菌种活化保存法

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菌种活化_操作方法

低温保存管（cryotube）中之一般菌种临时存放及活化A. 低温保存管之临时存放及解冻1. 低温保存管（cryotube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。

2. 准备 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高达管塞。

3. 将 cryotube 从低温保存条件中取出，置于 37℃浴槽之小试管架上。

4. 不断轻微摇动 cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需 2 分钟）。

B. 菌株活化: 在无菌操作下1. 用无菌微量吸管，从已溶解之 cryotube 吸取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近，以划线法接种于培养基。

2. 将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。

C. 划线法1. 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3 培养基为止（I 区）。

2. 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）。

3. 重复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区。

4. 灼烧接种环，将接种环归位。

D. 图示（1）金属接种环（2）平板划线法冷冻干燥管之开管说明下列步骤请在无菌环境下操作：1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端。

2、滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。

3、取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。

4、( a ) 适用于细菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。

菌种的活化操作步骤

菌种的活化操作步骤
菌种活化就是将保藏状态的菌种放入适宜的培养基中培养，逐级扩大培养是为了得到纯而壮的培养物，即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。

菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化，让菌种逐渐适应培养环境。

要明白菌种活化的情况就需要了解菌种保藏的方式和方法。

目前国际国内常用的菌种保存方法包括：定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80℃冰箱冻结法、液氮超低温冻结法。

对于不同的保存方式活化的方式也不同：
1、定期移植法的菌种复苏较简单，直接转接即可。

2、液体石蜡法保存的菌种在复苏时，挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上，生长繁殖后，再重新转接一次。

3、沙土管法保存菌种在复苏时，在无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次。

或取沙土粒于适宜的液体培养基中，增殖培养后再转接斜面。

菌种保藏方法及复壮技术

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菌种保藏方法及复壮技术菌种保藏的原理是通过干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养等方法，使菌种的代谢水平降低，乃至完全停止，达到半休眠或完全休眠的状态，而在一定时间内得到保存。

需要时再通过提供适宜的生长条件使保藏物恢复活力，使菌种在较长期的保藏之后仍然保持着原有的生命力、典型的形态特征、优良生产性能。

目前常用的菌种保藏方法有以下几种。

1菌种保藏方法1.1斜面低温保藏法将需要保藏的菌种，接种在适宜的斜面培养基上，菌丝长满斜面时，用硫酸纸包扎棉塞，旋转在4℃的冰箱保藏。

由于微生物的新陈代谢活动未停止，试管内培养基易失水变干，因此，保藏时间较短，转管次数多，不适于长期保藏。

每隔六个月转管一次。

草菇菌种不耐低温，需保藏在10~12℃，或在草菇菌落上灌注3~4毫升的防冻剂（10%的甘油）。

如菌丝长满斜面后，在无菌条件下，用无菌橡皮塞代替棉塞，并用石蜡密封，即可在室温或冰箱中保藏。

这种方法可防止杂菌污染，隔绝氧气，避免培养基干燥，使用方便。

1.2液体石蜡保藏法石蜡防止培养基水分蒸发，隔绝斜面菌丝与空气接触，降低微生物代谢活性，使其处于休眠状态，因此能延长微生物的生命，保持菌种优良的种性。

一般可保藏3~5年，是一种中长期的菌种保藏方法。

液体石蜡选用化学纯的，在121℃下高温灭菌30分钟，再将液体石蜡在160℃烘箱中保温1~2小时，蒸发掉液体石蜡中的水，或将高压灭菌后的液体石蜡放置在40~60℃温箱中，使灭菌后的液体石蜡层由乳白色变成无色透明。

在无菌条件下，将灭菌除水的液体石蜡用无菌吸管罐到长满菌丝的斜面试管中，液体石蜡要高出斜面尖端1厘米左右，然后用无毒泡沫试管塞塞好，直立地放在试管架上或罐头瓶中，置于冰箱或室温中保藏。

