第九章 植物线虫的基本研究
植物病原线虫
有些线虫的雌虫不经交配也能产卵繁殖， 进行孤雌生殖（parthenogenetical）。
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二、植物病原线虫的生态
1、线虫基本上是一类水生动物，保持水生 习性，除了休眠状态的幼虫、卵和胞囊，线虫
寄生于植物地上部:主要存活场所是病株残 体、二年生或多年生的田间病株或种瘿、叶瘿等 病变组织和种子。
线虫存活期的长短与体内贮藏的物质以及环
境有关，多数线虫的存活期可以达到一年以上，
鳞球茎茎线虫和小麦粒线虫存活期长达20~30年
之久。
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线虫病害症状
❖ 植物地上部的症状有顶芽和花芽的坏死，茎叶 的卷曲或组织的坏死，形成叶瘦或种疫等
❖ 根部受害的症状，有的生长点被破坏而停止生 长或卷曲，根上形成瘤肿或过度分枝，根部组 织的坏死和腐烂等。
❖ 多肉的地下根或茎受害后。组织先坏死，以后 由于其它微生物的侵染而腐烂。
❖ 根部受害后，地上部的生长受到影响，表现为 植株矮小，色泽失常和早衰等症状，严重时整 株枯死
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危害
已报道的植物寄生线虫5700多种。它对全世 界农业生产有很大影响，每年造成上千亿美元的 损失。
如根结线虫可以危害100多种重要的果树、 蔬菜和花卉植物，使寄主生长衰弱、根部畸形。
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形态与解剖特征
唇区
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体形和大小
差异很大，寄生人和动物的线虫有的很大，如 蛔虫；寄生植物的一般较小，长约0.3~1mm，也有长 达4mm左右的，宽为0.015~0.135mm。肉眼不易看见。 线虫细长，有的呈纺锤形，横断面呈圆形有些线虫 的雌虫成熟后膨大成柠檬形或梨形。
植物寄生线虫
属
粒线虫 属
茎线虫 属
滑刃线 虫属
特征
引起的病害
线形，垫刃型 多寄生禾本科植物的地上部，形成
食道
虫瘿。小麦粒线虫病
线形，垫刃型 内寄生线虫，可危害植物的地上和
食道
地下，引起组织坏死。水稻茎线虫
病、马铃薯茎线虫病
线形，滑刃型 危害植物的叶、芽，水稻干尖线虫
食道
病
异皮线 虫属
根结线 虫属
雌雄异型，雌 虫柠檬状残体、田间病株、种瘿、叶瘿、 等多种虫态越冬
4 、生态：
（1）大多数寄生在植物根内或土壤环境中，少数寄 生在植物的地上部
（2）多生活在耕作层内，即土表15-20厘米的土层中 线虫最多，特别是根际土壤中虫量较多。
（3）温湿度的影响 植物寄生线虫大多是活组织寄生。线虫一般
在15—30℃之间均能发育。 在40一50℃的热水中10分钟，即可杀死。 在低温和干燥条件下可促进线虫进入休眠状
滑刃线虫目： 1．滑刃线虫属：Aphelenchoides 2．伞滑刃线虫属：Bursaphelenchus 3．纤细滑刃线虫属：Rhadinaphelenchus
矛线线虫目： 1．剑线虫属：Xiphinema 2．长针线虫属：Longidorus 3．毛刺线虫属：Trichodorus 4．拟毛刺线虫属：Paratrichodorus
5 、 与其他病害的关系：
线虫和真菌、细菌、病毒共同作用，从而常引起复 合侵染病害。
（1）线虫传播植物病毒：剑线虫属、长针线虫属 和毛刺线虫属。它们能传播葡萄菱脉（扇叶）病、 芙蓉花叶病、樱桃皱叶病。美洲剑线虫 (Xiphinema americanum) 可传播烟草环斑病。
（2）线虫传播植物病原真菌：根结线虫和镰 刀菌能共同侵入香石竹和含羞草，造成枯萎 病；
线虫病害的研究
植物线虫病害的研究摘要线虫，是一类低等的无脊椎动物，通常生活在淡水、海水中，植物受线虫危害后所表现的症状与一般病害症状相似，因此，习惯上把病原线虫作为病原物来研究，本文主要从认识病原线虫、线虫病害的症状、以及怎样应用柯赫氏法则诊断植物线虫病害等方面做一简单了解。
关键词线虫病害诊断1 植物病原线虫1.1植物病原线虫的形态与结构线虫的大小差异很大。
寄生人和动物的线虫有的很大，如：蛔虫；寄生植物的一般较小，长0.3-1mm，宽0.015-0.035mm。
线虫细长呈线形，横断面呈圆形。
大多数植物线虫的体形为雌雄同型；有些线虫的体形为雌雄异型，属于这一类线虫的雌虫成熟后膨大呈梨形[1]。
线虫的虫体结构较简单，虫体有体壁和体腔。
体腔内有消化系统、生殖系统、神经系统、排泄系统等器官。
线虫的消化系统非常发达，是从口孔开始一直连到肛门的直通管道。
植物寄生线虫口腔内有一个刺针状的器官称口针，口针是植物寄生线虫的最主要标志[2]。
1.2植物病原线虫的生活史与生态线虫的生活史很简单，线虫由卵孵化出幼虫，幼虫发育成为成虫后，大多数需通过两性交配后产卵，完成一个发育循环，即线虫的生活史。
线虫的生活史中没有蛹期。
