离心管的使用
Amicon Ultra 超滤离心管说明书
本说明仅供参考
超滤离心管
蛋白浓缩和换Buffer 通常会使用到超滤管,有多种不同MWCO 和处理量的型号可选,
视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。
超滤离心管具有快速超滤功能,能够达到较高的浓缩系数,易于从稀释液和复杂的样本组合中进行浓缩回收。其竖式设计以及可用的滤膜表面积能提供快速的样本处理和较高的样本回收率(通常大于90%的初始溶液),并能进行多倍浓缩。竖式设计将溶质极化之后造成的滤膜结垢降至最低,过滤装置中的物理止滤点防止过滤器旋转过度使样本干燥和造成样本的损失。浓缩液用移液管从过滤器的样本槽中收集,而超滤出液则收集到所提供的离心管中。该装置可在离心机中进行。装置未经消毒,只供一次使用(但是国内众多科研院所及科研单位的老师,都在重复使用,毕竟使用一次就扔掉太浪费。)
超滤离心管储存在15-30°C 下,保质期自生产之日起3年。整套装置包括一个盖子、一个过滤器和一个离心管,如右图所示:
一、使用方法:
1预清洗:超滤离心管的过滤薄膜含有微量甘油。如果此材料干扰分析,可用缓冲液或超纯水预清洗。如果干扰仍然存在,用0.1M NaOH 清洗,然后用缓冲液或超纯水再次清洗后甩干。
注意:Amicon®Ultra 超滤离心管中的滤膜一旦润湿后应避免重新干燥。若在预清洗后没有立即使用该装置,则应保持滤膜湿润,直到使用该装置为止。
瑞
达恒辉
恒辉
恒
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2.向超滤离心管加入不超过处理量的样品。
3.将盖好盖子的超滤离心管放入离心转子中。
4.适当转速离心。(关于旋转时间,请参见图1和图2以及表1和表2)
离心机使用方法说明书
离心机使用方法说明书
一、产品简介
离心机是一种常见的实验室设备,用于分离混合物中的不同成分。本说明书将介绍离心机的使用方法,帮助用户正确使用这一设备。
二、安全须知
1. 在操作离心机之前,确保设备电源已断开。
2. 离心机应放置在坚固的平台上,以确保稳定性。
3. 在使用过程中,不要触摸旋转部件,以避免伤害。
4. 使用合适的离心管和盖子,确保装载样品时的密封性。
5. 确保离心管加载均衡,避免不平衡导致设备震动。
6. 使用安全手套和护目镜等个人防护设备。
三、设备操作步骤
1. 将离心机连接到电源,并确保电源开关关闭。
2. 打开离心仓盖并检查离心机内部是否有残留物。
3. 根据需要选择合适的转速和离心计时。
4. 将待离心样品均匀分配于离心管中,确保管子盖子紧闭。
5. 将离心管放入离心机,确保管子放置位置正确。
6. 关闭离心仓盖,确保盖子安全锁定。
7. 打开电源开关,启动离心机。
8. 离心过程中,确保设备平稳运行,避免操作干扰离心机的稳定性。
9. 离心完成后,关闭电源开关,并等待离心机完全停止运行。
10. 打开离心仓盖,小心取出离心管。
四、注意事项
1. 根据样品特性和离心机规格选择合适的转速和离心计时。
2. 离心管上方应留有足够的空间,以避免离心时样品溢出。
3. 禁止超出离心机转速限制使用。
4. 在离心过程中,禁止停止或干扰离心机的旋转。
5. 确保离心管和离心机的外表面清洁,并定期进行维护保养。
五、故障排除
1. 若离心机在启动时没有转动,请检查电源连接和开关。
2. 若离心机在运行过程中发出异常声音或震动明显增加,请立即关
掌式离心机使用方法
掌式离心机使用方法
掌式离心机是一种小型的离心设备,通常用于实验室中分离液体混合物中的某些成分。它采用离心力将混合物中的不同组分分离开来,以便进行更深入的分析和研究。
以下是掌式离心机的使用方法:
1. 准备样品:将需要分离的样品放入离心管中,通常为1.5ml或2ml 的离心管。
2. 选择转速:根据实验需求选择合适的离心转速。通常离心机的速
度范围为1000-13000rpm。
3. 调整运行时间:设定离心机的运行时间,以便样品能够充分分离。
4. 启动离心机:将离心管放置在离心机中并关闭盖子,然后启动离
