］9&B =?年始，利用激光诱导融合的技术迅速发展起来，并很快被应用在动物细胞及植物原生质体的融合中［&"，&@］9该技术最突出的优点在于它的高度选择性，利用激光微束技术可诱导许多细胞中所需的万方数据两个相邻细胞融合!但由于其所需设备昂贵复杂，操作技术难度大，很难推广应用!此后，虽有研究者试图以类似原理及较简便的步骤，在微生物原生质体融合中应用激光微束技术［"#］，但融合效率较低，且丧失了高度选择性的优点，有赖后续步骤检出融合子!激光诱导融合技术仍处在发展初期，还有待进一步完善!$融合子的筛选方法已建立的融合子筛选方法很多，需根据实验目的和材料的特殊性加以设计!以下为几种常用方法：$!"利用营养缺陷型筛选融合子此法采用营养缺陷型菌株为融合的双亲，经原生质体融合，在基本培养基上筛选融合子!这种方法依据的原理是：原生质体由于遗传缺陷，丧失了合成某种物质的能力，在基本培养基上不能萌发生长，同一亲本原生质体融合也不能长出菌落，只有不同亲本原生质体融合后，缺陷的遗传物质得到互补才能恢复为野生型，在基本培养基上可萌发生长!这种方法直接而有效，是一种传统的融合子筛选方法!其优点是准确可靠，在排除污染的前提下，基本培养基上长出的菌落即可初步判定为融合子!但由于融合原生质体处于强选择压力下，可能有部分融合原生质体不能萌发!另外，营养缺陷型菌株多数存在优良性状丧失或降低的弊端，因此在选择出发菌株时，应注意选择发生正突变的营养缺陷型作为亲本菌株!$!$利用抗药性筛选融合子微生物的抗药性是由遗传物质决定的，不同种的微生物对同一种药物的抗性不同，利用这种差异可对融合子进行选择!如诺卡氏菌（!"#$%&’$()*%&）（’())，*+,-）./!’0!"&1（’()-，*+,)）融合处理后，在含有四环素和利富霉素的培养基上选择融合子［"2］!徐京宁等［"&］结合灭活原生质体技术，利用抗药性筛选进行了林可霉素产生菌的定向改造筛选工作!研究者将金色链霉菌（+,%-),"./#-($0%-"1$#’-2(）（34)，5(6)，产金霉素）的原生质体用紫外线照射%74+8灭活后与林可链霉菌林可变种（+*3’2#"32#0(’(4$%*3’2#"3’2-2(’(）（34)，5(6-，产林可霉素）原生质体融合处理后，在含有97!:／43金霉素的再生平板上选择融合子!利用此法筛选融合子应注意，药物使用浓度不宜过高，否则会降低融合频率；亦不可过低，浓度过低不足以抑制亲本的生长，从而降低筛选效率!$!;利用荧光染色筛选融合子原生质体制备时在酶解液中加入荧光色素，掌握好荧光染料的浓度和处理时间，则可使原生质体带上荧光色素，且保持发生融合和再生的能力!使用两种不同的荧光染料分别处理融合的亲本，经原生质体融合后，可在荧光显微镜下观察并通过显微操作，直接挑选出同时带有两种荧光的原生质体，即为已融合原生质体!$!%应用灭活原生质体筛选融合子原生质体经紫外线照射、加热或经某些化学药剂的处理，可使其丧失在再生培养基上再生的能力!将融合亲本之一原生质体灭活，即可只根据另一亲本的特性设计选择条件筛选融合子!!如用7!"<碘乙酸，;7=处理产朊假丝酵母（5$2&’&$0,’3’(）原生质体%74+8后与啤酒酵母（+$##6$%"./#-(#-%-4’(’7$-）的原生质体融合，利用形态差异可筛选融合子［"1］!有研究者在金霉素链霉菌（+*$0%-"1$#’-2(）与龟裂链霉菌（+*%’."(0(）的融合研究中，用不同理化手段分别灭活双亲原生质体，融合后在再生平板上直接筛选重组菌株［"#］!这种“双灭活”原生质体融合的原理是，用不同理化手段处理双亲原生质体，可使二者不同部位的生理结构被损伤而失去活性，继而损伤部位不同的原生质体相结合，通过融合后的遗传互补获得活的重组体!由于灭活原生质体融合减少了寻找稳定遗传标记的繁杂工作及由此可能带来的亲株优良性状的丢失，因此是获得遗传重组的一条有利途径；而且在不利用选择培养基的情况下即可减少亲株的生长，从而提高了筛选效率!;融合技术在育种中的应用"121年匈牙利的0>-(+［$7］首先发表了融合育种提高青霉素产量的报告，从而开创了原生质体融合在实际工作中的应用!$7多年来，该技术的应用范围日渐扩大，并已获得不少有意义的菌株!#西安联合大学学报第#卷万方数据!"#通过融合杂交综合双亲优良性状，促进定向选育［$%!!