线虫基本上是一类水生动物，大多数线虫的生活史中均有一段时期是生活在土壤中的，并且大都生活在土壤的耕作层，其在土壤中的活动性也不大，植物病原线虫都是专性寄生物，只能在活的植物细胞或组织内取食和繁殖，在植物体外就依靠它体内贮存的养分存活或休眠[1]。
1.3植物病原线虫的致病性植物线虫对植物都有致病性，有的可以造成毁灭性损失。
线虫对寄主植物的致病性首先表现在其本身通过口针对寄主的细胞或组织的直接穿刺吸食和在组织内造成的创伤；但线虫对植物破坏作用最大的是食道腺的分泌物。
食道腺的分泌物主要有以下这些影响[3]：（1）刺激寄主细胞的增大，以致形成巨型细胞或合胞体；（2）刺激细胞分裂成瘤肿等畸形；（3）溶解细胞层使细胞离析；（4）抑制细胞顶端分生组织细胞的分裂；（5）溶解细胞壁和破坏细胞。
植物病原线虫的分离方法及形态观察实验
植物病原线虫的分离一、目的要求了解从土壤和植物组织中分离线虫的基本原理，掌握从土壤和植物组织中分离线虫的常用方法。
学习在解剖镜或扩大镜下用镊子、竹针、毛针、毛笔等工具从水中和滤纸上挑取线虫的方法。
二、基本原理植物寄生线虫主要存在于土壤和植物组织中，分离线虫的方法有许多，要根据线虫的种类、研究目的等来选择适宜的方法。
植物寄生线虫的个体很小，除极少数可从植物组织中直接挑出以外，绝大多数需借助特定的工具和方法才能完成。
线虫的分离主要是利用它的趋水性、大小、比重以及与其他杂质的差异，采用过筛、离心、漂浮等措施，将线虫从植物组织、土壤中分离出来。
三、材料、试剂与仪器1．实验材料感染根结线虫病的植物病根、病土、感染大豆孢囊线虫或其它孢囊线虫的病土、感染甘薯茎线虫的病薯块等。
2．仪器或实验用具解剖镜、漏斗分离装置、漂浮分离装置、浅盘分离装置、纱布或铜纱、记数皿或平皿、小烧杯、小玻管、旋盖玻璃瓶、40目和325目网筛、线虫滤纸、餐巾纸、挑针、竹针、毛针、毛笔等。
3．试剂线虫固定液。
四、实验操作1．直接观察分离对于个体较大的线虫如根结线虫、孢囊线虫、粒线虫的雌虫等，可直接用挑针从植物组织中挑取，也可在解剖镜或扩大镜观察下直接挑取，对于虫体稍小的线虫如茎线虫、粒线虫的雄虫和幼虫等，需在解剖镜下，用竹针或毛针直接挑取。
取感染根结线虫的植物病根材料（若是干材料需用水浸泡过夜），剥开皮层，观察里面是否有针头大小、乳白色发亮的颗粒状物。
用挑针挑取，置凹玻片上水滴中，在解剖镜或显微镜下观察是否为根结线虫雌虫。
2．漏斗分离法该方法操作简单，是目前从植物材料中分离线虫较好的方法。
其装置是将直径10~ 15cm 的玻璃漏斗架在铁架上，下面接一段约 10 cm 的橡皮管，橡皮管上装一个弹簧夹。
（1）将植物材料切碎用双层纱布包好，浸在盛满清水的漏斗中，或在漏斗内衬放一个用细铜纱制成的漏斗状网筛，将植物材料直接放在网筛中，分离土壤线虫时需在网筛上放一层纱布或多孔疏松的纸，上面加一层土样。
植物寄生虫-线虫
防治措施：1.加强苗木检验和培育无病苗木：为了防止此病的蔓延， 对外来苗木必需经过检验，防止病苗传入无病区及新区。
2.加强肥水管理：对病树，可根据土壤肥力，适当增施有机肥料， 并加强肥水管理，以增强树势，减轻本病的为害程度。此外，如土 壤砂质较重时，逐年改土，也能有效地减轻为害。
3.药剂处理：对成年病树，使用二溴氯丙烷有良好的防治效果。根 据树龄和土质每株使用80％二溴氯丙烷40～60毫升，对水7.5～15 公斤，在2～3月初使用。施药方法：在树干四周每隔30厘米处层层 打穴，穴深在15厘米以上，穴与穴之间的距离也为30厘米左右。将 药液按比例均匀灌人每个洞穴中，然后覆土踏实，并在洞穴表面泼
病原线虫主要是以卵及幼虫越冬。当外界 条件适合时，卵在卵囊内发育成为：龄幼 虫。1龄幼虫孵化后仍藏在卵内，经一次 蜕皮后破卵而出，成为2龄侵染幼虫，2龄 侵染幼虫侵入维管束附近为害，并刺激根 组织过度生长，形成不规则的根瘤。幼虫 在根瘤内生长发育，再经三次蜕皮，发育 成为成虫。雌、雄虫成熟后交尾产卵，卵 聚集在雌虫后端的胶质卵囊中，卵囊的一 端露在根瘤之外，每卵囊有卵300～800粒。 根结线虫一年可发生2～3代，能进行重复 侵染。
植株矮小、色泽失常、萎蔫、早衰，甚至整株死亡
如何区分寄生性和腐生性线虫
•土壤中存在大量腐生性的线虫，常常在植物根部以及植物地 下部或地上部坏死和腐烂组织内外看到的线虫，不一定是致 病性的线虫，要注意区分寄生性和腐生性线虫。 •腐生性线虫的特征主要是：口腔内没有口针，食道多为双胃 型或小杆型，尾部细长如丝状，在水中非常活跃。 •寄生性线虫的特征主要是：口腔内有口针，食道多为滑刃型 或垫刃型，尾部较钝，在水中不活跃。
香蕉穿孔线虫是迁移性内寄生线虫，寄生植物根 部，2龄及其以上各虫志均有侵染能力。在寄主 和土壤中都能完成生活史，在 24～32℃条件下， 完成1代需20～25天。香蕉穿孔线虫在休闲土壤 中只能存活12周，但有报道，在不种香蕉的情况 下，其在土壤中需5年才全部死亡，可能有替代 杂草寄主。
植物病原线虫
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在环境条件适宜的情况下，线虫完成一个 世代一般只需要3~4星期的时间，如温度低或 其它条件不合适，则所需时间要长一些。
5、线虫大都生活在土壤的耕作层中，从地面 到15cm深的土层中线虫较多，待别是在根周围土 壤中更多。这主要是由于有些线虫只有在根部寄 生后才能大量繁殖，同时根部的分泌物对线虫有 一定的吸引力，或者能刺激线虫卵孵化。
