Expression of MAPK1 in cervical cancer and effect of MAPK1 gene silencing on epithelial-me
乳腺癌变过程中Pim1和Notch1差异性表达的临床价值
doi:10.3971/j.issn.1000-8578.2020.19.1434·临床研究·乳腺癌变过程中Pim1和Notch1差异性表达的临床价值熊世双1，陈晓文2，穆亚男1，张德瑞1，蒋金芳1，李军3，曹玉文1Clinical Value of Differential Expression of Pim1 and Notch1 During Carcinogenesis ofBreast CancerXIONG Shishuang1, CHEN Xiaowen2, MU Ya'nan1, ZHANG Derui1, JIANG Jinfang1, LI Jun3, CAO Yuwen11. Department of Pathology, School of Medicine, Shihezi University/Department of Pathology,The First Affiliated Hospital of Shihezi University School of Medicine, Shihezi 832002, China;2. Cancer Center, Affiliated Hospital of Guangdong Medical University, Zhanjiang 524001,China; 3. Department of Ultrasound, The First Affiliated Hospital of Shihezi UniversitySchool of Medicine, Shihezi 832002, ChinaCorrespondingAuthor:CAOYuwen,E-mail:*****************Abstract: Objective To investigate the differential expression levels of Pim1 and Notch1 in breast tissues and their clinical and prognostic significance. Methods qRT-PCR, immunohistochemistry and databases were used to detect the mRNA and protein levels of Pim1 and Notch1 genes in adjacent normal breast tissues (ANBT), usual ductal hyperplasia (UDH), ductal carcinoma in situ (DCIS) and invasive ductal carcinoma (IDC).The relation between Pim1/Notch1 expression and the clinicopathological parameters of breast cancer patients was analyzed. The prognostic value of Pim1 and Notch1 protein in breast cancer was evaluated by Kaplan-Meier Plotter databases. Results The expression of Pim1 mRNA in breast cancer tissues was increased. The expression of Pim1 protein in the breast cancer tissues was significantly decreased. The expression of Pim1mRNA was markedly associated with lymph node metastasis and advanced TNM stage. The expression of Pim1 protein was significantly decreased in the patients with lymph node metastasis or histological grade 3.The patients with low expression of Pim1 had a shorter relapse-free survival (P=0.000). The expression ofNotch1 mRNA and protein in breast cancer were higher than those in normal breast tissues. Notch1 mRNA was closely related to the lymph node metastasis, high grade and advanced stage. Notch1 protein expression in lymph node metastasis group had markedly increased. The overall survival time of patients with high level of Notch1 was shorter (P=0.025). The protein levels of Pim1 and Notch1 were negatively correlated in breastcancer tissues (r=-0.385, P=0.001). Conclusion Low Pim1 expression and high Notch1 expression may promote the carcinogenesis and progression of breast cancer and may be risk factors for poor prognosis. Pim1 and Notch1 may be used as potential biomarkers for clinical evaluation of breast cancer patients.Key words: Breast cancer; Pim1; Notch1; Development; PrognosisFunding: National Natural Science Foundation of China (No. 81560433, 81860498); Corps Science andTechonlogy Key Project (No. 2019DB012)Competing interests: The authors declare that they have no competing interests.摘 要：目的 探讨Pim1和Notch1在乳腺组织中差异性表达的临床意义及与预后的关系。
PIAS-1基因真核表达质粒的构建与鉴定
PIAS-1基因真核表达质粒的构建与鉴定秦会影;王海琳;刘钰;张培【摘要】Objective To construct interference vector of Plko.1 and PIAS-1.Methods Sequence of siRNA targeted by PIAS-1 was designed and was cloned into the expression vector pLKO. 1.The recombinants were identified by gene sequencing.Results PCR test and gene sequencing a-nalysis showed that the recombinant plasmid was constructed correctly.Conclusion Sequence of siR-NA targeted by PIAS-1 has been constructed successfully,and it provides stable transfection of RNA interference vector for the proliferation and apoptosis of PIAS-1 in cervical cancer.%目的：构建 PIAS-1 siRNA 干扰载体 Plko．1、PIAS-1。
方法设计以PIAS-1基因为靶标的 siRNA 序列，并克隆人载体 Plko．1，用基因测序进行重组克隆验证。
结果PCR 检测证实 siRNA 插入 Plko．1质粒，测序分析证实插入序列正确。
结论成功构建 PIAS-1基因的 siRNA 载体，为研究 PIAS-1基因对宫颈癌细胞增殖凋亡的影响提供了稳定转染的骨架载体。
【期刊名称】《实用临床医药杂志》【年(卷),期】2014(000)016【总页数】4页(P7-10)【关键词】宫颈癌;PIAS-1;质粒 pLKO.1;siRNA【作者】秦会影;王海琳;刘钰;张培【作者单位】兰州大学第一临床学院妇科，甘肃兰州，73000;甘肃省人民医院妇科，甘肃兰州，73000;;【正文语种】中文【中图分类】R73-3RNA干涉(RNAi)由美国科学家Andrew Fire和Craig Mello［1］于1998年正式提出，其原理为利用同源性的双链RNA(dsRNA)诱导序列特异性的目标基因的沉寂，迅速阻断基因活性。
丝裂原活化蛋白激酶MAPK信号通路与糖尿病心肌病关系的研究进展
丝裂原活化蛋白激酶MAPK信号通路与糖尿病心肌病关系的研究进展王文聪;谢春毅【摘要】糖尿病心肌病是导致糖尿病患者心血管疾病高发生率和高病死率的主要原因。
由于糖尿病心肌病病因复杂，又具有独特的病理生理改变，故其确切的发病机制尚未完全阐明。
目前研究认为，丝裂原活化蛋白激酶MAPK信号通路参与胰岛素抵抗、细胞应激、炎症、凋亡等代谢过程，是涉及了多级蛋白激酶的级联反应。
本文总结了近年来关于MAPK信号通路与糖尿病心肌病的研究状况，旨在说明从阻断MAPK信号通路角度对糖尿病心肌病进行干预可以成为防治糖尿病心肌病的一个新途径。
%Diabetic cardiomyopathy is the main reason of the high incidence and highmortality lead to cardiovascular disease in diabetic patients. Due to the complexetiology of diabetic cardiomyopathy, but also its own pathophysiologicalchanges, its exact pathogenesis has not been fully elucidated. Current studies suggest that MAPK signaling pathways involved in insulin resistance, metabolic processes such as stress, inlfammation, apoptosis cells. It is involved in the cascade multilevel protein kinase. This paper summarized the research status about the MAPK signaling pathways and diabetic cardiomyopathyin recent years, aiming to illustrate interfering diabetic cardiomyopathyfrom the perspective of blocking the MAPK signaling pathway could become a new way of prevention and treatment of diabetic cardiomyopathy.【期刊名称】《当代医学》【年(卷),期】2016(022)014【总页数】3页(P8-10)【关键词】糖尿病心肌病;丝裂原活化蛋白激酶;信号通路【作者】王文聪;谢春毅【作者单位】上海 201203 上海中医药大学 200082 上海市中西医结合医院;上海201203 上海中医药大学 200082 上海市中西医结合医院【正文语种】中文糖尿病(diabetes mellitus,DM)是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染等各种原因引起的胰岛素分泌不足、胰岛素抵抗，并以高血糖、高血脂为特征的代谢紊乱综合征[1-2]。