液体石蜡灌注过多，移种时不方便；过少，时间长容易干涸。

如将棉塞齐试管中剪平，用石蜡溶封，或用无菌橡皮塞代替棉塞，可延长保藏时间。

活化菌种的方法

活化菌种的方法菌种是微生物学研究中非常重要的一部分，它们可以用于制备各种发酵产品，如酸奶、酒、酱油等。

但是，菌种经过一段时间的保存后，会出现休眠或死亡的现象，这就需要进行活化处理，使其恢复生命活力。

本文将介绍几种常见的活化菌种的方法。

一、温度法温度法是最常用的活化菌种方法之一。

该方法是将被保存的菌种移至适宜的温度环境下进行培养，使其恢复生命活力。

具体方法是将菌种从冰箱中取出，放置于适宜的温度环境中进行培养。

一般情况下，大多数菌株的培养温度为30℃左右。

二、营养法营养法是通过添加适当的营养成分来活化菌种。

该方法适用于营养成分缺乏、菌种处于休眠状态的情况。

具体方法是将保存的菌种接种到含有适量营养成分的培养基中进行培养。

常用的营养成分包括葡萄糖、酵母粉、胰蛋白胨等。

三、pH法pH法是通过改变培养基的pH值来活化菌种。

该方法适用于菌种处于休眠状态、培养基酸碱度不适宜的情况。

具体方法是将保存的菌种接种到pH值适宜的培养基中进行培养。

一般情况下，大多数菌株的适宜pH值为6.5-7.5。

四、氧气法氧气法是通过调节培养环境氧气含量来活化菌种。

该方法适用于需氧菌株、培养环境氧气含量不足的情况。

具体方法是将保存的菌种接种到含有适量氧气的培养基中进行培养。

常用的氧气供应方式包括摇床培养和搅拌培养。

五、复苏法复苏法是通过多种活化手段的组合来活化菌种。

该方法适用于菌种处于极度休眠状态、多种单一活化手段无法恢复生命活力的情况。

具体方法是将保存的菌种接种到含有多种活化成分的培养基中进行复苏培养。

常用的活化成分包括葡萄糖、酵母粉、胰蛋白胨、氧气等。

总之，活化菌种是菌种保存和利用中的重要环节。

选择合适的活化方法可以使菌种恢复生命活力，保证其在后续的利用中发挥更好的作用。

活化菌种的方法

活化菌种的方法菌种的活化是指将冷冻、干燥或其他方式保存的菌种重新复苏，使其具有生物活性和生长能力的过程。

活化菌种的方法有很多种，根据菌种的特点和保存方式的不同，选择不同的方法进行活化。

本文将介绍几种常见的活化菌种的方法。

一、液体培养法液体培养法是一种简单、易操作的活化菌种方法。

首先将保存的菌种接种到含有适当营养成分的液体培养基中，然后在适当的温度、湿度和通气条件下培养。

液体培养法的优点是适用范围广，可以用于多种菌种的活化，且容易控制生长条件，可以获得较高的活化率。

但液体培养法需要较长的时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。

二、固体培养法固体培养法是将保存的菌种接种到含有适当营养成分的固体培养基上，然后在适当的温度、湿度和通气条件下培养。

固体培养法的优点是可以获得单个菌落，可以对菌株进行纯化和鉴定。

但固体培养法的缺点是需要较长时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。

三、滴定法滴定法是将保存的菌种加入到含有适当营养成分的液体培养基中，然后逐渐加入新的培养基，使菌株逐渐适应新的环境。

滴定法的优点是可以逐渐适应新的环境，可以获得较高的活化率。

但滴定法需要较长的时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。

四、化学处理法化学处理法是利用化学物质对保存的菌种进行处理，使其重新复苏。

常用的化学处理方法包括酸碱处理、渗透压处理、氧化还原处理等。

化学处理法的优点是操作简单，可以获得较高的活化率。

但化学处理法对菌株的适应性要求较高，有可能对菌株造成伤害，影响其生物活性和生长能力。

五、生物处理法生物处理法是利用其他微生物对保存的菌种进行处理，使其重新复苏。

常用的生物处理方法包括共培养法、共生法、共生菌法等。

生物处理法的优点是可以利用其他微生物对菌株进行适应性调节，可以获得较高的活化率。

但生物处理法对微生物的适应性要求较高，且需要较长时间才能获得足够的活化菌种。

菌种活化操作步骤

菌种活化操作步骤引言：菌种活化是一项重要的实验室技术，用于使冷冻保存的微生物菌种恢复活力并进行后续研究。

本文将介绍菌种活化的操作步骤，以帮助读者正确进行实验并获得可靠的结果。

一、准备工作1.1 材料准备确保准备好以下实验材料：- 冷冻保存的菌种样本- 无菌培养基- 无菌培养皿或试管- 灭菌的移液器和吸头- 灭菌的培养箱或恒温培养箱- 无菌操作台或洁净工作台1.2 环境准备在进行菌种活化之前，必须确保实验环境的无菌和洁净。

