生化实验设计
蛋白质的提取与分离纯化——生化实验设计讲解课件
声波法
⑶化学及生物化学方法
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玻璃匀浆机
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b、细胞器的分离
细胞器的分离一般采用差速离心法。细 胞经过破碎后，在适当介质中进行差速 离心。
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三、蛋白质粗提取
从破碎材料或细胞器提出的蛋白质是不纯的， 需进一步纯化。纯化包括将蛋白质与非蛋白质 分开，将各种不同的蛋白质分开。选择提取条 件时，就要考虑尽量除去非蛋白质。一般总是 有其它物质伴随混入提取液中。但有些杂质 （如脂肪）以事先除去为宜。先除去便于以后 操作。常用有机溶剂提取除去。
间被一个长而富有弹性的螺旋结构相连,每个末端
有两个Ca2+ 结构域,每个结构域可以结合一个Ca2+ ,
这样,一个钙调蛋白可以结合4个Ca2+ ,钙调蛋白与
Ca2+ 结合后的构型相当稳定 。
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值得注意的是，在洗脱时，会有少许配基与蛋白 质一同被洗脱下来，因此常在其后加一凝胶层析 以除去小分子的配基。
巯基化合物均有干扰作用。此外，不同蛋白质因酪氨酸、 色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。
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结束语
若有不当之处，请指正，谢谢！
五、分析鉴定
A、定性分析
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）测定蛋白质分子量：是在聚 丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基磺酸钠）， SDS能断裂 分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂 能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还 原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的 SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质 丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子 团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异， 由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳·时， 蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。
生物化学实训教案
天津开发区职业技术学院2007 ——2008 学年度第一学期
教案
（实践课）
工学院生物技术系（部）生物专业06年级
课程生物化学实验
班级生物061~2
姓名张冲
实践课教案首页
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开发区职业技术学院
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实验设计：卵清蛋白
实验注意事项
1 2 3
蛋白质浓度过大，盐析时发生共沉，分离效果不好。 • 蛋白质浓度太稀，耗盐量过大，蛋白质回收率较低。一 般蛋白质浓度在2.5%～3.0%较适中。
蛋白质提取过程中须注意温度的控制，一般在20℃ 以下进行
调节等电点一定要准确，在本实验中，球蛋白和卵 清蛋白的等电点相差较小，若不准确，会导致蛋白 质不纯。
9 提取液
1.0 3.0
0 4.0 0
0.5 3.5 0.125
1.0 3.0 0.25
1.5 2.5 0.375
2.0 2.0 0.50
2.5 1.5 0.625
3.0 1.0 0.75
4.0 0 1.0
实验步骤
（二）蛋白提取液中蛋白质含量测定 1、提取液分别稀释1倍、10倍、20倍后，取待测蛋白质 溶液1ml，加入蒸馏水3ml，摇匀，按上述方法在280nm 波长处测定光吸收值，并从标准曲线上查出经稀释的待测 蛋白质的浓度。 排除干扰：将待测蛋白质溶液适当稀释，在波长260nm 和280nm处分别测出A值，然后利用280nm及260nm下的 吸收差求出蛋白质浓度。 2.计算：蛋白质浓度（mg/ml）=1.45A280-0.74A260 （式中A280和A260分别是该溶液在280nm和260nm波长下 测得的光吸收值）
.