原发性肝细胞癌组织PD-L1、MDR1表达变化及其临床意义
原发性肝细胞癌组织PD-L1、MDR1表达变化及其临床意义苏纯洁;何前进;毛伟明;张喜华;岑红兵;张松柏【摘要】目的探讨原发性肝细胞癌(以下称肝癌)组织细胞程序性死亡配体1(PD-L1)、多药耐药基因1(MDR1)表达变化及其临床意义.方法选择原发性肝癌组织及其配对的癌旁正常组织各90例份,采用免疫组化法检测PD-L1、MDR1表达,并分析原发性肝癌组织PD-L1表达与MDR1表达的关系.取传3代、对数生长期肝癌细胞Huh7,随机分为观察组和对照组,分别转染pEGFP-PD-L1和pEGFP-N1质粒.转染48 h,采用real-time PCR法检测PD-L1、MDR1 mRNA表达,采用Western blotting法检测PD-L1、MDR1蛋白表达.结果原发性肝癌组织PD-L1、MDR1阳性表达率均明显高于癌旁正常组织(P均<0.01).Spearman秩相关分析显示,原发性肝癌组织PD-L1表达与MDR1表达呈正相关关系(r=0.594,P<0.01).转染48 h,观察组PD-L1、MDR1 mRNA和蛋白表达均明显高于对照组(P均<0.01).结论原发性肝癌组织PD-L1表达明显升高,其表达变化可能与肝癌化疗耐药有关.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2019(059)010【总页数】3页(P60-62)【关键词】原发性肝细胞癌;细胞程序性死亡配体1;多药耐药基因1【作者】苏纯洁;何前进;毛伟明;张喜华;岑红兵;张松柏【作者单位】荆门市第一人民医院,湖北荆门448000;黄冈市中心医院;黄冈市中心医院;黄冈市中心医院;黄冈市中心医院;荆门市第一人民医院,湖北荆门448000【正文语种】中文【中图分类】R735.7原发性肝细胞癌(以下称肝癌)是临床常见的消化系统恶性肿瘤之一，其发病率和病死率分别居所有恶性肿瘤的第三位和第二位。
虽然根治性手术是治疗肝癌的最有效手段，但由于其早期症状不明显，多数患者就诊时已错过了最佳手术时机，化疗成为中晚期肝癌综合治疗的重要手段。
肺癌患者丝裂原活化蛋白激酶1_MAPK1_表达水平及临床意义_陈伟庄
肺癌是严重危害人类健康的疾病，2012 美国肿瘤公布的 资料显示，其发病率（ 13. 8% ） 及病死率（ 27. 4% ） 均居癌症前 列［1］。丝裂原活化蛋白激酶（ mitogen-activated protein kinase， MAPK） 信号转导通路是生物体内的重要信号通路之一［2］，参 与细胞的炎症性反应、生长、分化、增殖和生存等生理过程中 起重要调控作用。丝裂原活化蛋白激酶 1（ MAPK1） 又称为细 胞外信 号 调 节 激 酶 2 （ extracellular signal-regulated kinase2 ， ERK2） ，其分子量 41390Da。本文采用 ELISA 法，检测肺癌患 者、良性肺部疾病患者和健康对照者血浆中 MAPK1 / ERK2 表 达水平并进行统计分析，探讨其在肺癌发生发展中的作用。
对象和方法
一、本文收集了浙江省宁波市李惠利医院 2011 年 12 月 ～ 2012 年 3 月具有完整临床和病理资料的首诊肺癌患者 78 例。其中男 性 60 例，女 性 18 例。平 均 年 龄 63 岁 （ 35 ～ 83 岁） 。良性肺部疾病组为同期住院患者 27 例。其中男性 18 例，女性 9 例。平均年龄 55 岁（ 25 ～ 73 岁） 。健康对照组为 同期门诊健康体检者 14 例。其中男性 9 例，女性 5 例。平均 年龄 35 岁（ 22 ～ 56 岁） 。
【关键词】 丝裂原活化蛋白激酶 1； 细胞外信号调节激酶 2； 丝裂原活化蛋白激酶信号通路； 肺癌； 生物标志物
Expression levels and clinical value of mitogen-activated protein kinase1 （ MAPK1） in patients with lung cancer CHEN Wei-zhuang1 ，WU Hong-cheng2 1． Ningbo University，2． the Affiliated Hospital of Ningbo University，LI Hui-li
MAPK相互作用蛋白激酶1对心肌细胞炎症的作用
MAPK相互作用蛋白激酶1对心肌细胞炎症的作用袁园;车妍;王兆鹏;靳亚阁;唐其柱【摘要】Objective To investigate the effect of MAP kinase-interacting kinase 1 (Mnkl) on myocardial inflammation.Methods Using Mnk1 gene knockout mice and C57 BL/6 wild type mice,we investigated the nuclear localization of NF-κBp65 and the protein levels of P-NF-κBp65 and TNF-α in heart tissue after 4 weeks of aortic banding by immunofluorescence and Western blot re spectively.For the in vitro studies,the expression of Mnk1 in H9c2 cells was knocked down using adenovirus expressing Mnk1 shRNA.And the cells (control group and Mnk1 shRNA group) were stimulated with angiotensin Ⅱ for 48 hours.The nuclear localization of NF-κBp65 and the mRNA level of TNF-α was analyzed by immunofluorescence and RT-PCR respectively.Results The in vivo studies showed that P-NF-κBp65 nuclear translocation significantly increased in the heart tissue of Mnk1 gene knockout mice as compared with C57 BL/6 wild typemice.Furthermore,the protein levels of P-NF-κBp65 and TNFα increased as mediated by pressure overload,especially in the Mnk1 gene knockout mice.The in vitro studies indicated that decreased Mnk1 expression increased P-NF-κBp65 nuclear translocation and TNF-α mRNA expression in angiotensin Ⅱ-stimulated H9c2 cells.Conclusion Mnk1 gene knockout accelerate pressure overload-induced Ⅱ myocardialinflammation,decreased Mnk1 expression led to more aggressive cardiomyocyte inflammation induced by angiotensin.%目的于在体水平和离体水平研究MAPK相互作用蛋白激酶1对心肌细胞炎症的作用.方法应用MAPK相互作用蛋白激酶1基因敲除小鼠和C57 BL/6野生型小鼠,行主动脉缩窄术,于术后4周取材.应用免疫荧光染色,检测心肌组织中P-NF-κBp65在心肌细胞中的核转位.应用Western blot法检测心肌组织中P-NF-κBp65和TNF-α.应用Mnk1 shRNA腺病毒转染技术,降低H9c2细胞中Mnk1的表达,给予血管紧张素Ⅱ刺激48h.应用免疫荧光染色,检测H9c2细胞中P-NF-κBp65的核转位.应用RT-PCR检测H9c2细胞中TNF-αmRNA的表达.结果在体实验表明,主动脉缩窄术后4周,与野生型小鼠相比,MAPK相互作用蛋白激酶1基因敲除小鼠心肌组织中P-NF-κBp65在心肌细胞中的核转位明显增多,TNF-α和P-NF-κBp65的蛋白表达明显增加.离体实验表明,MAPK相互作用蛋白激酶1表达降低的H9c2细胞中P-NF-κBp65的核转位明显增多,TNF-αmRNA的表达明显增加.结论 MAPK相互作用蛋白激酶1基因缺失促进压力负荷诱导的小鼠心肌组织炎症,其表达降低可促进血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞炎症.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2018(047)003【总页数】5页(P62-66)【关键词】MAPK相互作用蛋白激酶1;炎症;心肌细胞【作者】袁园;车妍;王兆鹏;靳亚阁;唐其柱【作者单位】430060 武汉大学人民医院心血管内科、武汉大学心血管病研究所,心血管病湖北省重点实验室;430060 武汉大学人民医院心血管内科、武汉大学心血管病研究所,心血管病湖北省重点实验室;430060 武汉大学人民医院心血管内科、武汉大学心血管病研究所,心血管病湖北省重点实验室;430060 武汉大学人民医院心血管内科、武汉大学心血管病研究所,心血管病湖北省重点实验室;430060 武汉大学人民医院心血管内科、武汉大学心血管病研究所,心血管病湖北省重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R542.2;R34MAPK相互作用蛋白激酶1 (MAP kinase-interacting kinase 1，Mnk1)在研究细菌经典MAPKs调节蛋白表达文库时被发现[1]。
激活蛋白-1 在妇科疾病中的研究进展
0 引言
激活蛋白 -1(Activator protein-1, AP-1) 于八十年代由美国 科 学 家 Lee 等 [1] 首 次 发 现，并 被 鉴 定 为 转 录 因 子。 目 前 研 究 发 现，AP-1 是由碱性亮氨酸拉链 (basic leucine- zipper, bZIP) 结构 的 Jun 蛋白质 (c-Jun、v-Jun、JunB 和 JunD)、Fos 蛋白质 (c-Fos、 v-Fos、FosB、Fral 和 Fra2)、激活转录因子 (activating transcription factor,ATF, 包 括 ATF2、ATF3/LRF1、B-ATF、JDP1 和 JDP2) 和 肌 肉 腱 膜 纤 维 肉 瘤 (musculoaponeurotic fibrosarcoma, MAF，包 括 C-Maf、MafB、MafA、MafG/F/K 和 Nrl) 家族形成高度保守的同源 或异源二聚体，可激活下游靶基因的转录 [2]。
ABSTRACT: Activator protein-1 (AP-1) is one of the earliest transcription factors in mammals.Ap-1 belong to a multi-gene family, and its activity is regulated at various levels. Meanwhile, Ap-1, as an important nuclear transcription regulator, is involved in physiological processes such as cell proliferation, differentiation and apoptosis.Activated Ap-1 can be involved in the occurrence and development of multi-organ and multi-system diseases, such as malignant tumors.In recent years, breakthroughs have been made in the research on Ap-1, but there are relatively few studies on the diseases related to obstetrics and gynecology.This paper reviews the research of Ap-1 in gynecological diseases. KEY WORDS: Activator protein-1; c-Jun; c-Fos; Gynecological cancer; Endometriosis; Uterine myoma