心机。
5. 停止离心机:离心时间到达设定时间后,离心机会自动停止。注
意不要在离心机运行时打开盖子。
6. 取出样品:小心地将离心管取出,避免扰动样品。分离后的组分
通常会分层,所以可以使用移液管或吸管将上层液体或沉淀取出。
需要注意的是,在使用掌式离心机时要遵循安全操作规程,否则可能会产生危险。例如,在启动离心机之前,应确保离心机中没有任何异物或损坏的部件。同时,应该避免超过离心机的最大转速和运行时间,以免造成设备损坏或爆炸等危险情况。
总之,掌式离心机是一种非常有用的实验室工具,可以快速、有效地分离样品中的不同成分,为后续的研究和分析提供有力的支持。
生物无菌实验室离心管使用SOP
离心管使用SOP
目的:保证离心管使用规范,保证实验过程离心管使用无菌
范围:离心管的使用
责任人:实验人员
1.使用前的处理
1.1 使用前用3级纯水泡一个小时。
1.2 将上述泡过的离心管用消毒锅在高压锅消毒,消毒完成后用烤
箱烤干。
2. 离心管使用标准操作
2.1取离心管
2.1.1将烤干的消毒锅在传递窗中用紫外灯消毒半个小时.
2.1.2将消毒锅打开,并使开口处在超净台的里面.
2.1.3打开消毒锅必须在超净台内进行.
2.1.4用镊子取出离心管.
2.1.5左手拿住离心管,右手沿逆时针方向将离心管盖子拧松.
2.1.6将离心管直立放置于试管架上,将盖子倒扣放置于超净台
内手不易碰触的地方.
2.1.7注意此过程手不能从离心管开口上方经过.
2.2封管离心
2.2.1当离心管内溶液加完,拇指于食指轻轻拿住盖子外壁边缘,
将盖子沿逆时针方向拧紧.
2.2.2将离心管对应放置相同型号的适配器内离心.
2.2.3离心完成后,轻轻将离心管从适配器中拿出,放置于试管架
上,置于超净台内操作.
2.2.4注意50ML离心管所装溶液不能超过其刻度线,更不能溢
出管口,一但溶液溢出管口, 离心管连带里面溶液必须都废弃.
2
3. 使用后处理
3.1使用过的离心管必须盖紧盖子,将其放置于医疗专用垃圾袋内
统一处理.
3.2离心管一经开盖,必须立即使用,否则废弃.
离心机使用方法
离心机使用方法
离心机是一种常见的实验室设备,广泛应用于生物化学、医药、环境监测等领域。它通过离心作用,将样品中的不同成分分离出来,是实验室中不可或缺的工具之一。下面将介绍离心机的使用方法,希望能对您有所帮助。
1. 准备工作。
在使用离心机之前,首先要做好准备工作。检查离心机是否处于正常工作状态,确认离心机的转子和样品管是否干净无异物。另外,要选择合适的离心管和转子,确保样品能够被均匀分离。在操作过程中,要佩戴好实验手套和护目镜,确保安全。
2. 样品加载。
将需要分离的样品放入离心管中,注意不要超过离心管的最大容量。为了保持
离心的平衡,如果只有一个样品管,需要在另一侧放置一个空管。如果有多个样品管,要确保它们的重量相近,以避免离心不平衡而导致的危险。
3. 设定参数。
根据样品的性质和需要分离的成分,设置离心机的转速和离心时间。一般来说,离心速度越高,分离效果越好,但也要根据样品的特点来确定最佳的离心参数。在设定参数之前,要仔细阅读离心机的说明书,了解各个按钮和显示屏的功能,确保设置正确。
4. 启动离心机。
确认参数设置无误后,关闭离心机的盖子,启动离心机。在启动过程中,要注
意观察离心机是否有异常声音或振动,如果有异常情况,应立即停止离心并检查原因。离心机在运转过程中,禁止打开盖子,以免发生意外。
5. 取出样品。
离心时间到达后,关闭离心机并等待离心机完全停止后再打开盖子。小心地取
出离心管,注意不要摇晃或颠倒离心管,以免混合分离后的成分。取出样品后,可以根据需要进行下一步的实验操作。
6. 清洁和维护。
离心仪和离心管使用方法及注意事项
离心仪和离心管使用方法及注意事项
一、离心仪的基本介绍
离心仪是一种常见的实验室仪器,用于快速旋转样品以分离和沉淀其中的组分。在生物学、化学、医学等领域,离心仪广泛应用于细胞、微生物、血液和化学物质的分离和制备工作。
二、离心仪的种类及选购指南
