5-菌种的管理和保藏

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低于-70℃或低温冷冻干燥可以延长菌种的保 低于-70℃或低温冷冻干燥可以延长菌种的保 存时间. 存时间.标准储备菌株可用于制备每月或每周一 工作菌株。 次转种的工作菌株 次转种的工作菌株。 冷冻菌株一旦解冻转种制备工作菌株后, 冷冻菌株一旦解冻转种制备工作菌株后,不得 重新冷冻或再次使用。 重新冷冻或再次使用。
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常用菌种保藏方法
菌种保藏的原则 根据微生物菌种的生理、 生化特性， 根据微生物菌种的生理 、 生化特性 ， 在人工 创造的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强 使细胞基本上处于休眠状态， 度 ， 使细胞基本上处于休眠状态 ， 生长繁殖 受到抑制但不至于死亡， 受到抑制但不至于死亡 ， 以减低菌种的变异 率。
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⑴ 挑选特征典型的纯菌菌落。 挑选特征典型的纯菌菌落。 确定保藏的合适菌体。 ⑵确定保藏的合适菌体。 选择最适宜的方法保藏。 ⑶选择最适宜的方法保藏。 定期对保藏的菌种进行检查。 ⑷定期对保藏的菌种进行检查。
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二、菌种的传代和使用
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工作菌株不可代替标准菌株， 工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业 衍生物仅可用作工作菌株。 衍生物仅可用作工作菌株。
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不同的微生物， 不同的微生物，应根据其生物特征来选择最适 宜的保藏方法， 宜的保藏方法，菌种的保藏方法一般分四个阶 段：
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⑵创造适宜的培养条件 ⑶用不同类型的细胞进行传代 ⑷采用有效的保藏方法
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定期检查 主要检查项目 菌落形态、革兰染色、 菌落形态、革兰染色、 显微镜下菌体形 生化特性及血清学检查。 态、生化特性及血清学检查。
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菌种保藏的重要性
菌 种保藏是微生物学检验工作中的 一项常规技术， 一项常规技术，菌种的科学保藏和管 理直接关系到检验结果的正确性。 理直接关系到检验结果的正确性。
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菌种的来源
药品微生物检验用的试验菌应来自认 可的国内或国外菌种收藏机构的标准菌株， 可的国内或国外菌种收藏机构的标准菌株， 或使用与标准菌株所有相关特性等效的商 业派生菌株。 业派生菌株。
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菌种保藏的中心任务
⒈广泛收集各种有用的微生物菌种。 广泛收集各种有用的微生物菌种。 选择最适宜的保藏方法。 ⒉选择最适宜的保藏方法。 研究、检验、交换和使用。 ⒊研究、检验、交换和使用。
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国外的菌种保藏机构
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详细记录 菌种的来源、接收、传代、分离、复壮、 菌种的来源、接收、传代、分离、复壮、使用 和鉴定等均应做好详细记录。包括菌保存位置、 和鉴定等均应做好详细记录。包括菌保存位置、 环境(温度) 种传代或使用时间、名称、菌号、 环境(温度)、种传代或使用时间、名称、菌号、 代数、传代或保存形式、分离、复壮方式、 代数、传代或保存形式、分离、复壮方式、使 用内容、鉴定情况等都应进行详细的记录。 用内容、鉴定情况等都应进行详细的记录。
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菌种不得随意带出实验室，外单位索取、 菌种不得随意带出实验室 ， 外单位索取 、 购买 应有证明和登记，并包装严密。 应有证明和登记，并包装严密。 菌种处理应严格按操作规程进行， 菌种处理应严格按操作规程进行，灭菌处理应 有详细记录。 有详细记录
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菌种的复壮 使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性的 过 程验室主要采用分离纯化的方法。 程验室主要采用分离纯化的方法。
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四、菌种的管理
1、使用菌种的单位，应具备从事微生物工作的 使用菌种的单位， 条件和设备。 菌种应由专人负责管理， 条件和设备。 菌种应由专人负责管理，管理人 员应具有微生物专业知识和技术水平， 员应具有微生物专业知识和技术水平，并应具有 较强的责任心。 较强的责任心。
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2、实验室必须建立菌种保存和使用文件化的程序管理 制度； 制度； 包括：每支菌种标注名称、标准号、接种日期、 包括：每支菌种标注名称、标准号、接种日期、传代 次数、进出、收集、贮藏、保存、 次数、进出、收集、贮藏、保存、确认试验以及销毁 的记录、标准菌种的申购记录、 的记录、标准菌种的申购记录、从标准菌株到工作菌 株操作记录，如菌种定期转种传代，鉴定（纯度、 株操作记录，如菌种定期转种传代，鉴定（纯度、特 ）、培养基和培养条件 培养基和培养条件、 性）、培养基和培养条件、菌种保存的位置和条件及 其它需要的程序。 其它需要的程序。