弃上清液
实验步骤
二.卵清蛋白活性测定：
（一）紫外吸收法测定卵清蛋白的含量 1、标准曲线法 （1）标准曲线的绘制 按下表分别向每支试管加入各种试剂，摇匀。在280nm波长处分别测定各 管溶液的A280值。以A280值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
试管号 试剂 标准蛋白溶液 /mL 蒸馏水/mL 蛋白质浓度 /mg/mL A280 1 2 3 4 5 6 7 8
生化实验技术综合设计性大实验
7.干燥离子互换剂应怎样进行处理？何谓 离子互换剂转型？
8.动植物总DNA或RNA提取旳措施主要有哪 些？以猪脾脏DNA提取为例试述每环节主 要原理是什么？怎样判断所提取DNA旳纯 度？
9.蛋白质浓度测定措施有哪些？怎样鉴定 所提取蛋白旳纯度？未知蛋白质分子量 从鸽肝中提取乙酰化酶，需将 动物饥饿后取材，可降低肝糖原，以 简化纯化环节。
7．对生物技术产品宿主菌或细胞旳要求
选择生物技术产品旳宿主受体菌或细 胞也应考虑到后处理旳问题。如用大肠杆 菌体现，因为其不能将所体现旳蛋白质分 泌到体外，故提取时必须破壁，增长了提 取旳困难，而且还可能具有毒素类有害因 子；
3.表面活性剂处理法
表面活性剂旳分子中，兼有亲脂 性和亲水性基团，能降低水旳界面张 力，具有乳化、分散、增溶作用。较 常用旳有十二烷基硫酸钠(SDS)、氯 化十二烷基吡啶、去氧胆酸钠等。
生化物质旳提取
利用一种溶剂对不同物质溶解度旳差别， 从混合物中分离出一种或几种组分旳过程 称为提取（extraction），提取又称萃取 或抽提，其含义基本相同。用冷溶剂从固 体态物质提取旳过程可称为浸渍 （maceration）；用热溶剂者可称为浸提 （digestion），也称浸煮
思索题（课前设疑）
1.怎样保持生化物质旳生物活性？一般生化物 质在碱性条件下轻易变性，还是在酸性条件 下轻易变性？
2.一般从天然生物材料制作生化物质旳过程大 致可分为几种阶段？
3.在制备生化物质前应怎样选择原料？
4.什么叫动态吸附和静态吸附？它们在应用 上有何区别？
5.对酸性物质旳提取，常在什么条件下进行？ 对碱性物质旳提取，常在什么条件下进行？ 对两性物质旳提取，常在什么条件下进行？
生化综合实验报告--测定蛋白质含量的三种方法及其比较
①容量瓶②试管及试管架
③恒温水浴槽④吸量管
⑤分光光度计⑥电热套
⑦锥形瓶⑧比色皿
(3)紫外吸收法
试剂:
样品蛋白溶液:准确称样品蛋白质,配制成一定浓度的溶液。
器材:
①紫外分光光度计②容量瓶
③试管、试管架④吸量管
⑤锥形瓶⑥比色皿
4．实验方法步骤及注意事项
双缩脲法
标准曲线的绘制:
取12支试管分成两组，按下表平行操作，绘制标准曲线。
实验远没有我想象的那样简单，要想做好一个实验，容不得半点马虎。综合实验正是这培养了我们的耐心、恒心和信心，让我们的思维和创造力得到了大幅度的提高，让我们的科学素养有了很大的飞越。真真正正变学生的被动学习为主动学习，激发了我们的学习热情，不管实验成功或是失败，我们都能从中获得很多从其它地方得不到的知识，让我们获益匪浅！
若样品中含有大量吸收紫外线的物质，会出现较大的干扰。
5.实验数据处理方法
双缩脲法
试
剂
0
1
2
3
4
5
样品1
样品2
O．D540
0
0.021
0.052
0.160
0.316
0.345
0.08
0.029
标准蛋白质浓度(mg/ml）
0
1
2
3
4
5
X
Y
考马斯亮蓝染色法
试
剂
0
1
2
3
4
5
样品1
样品2
蛋白质浓度（ug/ml）
样品测定:
①制备样品的蛋白质提取液。
②取出两份1.0 ml样品液。操作同标准曲线，测定样品的OD值，平行两份
计算:
2022简单生物实验设计方案
2、增殖培育(又称丰富培育)
增殖培育就是在所采集的土壤等含菌样品中加入某些物质，并创建一些有利于待分别微生物生长的其他条件，使能分解利用这类物质的微生物大量繁殖，从而便于我们从其中分别到这类微生物。因此，增殖培育事实上是选择性培育基的一种实际应用。
3、纯种分别
在生产实践中，一般都应用纯种微生物进行生产。通过上述的增殖培育只能说我们要分别的微生物从数量上的劣势转变为优势，从而提高了筛选的效率，但是要得到纯种微生物就必需进行纯种分别。