离心仪的种类多样,按速度划分可分为低速、高速和超高速离心机。选择离心仪时,需要考虑样品容量、最高速度、离心力、加速度和减速度等因素,并根据实验需求选择适合的离心仪型号。
2.1低速离心仪
低速离心仪适用于一般实验室工作,常规样品分离和匀浆。这类离心仪的最高转速一般在5000转/分钟以下。
2.2高速离心仪
高速离心仪适用于细胞破碎、核酸提取、蛋白质沉淀等工作,具有较高的离心力和转速,常用于常规离心仪无法满足的实验需求。
2.3超高速离心机
超高速离心机常用于制备纯化DN A、RN A等生物大分子,具有非常高的离心力和转速,适用于高效分离和富集特定组分。
三、离心管的类型及选择
离心管是用于装载样品的容器,根据实验需求,可选择普通离心管、P C R离心管、磁力离心管等不同类型。
3.1普通离心管
普通离心管是最常用的离心容器,适用于一般样品离心分离。
3.2P C R离心管
P C R离心管专门用于P CR反应的离心过程,能够耐受高温和化学试剂。
3.3磁力离心管
磁力离心管常用于磁珠分离,适用于磁性实验以及DN A、RN A等纯化
过程。
四、离心仪和离心管的使用方法
4.1操作前的准备工作
在使用离心仪和离心管之前,需要进行以下准备工作:
-检查离心仪的电源是否接通并正常工作。
-确保离心仪的转盘干净、无异物,并关闭离心仪的盖子。
离心机的使用方法
离心机的使用方法
一、概述
离心机是一种常见的实验室设备,主要用于分离混合物中的固体和液体。在科研、医药、生物等领域中都有广泛的应用。本文将介绍离心机的使用方法,包括准备工作、操作步骤、注意事项等。
二、准备工作
1.检查设备:在使用离心机之前,需要检查设备是否正常运转。检查电源线是否连接牢固,旋钮是否灵活等。
2.选择离心管:根据实验需要选择合适的离心管。一般来说,离心管材质分为玻璃和塑料两种,选择时要根据实验需要进行判断。
3.调整转速:根据实验需要调整转速。一般来说,低速转速适用于分离较轻的物质,高速转速适用于分离较重的物质。
4.平衡样品:将样品放入离心管中,并确保各个样品的重量相等,以保证样品在旋转过程中平衡。
三、操作步骤
1.打开盖子:打开离心机盖子,并将样品放入相应位置中。
2.关闭盖子:关闭盖子,并调整离心机的转速和时间。
3.启动离心机:按下启动按钮,离心机开始旋转。
4.等待分离:根据实验需要,等待一定时间让样品分离。在此期间,可以观察离心管中的样品状态。
5.停止离心机:当分离完成后,按下停止按钮,离心机停止旋转。
6.取出样品:打开盖子,取出分离后的样品,并进行后续处理。
四、注意事项
1.注意安全:在使用离心机时,要注意安全。不要将手伸入正在旋转的设备中,并确保设备稳定运行。
2.选择合适的转速和时间:根据实验需要选择合适的转速和时间。不要超过设备规定的最大容量和最大速度。
3.平衡样品:放置样品时要平衡,并确保各个样品重量相等。如果不平衡会导致设备震动和噪音增加。
4.清洁设备:使用完毕后及时清洁设备,并保持干燥。不要使用酸性或碱性溶液清洗设备,以免损坏设备表面。
超高速离心机使用说明书
超高速离心机使用说明书
1. 简介
超高速离心机是一种用于分离液体混合物中的固体和液体成分的高效技术设备。本使用说明书旨在向用户提供关于超高速离心机的详细介绍和正确操作指南。
2. 安全须知
在使用超高速离心机之前,请务必仔细阅读并理解以下安全须知:
2.1 确保离心机放置在平稳牢固的台面上,避免因震动或倾斜而引起意外;
2.2 在打开或关闭离心管盖之前,必须停止离心机的旋转;
2.3 使用合适的离心管和离心管盖,并确保保持清洁和完整;
2.4 严禁超出离心机额定容量范围;
2.5 细胞培养和感染性试样等具有潜在危险的样品必须在全封闭的安全试管中操作;
2.6 禁止酒精或其他易燃物质与离心机接触;
2.7 操作离心机时,应佩戴适当的防护眼镜、手套和实验室外套。
3. 离心机的组装与调整
3.1 将离心机插头正确插入电源插座;
3.2 按照用户手册的指示,将离心机转动部件组装好;
3.3 按照用户手册的指示,调整离心仪的速度和运行时间。
4. 示例实验操作步骤
以下是一般实验的操作步骤,您可以根据具体实验的要求进行调整:
4.1 将试样倒入离心管中,确保离心管盖紧闭;
4.2 将离心管放入离心机试样架中,注意安装位置的平衡和稳定;
4.3 关上离心机门并锁紧;
4.4 根据实验需要,设置离心机的转速和时间;
4.5 启动离心机,并确保其正常运行;
4.6 离心完成后,小心打开离心机门,取出离心管。
5. 维护与保养
5.1 在每次使用离心机后,请将离心机内外表面进行清洁,并确保
无残留物;
5.2 定期检查离心机的主要部件和配件是否完好;
超滤离心管使用方法和注意事项
超滤离心管使用方法和注意事项
使用方法:
1.预处理:新超滤管使用前需用纯水浸泡,冰箱预冷10分钟。然后将水倒出,置于冰上预冷2-5分钟,加样。旧超滤管倒出管内乙醇浸泡液,用纯水冲洗干净10遍,置于冰上预冷2-5分钟,加样。
2.加样:如超滤管中有少许残留水,可将超滤管内管倒置1000×g离心1分钟,移液枪移取适量样本加入超滤管中。
3.离心:配平,12000×g离心(15-30分钟),等达到目的转速后方可离开。
4.样本收集:外管滤液为除去部分蛋白的样本上清,如需取浓缩后样本用于其他实验,则另取外管,内管倒置,1000×g离心1-2分钟。
5.超滤管清洗:使用完的超滤管用纯水反复清洗5次,再用75%乙醇冲洗3次。
注意事项:
1.选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3。
2.新买来的超滤是干燥的,使用前需加入超纯水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。
3.注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。
离心机的使用方法及注意事项
离心机的使用方法及注意事项
离心机是一种在分离和分析化学或生物样品时使用的常见实验室设备。它可以根据样品的密度和分配,在不同的离心速度下分离样品中的不同成分。以下是使用离心机时需要注意的事项和步骤:
1. 离心机需要平放在实验室的平稳表面上,并保证安装稳定。
2. 样品需按照离心机的容量和离心机的最大负荷装入离心管中,注意离心管盖应完全盖紧以避免液体外溢。
3. 将填充离心管的样品在离心计划表中按照相应的转速和转速时间进行离心。在离心开始之前请务必检查离心盘和离心杯是否配对并且已经平衡。
4. 离心计划结束后,离心管应慢慢取出。离心管内的物质要保持离心管的竖直位置捞出,避免倒放。
5. 离心完毕后,离心盘和离心杯需要彻底清洗和消毒,以避免样品的交叉污染。
6. 在使用离心机的操作中,需要注意轻触轻按按钮,并严格遵守实验室安全规程,避免使用不当或导致意外损伤。
7. 不要在离心机中离心含有易燃物质或腐蚀物质的样品。
8. 离心机样品的离心过程应仔细观察,若发现任何异常情况,应立即停止离心并检查原因。
总之,当使用离心机时,需要注意安全操作和正确使用方法,以确保实验过程的良性进行,保证实验结果的准确性和可靠性。
离心机的使用步骤
离心机的使用步骤
离心机是一种常用的实验设备,广泛应用于化学、生物、医药等领域。正确的使用离心机可以保证实验的准确性和可重复性,提高实验效率。下面将介绍离心机的使用步骤。
1.准备工作
在使用离心机之前,首先需要进行一些准备工作。确保离心机台面平稳,没有杂物。检查离心机的电源是否连接正常,并调整好转速控制旋钮。
2.选择离心管和样品
根据实验需求,选择合适的离心管和样品。离心管应具备耐高速离心的性能,有无泄漏等缺陷。样品应注意遵守安全操作规范,并根据实验要求选择适量的样品。
3.装填样品
将选择好的离心管打开,将样品小心装填进离心管中。注意避免样品溢出或液体接触到离心管的螺旋盖。确保离心管的盖子紧密并牢固。
4.平衡离心载体
平衡离心载体是为了保证离心过程中转动平衡,防止离心机出现晃动或振动造成事故。将装有样品的离心管放在离心载体上,确保各个位置的离心管质量均衡分布。
5.放置进离心机
将平衡好的离心载体放置进离心机的转盘中,注意对位。关闭离心机的盖子,并锁好。
6.选择转速和时间
