芦丁的提取

实验从槐花米中提取芦丁P.198

【实验目的】

通过从槐花米中提取芦丁的实验,掌握用酸碱调节提取中药活性成分的方法.

【实验原理】

槐花米又名槐米,是槐花的花蕾.性凉,味苦,功能凉血,止血,主治肠风,痔血,便血等症.槐花米的主要活性成分是芦丁.

芦丁又名芸香苷,不仅存在于槐花米中(含量达10-20%),在荞麦叶等中,也有存在.结构式如下: 从结构式中不难看出,芦丁实际上是由黄酮与糖(葡萄糖和鼠李糖)形成的苷.由于含有黄酮结构,所以,呈黄色.黄酮部分连有许多酚-OH,故易溶于碱液,酸化复析出,这是本实验采用酸-碱调节法来提取芦丁的依据.

纯芦丁为淡黄色针状结晶,不溶于乙醇,氯仿等有机溶剂,熔点为188℃(理论值),带三个结晶水的熔点为174-178℃.

芦丁能增强毛细管的韧性,适用于毛细管脆弱的患者.

【实验步骤】

称取15g槐花米,用粉碎机研成粉状.置于250ml烧杯中,加入150ml饱和石灰水[1],于石棉网上加热至沸,并不断搅拌,煮沸15分钟后,抽滤[2].滤渣再用100ml饱和石灰水煮沸10分钟,抽滤.

合并两次滤液,用5%盐酸调节至pH3-4[3].放置1-2小时,使沉淀完全,抽滤,并用水洗涤2-3次,即得芦丁粗品.

将粗品置于250ml的烧杯中,加水150ml,在石棉网上加热至沸,不断搅拌,并慢慢加入约50ml 饱和石灰水,调节溶液pH值为8-9,待沉淀溶解后,趁热过滤.滤液置于250ml的烧杯中,用5%盐酸调节至pH4-5,静置30分钟.芦丁即以浅黄色结晶析出,抽滤,并用水洗涤1-2次,烘干,称重[4],测熔点.

【注解】

[1] 加入饱和石灰水既可达到用碱液提取芦丁的目的,同时,还可除去槐花米中的多糖粘液质.

[2] 抽滤时,宜先小心倾出上层清液,再慢慢倒出带结晶的溶液,以防结晶过早堵住滤纸孔.后面的抽滤均需如此.

[3] 注意小心滴加,约需7-8ml稀盐酸.如果滴加过多,pH值过低,芦丁(苷类)则易水解.

[4] 产量约为1.5g.

【实验结果】

产品的外观性状

产量

【问题与讨论】

1 本实验中,开始用饱和石灰水提取,再用酸调节到pH3-4,这段pH值范围较宽;后来又用饱和石灰水调节到pH3-4,再用酸调节到pH4-5,这段pH值范围较窄.为什么要这样做如果反过来(先调窄后调宽)行不行

2 在一开始用酸调节pH值时,某生不小心,加入的稀盐酸过量,pH值小于3-4,请问对实验会产生什么后果为什么

3 根据这个实验,请总结出用酸碱调节法提取中药活性成分的适用条件及一般原理.

实验二槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定

槐米为豆科植物槐(Sophora japonica L.)的未开放花蕾.味苦性凉,具清热凉血,止血之功.常用于治疗多种出血症:肠风便血,痔血,尿血,衄血,崩漏下血,赤血下痢等.槐米常炒炭应用.

槐米的主要化学成分为芦丁,其含量可达12～16%,其次含有槲皮素,三萜皂苷,槐花米甲素,槐花米乙素,槐花米丙素等.芦丁具有Vitp样作用,可降低毛细血管脆性和调节通透性.临床上用作毛细血管脆性引起的出血症,常作为高血压症的辅助治疗药.

[目的要求]

1.通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作.

2.掌握槲皮素的制备原理及操作.

3.熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用

4.通过芦丁的结构检识,了解苷类结构研究的一般程序和方法.

