Westernblot所需溶液的配制

WB 所需溶液的配制

1 Tris-甘氨酸电泳缓冲液

Running buffer) 55X Tris-甘氨酸电泳缓冲液：15.1g Tris 碱和72g 甘氨酸，5g 电泳级的SDS ,双 蒸水定容至1L ，pH 值为8.3。使用前，将5X 稀释到I X ：取200ml 5X ，定容到 1000ml 。

必须新鲜配置，因为甘氨酸溶于水后易分解。小片段可不加 SDS 。

3 10% SDS 配置

电泳级 十二烷基硫酸钠也叫 SDS （ Sodium Dodecyl Sulfate ，SDS,C i2H 25O 4NaS ）

溶液：10g SDS, 100ml 去离子水配制，50-68度搅拌溶解，浓盐酸调pH 到7.2， 室

温保存。

4 Tris.HCI 的配置 注：Tris 的分子量是121.4. 4度储存。

5 10% APS (Ammonium persulfate ;过硫酸铵)的配置

称取1g过硫酸铵，加超纯水溶解并定容至10ml，分装到1.5ml微量离心管中，负30度冻存。使用时尽量现配现用，短期内实验频繁可多配。4度存则两周内

用完，最多不能超过一个月。负20度可存两个月，但一旦解冻后尽快用完。

加HCI调pH到7.6,室温储存

SDS-PAGE 加样缓冲液：pH6.8 0.5mol/L Tris 缓冲液8ml，甘油6.4ml，10%SDS 12.8ml,巯基乙醇3.2ml, 0.05%溴酚蓝1.6ml，H2O 32ml混匀备用。按1:1或1:2 比例与蛋白质样品混合，在沸水终煮3min混匀后再上样，一般为20-25ul，总蛋白量100 ^g

调pH到6.8,加双蒸水到10毫升

11圭寸闭液的配置Blocking solution要用TBST配制牛奶

5% (w/v) nonfat dried milk 或者1%BSA

0.01% an tifoam A (Sigma)

0.01%(v/v) sodium azide

12丽春红溶液：

100微升冰醋酸，加入0.05克丽春红，用水稀释至10毫升。

1) 4%多聚甲醛(PFA)的配制 (1000毫升)

40克多聚甲醛，加入800毫升水，60度搅拌溶解，加入300微升氢氧化钠，全部溶解后冷却到4度，再加入100毫升的10X PBS，加水定容到1000毫升。调pH到727.4。通风橱过滤，4度保存。

13组织裂解液

步骤：

首先加10-20毫升的水溶解EDTA,再加入0.2%NaOH使溶解，再调pH至7.4; 然后分别加入其他成分，溶解一个再加另外一个；去氧胆酸钠开盖后会飞出，应戴口罩。

14. PBS 的配制(1000 毫升) (PH 7.2~7.4)