%］在啤酒酵母的改良方面，国内外均有利用原生质体融合技术获得发酵度高且凝集性好的酵母菌株的报道［#&!$!］"又如，苏云金杆菌的不同变种杀菌谱不同，王宪等［$’!$(］利用原生质体融合技术获得了综合双亲杀虫谱的新菌株")*+,-.与/*,,在进行头孢菌素0产生菌融合杂交时，从’%%株重组体中选出综合高产亲本利用硫酸盐的能力与低产亲本生长快产孢子多的优点的高产菌株［$&］"!"$提高代谢产物的产量［!#!!1］为了提高某一抗生素的单位产量，可将其产生菌与另一生物合成途径相似的抗生素产生菌的高产菌株进行原生质体融合"在提高巴龙霉素［!$］及异亮氨酸的产量方面都有过成功的报道"234*5*等利用原生质体融合方法将低产的赖氨酸产生菌与野生菌种融合，得到了生产能力提高大约!倍的重组体［!6］"种间融合获得的融合子菌株往往会产生一些不希望有的组分"为了解决这一问题，张瑾阳等［(］在进行去甲基金霉素产生菌与金霉素产生菌原生质体融合以选育产去甲基金霉素的菌株时，对金霉素产生菌的原生质体进行热灭活，以减少既产生金霉素和四环素又产生去甲基产物的融合子"结果所获得的融合子中(78以上只产生去甲基产物，提高了目的产物的相对产量"!"!改变生物合成抗生素的组分9+:;*等［!(］用原生质体融合技术对生物合成*<=;+=>?@.的组分进行了改进"该抗生素有6个大组分（A #*，A $*，/#*，/$*）和6个小组分（A #B ，A $B ，/#B ，/$B ），其中/#*和/$*是活性最好的主要组分"通过诱变获得了一株只能产生6个/组分的变株，另外还选出只能产生6个*组分的一株变株"将这两个变株融合，获得一株只产生/#*和/$*的重组体，从而消除了其他不必要的组分"9+:;*等的这一工作虽在遗传上还没有明确的解释，却为改变生物合成抗生素的组分提供了一个成功的例子"!"6获得产生新化合物的菌株C *D @=;=4等人用巴龙霉素产生菌与卡那霉素产生菌融合杂交得到了新霉素产生菌［!&］"E 3=F=,+*.等［6%］将*<=;+=>?@.产生菌G ?;"*<=;+@?@,@4与+@,B =+->@.产生菌G ?4"H -F ;34>3I@>:4融合获得的重组体可产生’个$(J 去氧，$7J 甲基（或乙基）+@,B =+->@./的新衍生物，有广谱抗虫活性"贺敏霞等［#1］通过诺卡氏菌原生质体融合重组实验发现有6株融合子产生亲本没有的甾体转化中间体，!株融合子产生亲本没有的抗生物质"郑幼霞等将井岗霉素产生菌与庆丰霉素产生菌融合，分离得到!株融合子，其中$株所产生的抗生素分别为聚醚类抗生素*,B 3K @K @.与萘醌类抗生素F ;*.*?@>@.A ，其余#株所产生的为寡肽类化合物"此外，产生林可霉素的林可链霉菌与产生福堤霉素的#株小单孢菌融合"产生农用抗生素7#%$的吸水链霉菌应城变种种内融合［6#］，+:,?H @3+->@.产生菌!"#$%&"’("’)*+与新霉素产生菌!"#$,#%-’%.融合以及阿克拉霉素产生菌$变株融合，均获得了产生与$亲株产物不同的融合子"!"7获得具有新性状的菌株余名仑等［6$］在研究苎麻微生物脱胶时，发现#株软化芽孢杆菌与另#株革兰氏阴性无芽孢杆菌能协同脱胶，但后者对前者的生长有强烈的抑制作用，故不能混合培养，而这两个菌株的融合子的脱胶能力达到了$亲株分别处理脱胶的水平"这种例证可能为改进混合发酵工艺提供一种新的思路"原生质体融合技术由于不受亲缘关系的影响，遗传信息传递量大，不需了解双亲详细的遗传背景，可有目的地选择亲株以选育理想的融合株，便于操作等优点，为遗传育种提供了一种有效手段"随着现代分子生物学和生物技术的发展，这项技术正在被不断丰富和完善，并起到越来越重要的作用"［参考文献］［#］)3I L 33MNA ，O ;@F H ?)C"E =.=?@>;=>3+B @.*?@3.?H ;3:F H I ;3?3I ,*4?P :4@3.@.G ?;=I ?3+->=4［Q ］"QE =.C @>;3B @3,，#&1&，###（#）：#!1!#6!"［$］)3I L 33MNA ，O ;@F H ?)C"/*>?=;@*,I ;3?3I ,*4?P :4@3.：;=>3+B @.*?@3.@.P :4=M I ;3?3I ,*4?43P G ?;=I ?3+->=4［Q ］"C 3,E =.E =.=?，#&1(，#’$：!%1!!#1"［!