清洁操作台或洁净工作台，并使用适当的消毒剂擦拭工作表面。

同时，确保培养箱或恒温培养箱已经预热到适当的温度。

二、菌种活化步骤2.1 无菌操作在进行菌种活化之前，务必进行无菌操作。

戴上手套，使用灭菌的移液器和吸头，避免任何外界污染。

2.2 菌种接种将冷冻保存的菌种样本取出，迅速将其转移到无菌培养基中。

使用移液器，将适量的菌种悬浮液滴入无菌培养皿或试管中。

确保每个培养皿或试管只接种一种菌种。

2.3 培养条件设置根据菌种的特性，设置适当的培养条件。

这包括温度、pH值、培养基成分等。

将接种好的培养皿或试管放入预热好的培养箱或恒温培养箱中。

2.4 培养过程管理在菌种活化的过程中，需要定期观察和管理培养过程。

这包括检查培养皿或试管中的菌落形态和生长情况，以及调整培养条件，如温度和培养基的补充。

2.5 菌种分离与保存当菌种活化成功后，可以进行菌种分离和保存。

使用无菌技术，将菌落转移到新的培养皿或试管中，并进行进一步的鉴定和研究。

同时，将一部分菌种保存在冷冻条件下，以备将来使用。

结论：菌种活化是一项关键的实验技术，为后续的微生物研究提供了可靠的菌种资源。

通过正确的操作步骤，可以成功地活化冷冻保存的菌种，并获得可靠的实验结果。

在进行菌种活化实验时，务必遵循无菌操作规范，并根据菌种的特性进行适当的培养条件设置和管理。

这将有助于保证实验的准确性和可重复性，为微生物研究提供坚实的基础。

菌种的活化

-80℃冰箱冻结法保存菌种复苏时，从冰箱中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置38℃-40℃水浴中快速复苏并适当快速摇动。

直到内部结冰全部溶解为止，约需50秒-100秒。

开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养
总结一下菌种活化需要以下几个步骤：
第一配置菌种适宜生长的培养基
第二将菌种从保藏状态恢复到室温状态，比如将冷冻的菌种解冻
第三将通过操作将保藏的菌种接种到培养基中培养，此步骤称为菌种复壮
第四步挑选培养基茁壮的菌落，挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养，重复此步骤2-3次，从而得到生长良好的菌落
培养基：LB培养基，对于含有质粒的菌种可以在活化培养后，接种到含有抗生素的平板上，进行筛选，然后将长出的菌落接种到斜面或者平板上保存。

菌种活化工艺流程说明

菌种活化工艺流程说明
一、目的
本工艺流程的目的是重新活化已经冷冻保存的菌种,使其恢复生长复制功能。

二、应用范围
本工艺流程适用于所有需要从-80°低温贮存恢复的各种细菌菌种。

三、必需设备与材料
1. 试管
2. 转移枪或吸杆
3. 液体压缩氮槽
4. 37°或28°恒温培养箱
5. 理想培养基
四、流程操作
1. 取出低温保存的菌种草液,放在振荡机中,振荡均匀。

