分子生物学实验室常用仪器设备简介

分子生物学实验室常用仪器设备简介
实验一分子生物学实验室常用仪器设备简介
一、实验目的
熟悉分子生物学实验室常用仪器并熟练使用二、实验原理
1.恒温空气浴摇瓶：用于对温度和振荡频率要求较高的细菌培养、发酵、杂交、生化
反应、酶和组织研究。

2、超净工作台：用于分子生物学无菌操作。

3.低温台式高速离心机：用于分离纯化DNA和蛋白质，如分离基因片段、沉淀和回收
蛋白酶等。

4、微量移液管：是连续可调的，计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。

有多种规格：①0.5-10μl②10-100μl③20-200μl④100-1000μl。

5.电泳仪：用于测定大分子物质的分子量和鉴定物种亲缘关系的仪器。

6、pcr仪：用于目的基因的扩增，是一对寡糖核苷酸引物结合到正负dna链上的靶序列两侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列dna片段。

主要用于基础研究和应用研究
等领域。

7.灭菌锅：用于对细菌、细胞培养和核酸实验中使用的试剂、器具和实验仪器进行严
格灭菌。

三、实验仪器
恒温空气浴摇床、超净工作台、低温台式高速离心机、微量移液管、灭菌罐、PCR仪、电泳仪。

四、实验步骤
（一）恒温气浴的使用：1。

将样品瓶牢固地放置在弹簧夹中
2、接通电源开关，仪器进入准备状态
3、参数设定，（设定温度、时间、转速等参数）
4.按开始键启动仪器，按暂停键暂停托盘旋转；
5.按下电源按钮，显示屏将消失，关
闭主电源开关（二）和超净工作台的使用
1、使用工作台时，先经过清洁液浸泡的纱布擦拭台面，然后用消毒剂擦拭消毒。

2、
接通电源，提前30分钟打开紫外灯照射消毒，处理净化工作区内工作台表面积
15分钟后，关闭紫外线灯并打开送风机。

3、工作台面上，不要存放不必要的物品，以保持工作区内的洁净气流不受干扰。

4、操作结束后，清理工作台面，收集各废弃物，关闭风机及照明开关，用清洁剂及消毒剂擦拭消毒。

5.最后打开工作台紫外线灯，照射消毒30分钟，关闭紫外线灯，切断电源。

（3）低温台式高速离心机的使用
1、把离心机放置于平面桌或平面台上，目测使之平衡，用手轻摇一下离心机，检查离心机是否放置平衡。

2.打开门盖，将离心管放入转子中。

离心管必须以偶数对称放置，并提前平衡。

然后用手轻轻转动转子体，使离心管架动作灵活。

3、关上门盖，注意一定要使门盖锁紧，完毕用手检查门盖是否关紧。

4.插入电源插座并按下电源开关（电源开关位于离心机背面和电源底座上方）。

5.设置转子编号、速度和时间：
在停止状态下时，用户可以设置转子号、转速、时间，此时离心机处于设置状态，停止灯亮、运行灯闪烁；按下启动离心开始
（常用，最高转速13000r/min，最长时间20分钟）；
注意：对应的转子一定要设置在相应的转速范围内，不可超速使用，否则对试管或转子有损坏。

6.当离心机的倒计时达到“0”时，离心机将自动停止。

转子停止时，打开门盖，取出离心管，关闭电源开关。

（四）、微量移液管的使用
1.将微量移液管安装在吸盘上（不同规格的移液管使用不同的吸盘）。

2.轻轻按压微量移液管按钮至第一个停止点；
3．垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液样面下几毫米，千万不要将吸嘴直接插到液体底部；
4.缓慢稳定地松开控制按钮，吸取样品溶液。

否则，液体进入吸嘴的速度过快，导致液体被吸回移液管或吸液量减少；
5.等待一秒钟后，将吸嘴提离液位
6．平稳地把按钮压到第一停点，再把按钮压至第二停点以排出剩余液体；7．提起微量移液器，然后按吸嘴弹射器除去吸嘴。

（五） PCR的使用
1、开机：打开开关，视窗上显示“selftest”。

2、放入样品管，关紧盖子。

3.如果要运行编程程序，直接按“继续”，用箭头键选择存储的程序，然后按“继续”启动程序。

4、如果要输入新的程序，则在run-enter菜单上用箭头键选择enterprogram,按《proceed》，
1）用最多8个字母命名新程序，然后按“继续”确认（如何输入字母和数字）。