[实验原理]

芦丁(rutin):C27H30O16·3H2O,浅黄色针状结晶,mp174～178℃(含三分子水);188℃(无水物).难溶于冷水(1:8000～10000),可溶于热水(1:180～200),热甲醇(1:10),冷甲醇(1:100),热乙醇(1:60),冷乙醇(1:650);难溶于乙醚,三氯甲烷,石油醚,乙酸乙酯,丙酮等,易溶于碱液.

槲皮素(quercetin):C15H10O7·2H2O,黄色结晶,mp313～314℃(2分子结晶水),316℃(无水物).能溶于冷乙醇(1:290),易溶于沸乙醇(1:23),可溶于甲醇,乙酸乙酯,冰醋酸,吡啶,丙酮等;难溶于水,苯,石油醚等溶剂.

芦丁为黄酮苷,分子中具有酚羟基,显酸性,可溶于稀碱液中,在酸液中沉淀析出,可利用此性质进行提取分离.利用芦丁易溶热水,热乙醇,较难溶于冷水,冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制.芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖,鼠李糖,依此进行制备槲皮素.通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定.

[实验内容]

一,芦丁的提取分离及精制

方法⑴

槐米粗粉(50g)

置1000ml烧杯中,加入500ml饱和石灰水,加热,并维持pH8～9

煮沸20分钟,趁热用脱脂棉滤过

滤液药渣

用300ml饱和石灰水煮沸10分钟,维持pH8～9

趁热滤过

滤液药渣(×)

合并

在60℃～70℃下用浓HCl调pH至4 ～5

静置,抽滤

沉淀

低温(80℃)干燥,称重.按1:200的比例加水,

加热使溶解,趁热滤过

滤液

静置,抽滤,减压干燥,计算收率

芦丁精制品

方法⑵利用芦丁在冷热溶剂中的溶解度不同进行提取分离.

槐米粗粉

沸水煮沸5～10分钟,反复2次

趁热滤过

水提取液药渣

放冷

沉淀析出(粗芦丁)

热水重结晶

或乙醇重结晶

芦丁结晶

二,槲皮素的制备

称取精品芦丁1g

置250ml烧瓶中

加2%H2SO4200ml

加热回流1小时

放冷,静置,抽滤

酸性滤液沉淀

中和水洗两次,干燥

乙醇重结晶

中性滤液称重,计算收率

浓缩

黄色细针状结晶

浓缩液(槲皮素)

(供糖的PC鉴定)

三,检识反应

1.芦丁的定性反应

取芦丁适量,加乙醇使溶解,分成三份供下述试验用:

(1)盐酸镁粉试验:取样品液适量,加2滴浓HCl,再酌加少许镁粉,即产生剧烈的反应,并逐渐出现红色至深红色.

(2)锆-枸试验:取样品液适量,然后加2%ZrOCl2的甲醇溶液,注意观察颜色变化,再加入2%枸椽酸的甲醇溶液,并详细记录颜色变化.

(3)α-萘酚-浓硫酸反应:取样品液适量,加等体积的l0%α-萘酚乙醇溶液,摇匀,沿管壁缓加浓硫酸,注意观察两液界面的颜色.

2.芦丁的UV

(1)鉴定试剂的配制

①甲醇钠溶液:取0.25g金属钠,切碎,小心加入色谱甲醇10ml中,此液置于玻璃瓶中,用橡皮塞密封.

②三氯化铝溶液:取1g无水三氯化铝,小心加入色谱甲醇20ml中,放置24小时后全部溶解即得.

③醋酸钠:用无水粉末醋酸钠.

④⑤硼酸饱和溶液:取无水硼酸,加入适量色谱甲醇,制成饱和溶液.

(上述贮备液可放置六个月)

(2)芦丁溶液的配制

精密称取芦丁纯品0.5g,用甲醇适量溶解至50ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度.

(3)光谱的测定