2. 用转移枪或吸杆取出少量菌种草液,转移至含有理想培养基的试管中。

3. 将菌种试管置入37°或28°恒温培养箱中培养恢复。

4. 每隔24小时观察菌变化,直到见到菌落增长。

5. 培养48小时后,菌种正式进入对数生长期,即完成活化。

五、注释
以上流程仅供参考,细节操作请根据不同菌种的生理要求进行调整。

活化过程需严格规范执行,以确保菌种活性的完全恢复。

菌种保存与活化

菌种保存与活化（一）培养基保存法利用各种斜面和半固体培养基，加上石蜡油保存菌种，是一种最常用而又简易的保存方法。

1.普通琼脂斜面保存法：肠道杆菌、葡萄球菌等一般细菌可接种于不含糖的普通琼脂斜面上，斜面底部应加少许无糖肉膏汤，以防干涸。

经35℃培养18～24h后，移种于4℃冰箱中，一般可保存一个月，每月传代一次。

2.血液琼脂斜面保存法：链球菌、肺炎链球菌应接种于血液琼脂斜面上，35℃培养生长后，置4℃冰箱中保存，链球菌须半个月至1个月移种一次，肺炎链球菌的新分离菌株须2～4天移种一次，以后逐渐延长移种时间，在适应后可延至半个月移种一次。