6、植物病原线虫都是专性寄生物，只能在活
的植物细胞或组织内取食和繁殖，在植物体外就
依靠它体内储存的养分生活或休眠。
❖ 雌、雄虫都是线形，滑刃型食管，口针 较长。主要危害植物的叶、芽，如引起 水稻干尖线虫病的贝西滑刃线虫
（A．bessey）。
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❖ 多肉的地下根或茎受害后。组织先坏死，以后由 于其它微生物的侵染而腐烂。
❖ 根部受害后，地上部的生长受到影响，表现为植 株矮小，色泽失常和早衰等症状，严重时整株枯 死
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危害
❖ 估计全世界主要作物每年因线虫危害损失12.3%, 达 $100 billions
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线虫的体形因类别而异。
雌雄同形的线虫其成熟雌虫和雄虫均为蠕虫形， 除生殖器官有差别之外，其他的形态结构都相似。
雌雄异形的线虫其成熟雄虫为蠕虫形，而雌虫球 形、柠檬形或肾形。
植物病原线虫
松材线虫(Bursaphelenchus
xylophilus)：松材线
虫是松树萎蔫病（Pine wilt disease）的病原，通 过介体松墨天牛（Monochamus alternatus）传播病 害。松树萎蔫病在中国、日本和韩国引起松树大面 积死亡，是毁灭性的森林病害。我国于1982年首次 在江苏南京紫金山死亡黑松上发现松树萎蔫病，由 于松材线虫发病致死速度快，传播蔓延迅速，防治 难度大，在此后短短二十多年间，松材线虫已经迅 速传播蔓延至我国12个省的113个县，使我国松林资 源与生态平衡遭到严重破坏，经济损失巨大。
线虫病害症状
植物地上部的症状有顶芽和花芽的坏死，茎叶 的卷曲或组织的坏死，形成叶瘦或种疫等 根部受害的症状，有的生长点被破坏而停止生 长或卷曲，根上形成瘤肿或过度分枝，根部组 织的坏死和腐烂等。 多肉的地下根或茎受害后。组织先坏死，以后 由于其它微生物的侵染而腐烂。 根部受害后，地上部的生长受到影响，表现为 植株矮小，色泽失常和早衰等症状，严重时整 株枯死
植物线虫的整体形态
植物线虫很小，一般300-1500 × 10-40μm;大多数植 物线虫雌雄同形，线状，虫体中部较宽，向头部和 尾部逐渐变细 少数植物线虫的成熟雌虫虫体膨大，呈香肠形、梨 形、球形、肾形或其它各样的囊状，但其幼虫和雄 虫仍保持线形 植物线虫虫体不分节，横切面圆形，并且很少有其 它附属结构
在环境条件适宜的情况下，线虫完成一个 世代一般只需要3~4星期的时间，如温度低或
其它条件不合适，则所需时间要长一些。
线虫在一个生长季节里大部可以发生若干
代，发生的代数因线虫种类、环境条件和危害
方式而不同，不同线虫种类的生活史长短差异 很大。小麦粒线虫则一年仅发生一代。 有些线虫的雌虫不经交配也能产卵繁殖， 进行孤雌生殖（parthenogenetical）。
植物线虫
• 滑 刃 型 食 管 antielenchoid oesophagus ）， 整个食管构造与 垫刃型食管相似， 但其背、腹食管 腺均开口于中食 管球腔内；
•矛 型 食 管 dorylaimoid oesophagus）， 口针强大，食 管分两部分， 食管的前部较 细而薄，渐向 后加宽加厚， 呈瓶状。
• 一种线虫在不同的发育阶段可有不同的 寄生方式。 • 有些外寄生的线虫，到一定时期可以进 入植物组织内寄生。即使是典型内寄生 的线虫，在幼虫整个进入植物体内以前， 也有一段时间是在寄主体外生活的。 • 线虫对植物的致病作用，除了直接造 成损伤和掠夺营养外，主要是线虫在穿 刺寄生时分泌的唾液中含有许多酶或毒 素，引起各种病变。
• 植物寄生线 虫口腔内有 一根骨化了 的 口 针 （stylet）， 它能穿刺植 物组织，向 内分泌消化 酶，先消解 寄主细胞中 的物质，再 吸吮入食管。
• 线虫的食管类型是线虫分 类鉴定的重要依据。 • 食管主要有三种类型 • 垫刃型食管 Aphelenchoid esophagus） • 整个食管可分为四部分， 靠近口孔是细狭的前体部， 往后是膨大的中食管球， 之后是狭部，其后是膨大 的食管腺。背食管腺开口 位于口针基球附近，而腹 食管腺则开口于中食管球 腔内；
• 诊断时应注意，植物内寄生线虫容易在 病部分离到，而根的外寄生线虫一般需 要从根围土壤中分离。 • 分离的线虫还需进行人工接种试验，完 成柯赫法则各步骤，以确定其病原性。 • 一种植物常常可以被多种线虫寄生；有 些线虫还与真菌、细菌等一起，引起复 合侵染。
线虫病害的诊断
• 由于线虫的穿刺吸食对寄主细胞的刺激 和破坏作用，植物线虫病害的症状往往 表现为植株矮小、叶片黄化、局部畸形 和根部腐烂等。 • 一般在植物的受害部位，特别是根结、 虫瘿内有线虫虫体和卵，可以直接或分 离后镜检。
植物线虫的研究和防治
植物线虫的研究和防治刘青娥1 , 曹鹏飞2(1 . 丼水学院应用生物系, 浙江丼水323000 ;2 . 浙江省丼水农业科学研究所, 浙江丼水323000)摘要就近年来的研究结果综述了植物线虫的生物学特性、危害及防治等3 个方面。