MAPK在葡萄糖及AngⅡ致血管平滑肌细胞增殖反应中的作用(1)解读
MAPK在葡萄糖及AngⅡ致血管平滑肌细胞增殖反应中的作用(1)】目的：研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径在葡萄糖（GS）和/或血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导大鼠动脉平滑肌细胞促增殖中的作用及其可能的调控机制. 方法：实验以平滑肌细胞蛋白合成速率和蛋白含量为平滑肌细胞增殖的指标，以平滑肌细胞3Ｈ亮氨酸掺入率表示细胞蛋白质合成速率，通过3H胸苷(3HTdR)反映平滑肌细胞DNA的代谢及细胞增殖情况；并通过给予PD098059及高浓度葡萄糖(HG)预处理，观察它们对细胞蛋白合成、DNA代谢及细胞增殖的影响. 结果：① AngⅡ(10-7 mol/L)处理平滑肌细胞，3Ｈ胸苷掺入率明显增高；HG (25×10-3 mol/L)处理平滑肌细胞，3Ｈ胸苷掺入率明显增高；AngⅡ＋HG处理平滑肌细胞3Ｈ胸苷掺入率显著增高. ② AngⅡ增加3Ｈ胸苷掺入的作用可明显被PD098059所抑制；AngⅡ＋HG增高3Ｈ胸苷掺入的作用也可被PD098059所抑制. ③ AngⅡ(10-7 mol/L)处理平滑肌细胞，3Ｈ亮氨酸掺入率明显增高；HG (25×10-3 mol/L)处理平滑肌细胞，3Ｈ亮氨酸掺入率增加；AngⅡ＋HG处理平滑肌细胞3Ｈ亮氨酸掺入率显著增加. ④ AngⅡ增加3Ｈ亮氨酸掺入的作用可部分被PD098059所抑制；AngⅡ＋HG增加3Ｈ亮氨酸掺入的作用可显著被PD098059所抑制. 结论：应用MAPK的特异性抑制剂PD098059抑制血管平滑肌细胞的增殖，证明MAPK激活在GS和/或AngⅡ导致平滑肌细胞增殖反应中有重作用.【关键词】丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)；细胞外信号调节MAP激酶类(ERKs)；血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)；高糖；肌，平滑，血管/细胞学；增殖反应0引言引起高血压及动脉粥样硬化的发病机制十分复杂，其中主的病理改变之一就是血管滑肌细胞增生、肥大，继而造成血管壁弹性下降、管腔变窄. 已证实高葡萄糖及血管紧张素Ⅱ均对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及DNA合成有促进作用，引起VSMC增殖是PKC途径，并与MAPK信号途径的激活有关［1-3］. 本研究通过应用MAPK信号转导途径的特异性阻滞剂PD098059对体外培养的SD大鼠颈动脉平滑肌细胞增殖的影响，进一步探讨MAPK信号途径在心血管疾病中的作用机制，为心血管疾病防治提供依据.1材料和方法1.1材料SD大鼠由等二军医大学实验动物中心提供；ＰD098059和血管紧张素Ⅱ购自Sigma公司；3Ｈ胸苷、3Ｈ亮氨酸、小牛血清、高浓度葡萄糖、DMEM培养基及其他实验用品由长海医院中心实验室提供．［3H］液闪计数检测由长海医院中心实验室完成.1.2SD大鼠颈动脉血管平滑肌细胞培养选用6周龄230 g SD大鼠1只，按参考文献［4］的方法分离颈动脉平滑肌组织，贴壁法原代细胞培养和传代细胞培养VSMC，细胞鉴定后于第4 wk开始传代，第6~8代的细胞用于实验.1.33Ｈ胸苷掺入法测定VSMC的DNA合成量按参考文献［4］的方法改进. 制备4×108 cell/L悬液分别接种于24孔培养板，孵育24 h贴壁后换无血清DMEM培养液24 h，每孔分别加入PD098059(5×10-5 mol/L)预处理30~45 min，给予HG(25×10-3 mol/L)和/或AngⅡ(10-7 mol/L)孵育30 min后，每孔加入 3Ｈ胸苷孵育12 h，弃去培养基，PBS冲洗两次，给予胰蛋白酶消化，加入冷PBS液终止反应为细胞悬液，用自动细胞收集仪经微孔滤膜收集细胞，滤膜烘干后置闪烁瓶中，加入闪烁液后，在闪烁计数仪上测定［3H］的放谢性强度，结果以cpm表示. HG和/或AngⅡ组给予相应的双蒸水预处理，其他均与处理组相同；对照组在预处理及给予AngⅡ时均为双蒸水，其他与处理组相同. （每组3个样本，2 wk后重复实验1次，各组n=6）.1.43Ｈ亮氨酸掺入法测定细胞蛋白合成代谢实验方法及各种处理同1.3，只是用3Ｈ亮氨酸代替3Ｈ胸苷.统计学方法: 结果以x±s表示,统计学用χ2 检验，P<0.05表示差异有显著性意义.2结果2.1GS和/或AngⅡ对SD大鼠颈动脉VSMC的DNA合成速率的影响在无血清培养液中，AngⅡ剂量依赖性增加SD大鼠VSMC的3Ｈ胸苷掺入；GS浓度依赖性增加SD大鼠VSMC的3Ｈ胸苷掺入. 以10-7 mol/L作为AngⅡ的标准实验浓度；以25×10-3 mol/L作为GS的标准实验浓度. AngⅡ处理VSMC可使3Ｈ胸苷掺入明显增加（增加183.0%），该作用可被PD098059明显抑制（PD098059预处理组比AngⅡ处理组降低35.0%,增加被抑制52.3%,表1）. HG处理可使3Ｈ胸苷掺入明显增加（增加53.0%）；HG AngⅡ处理可使3Ｈ胸苷掺入显著增加（增加239.0%），该作用可被PD098059显著抑制（PD098059预处理组比HG AngⅡ处理组降低55.0%,抑制79.0%,表1）.作者：张严高，秦永文，吴弘，王文清，文军慧，李闻捷【关键词】丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)；细胞外信号调节MAP激酶本篇论文是由3COME文档频道的网友为您在网络上收集整理饼投稿至本站的，论文版权属原作者，请不用于商业用途或者抄袭，仅供参考学习之用，否者后果自负，如果此文侵犯您的合法权益，请联系我们。
CDK1CENPT和P53在乳腺癌中的表达及意义
CDK1、CENPT和P53在乳腺癌中的表达及意义【摘要】目的：研究CDK1、CENPT和P53在乳腺癌中的表达情况，探讨基因表达与乳腺癌患者生存率及病理阶段分型的关联性和调控关系。
方法：GEPIA数据库分析乳腺癌和正常样本中的表达与总体生存率，乳腺癌患者基因表达与病理分期影响，CENPT与CDK1、BAX、BCL2、CASP3、P53的相关性分析，UALCAN数据库验证结果。
敲减CENPT后，半定量PCR检测CDK1、BAX、BCL2、CASP3、P53在MCF7细胞系中的表达。
结果：CDK1、CENPT在乳腺癌及正常组织表达比较，差异均有统计学意义（P<0.05）;CDK1、BCL2表达与不同病理分期比较，差异有统计学意义（P<0.05）;P53不同表达乳腺癌患者总体生存率比较，差异有统计学意义（P<0.05）;乳腺癌MCF7细胞系敲减CENPT后P53、BAX、CASP3表达量均减少（P<0.05）。
结论：与正常组织比较，在乳腺癌中CENPT表达水平降低，CDK1表达水平升高;P53表达水平与生存率成反比。
乳腺癌中CENPT、P53、Bax、CASP3信号通路调节细胞凋亡参与乳腺癌的进展。
【关键词】乳腺癌生物信息学 CENPT CDK1Effect and Expression of CENPT， CDK1 and P53 in Breast Cancer/ZHAO Ruohan，SHI Jiayi， LIU Xinjing， SONG Jie. //Medical Innovation of China， 2020， 17（09）： 0-031[Abstract] Objective： To discuss the expression of CENPT， CDK1 and P53in breast cancer， to explore the correlation and the regulatory relationship between gene expression and survival rate and pathological stageclassification of breast cancer patients. Method： GEPIA database was used to analyze the expression and overall survival rate of breast cancer and normal samples， the pathological stage and gene expression in breast cancer patients，the correlation between CENPT and CDK1， BAX， BCL2， CASP3， P53， and the validation results of UALCAN database. RT-PCR was used to detect theexpression of CDK1， BAX， BCL2， CASP3 and P53 in MCF7 cell lines after knocking down CENPT. Result： The expression of CDK1 and CENPT in breastcancer and normal tissues were significantly different （P<0.05）. The expression of CDK1 and BCL2 was significantly different from those ofdifferent pathological stages （P<0.05）. The different expression of P53 was significantly different in the overall survival rate of breast cancer patients （P<0.05）. The expression of P53， BAX and CASP3 in breast cancer MCF7 cell lines decreased after CENPT knockout （P<0.05）. Conclusion： Compared with normal tissues， the expression level of CENPT in breast cancer is lower andthe expression level of CDK1 is higher， and the expression level of P53 is inversely proportional to the survival rate. CENPT， P53， Bax， CASP3signaling pathway regulates apoptosis in breast cancer and participates in the progression of breast cancer.[Key words] Breast cancer Bioinformatics CDK1 CENPTFirst-author’s address： Mudanjiang Medical University， Mudanjiang 157011， Chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.09.007乳腺癌是女性最常見的恶性肿瘤之一，我国发病率为16.8%，且每年3%～4%递增[1]，文献[2]证实细胞周期调控分子参与肿瘤进程。
Keap1
非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)发病率占据肺癌的75%~80%。
肿瘤细胞进展快且易扩散转移，临床常采用手术、放化疗等进行治疗，但5年生存率低于60%[1-2]。
氧化应激是由活性氧(ROS)生成量增加所致，ROS积累可诱导肺癌细胞凋亡，清除ROS 可阻止癌细胞凋亡，即肺癌细胞存活依赖于癌细胞自身抗氧化能力[3]。
Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1 (kelch-like epichlorohydrin-associated protein-1，Keap1)/核因子E2相关因子2(nuclear factor E2related factor 2，Nrf2)信号通路在癌症中发挥重要调控作用，氧化应激可激活Keap1，促使Keap1-Nrf2复合物裂解，Nrf2转移至细胞核内，可激活下游靶基因表达，参与肺癌发生发展过程[4]。
Nrf2可维持氧化还原稳态，ROS侵袭细胞时，Nrf2可进入细胞核，结合抗氧化反应元件(ARE)转录编码各种抗氧化蛋白、代谢酶基因，抑制氧化应激反应[5-6]。
目前氧化应激、Keap1/Nrf2信号通路在NSCLC发生过程中的机制尚未明确。
基于此，本研究尝试分析Keap1/Nrf2信号通路与临床病理参数、氧化应激指标的相关性，探讨其在NSCLC氧化应激机制中的作用，为临床研制新药提供参考依据。
1资料与方法1.1一般资料选取2017年4月至2020年4月郑州市第三人民医院收治的100例NSCLC患者为研究对象。
纳入标准：符合NSCLC诊断标准[7]；术前未接受放化疗、免疫治疗者；预计生存期≥6个月；符合手术适应证、禁忌证；Karnofsky功能状态评分≥70分；签署知情同意书。
排除标准：合并凝血功能障碍、肝肾功能障碍、其他恶性肿瘤者；伴有急/慢性感染者；伴有精神疾病者；既往腹部相关外科手术史者。
所有患者均行肺癌根治性切除术，术中收集癌组织、癌旁组织(距离癌组织5cm范围内正常组织)，其中男性63例，女性37例；年龄46~67岁，平均(56.32±3.16)岁；体质量指数(BMI)17~30kg/m2，平均(23.16±2.03)kg/m2；病理类型：鳞癌58例、腺癌42例；病理分级[8]：Ⅰ~Ⅱ级51例、Ⅲ级49例；T分期[9]：T1~T253例、T3~T447例；N分期：N055例、N1~N245例。
改良“轴保持短缩法”单人操作结肠镜在结肠术后患者检查中的临床应用
·临床研究·doi ：10．3969／j．issn．1006-5725.2011.02.016基金项目：解放军总医院苗圃基金项目（编号：09MP05）作者单位：100853北京市，解放军总医院南楼消化内镜诊疗科通信作者：王志强E-mail ：yxmnc1956＠163．com结肠镜是检查大肠疾病可靠、有效的检查方法［1］，自从日本消化内镜专家工藤进英提出“轴保持短缩法”及“Jiggling 手技法”［2］以来，结肠镜单人操作技术日趋完美。
因其操作安全、简便、患者痛苦小、成功率高、患者反应良好、又节省人力，单人操作结肠镜已经逐渐成为国际上结肠镜插入法的主流技术。
结肠术后患者由于肠管部分切除、吻合手术造成结肠正常生理走形改变，肠管之间、肠管与腹壁之间可能存在粘连，给结肠镜的插入带来不便［3］。
我们改良了工藤进英教授提出的单人操作结肠镜“轴保持短缩法”，对结肠术后患者进行检查，与传统单人操作结肠镜方法进行对比，探讨该方法对结肠术后患者检查的临床作用。
1资料与方法1．1一般资料2009年4－12月来我院消化内镜中心进行随访的结肠术后患者512例，其中男317改良“轴保持短缩法”单人操作结肠镜在结肠术后患者检查中的临床应用李明阳王志强令狐恩强卢忠生黄启阳摘要目的：探讨改良“轴保持短缩法”单人操作结肠镜在结肠术后患者检查中的临床应用。
方法：对2009年4－12月来我院消化内镜中心进行随访的512例结肠术后患者，分别应用改良“轴保持短缩法”单人操作法以及常规单人操作结肠镜进行检查，对两种方法的成功率、进镜时间、疼痛评分等指标进行比较。
结果：常规单人操作结肠镜和改良“轴保持短缩法”单人操作结肠镜到达回盲部（或结肠－小肠吻合口）的成功率分别为93．8％和99．1％。
常规单人操作结肠镜检查和改良“轴保持短缩法”单人操作结肠镜的平均进镜时间分别为7．6min 和3．5min （P ＜0．05）。
常规单人操作结肠镜和改良“轴保持短缩法”单人操作结肠镜检查后，采用数字评定量表（NRS ）评定疼痛程度的平均分数分别为6．7分和3．8分（P ＜0．05）。
非小细胞肺癌中MMP1基因的表达水平及其与患者预后的相关性
广东药科大学学报Journal of Guangdong Pharmaceutical UniversityMar.2021,37(2)收稿日期:2020⁃10⁃21作者简介:张馨予（1978-），女，硕士，讲师，主要从事肺病研究通信作者:杨彦斌（1974-），女，硕士，副主任医师，主要从事肺癌研究，Email ：**************。
非小细胞肺癌中MMP1基因的表达水平及其与患者预后的相关性张馨予1，王勇2，尧雪洲3，杨彦斌4（1.云南中医药大学第一附属医院肺病科，云南昆明650021；2.首都医科大学附属北京朝阳医院肿瘤科，北京100020；3.云南中医药大学科研实验中心，云南昆明650500；4.云南省中医医院肺病科，云南昆明650021）摘要：目的分析基质金属蛋白酶1（MMP1）基因在肺癌细胞与正常细胞中的表达差异及其预后意义。
方法从On⁃comine 数据库中收集近20年关于非小细胞肺癌中MMP1表达水平的研究信息，统计比较MMP1在肺癌细胞组织与正常细胞组织中的表达差异；采用CCLE 数据库分析MMP1基因在不同癌细胞系中的表达情况，同时应用Kaplan Meier Plotter 在线数据库分析MMP1表达水平与非小细胞肺癌患者预后的相关性。
结果共收集到MMP 1在多种类型肿瘤中表达水平的研究338项，其中有统计学差异的研究结果62项，包括MMP 1表达水平升高61项，MMP1表达水平下降1项。
进一步筛选分析发现，有8项为非小细胞肺癌的研究，均显示MMP 1在肺癌细胞中呈高表达，与正常细胞比较差异显著（P <0.05）。
CCLE 数据库分析显示了MMP 1在40类癌细胞系中的表达情况，其在非小细胞肺癌中的表达值排23位。
Kaplan Meier Plotter 统计分析显示，MMP1表达水平对肺腺癌患者预后有显著影响HR =1.53（1.21~1.94）（P =0.00034），但对鳞状细胞肺癌患者预后无显著影响HR =0.91（0.72~1.15）（P =0.43）。
MAPK1基因多态性及mRNA表达与缺血性脑卒中神经功能缺损程度的相关分析
內科 2019年4月第14卷第2期125.论著.MAPK9基因多态性及mRNA 表达与缺血性脑卒中神经功能缺损程度的相关分析▲陈昭霞龙建雄郭晓）黄焦杨佳磊朱路路吴旭龙苏莉** （广西医科大学公共卫生学院流行病学教研室,南宁市530029）▲基金项目：国家自然科学基金项目（81473670,81573756）*通信作者:苏莉,广西医科大学公共卫生学院流行病学教研 室，电子邮箱 86112013© hotmail, com【摘要】 目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶9（MAPK9）基因rs6928、rsl3515、rsl063311多态性及MAPK 9基因mRNA 表达与缺血性脑卒中（IS ）患者神经功能缺损严重程度的相关性。
方法 采用Massarray SNP 基因分型技术对MAPK3基因的rs6928、rsl3515、rsl063313多态性进行基因分型，运用qRT-PCR 实验技术测定MAPK3基因mRNA 表达水平，使用NIHSS 量表对IS 患者进行神经功能缺损评分。
结果 校正性别、年龄之后，在加性模型、隐性模型中，rs6928多态性与IS 患者NIHSS 评分具有相关性（P<0.05）。
MAPK3基因mRNA 表达水平与IS 患者NIHSS 评分无相关性（P>0.05）。
结论 MAPK3基因rs6928多态性可能会影响IS 患者神经功能缺损的严重程度。
【关键词】 缺血性脑卒中；MAPK3基因；单核昔酸多态性；mRNA 表达；NIHSS 评分【中图分类号】R 543.5；R 743.3【文献标识码】A【文章编号】1673-7768（ 2019 ）02P125P5DOI ： 15. 12123/j. cnki. cn45P344/r. 0212.02.03Correlation between MAPK6 gene polymorphisms and mRNA expression and thedegree of nexrrlogical deficiti io patients with ischemic strrkeCHEN Zhaoxia , LONG Jianxiong , GUO Xiaojing , HUANG Jiao , YANG Jialei , ZHU Lulu , WU Xulong , SU Li (Department of Epiaemiolojy , SchooO of Public Health , Guungxi Medical University , Naming 535021 , Chin)[Abstrrct i Objective To investigate the correlation between polymoa^isma of mitogen-pctivated protein kinasea 6 (MAPK6 ) gene rs6222 , rsl3515 ack rsl293316 ack MAPK6 mRNA expression ack the denren of kenrological deficits inpatiento with ischemic stakn((S). Methods Gedotypdl of MAPK2 rs6228 , al3515 ack al263311 were detectedrsing Massany SNP genotypink tech4qrd , MAPK3 mRNA expressioo wn assessen by qRT-PCR , ack O x 46X0( of kurologiccl dedcits in patients with I S wn evaluated rsink NIHSS score. Resells After acjustink for genkxr acd age , thepolymoahisms of 1^86222 wn associated with NIHSS score in patiente with IS in the acditiva model acd recessive model(P<0.05). The MAPK3 mRNA expressioo wd kot correlated te NIHSS score in IS patients ( P > 0. 05 )-Conclusion The polymoehism of MAPK3 gene rs6228 map affect the decree of kenrolooical defeite in patients with IS.[Key words 】 Ischemic stroke; MAPK3 gene ; Single nucleotinx polymoropism ； mRNA expressior ； NIHSS score缺血性脑卒中（IS ）是一种导致高伤残和高死亡的严重的神经系统疾病，是脑卒中最主要的类型，占全部脑卒中的88%以上［3］0《美国国立卫生研究院卒中量表》（NIHSS ）是脑卒中神经功能缺损的定量测量工具，能够反映脑卒中患者神经功能缺损的严重程度⑵o 丝裂原活化蛋白激酶3 （MAPK3 ）是MAPK 信号通路中的关键激酶。
非小细胞肺癌组织中mnk1水平及临床意义
【 Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ＭＡＰＫ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｓｅｒｉｎｅ ／ ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ １
ＰＣＲ， ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ＭＮＫ１ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ＮＳＣＬＣ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ
ｂｅｔｗｅｅｎ ＭＮＫ１ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ｏｖｅｒａｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ （ ＯＳ） ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ Ｋａｐｌａｎ⁃Ｍｅｉｅｒ ｍｅｔｈｏｄ． Ｃｏｘ ｒｉｓｋ ｒａｔｉｏ ｍｏｄｅｌ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ ａ⁃