改进：染色时不用吸水纸吸水，而是将玻片倾斜10度左右，这个角度肯定不能太大，太大水就会流出盖玻片下的小空间，然后从较高一侧的盖玻片与载玻片的缝隙往里滴碘液，让碘液自己流进盖玻片下，假如有液体流到盖玻片外，用吸水纸擦拭，但肯定要强调不能从盖玻片边缘吸水，盖玻片四周肯定要有充盈的液体，这样才不会出现大气泡。
⑵盖盖玻片
盖用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的水滴，然后缓缓地放下，盖在要视察的材料上
⑶染色
染：将玻片倾斜10度左右，从高的一侧滴入碘液，让其自己流入玻片。问题：染色时书中要求是把1-2滴碘液滴在盖玻片的一侧，然后用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染液浸润标本的全部。然而，部分同学可能将盖玻片下全部水全部吸干，做出的装片会有许多的大气泡，且气泡将细胞掩盖了，或者有人将气泡误认为细胞。
三、试验方法及步骤：
(一)试验材料：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、吸水纸、解剖针、毛笔、滴管、擦镜纸;清水、碘酒溶液;西红柿、空心莲子草、洋葱;创可贴(切片时可能会有人受伤)
生化实验 设计试验--PAGE
tetramethyl ethylene diamine, 简称TEMED)的
作用下,聚合交联而成的三维网状结构的凝胶。
Exit 生命科学学院
实验原理
设计试验
聚丙烯酰胺凝胶电泳按其有无浓缩效应分为连
生 续及不连续系统，在连续系统中凝胶总浓度、缓 物 冲液PH均相同，带电颗粒在电场作用下主要靠电 化 荷及分子筛效应得以分离；在不连续系统中缓冲 学 液离子成分、PH、凝胶总浓度及电位梯度均不连 实 续，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应和分 验 子筛效应，还具有浓缩效应，可使稀的样品在电
生
生物化学实验
物 化
设计试验
学 实
主讲：刘连芬
验
聊城生命科学学院
E-Mail：liulianfen@
生命科学学院பைடு நூலகம்
设计试验
相关知识背景
聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel
生 electropHoresis, PAGE）是以聚丙烯酰胺为支 物 持介质的电泳。聚丙烯酰胺是由单体丙烯酰胺
物 1.准确称取新鲜材料3g，加入9ml 提取缓冲液
Exit 生命科学学院
设计试验
生 物 化 学 实 验
Exit 生命科学学院
设计试验
试剂
1、1mol/L盐酸48.0 mL Tris 36.6g TEMED 0.24 mL
生
物
2、Acr 28.0g
Bis 0.753g
化 3、过硫酸铵 0.14- 0.3g
学
4、1mol/L盐酸48 mL Tris 5.98g TEMED 0.48 mL
化 （acrylamide. Acr）和交联剂N, N’-甲叉双丙烯
生化技术实验指导
实验一 DNS（3,5-二硝基水杨酸）比色法测定还原糖一、实验目的掌握还原糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；精密pH试纸。
2．主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11（2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3．试剂（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂四、操作步骤1．制作葡萄糖标准曲线取7支20mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
实验设计方案范文(精选5篇)
实验设计方案范文（精选5篇）实验设计方案1一、实验原理(1)鉴定实验设计的理念：某些化学试剂+ 生物组织中有关有机化合产生特定的颜色反应。
(2)具体原理：①可溶性还原糖+ 斐林试剂→砖红色沉淀。
②脂肪小颗粒+ 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒。
③蛋白质+ 双缩脲试剂→紫色反应。
二、目标要求初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