］梁平彦，刘宏迪"展青霉和产黄青霉的种间体细胞杂交#"原生质体融合、杂种发育和诱发分离［Q ］"微生物学报，1第6期罗雯等：微生物原生质体融合技术及其在育种中的应用万方数据!"#$，$$（%）：$&#!$’()［&］*+,-*，*./012，1+/3，!"#$)34567+.789:;:87.<;+<:7.;+:/./=9606/69.;+:/:>?6/;+/@<768+=6@<［1］)?+>6A 5+，$B B B ，((（!&）：!%’"!!%(C )［’］D 696/5E 4?，*6F 6+D )D @<+:/:>>@/0.789:;:87.<;<［1］)G .;@96，!"C &，$&#：C "%!C "()［(］*.:*G )H,6;I :=>:9I +0I J >96K @6/54+/;6906/69+5>@<+:/:>87./;89:;:87.<;［1］)L 7./;.，!"C &，!!’：%’’!%(C )［C ］M +,,69,.//N ，L +7O .;P )［Q ］)A +R ;I S /;-+:8I 4<Q :/09*4:;:H T <;9，"!!"（2）)!"C #：!&B )［#］张瑾阳，吕婉瑜，韩卫华，等)金色链霉菌原生质体电融合［1］)中国抗生素杂志，!""%，!#（%）：!(%!!(#)［"］M I ./0-，26U ，V +6Q ，!"#$)Q :/<;9@5;+:/:>I +0I 690:<;69:7J 89:=@5+/046.<;<;9.+/<./=<;@=4:/;I 6:8;+,.75:/=+;+:/<>:95@7;@96［1］)Q I +/1-+:;65I /:7，!"""，!’（!）：&%!&")［!B ］M I .:1，Q I ./0WV )S /;9.<865+>+5I 4T 9+=+E .;+:/T 6;O 66/Q :89+/@<5+/696@<./=A 5I +E :8I 477@,5:,,@/6T 4LX P J +/=@56=89:;:87.<;>@<+:/./=6765;9:/>@<+:/［1］)Y :97=13+59:T +:7H /=-+:;65I ，!""’，!!：’#’!’"B )［!!］1+./0M ，Y ./03，Y ./0Y)S />7@6/56:>.==+;+F 6<:/;I 689:;:87.<;<6765;9:>@<+:/［1］)-+:6765;9:5I 6,-+:6/690，!"""，&#（$）：&&C !&’!)［!$］Z 6+;E3，[67+E .9:F A ，P 7@5\-，!"#$)X >>65;<:>89:8:>:7（+/;9.F 6/:@<89:8:>:76,@7<+:/）:/5677,6,T 9./6<,6.<@96=T 46765;9:>@<+:/./=6765;9:8:9.;+:/［1］)H 9E /6+,+;;67>:9<5I @/0，!"""，&"（%）：$#!!$#’)［!%］N 9./:G ，2+0.<I +\.O .Z ，2+9.+2)X >>65;:>,+;:5I :/=9+.:/6765;9:>@<+:/:>46.<;89:;:87.<;<［1］)X /E 4,6./=3+59:J T +.7V 65I /:7:04，$B B !，$%（!!$）：!B C !!!$)［!&］卜宗式)激光诱导金盏菊原生质体融合方法初探［1］)激光生物学，!""%，$：$#$!$#%，$C ’)［!’］张闻迪，赵白，王秋，等)激光诱导泥鳅卵细胞融合———一种新的细胞融合方法［1］)生物工程学报，!"##，&（&）：$"#!%B %)［!(］陈五岭，罗雯，姚胜利)氦氖激光对链霉菌原生质体种间融合频率的影响［1］)光子学报，!""#，$C （’）：&!$!&!C )［!C ］贺敏霞，史济平，褚志义)诺卡氏菌原生质体融合重组研究［1］)生物工程学报，!"#"，’（&）：%B %!%B #)［!#］徐京宁，米贯东，唐孝宣)应用原生质体融合技术定向改造林可霉素产生菌的探索［1］)生物工程学报，!""$，#（%）：$%C !$&$)［!"］袁志明)啤酒酵母和产朊假丝酵母属间原生质体融合子的筛选［1］)微生物学通报，!""!，!#（’）：$C !!$C ’)［$B ］江慧修，张金玲，戈玲，等)凝集性酵母融合株3G D $"的啤酒酿造实验研究［1］)微生物学通报，!""