【 摘 要】 目的 探讨非小细胞肺癌（ ＮＳＣＬＣ） 组织中 ＭＡＰＫ 相互作用激酶 １（ ＭＮＫ１） 的表达及临床意义。 方法 收集
本院 ２０１４ 年 ３ 月至 ２０１８ 年 ６ 月手术切除的 ＮＳＣＬＣ 患者癌组织及配对癌旁组织 ７９ 对，采用实时定量 ＰＣＲ 检测上述组织的
ＭＮＫ１ 水平，分析 ＭＮＫ１ 水平与 ＮＳＣＬＣ 临床病理特征的关系，采用 Ｋａｐｌａｎ⁃Ｍｅｉｅｒ 法分析 ＭＮＫ１ 水平与总生存期（ ＯＳ） 的关系，
ｎａｌｙｓｉｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ＭＮＫ１ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ＮＳＣＬＣ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗａｓ ４ ６６８±１ ２６４， ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ １ ４３８±０ ５７７ ｉｎ ｐａｒａｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ （ Ｐ＜０ ０５） ．
近5年国家自然科学基金肝癌相关中医药研究项目资助情况分析
mesenchymal stem cells[J].Stem Cell Res Ther,2013,4：138. [48]Germano G,Frapolli R,Belgiovine C,et al.Role of macrophagetargeting in the antitumor activity of trabectedin[J].Cancer Cell, 2013,23：249-262[49]Hiroshima Y,Maawy A,Hassanein MK,et al.The tumor-educat-ed-macrophage increase of malignancy of human pancreatic cancer is prevented by zoledronic acid[J].PLoS One,2014,9:103382. [50]Joseph IB,Isaacs JT.Macrophage role in the anti-prostate cancerresponse to one class of antiangiogenic agents[J].J Nat Cancer Inst,1998,90：1648-1653.[51]Mullins DW,Burger CJ,Elgert KD.Paclitaxel enhances macrophage IL-12production in tumor-bearing hosts through nitric oxide[J].J Immunol,1999,162：6811-6818.[52]He J,Hu Y,Hu M,et al.Development of PD-1/PD-L1pathway intumor immune microenvironment and treatment for non-small cell lung cancer[J].Sci Rep2015,5：13110-13118.[53]Priceman SJ,Sung JL,Shaposhnik Z,et al.Targeting distincttumor-infifiltrating myeloid cells by inhibiting CSF-1receptor；combating tumor evasion of antiangiogenic therapy[J].Blood,2010,115：1461-1471.[54]Srivastava K,Hu J,Korn C,et al.Postsui^ical adjuvant tumortherapy by combining anti-angiopoietin-2and metronomic chemotherapy limits metastatic growth[J].Cancer Cell,2014,26: 880-895.[55]Banerjee S,Ghosh T,Barik S,et al.Neem leaf glycoprotein prophylaxis transduces immune dependent stop signal for tumor angiogenic switch within tumor microenvironment[J].PLoS One,2014, 9：110040.[56]Peng J,Tsangj Y,Li D,et al.Inhibitionof TGF-signaling in combination with TL7ligationre-programsatumoricidalphenotypein Tumor-Associated Macrophages[J].C&ncer Lett,2013,331(2): 239-249.引证本文童乐，饶智国.肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞与肝细胞癌的研究进展[J]・中西医结合肝病杂志,2021,31(4)：377-381.(收稿日期：2021-01-02编辑:程欣)doi:10.3969/j.issn.1005-0264.2021.04.025近5年国家自然科学基金肝癌相关中医药研究项目资助情况分析*朱义文V刘汶仏1.首都医科大学附属北京中医医院（北京，100010）2.北京中医药大学关键词肝癌；国家自然科学基金；中医药；资助项目中图分类号R735.7文献标志码A肝癌是临床常见的恶性肿瘤之一。
miR-362-3p通过MAPK1
miR-362-3p通过MAPK1/PTEN/AKT信号通路调节冠心病大鼠心肌细胞凋亡和内皮细胞损伤熊纭辉1,王娟2,邓海华1摘要目的:通过构建冠心病大鼠模型,探讨微小RNA-362-3p(miR-362-3p)是否通过调节有丝分裂原活性蛋白激酶1(MAPK1)㊁蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)㊁蛋白激酶B(AKT),参与影响冠心病大鼠的心肌细胞凋亡和内皮细胞损伤㊂方法:构建冠心病大鼠模型,随即将大鼠分为健康组㊁冠心病组㊁miR-362过表达组㊁过表达阴性对照组㊁过表达+MAPK1激活组,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠冠状动脉组织病理学变化;原位末端标记测定法(TUNEL)检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中炎性相关因子及一氧化氮(NO)㊁内皮素(ET)-1等含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组大鼠冠状动脉组织中MAPK㊁磷酸化MAPK(p-MAPK)㊁PTEN㊁AKT㊁磷酸化AKT(p-AKT)信号通路蛋白表达水平㊂结果:健康组大鼠冠状动脉组织完好;与健康组比较,冠心病组大鼠冠状动脉组织增厚明显,心肌细胞凋亡率㊁血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)㊁白细胞介素-1β(IL-1β)㊁白细胞介素-6(IL-6)㊁ET-1含量及冠状动脉组织p-MAPK/MAPK㊁PTEN蛋白表达量升高,NO含量㊁p-AKT/AKT降低(P<0.05);与过表达阴性对照组比较,miR-362过表达组冠状动脉组织厚度减小,心肌细胞凋亡率及血清TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6㊁ET-1含量㊁冠状动脉组织p-MAPK/ MAPK㊁PTEN蛋白表达量降低,NO含量㊁p-AKT/AKT升高(P<0.05);与miR-362过表达组比较,过表达+MAPK1激活组冠状动脉组织增厚明显,且心肌细胞凋亡率㊁血清TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6㊁ET-1含量及冠状动脉组织p-MAPK/MAPK㊁PTEN蛋白表达量升高,NO 含量㊁p-AKT/AKT降低(P<0.05);冠心病组与过表达阴性对照组比较,各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)㊂结论:miR-362-3p 过表达可调控MAPK1/PTEN/AKT信号通路,缓解内皮细胞损伤,减轻心肌组织损伤,从而改善冠心病病情㊂关键词冠心病;微小RNA-362-3p;有丝分裂原活性蛋白激酶1;蛋白酪氨酸磷酸酶基因;蛋白激酶B;心肌细胞凋亡;内皮细胞损伤;实验研究d o i:10.12102/j.i s s n.1672-1349.2023.14.009miR-362-3p Regulates Cardiomyocyte Apoptosis and Endothelial Cell Injury in Rats with Coronary Heart Disease Through MAPK1/ PTEN/AKT Signaling PathwayXIONG Yunhui,WANG Juan,DENG HaihuaFuyong People's Hospital,Bao'an District,Shenzhen518100,Guangdong,ChinaCorresponding Author WANG Juan,E-mail:***************Abstract Objective:To explore microRNA-362-3p(miR-362-3p)regulates mitogen-active protein kinase1(MAPK1),protein tyrosine phosphatase gene(PTEN),and protein kinase B(AKT),involved in myocardial cell apoptosis and endothelial cell injury in rats with coronary heart disease.Methods:The rat model of coronary heart disease was constructed.The rats were divided into the healthy group,coronary heart disease group,miR-362overexpression group,overexpression negative control group,and overexpression+ MAPK1activation group.Hematoxylin-eosin(HE)staining was used to observe the pathological changes of coronary arteries in rats in each group.The terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling(TUNEL)assay was used to detect myocardial cell apoptosis in each group.Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)was used to detect inflammation-related factors,nitric oxide (NO),and endothelin(ET)-1in serum.The expression levels of MAPK,p-MAPK,PTEN,AKT,and p-AKT signaling pathway proteins in coronary artery tissue of rats in each group were detected by Western Blot.Results:The coronary artery tissue of the rats in the healthy group was pared with the healthy group,the coronary artery tissue of the rats in the coronary heart disease group was significantly thickened.The myocardial cell apoptosis rate,serum tumor necrosis factor-α(TNF-α),interleukin-1β(IL-1β),interleukin-6 (IL-6),ET-1content,coronary artery tissue p-MAPK/MAPK,and PTEN protein expression increased;NO content,p-AKT/AKT decreased (P<0.05).Compared with the overexpression negative control group,the thickness of coronary artery tissue in the miR-362 overexpression group was reduced,the apoptosis rate of cardiomyocytes,serum TNF-α,IL-1β,IL-6,ET-1contents,coronary artery tissue p-MAPK/MAPK,and PTEN protein expressions decreased,while NO content and p-AKT/AKT increased(P<0.05).Compared with the miR-362overexpression group,coronary artery tissue thickening was obvious in the overexpression+MAPK1activation group; cardiomyocytes apoptosis rate,serum TNF-α,IL-1β,IL-6,ET-1content,coronary artery tissue p-MAPK/MAPK,and PTEN protein expression increased;NO content and p-AKT/AKT decreased(P<0.05).Compared with the overexpression negative control group, there was no statistically significant difference in each index between the coronary heart disease group(P>0.05).Conclusion: Overexpression of miR-362-3p could regulate the MAPK1/PTEN/AKT signaling pathway,relieve endothelial cell damage,and reduce myocardial tissue damage,thereby improving the condition of coronary heart disease.Keywords coronary heart disease;microRNA-362-3p;mitogen-activated protein kinase1;protein tyrosine phosphatase gene;protein kinase B;cardiomyocyte apoptosis;endothelial cell injury;experimental study作者单位 1.深圳市宝安区福永人民医院(广东深圳518100);2.桂林医学院(广西桂林541001)通讯作者王娟,E-mail:***************引用信息熊纭辉,王娟,邓海华.miR-362-3p通过MAPK1/PTEN/AKT信号通路调节冠心病大鼠心肌细胞凋亡和内皮细胞损伤[J].中西医结合心脑血管病杂志,2023,21(14):2582-2586.冠心病是一种常见的心脏系统疾病,往往由于沉积物积聚堵塞动脉壁,造成冠状动脉堵塞引发,导致病人心肌组织损伤,产生胸部疼痛,伴随强烈的急迫感,引发呼吸急促[1]㊂目前,该疾病主要通过防治血栓类药物进行治疗,但往往难以根除疾病,需要长期服药控制缺血症状,防止动脉壁堵塞[2],故急需开发具有针对性的治疗药物缓解疾病复发㊂有丝分裂原活性蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)作为酪氨酸激酶系统,介导细胞间物质传递和各种生理反应[3]㊂有研究指出MAPK的激活在冠心病发作中发挥重要作用,可进一步加重冠心病病情;在心肌组织再灌注引发的心肌组织损伤中可加剧细胞损伤[4]㊂MAPK的激活可促进蛋白酪氨酸磷酸酶基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)的表达[5]㊂PTEN与下游蛋白激酶B (protein kinase B,AKT)共同参与细胞凋亡,PTEN可抑制AKT的表达和激活,加重心肌损伤,PTEN/AKT 通路在调控心肌损伤过程中发挥重要作用[6-7]㊂微小RNA(miRNA)是一种长度在20~23个核苷酸之间的非编码RNA,随着近年来分子生物学的进一步发展,miRNA在生物中发挥作用和具体功能被进一步揭示,可靶向调控多种基因的表达,抑制蛋白合成,从而影响生理进程[8]㊂微小RNA-362-3p(miR-362-3p)可靶向调控多种蛋白表达,从而调控细胞凋亡[9]㊂miR-362-3p也被证实可参与缓解动脉粥样硬化,抑制组织中血管平滑肌细胞的增殖和迁移[10]㊂通过TargetScan数据库对miR-362-3p进行靶基因预测,发现MAPK1为miR-362-3p潜在的靶基因㊂因此,本研究推测miR-362-3p很可能通过调控MAPK1及其下游蛋白,在治疗冠心病过程中发挥重要作用,相关机制有待明确,故通过构建冠心病大鼠模型,探究miR-362-3p是否参与治疗冠心病,并探讨其内在机制㊂1材料与方法1.1实验试剂与仪器miR-362-3p agomir及其阴性对照由吉玛生物科技有限公司设计合成,MAPK1激活剂Scutebarbatine A(货号HY-N1260)购自MCE公司,垂体后叶素(货号YM-QV7071)购自远慕生物(上海)有限公司,白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)酶联免疫吸附法(ELISA)检测试剂盒(货号ZN2877)购自百奥莱博生物科技有限公司,白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6) ELISA检测试剂盒(货号AZ0652)购自普利莱基因技术有限公司,血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)ELISA检测试剂盒(货号ZY-TNFa-Ra)购自泽叶生物科技有限公司,一氧化氮(nitric oxide, NO)ELISA检测试剂盒(货号ZK-R3046)购自深圳子科生物科技有限公司,内皮素-1(endothelin1,ET-1) ELISA检测试剂盒(货号LZ-R6682)购自上海联祖生物科技有限公司,苏木精-伊红(HE)染色试剂盒(货号C0105S)㊁DNA断裂的原位缺口末端标记测定法(TUNEL)染色试剂盒(货号C1091)购自碧云天生物科技有限公司,GAPDH抗体(货号ab9485)㊁MAPK抗体(货号ab170099)㊁p-MAPK抗体(货号ab207483)㊁PTEN抗体(货号ab267787)㊁AKT抗体(货号ab38449)购于Abcam公司,p-AKT抗体(货号9271T)购自美国CST公司,凝胶成像系统(WD-9413B),购自宝医疗器械㊂1.2动物模型的构建实验动物购自山东艾莱克生物科技有限公司[SCXK(鲁)20190007],60只清洁级SD大鼠,4月龄,体质量(160ʃ15)g,随机将大鼠分为健康组㊁冠心病组㊁miR-362过表达组㊁过表达阴性对照组㊁过表达+ MAPK1激活组,每组12只㊂健康组选用常规饲料饲喂,其余各组大鼠均选用高脂饲料饲喂㊂连续饲喂6周,除健康组外,其余各组大鼠腹腔注射垂体后叶素30μg/kg,每日1次,连续注射3d,采用心电图检测大鼠,若ST段下移且T波改变,则视为具有典型冠心病症状,用于后续实验,同期健康组大鼠注射等剂量的生理盐水㊂miR-362过表达组大鼠腹腔注射miR-362-3p agomir20nmol/kg,过表达阴性对照组大鼠腹腔注射agomir生理盐水20nmol/kg,过表达+MAPK1激活组大鼠腹腔注射miR-362-3p agomir20nmol/kg和MAPK1激活剂Scutebarbatine A5mg/kg,健康组㊁冠心病组大鼠腹腔注射等量的生理盐水,每日1次,连续注射6周㊂1.3ELISA检测血清炎性相关因子㊁血管内皮活性物质含量末次干预12h后,麻醉并处死各组大鼠,用手术剪剪开颈部皮肤,暴露颈总动脉,颈总动脉取血6mL, 4ħ,以3000r/min离心10min,取上层清液,依次按照ELISA检测试剂盒说明书方法检测炎性因子IL-6㊁IL-1β㊁TNF-α和血管内皮活性物质NO㊁ET-1的含量㊂1.4HE染色观察冠状动脉组织病理学变化各组大鼠取血后暴露心脏,切开右心耳处,缓慢灌注生理盐水至左心室,直至切口处流出清澈的液体,换用10%甲醛灌注心脏,灌注结束后分离冠状动脉,部分置于10%甲醛中固定,部分液氮处理后研磨至粉,冻存冰箱备用㊂固定12h后取出冠状动脉组织,不同乙醇梯度脱水,石蜡包埋后制作切片,切片厚度4μm,随后切片脱蜡至水,按照HE染色试剂盒说明书方法进行染色,清水洗净后梯度脱水,二甲苯透明,中性树脂封片,置于显微镜下观察㊂1.5TUNEL检测心肌细胞凋亡剥离各组大鼠心肌组织,置于4%多聚甲醛中固定,12h后取出,不同浓度乙醇梯度脱水,石蜡包埋后制作切片,切片厚度4μm,脱蜡至水,按照TUNEL染色试剂盒说明书方法进行染色,梯度脱水,二甲苯透明,中性树脂封片,置于显微镜下观察,记录凋亡细胞数,计算心肌细胞凋亡率㊂1.6蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测冠状动脉组织MAPK1/PTEN/AKT通路蛋白表达取出冻存备用的冠状动脉组织粉末,加入少量蛋白裂解液,充分振荡混匀,确保蛋白充分裂解,加入蛋白提取液,充分振荡混匀,静置片刻后离心获取上层蛋白,定量检测后加入上样缓冲液,加热变性后加入蛋白孔道中,跑胶后转膜,脱脂牛奶封闭2h,加入一抗(GAPDH抗体㊁MAPK抗体㊁p-MAPK抗体㊁PTEN抗体㊁AKT抗体㊁p-AKT抗体,1ʒ1500),4ħ孵育过夜㊂TBST清洗3次,加入二抗(1ʒ1000),室温孵育40 min,TBST清洗3次,将发光液混合后均匀倒于膜上,浸泡1min,随后取出擦干多余水分,置于Syngene光密度扫描系统进行条带灰度分析㊂1.7统计学处理使用SPSS22.0软件分析数据,定量资料符合正态分布以均数ʃ标准差(xʃs)表示,组间差异采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),两两比较采用SNK-q检验,以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1miR-362-3p过表达对大鼠冠状动脉组织病理学变化的影响健康组大鼠冠状动脉组织完整无损,细胞排列紧密,组织内膜厚度较薄;与健康组比较,冠心病组㊁过表达阴性对照组大鼠冠状动脉组织增厚明显,细胞间排列松散;与过表达阴性对照组比较,miR-362过表达组大鼠冠状动脉组织厚度明显减小,组织逐渐恢复正常,细胞排列较为紧密;与miR-362过表达组比较,过表达+ MAPK1激活组大鼠冠状动脉组织恢复缓慢,厚度未出现明显减小,细胞排列较为松散㊂详见图1㊂图1各组大鼠冠状动脉组织HE染色(ˑ400)2.2miR-362-3p过表达对大鼠心肌细胞凋亡的影响与健康组比较,冠心病组大鼠心肌细胞凋亡率升高(P<0.05);与过表达阴性对照组比较,miR-362过表达组大鼠心肌细胞凋亡率降低(P<0.05);与miR-362过表达组比较,过表达+MAPK1激活组大鼠心肌细胞凋亡率升高(P<0.05);冠心病组与过表达阴性对照组比较,细胞凋亡率差异无统计学意义(P> 