三、重点、难点1.重点①初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
②通过实验的操作和设计培养学生的动手能力，掌握探索实验设计技巧，从而培养创新思维能力。
2.难点根据此实验方法、原理，设计实验来鉴定常见食物的成分。
四、实验材料1.可溶性还原糖的鉴定实验：选择含糖量较高、颜色为白色或近白色的植物组织，以苹果、梨为最好。
2.脂肪的鉴定实验：选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好(实验前浸泡3h～4h)。
3.蛋白质的鉴定实验：可用浸泡1d～2d的黄豆种子(或用豆浆、或用鸡蛋蛋白)。
五、仪器、试剂1.仪器：剪刀，解剖刀，双面刀片，试管，试管架，试管夹，大小烧杯，小量筒，滴管，玻璃漏斗，水浴锅，研钵，石英砂，纱布，载玻片，盖玻片，毛笔，吸水纸，显微镜。
2.试剂：①斐林试剂(0.1g/L的NaOH溶液+ 0.05g/mL的CuSO4溶液);②苏丹Ⅲ染液;③双缩脲试剂;④ 体积分数为50%的酒精溶液;⑤蒸馏水。
六、方法步骤1.制备试剂。
2.可溶性还原糖的鉴定、方法、步骤。
3.脂肪的鉴定、方法、步骤。
4.蛋白质的鉴定、方法、步骤。
七、实验过程新课引入：我们在化学中学习过物质的鉴定，其原理是被鉴定的物质与所用的化学试剂要么发生颜色反应，要么产生沉淀，我们生物学上也采用此原理，在生物学中物质鉴定的理念是：某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。
新课教学：(具体原理)①可溶性还原糖+ 斐林试剂→砖红色沉淀。
(水浴加热)②脂肪小颗粒+ 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒。
最新生物化学设计性实验报告
最新生物化学设计性实验报告实验目的：本实验旨在通过设计性实验，探究特定生物化学过程的机制和特点，验证理论假设，并培养学生的科研能力和实验技能。
实验背景：生物化学是研究生物体化学组成、化学变化及这些变化与生物体功能之间关系的科学。
设计性实验是生物化学教学和研究中的重要组成部分，它能够帮助学生更好地理解生物化学的基本概念，并通过实践活动加深对知识的掌握。
实验材料：1. 酶类样品2. 底物溶液3. 缓冲液4. 酶活性测定试剂盒5. 分光光度计6. 离心机7. 微量移液器8. 试管和比色皿9. 冰浴和恒温水浴实验方法：1. 预实验：首先对酶样品进行纯化，并通过酶活性测定初步了解其活性范围。
2. 实验设计：根据预实验结果，设计一系列实验，包括不同pH值、温度、底物浓度对酶活性的影响。
3. 实验操作：a. 准备一系列不同pH值的缓冲液，并调整酶样品和底物溶液至相应pH值。
b. 在不同温度下（如25℃、37℃、50℃）测定酶活性，记录数据。
c. 改变底物浓度，观察米氏常数（Km）和最大速率（Vmax）的变化。
4. 数据分析：利用图表和统计学方法分析实验数据，得出酶活性与实验条件之间的关系。
实验结果：1. pH值对酶活性的影响图显示，酶活性在特定pH值下达到最大，而在过高或过低的pH值下活性显著降低。
2. 温度对酶活性的影响图表明，酶活性随温度升高而增加，但在接近50℃时急剧下降，表明酶可能发生变性。
3. 底物浓度实验结果显示，当底物浓度增加到一定程度后，酶活性趋于平稳，计算得到的Km值与文献值相近。
讨论与结论：通过本实验，我们验证了酶活性受pH值、温度和底物浓度的影响。
实验结果与理论预期相符，表明设计性实验是理解和掌握生物化学原理的有效手段。
同时，实验过程中可能出现的误差和问题也为我们提供了宝贵的学习和改进机会。
生化实验的设计实验报告
一、实验目的1. 掌握从生物组织中提取DNA的基本原理和方法。
2. 学习使用酚-氯仿法进行DNA的粗提取和纯化。
3. 熟悉DNA的鉴定方法。
二、实验原理DNA是生物体内的重要遗传物质，具有独特的碱基序列。
在提取过程中，利用DNA与蛋白质、RNA等物质的溶解性差异，通过适当的化学试剂和操作步骤，将DNA从细胞中分离出来。
三、实验材料与仪器1. 材料：鸡血、无菌生理盐水、无水乙醇、氯化钠、酚-氯仿、NaCl溶液、DNA标准样品等。