植物线虫多为线形; 生活史较简单, 包括卵、幼虫、成虫3 个时期; 传播主要依赖流水、风、农具等媒介; 具有主动侵染的特点。
植物线虫广泛寄生在各种植物的根、茎、叶、花、芽和种子上,使植物发生各种线虫病, 给农林业的发展带来了严重的危害。
目前对植物线虫的防治主要采用化学防治和生物防治2 种手段。
关键词植物线虫; 生物学特性; 化学防治; 生物防治中图分类号Q959 .171 文献标识码A 文章编号0517 - 6611( 2006)18 - 4644 - 02 Research Progress inthe Control of Plant NematodeLIU Qing-e et al ( Department of Applied Biology , Lishui University , Lishui , Zhejiang 323000)Abstract The research progress in the biological characteristics , harmand control of plant nematodes was summarized . A lot of plant nematodes wereline- type . And its life history was simple , whichincluded three phases fromegg , larva to adult . The plant nematode was transmitted by means of water ,wind and agricultural tool , etc . The plant nematode initiatively invaded the root , leaf , flower , bud and seed of the plant , which badly blockthe agricultureand forest production. At present , the main control means of plant nematode were chemical control and biological control .Key words Plant nematode ; Biological characteristics ; Chemical control ; Biological control 线虫( Nematodes) 又称蠕虫, 是一类较低等的动物, 体长仅毫米级大小, 分类上属于无脊椎动物线性动物门( Nemath elmi nt hes) 线虫纲( Nematoda) 。
植物寄生线虫 ppt
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endoparasite
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3 生活史：
虫体从卵中孵化到再次产卵的过程（3-4 周）
分为卵期、幼虫期、成虫期三个阶段。 卵—1-4龄幼虫—成虫（四次蜕皮）。
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Life Cycle of a Plant Parasitic Nematode
(provided by Ayoub, 19- 80)
地下部外寄生线虫：在土壤中借助各种虫态休眠；
地下部内寄生和半内寄生线虫：在田间病株、无性繁 殖材料、病株残体、土壤中以各种虫态越冬越夏； （根 结线虫、胞囊线虫、半穿刺线虫以卵越冬为主。）
地上部寄生线虫：病株残体、田间病株、种瘿、叶瘿、 等多种虫态越冬
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4 、生态：
（1）大多数寄生在植物根内或土壤环境中，少数寄 生在植物的地上部
雌雄异型，雌 虫梨形
危害植物根部，形成胞囊（雌虫尸 体），大豆胞囊线虫病
危害植物根部形成根结，引起多种 植物根结线虫病
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园林植物常见线虫病害
（1）万寿菊、菊花、鸢尾、百合根腐线虫病（Pratylenchus penetrans） （2）风信子茎线虫病（Ditylenchus dipsaci）起绒草茎线虫（球茎 受害，又称环病） （3）万寿菊叶枯线虫病（Aphelenchoides tagetae）滑刃线虫属
接受植物根分泌物的刺激，向根部游动的特性。
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二 、线虫分类
全球记载线虫约15000种，多数以取食细菌为主， 属于自由生活线虫，少数寄生人、动物、植物。植 物寄生线虫有2600种.
Chitwood,B.G.(1950)系统
Golden,A.M.(1971)系统
植物线虫基础知识
二、内部器官结构 1、体壁结构 2、体腔 3、消化系统 4、生殖系统 5、神经系统 6、排泄系统