$，!"（!）：$!!$%)［$!］陈海昌，唐屹，张岭花，等)原生质体融合技术提高啤酒酵母絮凝性的研究［1］)微生物学通报，!""&，$!（&）：$!%!$!C )［$$］1.F .=6\.9[A ，A +F .Z .,./2，P :\I .76W[)S /=@<;9+.746.<;<;9.+/+,89:F 6,6/;：5:/<;9@5;+:/:>.I +0I 74>7:55@76/;46.<;O +;I .\+77695I .9.5;69T 489:;:87.<;>@<+:/［1］)1S /=@<;9+.73+59:T +:7，!""’，!’（$）："&!!B $)［$%］庞小燕，王吉瑛，赵凤生)构建直接发酵淀粉产生酒精的胶木融合菌株的研究［1］)生物工程学报，$B B !，!C （$）：!(’!!(")［$&］Q I ./0]2，?+QV ，Q I ./03Q ，!"#$)-.;5I 8I 6/:7=609.=.;+:/T 45./=+=.;9:8+5.7+<./=+;<>@<./;［1］)-+:;65I /:7-+:6/0，!""#，(B （%）：%"!!%"’)［$’］?+,.G ，3:96+9.Q ，V 6+R 6+9.1H ，!"#$)S /;9:=@5;+:/:>>7:55@:.;+:/+/;:+/=@<;9+.746.<;A .55I .9:,456<5696F +<+.6<.\6T 489:;:87.<;>@<+:/［1］)3+59:T +:<，!""’，#!（%$#）：!#C !!"C )［$(］王宪，范云六)通过原生质体融合产生的苏云金杆菌的新菌株［1］)生物工程学报，!"#C ，%：$"!%C )［$C ］穆国俊，董毓琨，黄冠辉)苏云金芽孢杆菌-;J %C B !与巨大芽孢杆菌-,J !B C 种间原生质体融合［1］)微生物学报，!""’，%’（’）：%$$!%$()［$#］]@1，L ./0]，V ./03，U +6Z ，!"#$)2+0I 74;:R +5./=T 9:.=J <865;9@,+/<65;+5+=.7-.5+77@<;I @9+/0+6/<+<6/0+/6696=T 4@<+/0;I 6;9./<8:<:/V /"!C ./=89:;:87.<;>@<+:/［1］)Q @993+59:T +:7，$B B !，&%（$）：!!$!!!")［$"］2.,74/L S ，-.77Q )P 6/6;+5<:>S /=@<;9+.73+59::90./+<,<［3］)A 6T 6\^*./=?.<\+/H S （6=)），!"C "：!#’!!"")［%B ］H +]，36/0D ，U @])24T 9+=+E .;+:/=:,+/./56:>\+/6;+5<+/965:,T +/./;H V 2J !%C (:T ;.+/6=F +.89:;:87.<;>@<+:/T 6J ;O 66/H <8690+77@</+069./=V 9+5I :=69,.966<6+［1］)Q I +/1-+:;65I /:7，!""C ，!%（%）：!(!!!(C )［%!］Q :@;6.@=+69]，[+.@=3，Z +T .P )P 6/6;+5G .;@96，A ;.T +7+;4，./=S ,89:F 6=[+9@76/56:>24T 9+=<>9:,L 9:;:87.<;D @J <+:/+/-6.@F 69+.［1］)3+59:TX 5:7，!""(，%$（!）：!!!B )#西安联合大学学报第(卷万方数据［!"］邢孔昭，王巽一，李焕娄#种间原生质体融合提高巴龙霉素单位产量的研究［$］#生物工程学报，%&’’，(（%）：(’!)(#［!!］曾红梅，张震霖，石义萍，等#原生质体融合提高农抗武夷菌素的效价［$］#微生物学报#%&&)，!)（)）：!*)!!’+#［!(］,-./0/1#23/45/64.-7489"48:;495;/4<-;/=>?@A -.<B @-;C 9;94<6.-7:;D B .45</=E <65--5F/;<.@.［G ］#%&’"：H %#［!)］,I /8I -;-2J ，K /0<L -;-,，M /?/@/N ，!"#$#:.-=/4<-;-759.<.4/;4@B 4/;4./F /<;.46/5-49;-<D 3<-.?;489.