2. 仪器：离心机、玻璃棒、量筒、烧杯、滴管、吸管、移液器、酒精灯、显微镜等。
四、实验步骤1. 鸡血采集：取鸡血2ml，加入10ml无菌生理盐水，充分混匀。
2. 细胞裂解：取2ml鸡血混合液，加入等体积的酚-氯仿，充分混匀后静置5分钟。
3. DNA沉淀：取上述混合液，加入2.5倍体积的无水乙醇，充分混匀后静置10分钟。
4. DNA纯化：将上述混合液转移到离心管中，离心5分钟（8000r/min），弃去上清液。
5. DNA溶解：将沉淀用50μl NaCl溶液溶解，混匀。
6. DNA鉴定：取少量溶解后的DNA溶液，加入2μl DNA标准样品，观察颜色变化。
五、实验结果1. 在实验过程中，观察到鸡血混合液与酚-氯仿混合后分层，上层为红色，下层为无色。
2. 在DNA沉淀过程中，观察到白色沉淀形成。
3. 在DNA溶解过程中，观察到溶液颜色由白色变为无色。
4. 在DNA鉴定过程中，观察到溶液颜色与DNA标准样品颜色相似。
六、实验结论1. 成功从鸡血中提取了DNA。
2. 酚-氯仿法是提取DNA的有效方法。
3. DNA在生物组织中的提取具有实际应用价值。
七、实验讨论1. 实验过程中，酚-氯仿的加入有助于细胞裂解和DNA的提取。
2. 无水乙醇的加入有助于DNA的沉淀。
3. NaCl溶液的加入有助于DNA的溶解。
4. 实验过程中，注意操作规范，避免污染。
5. DNA提取过程中，温度、pH值等条件对实验结果有影响。
生化系统综合实验报告
生化系统综合实验报告1. 引言生化系统是一个复杂的系统，由多个生化反应和生物分子组成。
了解和研究生化系统对于理解生物体的功能和疾病发生机制具有重要意义。
本实验旨在通过实验操作和数据分析，加深对生化系统的认识和理解。
2. 实验目的1. 掌握生化实验操作技能；2. 了解常用的生化实验仪器和试剂的使用方法；3. 学习采集和处理实验数据；4. 加深对生化反应和生物分子的理解。
3. 实验材料与方法3.1 材料- 实验仪器：分光光度计、离心机、PCR仪、电泳仪；- 实验试剂：DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、琼脂糖、DNA分子量标记物。
3.2 方法1. DNA提取：从植物叶片样品中提取DNA，按照DNA提取试剂盒的说明书进行操作；2. PCR扩增：通过PCR扩增特定基因片段，使用PCR试剂盒和PCR仪进行反应，优化PCR反应条件，包括温度和时间；3. 准备琼脂糖凝胶：按照说明书将琼脂糖溶解于TAE缓冲液中，并将其倒入电泳仪模型中固化；4. 准备DNA样品：将PCR扩增产物与DNA分子量标记物混合，加载到琼脂糖凝胶槽中；5. DNA电泳：将琼脂糖凝胶放入电泳仪中，设定合适的电流和时间进行电泳，观察DNA迁移结果。
4. 实验结果与讨论在本实验中，我们成功提取了植物叶片样品的DNA，并通过PCR扩增得到了特定基因片段。
下图展示了PCR电泳结果：通过结果观察，我们发现所有样品都成功扩增出了目标基因片段，并且具有相似的大小。
这说明我们的PCR反应条件是合适的，并且得到了高质量的PCR产物。
通过DNA电泳结果，我们可以看到样品之间的DNA迁移距离存在差异。
这是因为DNA分子的大小不同，在电场力下会以不同的速度迁移。
另外，我们还看到了DNA分子量标记物，在琼脂糖凝胶上形成了明显的条带。
通过与标准品的比较，我们可以估计出PCR产物的大小。
5. 结论通过本实验，我们成功地进行了DNA提取、PCR扩增和DNA电泳等生化实验操作。
生化实验 设计试验--PAGE
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设计试验
实验原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳按其有无浓缩效应分为连 续及不连续系统，在连续系统中凝胶总浓度、缓 冲液PH均相同，带电颗粒在电场作用下主要靠电 荷及分子筛效应得以分离；在不连续系统中缓冲 液离子成分、PH、凝胶总浓度及电位梯度均不连 续，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应和分 子筛效应，还具有浓缩效应，可使稀的样品在电 泳中浓缩成层，因而具有良好的清晰度和分辨率。 按器材来分主要有垂直的圆盘电泳和板状电泳。 下面就三种物理效应的原理分别加以说明：
