芦丁的提取及鉴定

实验二芦丁的提取及鉴定

（一）概述

芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。

芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。

芦丁具有维生素P样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。实验目的和要求

实验目的

①通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。

②通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。

③了解UV及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。

要求

①要拿到以下三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰化合物。

②能够拿根据化学试验及UV、NMR数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮类化合物的结构测定有一般性的了解。

试验方法

芦丁的提取与分离（见下图）

芦丁的鉴定

①芦丁的定性反应

取芦丁3~4mg，加乙醇5~6ml使其溶解，分成三份作下述试验：

A. 取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，在酌加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。

B. 取上述溶液1~2ml，然后滴加2%柠檬酸的甲醇溶液，注意观察颜色变化情况，在继续向试管中加入2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记录颜色变化情况。

C. 取上述溶液1~2ml，然后再加入10%α-等体积的萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两液面产生的颜色变化。

②芦丁的紫外光谱解析

取芦丁溶于色谱纯甲醇中，加入规定的试剂，测定其UV光谱，试解析光谱并初步判断其结构。

芦丁的NMR波谱解析

A. 芦丁的三甲基硅醚NMR谱的解析

B. 十乙酰化芦丁的NMR光谱解析

④芦丁水解后糖与苷元的鉴定

A. 水解方法：精密称取芦丁1g（±0.01g），加1%硫酸100ml，加热40min，放冷静置，过滤。所得沉淀用少许水洗除酸，干燥称重，计算苷元与糖的重量比。然后用乙醇（95%大约10ml）进行重结晶，即得苷元。

B. 苷元的鉴定：用纸色谱法与对照品对照。

槐花米粗粉（20g）

置500ml烧杯中，加水300ml，在搅拌下加入石

灰乳（1~1.5g），调至PH8~9，加热至微沸，

保持30min，趁热抽滤。

残渣滤液

在60~70℃下用浓盐酸调至

PH4~5，精置1hr,抽滤。

滤液沉淀（粗制芦丁）

重结晶

将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热

煮沸15min，趁热过滤

残渣滤液

充分静置后过滤，60~70℃下干燥

芦丁（精制品）

芦丁的提取与分离流程图

（四）实验指导

1．本实验讲解要点及注意事项

①芦丁提取方法，重点介绍碱-酸法的原理及注意事项。

②定性实验的目的、意义及注意事项。

③UV及NMR光谱在芦丁结构检识中的应用。

2．实验报告要求

①碱-酸法提取芦丁的原理

②定性反应的反应机理

③黄酮类UV和NMR的特点

④详细记录定性反应结果

⑤绘制色谱结果模拟图，并计算Rf值

3．思考题

①苷类结构的检识大体程序如何？

②苷类水解有几种催化方法？

③怎样确定芦丁结构中糖基是连接在槲皮素3-O-上？

④怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖基一个鼠李糖？

⑤苷元的结构是怎样确定的？

⑥怎样确定苷键的构型？

⑦芦丁的全乙酰化物的制备与苷元乙酰化物（槲皮素）的制备有何不同？为什么？

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