体躯形态
虫体大小
虫体各部
虫体头部形态
虫体尾部形态
虫体头尾部
虫体表皮
线虫体壁结构
线虫假体腔
线虫消化系统（口针类型）
线虫繁殖系统（雌虫卵巢）
胞囊线虫生殖系统
根结线虫会阴花纹
胞囊线虫阴门锥和阴门桥
线虫雄虫交合刺
线虫神经系统
线虫排泄系统
植物线虫的生物学特性
一、世代周期
三、寄生方式
卵 幼虫 成虫 卵 1、外寄生
二、侵染循环
2、内寄生
1、初侵染源
3、半外寄生
2、侵入寄主
四、病害症状
3、定居繁殖
1、组织病变
4、扩大群体
2、植株矮小
5、扩散再侵染
五、分布和传播
植物线虫世代周期
胞囊线虫生活史
科(Family)
-idae
垫刃科（Tylenchidae）
亚科(Subfamily) -inae
垫刃亚科（Tylenchinae）
族(Tribe)
-ini
属(Genus)
不规则
垫刃属（Tylenchus）
种(Species)
不规则
戴维恩垫刃线虫（Tylenchus davainei）
种级分类阶元的名称
物种是生物分类的基本单位。 种的名称：种的名称采用双名法。即一个物种的学名由
属名和种名组成，如：Paralongidorus citri（柑橘拟
长针线虫），前者是属名，后者是种名。种名不能单独 使用，只有属名与种名组合成一个双名时，才能代表一 种动物的名称。属名首字母必须大写，种名首字母小写。 名称被引用在文章中首次出现时，种名后常附定名人姓 氏和定名年份，姓氏与年代之间用“，”隔开，它们并 不是名称的组成部分。属名和种名一般用斜体或黑体。
植物线虫名词解释
植物线虫名词解释
1. 植物线虫呀，就好比是植物世界里的小捣蛋鬼！比如说在农田里，那些让作物生长不良的家伙，很可能就是植物线虫在捣乱呢！
2. 植物线虫是一种超小的生物呢，就像我们生活中的小虫子一样。
你想想，要是蔬菜的根部有好多它们，那蔬菜还能长得好吗？这可真是让人头疼啊！
3. 嘿，植物线虫就像是隐藏在植物里的小恶魔！举个例子，当你看到花儿莫名其妙枯萎了，说不定就是它们在作祟呀！
4. 植物线虫啊，它们可是很会搞破坏的哟！就像一群偷偷摸摸的小坏蛋，在植物身体里搞小动作，让植物生病，多可恶呀！
5. 植物线虫可不简单呐，它们就如同植物的小麻烦制造者！比如家里的绿植突然没精打采的，没准就是它们在搞鬼呢！
6. 哇哦，植物线虫是那种很难发现的小淘气呢！就像在植物世界里玩捉迷藏的家伙，一旦发现植物出问题了，才意识到它们的存在，真是气人呀！
7. 植物线虫呀，简直就是植物健康的小威胁！好比是一个看不见的敌人，在悄悄损害着植物，这可怎么办才好呢？
8. 嘿呀，植物线虫不就是那些让植物遭罪的小坏蛋嘛！比如说果园里的果树长不好，很可能就是它们在捣乱呀，真烦人！
9. 植物线虫啊，它们就像是植物的小冤家！比如好好的庄稼突然减产了，说不定就是它们在背后使坏呢，太让人气愤啦！
10. 植物线虫可是不能小瞧的家伙呢！它们就跟隐藏在暗处的小怪兽似的，会对植物造成大麻烦，这可怎么得了哟！
我的观点结论：植物线虫虽然微小，但对植物的危害可不小，我们要重视它们，采取措施来防治呀！。
植物病原线虫及寄生性植物
• 侵染：种子数量很大（1万粒左右/株），种子寿命长 （在土壤中存活3~5年）。种子在土壤内无限期休眠， 受适当寄主植物根分泌物刺激才萌发，长出丝状的幼 茎在空中旋转，直到缠绕在寄主植物的茎上，再长出 吸器与寄主植物维管束系统相连。
园艺植物病虫害防治
城市1131班
• 防治：清洁种子轮作人工拔除药剂防治生物防治（菟丝子炭疽 病菌）。 • 检疫，严禁从外地调运带有菟丝子种子的种苗，是最基本的防 治措施。 • 清洁种子，作种用的种子，应彻底清除菟丝子后方能用作繁殖。 粪肥经高温处理，使菟丝子种子失去萌发能力。 • 合理轮作或间作也有一定效果，菟丝子一般不寄生禾本科作物， 如玉米、高粱、谷子等，以这些作物与大豆轮作，或与大豆间 作，玉米有屏障作用，可减轻菟丝子的发生与危害。 • 生物防治，利用寄生菟丝子的炭疽病菌制成生防菌剂，在菟丝 子危害初期喷洒，可减少菟丝子的数量并减轻危害，具有防病 增产作用。 • 人工拔除和药剂防治，菟丝子早期以营养生长为主，其吸器多 伸达皮层或终止于韧皮部，在早期进行手工拉丝防除较容易， 寄主受害也较轻，受害严重的田块应及早喷灭生性除草剂连同 寄主一起销毁。
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2、致病性
（1）、致病作用：对营养物质的争夺。 寄生性植物都有一定的致病性，致病力因种类而异。半 寄生类对寄主的致病力较全寄生要弱。 全寄生致病能力强，主要寄生在一年生植物上，可引起 寄主植物黄化、生长衰弱、严重时造成大片死亡，对产量 影响极大。 半寄生主要寄生在多年生木本植物上，寄生初期对寄主 无明显影响，后期群起较大时造成寄主生长不良和早衰， 最终亦会导致死亡，但树势退败速度较慢。 （2）、传播病毒：菟丝子。 （3）、寄生性藻类影响观赏植物外观，影响光合作用。
园艺植物病虫害防治
城市1131班
第九章 植物线虫的基本研究
植物线虫的分离 1.从植物病组织中分离线虫的方法
（1）直接解剖分离 分离根结等内寄生线虫的成熟雌虫，简单且快速，但只适 合分离病组织中虫体较大的线虫。
（2）漏斗分离