3.巧克力色斜面保存法：宜保存脑膜炎奈瑟菌，并在35℃孵箱中保存，一般每2天移种一次。

4.鸡蛋斜面保存法：适于保存含有Vi抗原的沙门菌属及其他含表面抗原的细菌，一般可保存一个月。

5.半固体穿刺保存法：将细菌接种于琼脂半固体或血清琼脂半固体内，经35℃培养18～24h，再以无菌方法加入灭菌的液体石蜡。

高度约lcm，置4℃冰箱保存。

保存时间可达3～6个月。

（二）干燥保存法原理是将细菌体内的水分蒸发掉，使其处于休眠和代谢停滞状态，从而达到长期保存菌种的目的。

菌种干燥后低温保存，可保存数年至十几年医学教|育网搜集整理。

（三）冷冻干燥保存法本法又称冷冻真空干燥法。

它综合利用了各种有利于菌种保存的因素（低温、干燥和缺氧等），是目前最有效的菌种保存方法之一。

用本法保存的菌种具有成活率高，变异性小等优点，保存期一般3～5年，有的可长达10年以上。

菌种保管要求2009-11-16 15:32【大中小】【我要纠错】1.应充分了解每种细菌的不同生物性状及营养要求，以选择适宜的培养基。

一般原则是使细菌能够生长而不易变异的前提下，必须选择营养丰富的培养基，一般不用含糖的培养基。

液体培养基不适于保存菌种。

2.培养后最好在细菌尚未旺盛发育之前取出，放冰箱内保存。

但应注意，一般细菌大多保存于4℃冰箱中，但真菌，霍乱弧菌、铜绿假单胞菌及粪产碱杆菌需在室温保存。

菌种活化文档

菌种活化引言菌种活化是指通过一系列方法和条件，使得休眠状态的菌种恢复到活跃状态的过程。

活化菌种具有较高的代谢活性和生物活性，能够更好地应用于微生物学研究、工业生产以及医学领域。

本文将介绍常见的菌种活化方法和条件，以及菌种活化的应用。

菌种活化方法预处理在开始菌种活化前，通常需要对菌种进行一些预处理步骤。

首先，需要将菌种从低温储存条件中取出，并进行适当的复苏。

复苏方法包括将冻存的菌种转移至适宜的培养基中，并进行培养。

此外，还可以通过亚培养基转接、胶体水合等方法来有效地活化菌种。

培养条件的优化合适的培养条件对于菌种的活化十分重要。

首先，要选择适宜的培养基配方，其中包括碳源、氮源、矿盐、辅助因子和调节剂等。

此外，还应考虑到温度、pH值、氧气含量和培养时间等参数的优化。

通过对这些因素的调节和优化，可以提高菌种的活化效率和产量。

生物刺激物的应用生物刺激物是促进菌种活化的重要手段之一。

常见的生物刺激物包括细胞壁成分、抗生素、激素和激活因子等。

这些物质可以刺激菌种的代谢活性，促进细胞分裂和生长。

通过合理选择和使用生物刺激物，可以显著提高菌种的活化率。

物理因子的调节物理因子对于菌种的活化同样具有重要的影响。

常用的物理刺激包括温度、压力、光照和辐射等。

通过适当调节这些物理因子，可以激活菌种的代谢过程，促进细胞的生长和繁殖。

然而，需要注意的是，过高或过低的物理参数可能会对菌种的生长造成不良影响，因此应进行合理的控制和调节。

菌种活化的应用微生物学研究菌种活化在微生物学研究中具有重要意义。

通过活化菌种，可以获得更多的微生物样品和菌株，以进一步研究其生物学特性和代谢途径。

此外，活化菌种还可以用于微生物遗传实验、基因工程和酶制剂的生产等方面。

工业生产在工业生产中，活化菌种可以作为发酵生产的起始物种。

通过优化培养条件和菌种活化方法，可以提高发酵过程中的产量和质量。

活化菌种还可以应用于微生物制药、食品加工和环境修复等领域，为工业生产提供高效可靠的微生物资源。

菌种活化_操作方法

低温保存管（【2 】cryotube）中之一般菌种暂时存放及活化A. 低温保存管之暂时存放及解冻1. 低温保存管（cryotube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温前提下.2. 预备37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精,不可以火加温,以免安全;若以37℃水浴代替,应避免水中微生物污染）,个中事先安放小试管架（可放置 cryotube 之大小）,液面不可高达管塞.3. 将 cryotube 从低温保存前提中掏出,置于37℃浴槽之小试管架上.4. 不断稍微动摇 cryotube,液面不可高至管塞,直至结冰完整消融（约需 2 分钟）.B. 菌株活化: 在无菌操作下1. 用无菌微量吸管,从已消融之 cryotube 汲取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液,滴入固态指定造就基(造就基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘邻近,以划线法接种于造就基.2. 将接种好的造就基置于指定温度的造就箱中造就.C. 划线法1. 手持金属接种环,用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红,并不断往返烧烤金属固定杆之前约 10 公分,等待约 10 秒钟,将接种环前端轻触造就基边缘凝胶（无菌体部份）,待接种环完整冷却后,以环沾黏菌滴,由造就基边缘向中心轻轻横划紧接的并行线,直到涵盖 1/3 造就基为止（I 区）.2. 灼烧接种环,待数秒冷却后,扭转造就基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）.3. 反复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区.4. 灼烧接种环,将接种环归位.D. 图示（1）金属接种环（2）平板划线法冷冻湿润管之开管解释下列步骤请在无菌情况下操作：1.以沾有70%酒精的棉花,擦拭外管,在火焰上加热外管之尖端.2.滴数滴无菌水于加热处,使外管决裂,再以硬棒敲破尖端.3.掏出隔热纤维纸和内管,以灭菌过的镊子掏出内管之棉塞.4.( a ) 实用于细菌用无菌吸管,汲取0.3-0.5 ml指定之液体造就基,滴入内管内,并稍微震动（可用该吸管协助）,直到平均悬浮.( b ) 实用于霉菌.酵母菌用无菌吸管,汲取0.3-0.5 ml无菌水,滴入内管内,待湿润粉末消融后,以无菌吸管汲取并滴入约含有5ml无菌水之试管内,稍微震动使其平均后,静置30至60分钟.5.取0.1-0.2 ml之菌体悬浮液于指定的平板造就基上,做划线分别造就或做成一系列之稀释,用无菌L型玻棒平均涂抹,以磨练菌种之纯度及活化情况,而残剩的菌体则全体移入指定的液体造就基内,并依指定的温度造就之.6.某些菌种经由冷冻湿润保存后,迟滞期 ( lag period ) 较长,必须等造就二倍时光后才能长出,且再经由一.二次继代造就 (Subculture) 后才能正常发展.经由以上的尽力后仍造就掉败,才视为不能活化.7.若菌种未能活化,或活化之菌落有疑问时,请于收到菌种之一个月内,以问题菌株反响单传真至本中间,即进行处理.8．未开封之冷冻湿润管,请冷藏于4℃冰箱,切勿冷冻保存.双歧杆菌的活化请问列位双歧杆菌的冻干粉怎么活化？活化造就基是什么？活化时光？活化时须要特殊留意什么？感谢！--------------------------------------------------------------------------------脱脂乳7份+豆奶3份混均,加2%的酵母浸出液,2%的酪蛋白胨,0.1%的抗坏血酸,葡萄糖2%,混溶分装试管,应用间歇灭菌法(同上)灭菌,冷却,低温保存,备用.双歧杆菌为厌氧菌,需进行厌氧造就.在无氧前提下,打开湿润菌种菌管,用接菌环取冻干菌种于双歧杆菌活化造就基内,38℃恒温厌氧造就24ｈ,取深层活化菌种传入下一代造就基中深层造就,重回生化传至第5代,每代均为38℃及24ｈ.--------------------------------------------------------------------------------一般传两代今后,才能正常应用！常用活化造就基液体造就基有PYG固体有TPY活化办法,ATCC推举：1.冻干粉菌开封今后,用心理盐水,消融！接种于液体造就基上！造就为正常发展时光的二倍,36±1℃ 2.然后将其离心集菌,接种于平板上,养为正常发展时光的二倍,36±1℃自我感到,液体造就基活化不好用！我的活化办法：冻干粉菌开封今后,用小牛血清消融！接种于TPY固体造就基上！造就为72H,36±1℃ ,然后挑菌,接种于平板上,造就为72H,36±1℃即可。