Exit Exit
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设计试验
二、聚丙烯酰胺凝胶电泳----垂直板 1.装胶槽： （1）配1%的琼脂糖：用电子天平准确称取5g琼脂糖，加水 500ml,然后在电炉上加热至微沸，并不断搅拌，溶液由浑浊 变为透明即可。 （2）取两块电泳玻板（其中一块有凹槽），用铬酸洗净， 再用自来水冲洗2-3次，最后用蒸馏水冲洗干净，放于相应的 支架上直立干燥。（洗净的玻板内面要避免手指触摸，以防 沾污） （3）将带有凹槽的玻璃放在凝胶模高一点的孔中，另一平 板放于凝胶模有底槽的一边. （4）将已插好玻板的凝胶模夹到贮槽中（使略低的玻板一 侧靠近负极），然后双手以对角线的方式旋紧螺丝帽. （5）倾斜电泳槽，用滴管吸取少量的1% 琼脂糖溶液，封好 凝胶模板底边和侧边 Exit
3、过硫酸铵 5、Acr 10.0g 6、蔗糖 40.0g
4、1mol/L盐酸48 mL Tris 5.98g TEMED 0.48 mL
7、电极缓冲液Tris 6.0克；甘氨酸 28.8克；加水到1L 用时稀释10倍
Exit
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设计试验
实验步骤
生 物 化 学 实 验
一、样品的提取 二、PAGE电泳 三.结果分析
生化技术实验指导书(20学时)
生化技术实验指导书湖北工业大学生物工程学院二0一0年三月修订实验一酵母RNA的提取及其组分的鉴定一、实验目的1.了解稀碱法提取RNA及提取物组分鉴定的基本原理；2. 掌握稀碱法提取RNA及提取物组分鉴定的具体操作方法。
二、实验原理酵母中RNA的含量比较丰富（2.67%~10%），而DNA的含量相对地较少（据资料报道，酵母DNA的含量低于RNA的20%），因此从酵母中提取RNA比较方便。
RNA溶于碱性溶液，碱性溶液使蛋白质带负电荷，促进RNA(带负电荷)与蛋白质的分离，碱性溶液可使酵母细胞壁变性，同时进行加热，可增加细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
因此，酵母粉用稀碱液加热抽提时，可将其中的RNA抽提出来。
当碱性抽提液中和后，加入2倍体积的95%乙醇时，可以使抽提物沉淀出来。
抽提物的主要成分是RNA的钠盐，并带有少量的蛋白质。
用碱抽提时，RNA会有不同程度的降解。
地衣酚（3，5-二羟基甲苯）是比较灵敏的测定戊糖的试剂，常用于测定RNA。
核糖与地衣酚试剂反应呈现鲜绿色。
地衣酚试剂反应灵敏，也易被其他物质干扰。
DNA中的脱氧核糖也可与地衣酚反应，因此，单靠地衣酚显色实验不能作为RNA 与DNA鉴别依据。
二苯胺试剂是常用于测定DNA中脱氧核糖的试剂，脱氧核糖与二苯胺试剂反应产生蓝色物质，而RNA中的核糖一般不与苯胺起反应。
嘌呤碱可与硝酸银反应生成白色的嘌呤银化合物的沉淀。
双缩脲反应是检验蛋白质常用的颜色反应。
双缩脲或含有两个以上肽键的化合物（蛋白质、肽等）在碱性条件下与硫酸铜反应生成紫红色的配合物。
如果蛋白质含量很低时，此颜色反应不易观察到。
三、试剂与器材1. 试剂：（1）酵母粉（药用）；（2）0.5%NaOH溶液；（3）乙酸；（4）10%硫酸溶液；（5）氨水；（6）5%硝酸银溶液；（7）95%乙醇；（8）地衣酚试剂（硫酸铁铵1.35g，地衣酚2g，用蒸馏水配成50mL作为母液，保存于冰箱中。
使用前，取母液2.5mL，加浓盐酸41.5mL再加蒸馏水60mL）；（9）二苯胺试剂（1.5g二苯胺溶于100mL高纯度的冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸）；（10）10%氢氧化钠溶液；（11）1%硫酸铜溶液。
生化大实验实验步骤
⽣化⼤实验实验步骤实验⼀、碱裂解法提取质粒DNA及检测⼀、实验⽬的与原理简介质粒DNA的提取是基因⼯程操作中常⽤的基本技术。
质粒作为载体应具备下列四个特点：①有⾜够的容纳⽬的基因的幅度，并且对于携带的⽬的基因能够借助载体的复制和调控系统得到忠实的复制与增殖。
②在⾮必要的DNA克隆区有多种限制性核酸内切酶的单⼀识别位点，易于基因⽚段与载体的连接、重组与筛选。
③与宿主细胞有天与⼀个或多个遗传表型（如抗药性、营养缺陷型或显⾊表型反应等）。