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常用菌种保藏方法
标准菌株的复活或培养物的制备应按供应商 提供的说明或按验证的方法进行。 提供的说明或按验证的方法进行。 标准储备菌株- 从国内、 标准储备菌株 - 从国内 、 外菌种收藏机构获得 的标准菌株经复活并在适宜的培养基中生长后, 的标准菌株经复活并在适宜的培养基中生长后, 既为标准储备菌株。 既为标准储备菌株。
工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过 代 工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过5代， 从菌种保藏中心获得的标准菌株为第0代 （从菌种保藏中心获得的标准菌株为第 代）防止 过度的传代造成菌种变异。 过度的传代造成菌种变异。 1代是指将活的培养物接种到新鲜培养基中，任 代是指将活的培养物接种到新鲜培养基中， 代是指将活的培养物接种到新鲜培养基中 何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。必要 何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。 实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。 时，实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。
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细菌的接种、 细菌的接种、分离和培养 常用培养基种类 斜面培养基 半固体培养基。 半固体培养基。 液体培养基 平板培养基
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接种方法 涂布法 划线法 穿刺法 直接加入法等
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分离： 为了获得纯菌种（ 分离 ： 为了获得纯菌种 （ 株 ） ， 采用的 将细菌分离成单个细胞， 将细菌分离成单个细胞，使其独立分裂繁 殖形成单个菌落的操作技术。 殖形成单个菌落的操作技术。 分离一般采用平板培养基。 分离一般采用平板培养基。 分离方法主要有分段划线法、连续划线法、 分离方法主要有分段划线法、连续划线法、 涂布分离法、倾注分离法等。 涂布分离法、倾注分离法等。
菌种的保藏和管理
杜平华
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前言
试验过程中，生物样本可能是最敏感的，因 为它们的活性和特性依赖于合适的试验操作和 贮藏条件。实验室菌种的处理和保藏的程序应 标准化，使尽可能减少菌种污染和生长特性的 改变。 按统一操作程序制备的菌株是微生物试验结 果一致性的重要保证。
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培养 ： 接种后的培养基 ， 根据不同微生物 接种后的培养基， 生长条件的要求， 生长条件的要求，将培养基放在适宜微生物 生长的环境中（温度、湿度、氧气等） 生长的环境中（温度、湿度、氧气等），使 其生长繁殖的过程。 其生长繁殖的过程。 需气菌培养法 厌氧培养法
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菌悬液的制备与保存
菌悬液的制备与保存 参照《中国药典》 参照《中国药典》2010版培养基适用性 版培养基适用性 试验。 试验。
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百度文库
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低温、 干燥、 缺氧、 低温 、 干燥 、 缺氧 、 缺乏营养等环境条件都可 以抑制微生物的代谢和生长繁殖， 因此低温、 以抑制微生物的代谢和生长繁殖 ， 因此低温 、 干燥和真空是菌种保藏的重要手段。 干燥和真空是菌种保藏的重要手段。 标准储备菌株经纯度和特性确认后保存时， 标准储备菌株经纯度和特性确认后保存时 ， 可 将培养物等份悬浮于抗冷冻的培养基中， 将培养物等份悬浮于抗冷冻的培养基中 ， 并分 装于小瓶中,建议采用低温冷冻干燥，液氮储存， 装于小瓶中,建议采用低温冷冻干燥，液氮储存， 超低温冷冻(低于-70℃ 等方法保存。 超低温冷冻(低于-70℃)等方法保存。
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3 、 菌种应冷藏或冷冻保存 ， 保存菌种的冰箱不得 菌种应冷藏或冷冻保存， 放置食品和易挥发性药品， 放置食品和易挥发性药品 ， 放置菌种应有专用的冰 应上锁管理。 箱，应上锁管理。 4、由专人按操作规程和有关要求定期进行传代，并 由专人按操作规程和有关要求定期进行传代， 定期对保存的菌种进行检查， 一般每年1 定期对保存的菌种进行检查 ， 一般每年 1 ～ 2 次 ， 或定期更换冻干菌种） （ 或定期更换冻干菌种 ） 。 发现菌种的异常情况应 及时检查。一旦发现菌种污染和变异现象， 及时检查 。 一旦发现菌种污染和变异现象 ， 应立即 报告、研究处理。尤其长期保存时。 报告、研究处理。尤其长期保存时。
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培养后微生物的生长判断 固体培养基 液体培养基
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三、菌种的检查与复壮
菌种的衰退 菌种经过长期人工传代培养或保藏， 菌种经过长期人工传代培养或保藏，由自发突变 的作用而引起某些优良特性变弱或消失的现象。 的作用而引起某些优良特性变弱或消失的现象。 控制菌种的衰退方法 尽量避免不必要的接种和传代， ⑴控制传代次数 尽量避免不必要的接种和传代， 降低突变几率。采用良好的传代保藏方法。 降低突变几率。采用良好的传代保藏方法。《中 国药典》2010年版规定 传代次数不得超过5 年版规定， 国药典》2010年版规定，传代次数不得超过5代。