根据实验要求,选择合适的离心转速和离心时间。确保转速不超过离心管和离心机的安全使用范围。
7.启动离心机
启动离心机,根据实验要求设定好转速和离心时间,并按下启动按钮。在离心机运行期间,不要随意打开离心机的盖子或干扰离心机的转动。
8.离心结束
离心时间到达后,将离心机停止运行,并等待离心机完全停下来后再打开离心机的盖子。
9.取出样品
打开离心机的盖子,小心取出离心管,注意避免离心管和盖子接触到其他物体或表面。
10.处理样品废弃物
根据实验室的规定和要求,安全处理样品废弃物。可以选择将离心管等材料进行消毒处理或分类投放。
离心管的使用
红帽: 薄壁UC和PA管 扭矩扳手拧紧
蓝帽:厚壁PA和PC管 扭矩扳手拧紧
无色帽:六角起子手动拧紧
开口管的使用(适用于定角和水平转头)
检查管帽的各个组分 定期在stem的螺纹上涂润滑油,确保O圈和垫圈干燥,且无润滑 油 可在离心管内加1/2或3/4的离心样品,(一些小尺寸的离心管使 用的金属盖没有加样孔,包括:303624、303658、303113和 305022,须在盖帽前加满样品) 将Stem, O-ring/Gasket, Crown, Crown Washer (如果有), 和nut松散 地组装起来,对于钛合金的帽子,轻轻转动Crown以确保它准确 地放在Stem上 金属盖盖到离心管上,轻轻转动金属盖,使离心管壁卡在Oring/Gasket和Crown之间,离心管口的上缘贴住Crown向下的一 面,用手拧紧Nut 将离心管放到相应尺寸的vise上,一手拿离心管,另一手拧紧旋 钮,确保管帽和离心管水平 拧紧螺帽(相应的工具和扭力) 用注射器,通过小孔加满样品管,最后用小螺丝密封住小孔 (301875), 薄壁管:尽可能加满;厚壁管:与离心管口的距离小于13mm
离心结束后,先取出3-4ml 样品 离心管插入至vise中(fig.4) 使用扭矩扳手移去nut和crown 将assembler旋至stem中 松开vise,移出stem(fig.5)
使用离心机平衡的操作步骤
使用离心机平衡的操作步骤
离心机是一种常用的实验设备,其主要作用是通过旋转的离心力来分离混合物中的不同成分。在进行离心机平衡时,需要注意以下几个步骤:
1. 准备工作
确保离心机的工作台面平整稳固,并检查离心机的转子是否干净无异物。同时,检查离心机的电源是否正常运行,确保离心机的安全使用。
2. 样品处理
将待离心的样品放入离心管中,并确保样品均匀分布在离心管中。若样品过少,可以使用一些平衡材料(如氯化钠溶液)来使样品重量达到离心机的要求。注意,离心管应该尽量保持平衡,不要让样品集中在离心管的一侧。
3. 定位离心管
将离心管放入离心机的转子槽中,并注意离心管的位置和方向。确保离心管与转子的密合度良好,避免在离心过程中出现离心管脱落或破裂的情况。
4. 调整离心机参数
根据实验需要,设置离心机的转速和离心时间。转速的选择应根据
样品的性质和离心机的规格来确定,一般来说,低速离心适合分离大分子量的样品,而高速离心适合分离小分子量的样品。离心时间的选择应根据离心机的转速和样品的特性来确定,一般来说,离心时间越长,分离效果越好。
5. 启动离心机
在调整好离心机参数后,启动离心机,并确保离心机的运行平稳。在启动离心机后,不要打开离心机的盖子或干扰离心过程。
6. 等待离心完成
在离心过程中,耐心等待离心机达到设定的时间或速度,不要提前停止离心机。同时,应注意观察离心管内的样品是否均匀分离,并确保离心管没有发生破裂或溢出的情况。
7. 停止离心机
离心机结束后,将离心机停止运行,并等待离心机完全停止后再打开离心机的盖子。谨慎取出离心管,避免样品的交叉污染。
离心机的使用步骤和注意事项
离心机的使用步骤和注意事项
一、离心机的使用步骤:
1、离心前用天平保证离心管的平衡。
2、打开电源歼关,离心机自检后,开启盖门。
3、选择所需转头,用扳手安装转头,松紧适当。
4、装载离心管后,拧好转头盖,按下离心机门盖。
5、设定好转速、时间和温度后,按下启动按钮开始离心。
6、离心结束后,开启门盖,拧开转头盖。