④拷贝数多，易于宿主细胞的DNA分开，便于分离提纯。
分离质粒DNA的⽅法包括三个基本步骤：培养细胞使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。
碱裂解法质粒DNA是基于染⾊体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异⽽达到分离⽬的的。
在强碱性pH时，染⾊体线性DNA 的氢键断裂，双螺旋结构解开⽽变性。
质粒DNA的⼤部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，调节pH值⾄中性时，变性的质粒DNA⼜恢复到原来的构型，⽽染⾊体DNA不能复性纠缠形成⽹状结构，经过离⼼，染⾊体DNA与不稳定的⼤分⼦RNA、蛋⽩质-SDS复合物等⼀直沉淀下来⽽被除去。
提取基因⼯程中运载基因的载体，掌握最常⽤的提取质粒DNA的⽅法。
⼆．实验试剂1，SolⅠ100ml： 1M Tris-HCL（pH8.0）2.5ml，0.5M EDTA 2ml, DDW 91ml, 20%葡萄糖4.5ml( 葡萄糖单独灭，灭完后加进Sol I)，⾼压灭菌，4°保存。
2，SolⅡ100ml：（新鲜配制，常温使⽤）10% SDS 50ml， 2M NaOH 50ml。
使⽤前将两种溶液混合。
3，SolⅢ 500ml：KAc 147g， HAc57.5ml，加300mlDDW搅拌，定容⾄500ml。
⾼压灭菌，4°保存。
4，TE 100ml：1M Tris-HCl（pH8.0）1ml， 0.5 M EDTA 0.2 ml, 加DDW ⾄100ml。
生化设计实验
蛋白质与核酸的定性与定量一. 实验目的1. 学习和掌握纯化蛋白质的原理和方法、蛋白质等电点的测量原理和方法。
2. 掌握使用双缩脲法对蛋白质的定性测定。
3. 学会利用定糖法对核酸的定性与定量测定二. 实验原理1. 区分蛋白质和核酸：蛋白质在碱性溶液中可与Cu2+紫红色反应。
这是蛋白质分子中肽键的反应，肽键越多反应颜色越深。
核酸由单核苷酸所组成，无此反应。
另外，核酸组成成分嘌呤及嘧啶碱基具有强烈的紫外吸收，所以核酸也具有强烈的紫外吸收，最大吸收值在260mn ，利用这一性质亦可鉴别核酸样品和蛋白质样品。
2. 蛋白质的纯化方法：（1）粗分离：中性盐对蛋白质胶体的稳定性有显著的影响。
一定浓度的中性盐可破坏蛋白质胶体的稳定因素而使蛋白质盐析沉淀。
盐析沉淀的蛋白质一般保持着天然构象而不变性。
（2）蛋白质类别及分子量的确定：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术测定样液中含有几种蛋白质，每种蛋白质的分子量大小。
由于SDS 是阴离子，使多肽表面覆盖的负电荷远远超过蛋白质分子原有的电荷量，消除了原来的电荷差异。
改变了蛋白质单体分子的构象，不同蛋白质的SDS 复合物的短轴长度都相同，长轴长度随其分子量的大小成正比变化（3）蛋白质的精制：根据上一步骤得到的蛋白质的分子量，采用葡聚糖凝胶层析的方法。
聚糖凝胶层析，是使待分离物质通过葡聚糖凝胶层析柱，各个组分由于分子量不相同，在凝胶柱上受到的阻滞作用不同，而在层析柱中以不同的速度移动。
分子量大于允许进入凝胶网孔范围的物质完全被凝胶排阻，不能进入凝胶颗粒内部，阻滞作用小，随着溶剂在凝胶颗粒之间流动，因此流程短，而先流出层析柱；分子量小的物质可完全进入凝胶颗粒的网孔内，阻滞作用大，流程延长，而最后从层析柱中流出。
若被分离物的分子量介于完全排阻和完全进入网孔物质的分子量之间，则在两者之间从柱中流出，由此就可以达到分离目的。
3. 蛋白质的含量测定以及等电点、比旋度等性质（1）蛋白质的含量测定：采用Folin- 酚试剂法。
药大生化设计实验报告
药大生化设计实验报告引言生化设计实验是药学专业学生培养中重要的一门实验课程。
通过这门课程的学习，学生能够熟悉常用的生物化学实验操作，了解不同药物对生物体的影响，培养实验设计和数据分析的能力，为今后的科研工作打下基础。
本次实验旨在设计一个新型药物，并通过生化实验来评估其对细胞的影响。
实验设计本次实验设计了一个基于细胞增殖抑制作用的药物。
首先，从现有的药物中筛选出具有抑制细胞增殖效果的化合物A，作为我们设计的基础药物。
然后，我们希望通过对化合物A的结构进行修饰，产生一系列新型化合物，以寻找更具活性的药物。