0.05)㊂详见表1㊂2.3miR-362-3p过表达对内皮细胞炎症反应㊁细胞损伤的影响与健康组比较,冠心病组大鼠血清TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6㊁ET-1含量升高,NO含量降低(P<0.05);与过表达阴性对照组比较,miR-362过表达组大鼠血清TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6㊁ET-1含量降低,NO含量升高(P<0.05);与miR-362过表达组比较,过表达+MAPK1激活组血清TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6㊁ET-1含量升高,NO含量降低(P< 0.05);冠心病组与过表达阴性对照组比较,血清各项指标含量比较差异均无统计学意义(P>0.05)㊂详见表2㊂表1各组大鼠心肌细胞凋亡率比较(xʃs)组别只数细胞凋亡率(%)健康组127.43ʃ1.21冠心病组1231.52ʃ1.85①过表达阴性对照组1230.84ʃ2.14①miR-362过表达组1213.79ʃ1.38①②过表达+MAPK1激活组1224.26ʃ1.94①②③注:与健康组比较,①P<0.05;与过表达阴性对照组比较,②P<0.05;与miR-362过表达组比较,③P<0.05㊂表2各组大鼠血清TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6㊁NO㊁ET-1含量比较(xʃs)组别只数TNF-α(pg/mL)IL-1β(pg/mL)IL-6(pg/mL)NO(μmol/L)ET-1(pg/mL)健康组1228.63ʃ2.18 6.27ʃ0.5111.38ʃ0.8448.27ʃ1.34 3.51ʃ0.84冠心病组1259.26ʃ1.67①19.84ʃ1.25①52.27ʃ4.52①28.74ʃ1.06①15.27ʃ1.03①过表达阴性对照组1260.57ʃ2.04①20.06ʃ1.42①50.84ʃ3.15①29.26ʃ2.63①15.02ʃ1.26①miR-362过表达组1235.42ʃ2.14①②9.85ʃ1.06①②19.26ʃ1.72①②42.62ʃ1.26①② 5.84ʃ1.08①②过表达+MAPK1激活组1252.84ʃ2.31①②③15.38ʃ1.49①②③41.85ʃ3.26①②③34.37ʃ1.38①②③11.88ʃ1.18①②③注:与健康组比较,①P<0.05;与过表达阴性对照组比较,②P<0.05;与miR-362过表达组比较,③P<0.05㊂2.4miR-362-3p过表达对MAPK1/PTEN/AKT信号通路相关蛋白表达的影响与健康组比较,冠心病组大鼠冠状动脉组织p-MAPK/MAPK㊁PTEN蛋白表达量升高,p-AKT/AKT 降低(P<0.05);与过表达阴性对照组比较,miR-362过表达组大鼠冠状动脉组织p-MAPK/MAPK㊁PTEN蛋白表达量降低,p-AKT/AKT升高(P<0.05);与miR-362过表达组比较,过表达+MAPK1激活组冠状动脉组织p-MAPK/MAPK㊁PTEN蛋白表达量升高,p-AKT/AKT 降低(P<0.05);冠心病组与过表达阴性对照组比较,大鼠冠状动脉组织p-MAPK/MAPK㊁p-AKT/AKT㊁PTEN 蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)㊂详见表3㊁图2㊂表3各组大鼠冠状动脉组织p-MAPK/MAPK㊁p-AKT/AKT㊁PTEN蛋白表达量(xʃs)组别只数p-MAPK/MAPK p-AKT/AKT PTEN/GAPDH 健康组120.16ʃ0.030.92ʃ0.110.21ʃ0.04冠心病组120.87ʃ0.11①0.14ʃ0.04① 1.58ʃ0.26①过表达阴性对照组120.91ʃ0.12①0.12ʃ0.03① 1.62ʃ0.17①miR-362过表达组120.34ʃ0.06①②0.72ʃ0.08①②0.43ʃ0.11①②过表达+MAPK1激活组120.68ʃ0.08①②③0.33ʃ0.07①②③ 1.21ʃ0.09①②③注:与健康组比较,①P<0.05;与过表达阴性对照组比较,②P<0.05;与miR-362过表达组比较,③P<0.05㊂图2各组大鼠冠状动脉组织MAPK㊁p-MAPK㊁PTEN㊁AKT㊁p-AKT蛋白表达条带图3讨论冠心病是心脏系统中常见的一类疾病,常由于动脉壁堵塞造成心肌缺血引发损伤,最终造成病人心脏及呼吸功能异常,严重时会危及生命[11]㊂该疾病主要通过药物治疗,克服冠状动脉组织管壁堵塞从而缓解心肌损伤,冠状动脉组织病理学观察被认为是评估冠心病发病情况的重要依据[12]㊂本研究参照文献[13]方法,采用高脂饲料喂食法构建冠心病大鼠模型,以冠心病症状心电图作为造模成功标准,发现冠心病大鼠冠状动脉组织管壁增厚明显,细胞排列松散,再次表明大鼠具有冠心病症状,模型构建成功㊂有研究表明,miRNA在调控蛋白表达中发挥重要作用,利用miRNA调控疾病相关蛋白从而改善疾病的研究逐渐增多[14]㊂目前发现多种miRNA参与调控冠心病,如miR-145在冠心病病人体内表达量降低,加剧病情发作[15]㊂有研究发现,miR-362-3p可参与缓解动脉粥样硬化,减缓冠心病发作,但具体的作用机制尚未明确[16]㊂本研究推测miR-362-3p可缓解冠状动脉组织硬化,参与治疗冠心病,并通过过表达miR-362-3p 发现,大鼠冠状动脉组织管壁厚度明显变薄,表明miR-362-3p可恢复冠状动脉组织,改善疾病㊂有文献指出,冠心病可造成心肌组织损伤,引发心肌细胞凋亡,造成内皮细胞损伤,进一步加剧病情[17]㊂炎症反应与内皮细胞损伤息息相关,炎性相关因子和血管内皮活性物质在内皮细胞损伤过程中含量激增,被认为是评估内皮细胞损伤的重要标志[18]㊂本研究发现,冠心病大鼠心肌细胞凋亡率及血清TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6㊁ET-1含量升高,NO含量降低;而miR-362-3p过表达后,大鼠心肌细胞凋亡率及血清TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6㊁ET-1含量降低,NO含量升高,且冠状动脉组织趋于正常,表明过表达miR-362-3p可抑制心肌细胞凋亡,缓解内皮细胞损伤,从而治疗疾病,但具体的作用机制有待明确㊂有文献指出,MAPK可参与调控细胞凋亡,加重心肌损伤引发疾病,MAPK的激活可促进下游PTEN的表达,MAPK/PTEN通路激活在心肌重构病理过程中起负调控作用,可加剧冠心病发作[19]㊂PTEN可抑制下游AKT的表达,引发内皮损伤,MAPK1/PTEN/AKT 信号通路蛋白在心肌损伤过程中发挥重要作用[20]㊂本研究发现,冠心病大鼠冠状动脉组织PTEN蛋白表达量和MAPK磷酸化水平升高,AKT磷酸化水平降低,而miR-362-3p过表达后,PTEN蛋白表达量和MAPK磷酸化水平降低,AKT磷酸化水平升高,推测miR-362-3p可通过调控MAPK1/PTEN/AKT信号通路,参与影响冠心病病情㊂为进一步证实,本研究在miR-362-3p过表达的同时激活MAPK,发现PTEN蛋白表达量和MAPK磷酸化水平升高,AKT磷酸化水平降低,同时大鼠心肌细胞凋亡率及血清TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6㊁ET-1含量升高,NO含量降低,冠状动脉组织增厚且恢复缓慢㊂综上所述,miR-362-3p过表达可调控MAPK1/ PTEN/AKT信号通路,抑制PTEN表达和MAPK磷酸化,促进AKT激活,缓解内皮组织炎症反应,减少血管内皮活性物质,从而缓解内皮细胞损伤,减轻心肌组织损伤,改善冠心病病情㊂但miR-362-3p调控机制中是否有其他通路间接参与调控冠心病病情,还需进一步的实验加以验证㊂参考文献:[1]JENKINS D A,JACK B,ROBINSON H A,et 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神经纤维瘤病1型合并慢性髓性白血病一例及文献复习
例。
块”，诊断为 NF1，未治疗。现左侧面部纤维瘤肿块
1 病历资料
（见图 3），颈部神经纤维瘤结节（见图 4）。查体：体温
患者，男，29 岁，末次于 2020 年 6 月 18 日因“确 37.9益，脉搏 118 次/分，呼吸 20 次/分，血压 127/
诊慢性髓性白血病 6 年，继续治疗”入院。患者 6 年 76mmHg（1mmHg=0.133kPa），神清，精神尚可，右侧
经纤维瘤和咖啡斑等[1]。慢性髓性白血病是骨髓造血 板低下，对症输注红细胞、血小板。末次仍为阿糖胞
干 细 胞 克 隆 性 增 殖 形 成 的 恶 性 血 液 肿 瘤 。 检 索 苷降白细胞及对症输注红细胞、血小板收治入院。既
PubMed 只发现 3 例关于慢性髓性白血病与 NF1 共 往史：患者出生 1 周左右面部出现“肿块”，进行性增
本例患者及其母亲均罹患 NF1，但经家系调查， 患者母亲为 8 岁起逐渐发病，包括患者外祖父母在 内的其余家庭成员均无发病。根据双命中假说，肿瘤 患者抑癌基因的 2 个等位基因都失活才能发生癌 变[12]。我们认为患者母亲可能自幼携带 1 个 NF1 等 位基因突变或缺失，也可能 8 岁左右时两个 NF1 等 位基因先后或同时突变或缺失。而患者应自幼携带 两个 NF1 等位基因突变或缺失，但与其母亲不一定 完全相同，因为 NF1 基因的体细胞失活可能由不同 的突变机制引起，可能涉及基因内突变、杂合性丧失 和启动子区的表观遗传修饰。Laycock-van Spyk 等[13]
浙江中西医结合杂志 2021 年第 31 卷第 7 期 ZJITCWM（Vol.31 No.7 2021）
643
图 1 患者右侧面部肿块
图 2 患者腹部咖啡斑 图 3 患者母亲左侧面部 图 4 患者母亲颈部纤维
MAPK通路蛋白在肾透明细胞癌中的表达及意义
MAPK通路蛋白在肾透明细胞癌中的表达及意义赵为璘1,2沈西华2熊鑫1,2吉新华1丁美丽1朱星瑶1,2王永刚1李响1邹泓1,2（1.石河子大学医学院病理系/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室，新疆石河子，832002；2.石河子大学医学院第一附属医院病理科，新疆石河子，832008）【摘要】目的：探讨MAPK通路蛋白磷酸化酪氨酸磷酸化蛋白激酶（p-p38）、酪氨酸磷酸化蛋白激酶（p38）、磷酸化细胞外信号调节性激酶（p-ERK）、细胞外信号调节性激酶（ERK）在肾透明细胞癌中的表达及意义。
方法：收集石河子大学医学院第一附属医院2002-2017年肾透明细胞癌患者90例及正常肾组织患者80例，制备组织芯片2张，免疫组织化学检测p-p38、p38、p-ERK和ERK的表达，结合患者临床病理特征进行分析。
结果：（1）p-p38蛋白在肾透明细胞癌（81.7%，58/71）中较正常肾组织（54.5%，36/66）高表达，差异具有统计学意义（＜0.05）；（2）p38蛋白在正常肾组织（91.2%，62/68）中较肾透明细胞癌（59.7%，43/72）高表达，差异具有统计学意义（＜0.05）；（3）p-ERK蛋白在肾透明细胞癌（60.3%，44/73）中较正常肾组织（31.9%，22/69）高表达，差异具有统计学意义(＜0.05)；（4）ERK蛋白在正常肾组织（81.2%，56/69）中表达高于肾透明细胞癌（72.6%，53/73），但无统计学差异(＞0.05)。
结论：MAPK信号通路可能参与了肾透明细胞癌的发生发展。