7、取出离心管后,卸下转头,关闭电源开关。
8、在离心机内仓恢复室温后,擦干内壁
二、离心机使用注意事项:
1、离心机应始终处于水平位置,外接电源系统的电压要匹配并要求有良好的接地线。
2、开机前应检查机腔有无异物掉入。
3、样品应预先平衡使用离心机微量离心时,离心套管与样品应同时平衡。
4、挥发性或腐蚀性液体离心时,应使用带盖的离心管,并确保液体不外漏以免侵蚀机腔或造成事故。
5、每次操作完毕,应做好使用情况记录,应定期对机器各项性能进行检修。
6、离心过程中若发现异常现象,应立即关闭电源,报请有关技术人员检修。
7、定期清洁机腔。
8、使用离心机时遵守左右手分开原则,只以右手操作仪器。
9、使用冷冻离心机时,除注意以上各项外,还应注意擦拭机腔的动作要轻柔,以免损坏机腔内温度敏感器。
离心超滤管的使用方法
超滤管使用方法和注意事项
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra—15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管.
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡.质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直).在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管.若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
离心超滤管的使用方法
超滤管使用方法和注意事项
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon—Ultra-15超滤管(MWCO10kD).也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用.
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度).膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止.
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开口管的使用(适用于定角和水平转头)
钛合金帽:Type 90Ti、Type 70.1 Type 70(crow: 肽、stem: 铝)扭矩扳手拧紧 铝合金帽:
密封方法
A
Seal former放 于离心管口
Seal guide放到Seal former 上,光面朝下
热封器于USE位置,按压3-5秒 10秒左右,直至离心管肩部
移走热封器,吸热棒小 秒
移走吸热棒、 Seal
后,垂直放于seal former上,按压 的一端放于Seal former 2-3 guide和Seal former
PA 水平,定角,垂直和近垂 直
PC 定角
离心管/瓶在各种转头中的应用
快封管的使用
所需工具
取快封管上方的适配器(Floating Spacer )的工具 取锥底快封管底部的适配器 (Adapter)的工具
注意: 加热器充电需电压转换器
样品加至离心管颈底部,形成的气泡尽量小(小于3mm)
确认离心管颈部无液体,密封快封管
旋出assembler
将crown、washer、螺帽组装,手动拧紧 扭矩扳手拧紧螺帽(11N.m/100in.-lb),不能大于该力 确认离心管与crow的接触面持平 注射器通过加样孔装满离心管并密封加样孔 离心管推入转头中,离心管帽与转头表面O圈地距 离至少8mm
Thin-wall tube with crimp-lock cap (Type 70Ti)
红帽: 薄壁UC和PA管 扭矩扳手拧紧
蓝帽:厚壁PA和PC管 扭矩扳手拧紧
无色帽:六角起子手动拧紧
开口管的使用(适用于定角和水平转头)