适用于分离植物材料和土壤中较活跃的线虫，方法简便，容易 操作，缺乏氧气，但不利于活动线虫的存活，分离效率低。
（3）浅盘分离 原理与漏斗法相同，但通气状况更 好，线虫容易活动，存活率高，分离效 率比漏斗法高，然而分离时间较长，所 获线虫悬浮液较脏。
无菌水漂洗，3000r/min离心3min，弃上清液，将 装有虫的离心管投入液氮中30s，用研椎研磨，加 入700μl DNA抽提缓冲液和5 μl 蛋白酶k，混匀； （2）50℃水浴4-5h；（3）加入等体积Tris饱和 酚，轻轻混匀，12000rpm，4℃离心10min，取上 清液；（4）加入等体积的氯仿/异戊醇（24:1）， 轻轻混匀，12000rpm，4℃离心10min，取上清 液；（5）加入1/10体积的3M NaAc（pH5.2）和 2.5倍体积预冷的无水乙醇，混匀，-20℃ 3h以上； （6）12000rpm，4℃离心10min沉淀DNA；（7） 用75%乙醇洗涤沉淀2次，待酒精挥发干后，用TE 溶解沉淀。
• 食真菌线虫的培养：滑刃目内一些线虫，
如松材线虫，可用灰葡萄孢培养。 • 植物组织上线虫的培养：根结线虫可直接 接种于盆载的番茄或马铃薯根上反之；短 体科内的一些线虫，如穿孔线虫、短体线 虫可在胡萝卜愈伤组织上培养；潜根线虫 可在玉米离体根上培养。
植物线虫DNA的提取
• 大量DNA提取法：（1）分离培养的纯线虫，用
（线虫比重约1.05） • 简要步骤如下： （a）40g土样中加约150ml水，混成悬浮液， 2000转/min离心5分钟； （b）弃上清液（此时线虫沉于泥土中）； （c）加入蔗糖液，马上搅匀，立即离心 （2000转/min离心5分钟）， 此时线虫分布在糖液中； （d）立即过筛，冲洗，收集线虫。 该方法快速，可分离到较多 的线虫，所获得的线虫悬浮 1.20的蔗糖液中
植物寄生线虫
线虫门：侧尾腺纲、无侧尾腺纲 植物线虫绝大多数属于侧尾腺纲 分属于4个目 垫刃目、滑刃目、矛线目（长针科）、三矛 目（毛刺科）
科、属、种的分类依据，主要是根据线虫 的食道、生殖器官、体形、头部和尾部的 形态特征。
地上部寄生线虫：病株残体、田间病株、种瘿、叶瘿、 等多种虫态越冬
4 、生态：
（1）大多数寄生在植物根内或土壤环境中，少数寄 生在植物的地上部
（2）多生活在耕作层内，即土表15-20厘米的土层中 线虫最多，特别是根际土壤中虫量较多。
（3）温湿度的影响 植物寄生线虫大多是活组织寄生。线虫一般
在15—30℃之间均能发育。 在40一50℃的热水中10分钟，即可杀死。 在低温和干燥条件下可促进线虫进入休眠状
endoparasite
3 生活史：
虫体从卵中孵化到再次产卵的过程（3-4 周）
分为卵期、幼虫期、成虫期三个阶段。 卵—1-4龄幼虫—成虫（四次蜕皮）。
Life Cycle of a Plant Parasitic Nematode (provided by Ayoub, 1980)
根结线虫（ Meloidogyne arenaria. ）的卵
Photograph courtesy N. Kokalis-Burelle, from the Compendium of Peanut Diseases.
根结线虫雄虫根Leabharlann 线 虫雌虫雌虫的卵充满胞囊
越冬越夏：
地下部外寄生线虫：在土壤中借助各种虫态休眠；
地下部内寄生和半内寄生线虫：在田间病株、无性繁 殖材料、病株残体、土壤中以各种虫态越冬越夏； （根结线虫、胞囊线虫、半穿刺线虫以卵越冬为主。）
植物线虫病害及防治
植物线虫病害及防治1、什么是植物寄生线虫？它是什么样子？线虫又称蠕虫，是一类较低等的动物，它们在自然界分布很广，种类繁多。
在淡水、海水、池沼、沙漠和各种土壤中都有存在，而其中最大量是存活于土壤及水中；也有不少类群寄生在动物上，如常见的蛔虫、钩虫等，对人畜的健康带来很大的危害；还有一些类群寄生在植物上，引起植物发生病害，这些寄生在植物上的线虫、就称为植物寄生线虫。
植物寄生线虫是植物侵染性的病原之一，它们广泛寄生在各种植物的根、茎、叶、花、芽和种实上，使植物发生各种线虫病。
植物寄生线虫绝大多数为雌雄同形，即雌雄虫均呈线状，细长透明，虫体很小。
一般体长仅1毫米，体宽0.05毫米左右，要借助解剖显微镜才能看清。
这类线虫的种类和数量都很多，分布又广泛，凡是有土壤和水的地方都有可能存在。
还有少数植物线虫是雌雄不同形状的，雌虫呈梨形、球形或囊状，而雄虫仍呈线状。
最常见的如根结线虫、胞囊线虫、肾状线虫等，它们都是最重要的病原线虫。
由于线虫是一种低等动物，虽然个体细小，但肝胆俱全。
所以，线虫虫体内部构造既简单又全面，它有发达的消化系统和生殖系统，这样才能从植物体内吸取它所需要的营养，以使自己顺利生长发育和繁衍大量后代，才能生存于自然界中。
但神经系统和排泄系统就很简单了，一般要在高倍显微镜下才能看清楚这些内部结构。
2、植物线虫怎样为害植物？有什么危害性？植物线虫和其它植物的病原不同之处在于它有主动侵袭寄主和自行移动为害的特点，它们对植物为害，除吸取寄主的营养和对植物组织造成机械损伤外，主要在于植物线虫的食道腺可分泌有毒物质，这些物质是多种消化酶，诱发寄主组织发生各种病理变化，可使植物组织细胞发育过度，形成巨型细胞，或使细胞中胶层溶解引起细胞分解，细胞壁被破坏，造成根部和皮层形成空洞及细胞死亡。