【关键词】肾透明细胞癌；p-p38；p38；p-ERK；ERK中图分类号：R737.11文献标识码：AExpression and Significance of MAPK Signaling Pathway Proteins in Clear CellRenal Cell CarcinomaZHAO Wei-lin1,2，SHEN Xi-hua2，XIONG Xin1,2，JI Xin-hua1，DING Mei-li1，ZHU Xing-yao1,2WANG Yong-gang1，LI Xiang1，ZOU Hong1,2（1.Department of Pathology/Key Laboratory of Xinjiang Endemic and Ethnic Diseases,Ministry of Education,Shihezi University School of Medicine,Xinjiang Shihezi,832002;2.Pathology Department,the First Affiliated Hospital ofShihezi University School of Medicine,Xinjiang Shihezi,832008）【Abstract】Objective:To investigate the MAPK signaling pathway related protein p-p38(Phosphorylated tyrosine phosphorylated protein kinase,p-p38),p38(Tyrosine phosphorylated protein kinase,p38),p-ERK (Phosphorylated extracellular signaling regulatory kinases,p-ERK)and ERK(Extracellular signaling regulatory kinases, ERK)in differential expression and significance in renal clear cell carcinoma.Methods:90patients with renal clear cell carcinoma and80patients with normal renal tissue were collected from the First Affiliated Hospital of Shihezi University School of Medicine from2002to2017.Two tissue microarrays were prepared.Immunohistochemistry was used to detect p-p38,p38,p-ERK and ERK.The expressions of four biomarkers were combined with the clinical and pathological features of the patients.Results:(1)The expression of p-p38in renal clear cell carcinoma(81.7%, 58/71)was significantly higher than normal renal tissue(54.5%,36/66),＜0.05.(2)The expression of p38in normal renal tissue(91.2%,62/68)was significantly higher than renal clear cell carcinoma(59.7%,43/72),＜0.05.(3)The expression of p-ERK in renal clear cell carcinoma(60.3%,44/73)was significantly higher than normal renal tissue(31.9%,22/69),＜0.05.(4)The expression of ERK in normal renal tissue(81.2%,56/69)was higher than renal clearcell carcinoma(72.6%,53/73),but＞0.05.Conclusion:The MAPK signaling pathway may be involved in the development of renal clear cell carcinoma.【Key words】Renal clear cell carcinoma;p-p38;p38;p-ERK;ERK基金项目：国家自然科学基金项目（81460383，81660411）；兵团国际合作项目（2019BC001）。
MAPK信号通路在淫羊藿甙促进成骨细胞Cbfa1蛋白表达中的作用
MAPK信号通路在淫羊藿甙促进成骨细胞Cbfa1蛋白表达中的作用张秀珍;宋利格;王博【期刊名称】《中国骨质疏松杂志》【年(卷),期】2009(15)2【摘要】Objective To investigate the effect of icariin (ICA) on mitogen-activated protein kinase (MAPK) signal pathway in rat osteoblasts cultured in vitro and the role of MAPK signal pathway in the icariin-promoting expression of core binding factor-1 (Cbfa1) in osteoblasts, and to elucidate the signal mechanism of icariin on osteoblasts. Methods Calvarial osteoblasts were obtained from newborn (<24 h) SD rats by trypsin-collagenase digestion method. After 5 min, 10 min, 30 min, 60 min of treatment with icariin (10 ng/mL) or estrodial (E2) (10-8 mol/L), total protein was isolated from osteoblasts and proteins of ERK, p-ERK, P38 and p-P38 were detected by western-blot analysis. Then calvarial osteoblasts were cultured in the medium containing icariin (10 ng/mL), estrodial (10-8 mol/L) with or without u0126, SB203580 for 24 h respectively, nucleus protein was isolated from osteoblasts and protein of Cbfa1 was detected by western-blot analysis. Results 1.The protein of p-ERK in calvarial osteoblasts increased at 30 min and lasted for 60 min (P<0.05, contrast to the blank group) when treating osteoblasts with icariin(10 ng/mL); the protein of p-P38 in calvarial osteoblasts increased at 5 min and was at thepeak at 30 min, and lasted for 60 min (P<0.05, contrast to the blank group) when treating osteoblasts with icariin(10 ng/mL). 2.The protein of p-ERK in calvarial osteoblasts increased at 30 min (P<0.05, contrast to the blank group) when treating osteoblasts with estrodial (10-8 mol/L); the protein of p-P38 in calvarial osteoblasts increased at 10 min and continuously increased to 30 min(P<0.05, contrast to the blank group) when treating osteoblasts with estrodial (10-8 mol/L). 3. Both icariin and estrodial could promote the expression of Cbfa1 protein (P<0.05, contrast to the blank group) and this effect could be weakened by SB203580 or u0126. Conclusion Icariin and estrodial can activate ERK/MAPK and P38/MAPK signal pathways and promote the expression of Cbfa1 protein in osteoblasts respectively. ERK/MAPK and P38/MAPK signal pathway are involved in the processes of icariin-promoting and estrodial-promoting Cbfa1 expression.%目的观察淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响以及MAPK信号通路在淫羊藿甙促成骨细胞核心结合因子α1(core binding factor-1,Cbfa1)蛋白表达中的作用,以探讨淫羊藿甙对成骨细胞作用的信号传导机制.方法用酶消化法分离24 h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养.在培养液中加入淫羊藿甙(10 ng/mL),作用于成骨细胞5 min、10 min、30 min、60 min,抽提总蛋白,用Western blot法检测细胞中ERK、p-ERK、P38和p-P38蛋白的表达.用雌二醇(10-8 mol/L)作用于成骨细胞5 min、10 min、30 min,同上法检测细胞中ERK、p-ERK、P38和p-P38蛋白的表达.用淫羊藿甙(10 ng/mL)、雌二醇(10-8 mol/L)和u0126或SB203580单独或共同干预成骨细胞24 h,抽提核蛋白,用Western blot法检测Cbfa1蛋白的表达.结果①淫羊藿甙作用于成骨细胞,30 min时可促进ERK蛋白的磷酸化,并可持续至60 min,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05);淫羊藿甙作用于成骨细胞,5 min时即可促进P38蛋白的磷酸化,在30 min时达高峰,并可持续至60 min,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05).②雌二醇作用于成骨细胞,在30 min时可促进ERK蛋白的磷酸化,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05);雌二醇作用于成骨细胞,在10 min时可促进P38蛋白的磷酸化,并可持续至30 min,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05).③淫羊藿甙和雌二醇均能促进成骨细胞中Cbfa1蛋白的表达,和空白组相比,差异有显著性(P<0.05).u0126和SB203580可以抑制淫羊藿甙和雌二醇促进Cbfa1蛋白表达的作用.结论①淫羊藿甙和雌二醇均可以激活成骨细胞中ERK/MAPK和P38/MAPK信号通路;②淫羊藿甙和雌二醇均能促进成骨细胞中核转录因子Cbfa1的表达,并且ERK/MAPK和P38/MAPK信号通路参与了此过程.【总页数】8页(P115-122)【作者】张秀珍;宋利格;王博【作者单位】同济大学附属同济医院内分泌科,上海,200065;同济大学附属同济医院内分泌科,上海,200065;同济大学附属同济医院内分泌科,上海,200065【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.p38 MAPK信号通路在TLR4促进胰腺癌血管生成中的作用 [J], 孙运良;马建霞;满晓华;吴红玉2.Indian Hedgehog在牵张力促进成骨细胞增殖中的作用研究 [J], 韩磊;张晓玲;唐国华3.MT01对牙龈卟啉单胞菌感染成骨细胞 MG63中Ⅰ型胶原mRNA 表达的促进作用及其意义 [J], 刘引;申玉芹;高涵;费鸿博;胡天琦;李洋洋;顾中一;林崇韬4.MAPK信号通路在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的作用 [J], 张玲莉;雷乐;吴伟5.TGF-β/BMPs、Wnt和MAPK信号通路在间充质干细胞向成骨细胞分化中的作用 [J], 万晓晨;刘翠平;陈海啸;李继承因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。