菌种的活化方法

菌种的活化方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：菌种活化是指将菌种从休眠状态激活至活跃状态的过程，使其恢复生长和繁殖能力。

良好的活化方法可以提高菌种的发酵效率和产量，保证产品的质量稳定性。

下面将介绍一些常用的菌种活化方法。

一、前处理菌种在储存过程中可能会受到损伤或降解，因此在进行活化之前首先要进行前处理。

常见的前处理方法包括：将菌种在富含营养物质的培养基中培养一段时间，以恢复其活力；采用低温冷冻保存的菌种需先进行解冻和复苏处理；对于被冷冻干燥的菌种，需要通过加入适量水或培养基来复苏。

二、温度调节温度是影响菌种活化的一个重要因素。

一般来说，大多数菌种的适宜生长温度在25-35摄氏度之间。

在活化菌种时应根据不同菌种的特性和环境条件调节适宜的温度，提供一个适宜的生长环境，促进菌种的恢复和生长。

三、培养基选择培养基的选择对菌种的活化也有很大的影响。

一般来说，应选择含有适当营养成分、低毒性和无污染的培养基，以促进菌种的复苏和生长。

对于不同种类的菌种可能需要选择不同的培养基，以满足其特定的生长和营养需求。

四、氧气供应氧气是微生物生长和代谢所必需的。

在活化菌种时，应保证有足够的氧气供应，以促进菌种的代谢活动和生长。

可以通过搅拌、通气等方式增加培养基中的氧气含量，提高菌种的代谢和生长速度。

五、PH值调节PH值是影响菌种生长的另一个重要因素。

不同菌种对PH值的适应范围不同，因此在活化菌种时应考虑到不同菌种的PH值需求。

一般来说，绝大多数菌种的适宜生长PH值在6-8之间，因此应选择适当的PH值培养基来活化菌种。

六、添加生长因子有些菌种对特定生长因子有较高的依赖性，缺乏这些生长因子会导致其生长迟缓或死亡。

在活化菌种时，可以考虑添加一些生长因子或促生长物质，以帮助菌种更快地复苏和生长。

不过，需要根据菌种的特性和需求来确定添加何种生长因子以及添加的浓度。

七、时间控制菌种活化的时间一般较长，需要耐心等待。

在活化菌种时，应根据菌种的生长速度和复苏程度来控制活化时间，不能过早打断或过早结束。

菌种保藏及活化使用的注意事项

菌种保藏的方法很多，但原理大同小异。

首先要挑选优良纯种。

利用微生物的孢子、芽孢及营养体；其次，根据其生理、生化性，人为创造低温、干燥或缺氧等条件，抑制微生物的代谢作用，使其生命活动降低到极低的程度或处于休眠状态，从而延长菌种生命以及使菌种保持原有的形状，防止变异。

不管采用哪种保藏方法，在菌种保存过程中要求不死亡、不污染杂菌和不退化。

斜面保藏是目前最普遍的短期保藏法，操作简单，使用方便，但需定期接种。

因此工作量较大，而且传代次数多易发生变异，因此，仅适用于短期经常使用的菌种。

1.配制培养基，营养成分浓度稍低为宜，特别是糖类尽可能降低，产酸菌种，则应添加少量碳酸钙；2.斜面装液量，斜面以倾斜后不超过试管长度1/2为宜；3.斜面培养，温度较最适稍低，时间较最适略长；4.生长完成后，密封置于2~8℃的冰箱中保藏。