最后，通过细胞培养和药物处理实验，评估设计出的化合物对细胞增殖的影响。
实验步骤1. 从现有药物中筛选出化合物A，并确认其对细胞增殖的抑制效果。
2. 根据化合物A的结构，设计一系列新型化合物，进行合成。
3. 对设计出的化合物进行质量分析，包括质谱和核磁共振等技术。
4. 利用细胞培养技术，培养癌细胞株，例如HeLa细胞。
5. 将细胞分成多组，每组分别添加不同浓度的化合物，进行处理。
6. 观察细胞形态变化，记录细胞数量和生长情况。
7. 进行数据统计和分析。
实验结果化合物A的抑制效果在本次实验中，我们从已有的药物中筛选出了化合物A，并通过细胞培养实验评估了其对细胞增殖的抑制效果。
实验结果显示，化合物A在一定浓度范围内能够显著抑制细胞的增殖，并呈浓度依赖性。
新型化合物的设计与合成根据化合物A的结构，我们设计了一系列新型化合物，通过有机合成方法成功合成了这些化合物。
质谱和核磁共振技术的分析证实了化合物的结构正确性。
新型化合物对细胞增殖的影响通过细胞培养和药物处理实验，我们评估了新型化合物对细胞增殖的影响。
实验结果表明，新的化合物能够更有效地抑制细胞的增殖，且在低浓度下就表现出明显的抑制效果。
结论与展望通过本次实验，我们成功设计出了一系列新型的化合物，并通过细胞培养实验评估了其对细胞增殖的抑制效果。
实验结果显示，这些新型化合物具有更强的生物活性，为进一步的药物研发提供了重要的线索。
生化实验室设计标准
生化实验室设计标准
首先，生化实验室的设计标准需要考虑实验室的布局和空间规划。
实验室的布局应该合理，包括实验台、通风系统、安全出口等的设置，以及实验室内部的分区和通道设计。
同时，实验室的空间规划也需要考虑到实验设备的摆放和使用空间，确保实验操作的便捷性和安全性。
其次，生化实验室的设计标准还需要考虑到实验室的安全设施和环境控制。
这包括通风系统的设计，以确保实验室内的空气质量和排放有害气体；安全柜和防护设施的设置，以确保实验操作过程中的安全性；以及实验室的环境控制，比如温度、湿度等参数的控制。
此外，生化实验室的设计标准还需要考虑到实验设备和仪器的配置。
这包括实验台、实验室设备、实验仪器等的选型和配置，以及其与实验室布局的协调性和安全性。
最后，生化实验室的设计标准还需要考虑到实验室的管理和操作规范。
这包括实验室的规章制度、实验操作流程、实验废物处理等方面的规定，以确保实验室的安全运行和实验操作的规范性。
综上所述，生化实验室的设计标准涉及到实验室的布局和空间规划、安全设施和环境控制、实验设备和仪器的配置、以及实验室的管理和操作规范等多个方面，需要综合考虑并遵循相关的行业标准和法规规定。
植物的生理生化研究实验
准备实验材料，设置呼吸作用抑制剂处理组和对照组，观察并记录 植物的生长情况。
数据分析
对比处理组和对照组的植物生长数据，分析呼吸作用对植物生长的 影响及机制。
05
植物矿质营养与代谢实验
测定植物体内矿质元素含量
原子吸收光谱法
利用原子吸收光谱仪测定植物样品中矿质元素的含量，该方法具有灵敏度高、选 择性好、精密度高等优点。
应用价值
实验结果可为农业生产、生态环境保护等领域提供科学依据和技术支持。例如，通过了解植物对不同环境条件的 适应机制，可以指导农业生产中合理施肥、灌溉等措施的制定；同时，对于植物抗逆性、抗病性等方面的研究也 可为植物育种和病虫害防治提供新的思路和方法。
提出进一步研究的设想和建议
深入研究特定基因或蛋白质的功能
质壁分离观察
利用显微镜观察质壁分离后的细胞形 态，了解细胞壁的弹性和原生质体的 收缩情况。
分析水分在植物体内的运输途径
长距离运输
通过测定植物不同部位的水势和含水量，分析水分在植物体内的长距离运输途 径和机制。
短距离运输
利用显微技术观察植物细胞间的水分移动，了解水分在细胞间的短距离运输方 式和过程。
信号传导机制探讨
深入研究激素与受体结合后的信号传导过程，揭示激素调控植物生长发 育的分子机制。
03
激素互作分析
研究不同激素间的相互作用关系，探讨它们在植物生长发育中的协同或
拮抗作用。
07
实验结果分析与讨论
对实验数据进行统计分析
数据收集与整理
详细记录实验过程中的各项数据，包括植物的生长情况、生理生 化指标等，并进行分类整理。
分析环境因素对光合作用的影响
实验原理
研究光照强度、温度、CO2浓度等环境因素对光 合作用的影响。