检查管帽的各个组分 定期在stem的螺纹上涂润滑油,确保O圈和垫圈干燥,且无润滑 油 可在离心管内加1/2或3/4的离心样品,(一些小尺寸的离心管使 用的金属盖没有加样孔,包括:303624、303658、303113和 305022,须在盖帽前加满样品) 将Stem, O-ring/Gasket, Crown, Crown Washer (如果有), 和nut松散 地组装起来,对于钛合金的帽子,轻轻转动Crown以确保它准确 地放在Stem上 金属盖盖到离心管上,轻轻转动金属盖,使离心管壁卡在Oring/Gasket和Crown之间,离心管口的上缘贴住Crown向下的一 面,用手拧紧Nut 将离心管放到相应尺寸的vise上,一手拿离心管,另一手拧紧旋 钮,确保管帽和离心管水平 拧紧螺帽(相应的工具和扭力) 用注射器,通过小孔加满样品管,最后用小螺丝密封住小孔 (301875), 薄壁管:尽可能加满;厚壁管:与离心管口的距离小于13mm
化学耐受性
PA:半透明材质,能耐部分酸碱和有机溶剂,可以121℃
高压消毒。
PC:透明、耐用、硬度好;不耐碱、酒精及其他有机溶
剂;高压灭菌会降低寿命。
UC:超净,可耐弱酸及一些弱碱,但不耐DMSO及大部 分有机溶剂;不可高压灭菌,不耐油
PP:半透明材质,多用于高速离心机;对许多酸、碱及
酒精有很好的耐受性
提取样品
离心结束后,离心管从转头孔内取出,放 于专用管架上 在管架上插入管架插条(Rack Insert); 用取塞子的工具(Extraction Tool)把塞子一一取出; 按要求取出离心管内样品。
离心瓶的使用
常用工具
取(PC瓶)塑料盖的工具
取(PC瓶)铝合金盖的工具
离心瓶的使用
Baidu Nhomakorabea
平衡样品
离心结束后,先取出3-4ml 样品 离心管插入至vise中(fig.4) 使用扭矩扳手移去nut和crown 将assembler旋至stem中 松开vise,移出stem(fig.5)
超速离心机离心管的使用
类型
开口管 快封管 指封管 离心瓶
薄壁
厚壁
材质
PA (Polyallomer): 聚丙烯和聚乙烯的混合物
PC (Polycarbonate ): 聚碳酸酯 UC (Ultra-Clear ): 超净 PP (Polypropylene ): 聚丙烯
常见问题
消毒方法(高压灭菌、UV、70%酒精等)? 重复利用?
指封管的使用(Optiseal tubes)
离心管置于指封管架上
插入塞子(含密封圈),密封离心管 将塑料桩置于离心管口上方,两端的凸起对准凹口插入 垂直按压塑料桩,塞子垂直置于离心管口,取走塑料桩 检查所有的塞子已密封住离心管 将离心管对称放入转头孔内,并使用相应的适配器
指封管的使用(Optiseal tubes)
B
移走热封器,吸热棒大 的一端放于Seal former 2-3
轻轻挤离心管,检查是否有漏液
秒
离心管对称放于转头孔内,并使用相应的适配器 离心完毕后可剪去离心管头取样或穿刺取样
指封管的使用(Optiseal tubes)
常用工具
注意: 样品加至离心管颈底部,形成的气泡尽量小 确保指封管颈部无液体
指封管移出工具
各种材料的离心管及其特性
化学耐受性
离心管类型及材质
开口管
快封管
指封管 圆顶(dome-top),钟形 顶(bell-top)
离心瓶
类型 材质 适用转头
高离心力(g-max),锥 薄壁(Thinwall) 、 形(Conical),圆顶 厚壁(Thickwall) 、 (dome-top),钟形顶 锥形(Conial) (bell-top) PA、UC、PC 水平和定角 PA、UC 水平,定角,垂直和近垂 直
开口管帽工具及扭力
Thin-wall tube with crimp-lock cap (Type 70Ti)
离心管顶端BECKMAN LOGO 一次性使用
Thin-wall tube with crimp-lock cap (Type 70Ti)
将stem旋至工具assembler中 离心管推入stem直至assembler 将离心管插入vise中,离心管在下方,assembler在 上方,并拧紧旋钮