最常见的是植物细胞体积膨大，最典型的就是根结线虫为害植物后所形成的巨型细胞，结果在根上可形成大小不等的瘤叫“根结”；又如穿孔线虫为害柑桔后，使细胞壁分解，结果被害根部的皮层形成典型的空洞，最后导致根腐烂；也有的线虫分泌物则表现强烈的抑制作用，使根停止生长，植物生长受到抑制而表现矮化。
植物寄生虫-线虫
一、根结线虫属 Meloidogyne
雌、雄虫异形，即雄虫线形，雌虫梨形。具特征性 的会阴花纹。后期雌虫常将卵产在尾部体外的胶质 卵囊（eggsac）内。 该属线虫危害多种植物根部，形成瘤状根结（ root knot ），如引起多种植物根结线虫病的南方根结线 虫（ M ． incognita ）、北方根结线虫（ M ． hapla ）、 花生根结线虫（ M． arenaria）和爪哇根结线虫 （ M． javnica）等。
虫体从卵中孵化到产卵的 过程 三种虫态： – 卵 – 幼虫：4个龄期 – 成虫 生殖方式： – 有性生殖 – 孤雌生殖
寄生方式：
– 外寄生：虫体在外，仅头部刺入寄主组 织取食
– 内寄生：
• 定居型
• 迁移型
致病作用及所致病害特点
1、线虫单独为害：症状
植株顶芽、花芽的坏死 叶片卷曲
根结线虫病
症状特点：此病主要为害根部，病原线虫寄生在根皮与中柱 之间，使根组织过度生长，结果形成大小不等的根瘤。因此， 根部成根瘤状肿大，为该病的主要症状。根瘤大多数发生在 细根上，感染严重时，可出现次生根瘤，并发生大量小根， 使根系盘结成团，形成须根团。由于根系受到破坏，影响正 常机能，使水分和养分难于输送，加上老熟根瘤腐烂，最后 使病根坏死。在一般发病情况下，病株的地上部无明显病状， 但随着根系受害逐步变得严重，树冠才出现枝短梢弱、叶片 变小、长势衰退等病状。受害更重时，叶色发黄，无光泽， 叶缘卷曲，呈缺水状。
病原线虫主要是以卵及幼虫越冬。当外界 条件适合时，卵在卵囊内发育成为：龄幼 虫。1龄幼虫孵化后仍藏在卵内，经一次 蜕皮后破卵而出，成为2龄侵染幼虫，2龄 侵染幼虫侵入维管束附近为害，并刺激根 组织过度生长，形成不规则的根瘤。幼虫 在根瘤内生长发育，再经三次蜕皮，发育 成为成虫。雌、雄虫成熟后交尾产卵，卵 聚集在雌虫后端的胶质卵囊中，卵囊的一 端露在根瘤之外，每卵囊有卵300～800粒。 根结线虫一年可发生2～3代，能进行重复 侵染。
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植物线虫形态计测
• 对于比较短而直的部位，可直接在高倍光
学显微镜下，通 或通过显微绘图，将虫体画到纸上后再测 量。 • De Man公式
植物线虫的培养
植物线虫一般都是专性寄生物，很难在纯培养 基上生长，只能在相应的寄主植物上生长。 （1）消毒：培养线虫前一般先进行消毒，保 证其是无外源的。通常是用0.1%-0.5%的硫 酸链霉素泡5-15min（不同的线虫，浸泡时 间不同），再用无菌水漂洗3次。 （2）培养
根结线虫接种和为害的记载标准
接种技术
根结线虫为害的记载标准
谢谢！
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植物组织内线虫的染色
方法多种，共同特点是经过染色处理，线 虫着色，植物组织不着色或着色很浅。 （1）次氯酸钠-酸性品红染色 （2）棉蓝或酸性品红乳酚油染色法 （3）弗莱明染色液 （4）猩红R染色液
线虫的计数
• 线虫样品的计数：线虫数量不多可在小培
养皿或线虫计数皿中，在解剖镜下直接计 数；数量多时，先充分搅拌和适当稀释 后，吸取5-10ml线虫悬浮液进行计数。 • 根组织内线虫的计数：先进行染色，再在 解剖镜下计数每段根组织中的线虫数。
• FA固定液（福尔马林-冰醋酸固定液）
4:1用量 4:10用量
福尔马林（40%甲醛） 10ml 10ml 冰醋酸 1ml 10ml 蒸馏水 89ml 80ml 优点：可长时间保存线虫原形 缺点：可能使虫体颜色变暗，会使垫刃线虫的 口针变透明
• 杀死与固定同时进行
4:1的FA固定液（福尔马林-冰醋酸固定 液）加热到99℃后倒入高度浓缩的线虫悬 浮液
（4）贝曼漏斗分离 （5）浅盘分离法 贝曼漏斗，过筛，离心这三种是最基 本的分离方法。
植物线虫玻片标本的制作
1、线虫的杀死和固定 （1）热杀死：60-65℃ 约3min；线虫悬浮液 内加沸水使温度为56-58℃， 3min后防入 冰箱或室温自然降温。 （2）固定：线虫杀死后应马上固定，防止变 形和变质。
（线虫比重约1.05） • 简要步骤如下： （a）40g土样中加约150ml水，混成悬浮液， 2000转/min离心5分钟； （b）弃上清液（此时线虫沉于泥土中）； （c）加入蔗糖液，马上搅匀，立即离心 （2000转/min离心5分钟）， 此时线虫分布在糖液中； （d）立即过筛，冲洗，收集线虫。 该方法快速，可分离到较多 的线虫，所获得的线虫悬浮 液干净，但不容易获得活线虫。
• 线虫可飘浮在比重为1.12－1.20的蔗糖液中
（3）胞囊漂浮器分离法