每传代一次，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌可保存1~3个月，酵母菌2个月，细菌1个月。

活化使用：将斜面从冰箱中取出，细菌挑取菌落增菌，或霉菌切块传代培养，培养好即可使用。

冷冻保藏是目前使用较为广泛的长期保藏法之一，适用于所各类微生物，较之于斜面保藏，减少了工作量，延长了保藏时间。

1.准备斜面或平板新鲜培养物一个，10%的无菌甘油溶液；2.用甘油溶液将菌体或孢子洗脱下来，形成菌悬液；3.菌悬液分装，冻存管装液 1mL/支，后置于程序降温盒；4.将程序降温盒置于-80℃冰箱冻存；5.可保藏 1-2 年。

活化使用：1.将冻存菌株置于冻存盒中取出，准备水浴溶解，切勿常温融化；2.将菌株迅速置于水浴速溶，细菌40℃，真菌30℃，约2min 全部溶解后接种到适宜培养基；3.采用适宜条件培养完成即可。

菌种保存方法

菌种保存方法微生物具有容易变异的特性，因此,在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。

低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以,菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。

一. 保藏方法大致可分为以下几种：1．传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。

2．液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。

3．载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4．寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。

病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5．冷冻保藏法可分低温冰箱（—20——30℃，—50——80℃）、干冰酒精快速冻结（约—70℃）和液氮（-196℃)等保藏法.6．冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右)下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。

有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害.保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。

保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。

二. 常用的器材所要保存的微生物；肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷,河沙，瘦黄土或红土,冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙;灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管,泪滴形安瓿管（长颈球形底）,40目与100目筛子，油纸，滤纸条(0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。

甘油菌菌种活化步骤,甘油菌怎么保存

甘油菌菌种活化步骤，甘油菌怎么保存1、LB培养基制备：准备10g胰蛋白胨，5g酵母提取物，10g氯化钠，加入800ml去离子水，拌匀，直至完全溶解，然后用0.2ml氢氧化钠（5mol/L）将ph调节到7.4，并加入1L去离子水，高压蒸汽灭菌。

2、倒平板：培养基放置在60°C水浴锅中保温，取出后，轻轻转动培养基，让琼脂分布均匀。

一、甘油菌菌种活化步骤1、LB培养基制备（1）准备10g胰蛋白胨，5g酵母提取物，10g氯化钠，然后加入800ml去离子水，搅拌均匀，直至完全溶解，接着使用0.2ml的氢氧化钠（5mol/L）将ph调节到7.4左右，并加入1L的去离子水，高压蒸汽灭菌20分钟左右。

（2）在高压灭菌之前，应当加入15g/L（铺制平板用）或7g/L （配制顶层琼脂糖用）的琼脂糖。

2、倒平板（1）超净台、接种环、培养皿，酒精灯等用紫外线灭菌30分钟左右。

（2）高压灭菌后的培养基放置在60°C的水浴锅中保温，等到溶液尚未冷却的时候，将培养基取出，轻轻转动，让琼脂均匀分布在培养基溶液中。

（3）等到冷却至50°C的时候，在超净台中加入抗生素，并旋转将培养基混合均匀，然后从烧瓶中倾出培养基铺制平板。

（4）将甘油菌冻存管放在冰上，直接用接种环在冻存管内的冰渣上蘸一下，然后涂上平板。

3、大量培养（1）将冷藏的液态培养基重新高温高压灭菌，等到冷却至50°C 的时候，加入抗生素，接着将菌落挑至已经加入抗生素的液态培养基中（2-5ml），37°C，200rpm培养8小时左右。

（2）按照1：500-1000的比例，将添加了抗生素的液态LB培养基稀释上一步骤所得菌液（20-25μL菌液+25ml液态LB培养基），37°C，200rpm培养12-16小时。

二、甘油菌怎么保存1、如果是20%甘油保存菌种（甘油：菌液=20：80），一般放置在零下70°C的环境下保藏。