<.<;8<3<4-5.7-5/F 599;/=F /M /9@/4-6-66B .A =B O </=<./;D 489<58?35<D 7-5@/4<-;3?A 5-4-A =/.47B .<-;7-53599D <;F -78<F895/.4/P /;48<;A 5-D B 695.［$］#$-7Q 95@9;4/4<-;/;DR <-9;F <;995<;F，%&&(，**：!)"!!)*##［!H ］S B 3<;D 95K ，G 8/D 8/R>，><;F 8>，!"#$#2@?=/.98?A 95T A 5-D B 6<;F 8/A =-<D596-@3<;/;4.45/<;.-7,895@-@?69.=/;B F <;-.B .-34/<;9D 3?<;45/.A 96<7<6A 5-4-A=/.47B .<-;［$］#G /;$E <65-3<-=，"+++，(H （*）：H H &!H *!#［!*］S 94/@/=9.U ，M 95@-.<==/C ，V 9-;S ，!"#$#W 9O 9=-A @9;4-7489.9P B /=59A 5-D B 64<O 96?6=9-7X /;48-A 8?==-@?69.D 9;T D 5-58-B .［$］#$E <65-3<-=E 948-D .，"++"，(’（%）：’*!&!#［!’］1@B 5/>，:0/D /M ，,/;/0/M #>9=964<O 9A 5-D B 64<-;-7.A 96<7<66-@A -;9;4.-7/O 95@964<;.<;.459A 4-@?69./O 95@<4<=<.［$］#$2;4<3<-4<6.，%&&%，((（)）：)H +!)H !#［!&］E /L <959.Y #23.45/64.-7489#48:;495;/4<-;/=C 95@9;4/4<-;>?@A -.<B @/;D $48:;495;/4<-;/=>?@A-.<B @-;N 9/.4.［G ］#%&’+："(#［(+］C -9F9=@/;S,#［U ］#Z >U /49;4(，%&’’：*’&，H ’(#［(%］袁德军，周启#农抗)%+"产生菌原生质体融合育种的研究#"融合子Q S !++’的验证及其产生新活性物质的分离和鉴别［$］#生物工程学报，%&&%，*（"）：%("!%((#［("］余名仑#［G ］#第三届全国分子育种学术讨论会论文摘要#%&&%：!#［责任编辑吕玉琴］!"#$%&%’($)*%+$,-.*%/%.-,#(,&0$/#,..-$),/$%&$&+*110$&2V Z 1[9;%，G M J Y\8<T ]<;"（%#W 9A /54@9;4-7G 89@<.45?/;DV <79>6<9;69，X <’/;G -==9F9-7254./;D >6<9;69，X <’/;*%++H )，G 8<;/；"#X <’/;W -;F 79;F :;.45B @9;4Q /64-5?，X <’/;*%++H )，G 8<;/）3+#/*,)/：,894968;<]B 9-77B .<-;-7@<65-3</=A 5-4-A =/.4.<.6/A /3=9-745/;.@<44<;F /=/5F 9]B /;4<4?-7F9T ;94<6<;7-5@/4<-;^<48-B 4489<;7=B 9;69-7/77<=</4<-;#R 96/B .9-748<./D O /;4/F 9，<46/;39B .9D A B 5A -.9=?<;.9=964<;F A /59;4/=-5F /;<.@.4-3599D <D 9/=7B ./;4.7-57B .<-;#[<48489D 9O 9=-A@9;4-7@-D 95;@-=96B =/53<T -=-F ?/;D 3<-=-F <6/=4968;<]B 9.，48<.4968;<]B 9<.6-;4<;B -B .=?39<;F 9;5<689D /;D A 9579649D ，48B .A =/?<;F/@-59/;D@-59<@A -54/;45-=9<;@<65-3</=F 9;94<63599D <;F#4156%*0#：A 5-4-A =/.@；7B .<-;；3599D <;F &第(期罗雯等：微生物原生质体融合技术及其在育种中的应用万方数据。