(1)淋湿漂浮筒和下筛。 (2)漂浮简内灌满清水。 (3)在L筛中放风干土样100g左右，用强水 流冲洗，使土样全部被淋洗进漂浮筒内。进 入筒内的土粒因为轻重，逐渐沉向筒底，较 轻的胞囊和一些有机杂物则陆续向上漂浮， 经1—2min后全部漂浮于筒口水面上。 (4)经过上筛加水至漂浮筒内，使游离于 筒门表面的胞囊和杂物沿环须水槽流到下筛 (60目)上面。 (5)淋洗下筛内含有胞囊的残留物至 1000m1的三角瓶内，胞囊和杂物都漂浮在 瓶先端。 (6)用滤纸过滤，收集上述漂浮物，在滤 纸上待在。
植物线虫的分离 1.从植物病组织中分离线虫的方法
（1）直接解剖分离 分离根结等内寄生线虫的成熟雌虫，简单且快速，但只适 合分离病组织中虫体较大的线虫。
（2）漏斗分离
适用于分离植物材料和土壤中较活跃的线虫，方法简便，容易 操作，缺乏氧气，但不利于活动线虫的存活，分离效率低。
（3）浅盘分离 原理与漏斗法相同，但通气状况更 好，线虫容易活动，存活率高，分离效 率比漏斗法高，然而分离时间较长，所 获线虫悬浮液较脏。
• 食真菌线虫的培养：滑刃目内一些线虫，
如松材线虫，可用灰葡萄孢培养。 • 植物组织上线虫的培养：根结线虫可直接 接种于盆载的番茄或马铃薯根上反之；短 体科内的一些线虫，如穿孔线虫、短体线 虫可在胡萝卜愈伤组织上培养；潜根线虫 可在玉米离体根上培养。
植物线虫DNA的提取
• 大量DNA提取法：（1）分离培养的纯线虫，用
无菌水漂洗，3000r/min离心3min，弃上清液，将 装有虫的离心管投入液氮中30s，用研椎研磨，加 入700μl DNA抽提缓冲液和5 μl 蛋白酶k，混匀； （2）50℃水浴4-5h；（3）加入等体积Tris饱和 酚，轻轻混匀，12000rpm，4℃离心10min，取上 清液；（4）加入等体积的氯仿/异戊醇（24:1）， 轻轻混匀，12000rpm，4℃离心10min，取上清 液；（5）加入1/10体积的3M NaAc（pH5.2）和 2.5倍体积预冷的无水乙醇，混匀，-20℃ 3h以上； （6）12000rpm，4℃离心10min沉淀DNA；（7） 用75%乙醇洗涤沉淀2次，待酒精挥发干后，用TE 溶解沉淀。
• TAF固定液（三乙醇胺-福尔马林固定液）
福尔马林（40%甲醛） 7ml 三乙醇胺 2ml 蒸馏水 91ml 优点：短时间内可较好保持线虫的弹性 缺点：时间过长，会导致一些线虫内部结构 透明和表皮角质膜变质。
• FAA固定液（福尔马林-冰醋酸-酒精固定液）
95%酒精 福尔马林（40%甲醛） 冰醋酸 蒸馏水 优点：可保持线虫的刻线和环纹清晰 缺点：可能会使虫体洲缩变形 20ml 6ml 1ml 40ml
• 微量DNA提取法：首先配制WLB液（线虫裂解
液）；然后在载玻片上滴16 µl预冷的WLB液，挑 入3-5条线虫，用手术刀将线虫切成多段，迅速吸 取含尽量多的线虫片段的悬浮液8 µl，加到含10 µl无菌水的Eppendorf管中，再向管中加入2 µl预 冷的1 mg/mL蛋白酶K，使总体积为20 µl，迅速 放入-70 ℃冰箱10 min以上。接着将Eppendorf管 置于65 ℃恒温60 min，95 ℃恒温10 min，最后 12000 g离心0.5 min。此时即得到DNA悬浮液。
3、玻片的制作 蜡圈制作法：直径1.5cm的打孔器，端部烧 热，迅速插到低熔点的石蜡（熔点54℃） 中，将熔化的蜡尽快黏附在载玻片中央， 做成蜡圈；在蜡圈中央加一小滴甘油；将 已脱水的线虫挑入其中；加盖玻片；加热 使蜡熔化；封片。
植物线虫的染色
由于线虫透明，一些内部结构较难观 察，因此可进行染色，增强反差。 多色蓝：染色后的线虫肠呈绿色，生殖器 官与卵原细胞或精原细胞呈蓝紫色，细胞 核为浅红色，染色体为蓝紫色，其他器官 如神经环、神经细胞等呈深蓝色或深紫色。 醋酸地衣红与丙酸地衣红
2.从土壤中分离线虫 （1）直接过筛分离
• 60－100目筛，可收集到胞囊 • 325－400目筛，可收集到大多数 • •
线虫 500目，可收集到根结线虫的卵 用洗瓶冲（两面都冲），筛稍倾 斜， 使冲致一角落，用瓶或皿收集。
可在短时间内处理大量样品， 但方法粗糙，所获线虫悬浮 液较脏。
（2）离心飘浮分离
2、脱水 制作永久玻片和半永久玻片的线虫需要固定后 脱水，用于脱水的线虫必须固定24h以上。
甘油酒精脱水法： 甲溶液：酒精（95%）20ml，甘油1ml，蒸馏水79ml 乙溶液：酒精（95%）95ml，甘油5ml 取固定24h以上的线虫放进盛有甲溶液的小皿内，将 小皿放进干燥器隔板上，干燥器底部放95%酒精， 加盖后置35-40℃温箱内12-24h，取出小皿，换进 乙溶液，将小皿放进密闭的大器皿内，40℃保存3h 或更长，直至酒精完全蒸发。
第九章、植物线虫的基本研究方法
• 植物线虫的采集和保存：
应根据取样目的和具体的病害特点来制定取样计划和确定 取样方法。 1.病变组织的采集 病变部位，一般也是线虫的存在部位。如：根结，小麦粒 线虫危害引起的虫瘿等。 2.病根、根际土壤和大田土样的采集 在离地表5－20cm的根际取样，遵循少量多点的原则，每 块田取0.5－1kg土样，连同部分根系一起采集，采样时一般 采集长势较差的植物。 3.样本的保存 采样时作好记录，时间、地点、作物，大型作物挂牌。样 本保存在5－10℃冰箱，袋口扎住，稍透点气。若无冰箱，则 放在阴凉处，打开袋口，最好马上分离。