2）输入程序步骤：输入名称后，确认，然后输入相关程序
5、输入完成的程序后，到run-enter菜单，选择新程序，开始运行。

6、其它：用《pause》可以暂停一个运行的程序，再按一次继续程序。

用《stop》或《cancel》可停
止运行的程序。

（六）电泳仪的使用
1．首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接，注意极性不要接反。

2．按电源开关，显示屏出现“欢迎使用dyy-12型电脑三恒多用电泳仪?”等字样后，同
时系统初始化，蜂鸣4声，设置常设置。

屏幕转成参数设置状态，根据工作需要选择稳压
稳流方式及电压电流范围。

3．确认各参数无误后，按“启动”键，启动电泳仪输出程序。

在显示屏状态栏中显示start!并蜂鸣4声，提醒操作者电泳仪将输出高电压，注意安全。

之后逐渐将输出电压加至设置值。

同时在状态栏中显示“run”，并有两个不断闪烁的高
压符号，表示端口已有电压输出。

在状态栏最下方，显示实际的工作时间（精确到秒）
4.电泳后，仪器持续显示“结束”和蜂鸣音。

此时，按任意键可停止响铃
（七）、高压灭菌锅
1.开盖：转动手轮，使锅盖离开密封圈，在盘子正下方加入蒸馏水
2、通电：将控制面板上电源开关按至on处，若水位低（low）红灯亮
3.堆放物品：无菌物品装订，体积以不大于200mm×100mm×100mm为宜。

包装之间有
间隙，堆放在金属框架内，有利于蒸汽渗透，提高灭菌效果。

灭菌时间：121℃，20min，；如果是液体，液体必须装在耐高温的玻璃器皿中，不能填充，2/3，121℃，18-20分钟
4、密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，使锅盖下压，充分压紧
5、设定时间和温度，开始灭菌
6.灭菌后，将所有物品放入干燥箱中干燥，并排空水和气体。

五、思考问题
1、列出分子生物学常用仪器的名称，用途及操作时的注意事项。

答复:① 恒温空气浴摇壶：常用于摇匀液体，培养微生物、细菌和细胞。

请注意，应
根据不同的目的设置不同的参数。

② 超净工作台：通常用于为微生物实验提供无菌操作
环境。

操作过程中注意关闭紫外线灯，以免对人体造成伤害。

③ 低温台式高速离心机：
常用于分离纯化蛋白质、病毒、细胞等，使用时不要移动离心机或打开盖子；离心机运行
时应上锁；离心管应处于平衡状态。

④ 微量移液管：测量和转移微量液体的特殊仪器。

操作过程中注意避免枪头污染；调整刻度时，不应超过最大范围；使用后，将天平调整到
最大收集量。

⑤ 电泳仪：可对不同物质进行定性或定量分析，或对某一混合物进行组分
分析，或对单一组分进行提取和制备。

在操作过程中，不要颠倒导体的极性；电泳仪在工
作状态下，避免人体与其部位接触，不同介质支架的电泳不应同时在同一台电泳仪上进行；如果在使用过程中出现任何异常，请立即切断电源。

⑥ PCR仪器：用于扩增DNA片段。

在操作过程中，注意紧盖并遵循正确的步骤。

⑦ 高压高温灭菌锅：用于灭菌消毒。

严格按
规定操作，避免发生安全事故。

实验二琼脂糖凝胶电泳的制备及核酸检测
我的实验目的
1、掌握琼脂糖凝胶电泳的原理;
2、学习琼脂糖凝胶电泳的操作。

二.实验原理
琼脂糖是一种自然聚合的长链分子，在沸水中溶解，在45℃时开始形成多孔刚性过滤孔。

凝胶孔的大小取决于琼脂糖的浓度。

dna分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。

dna分子在琼脂糖
凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。

不同dna，其分子量大小及构型不同，电泳时
的泳动率就不同，从而分出不同的区带。

琼脂糖凝胶电泳法分离dna，主要是利用分子筛
效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。

溴化乙锭（eb）未扁平状分子，在紫外照
射下发射荧光。

eb可与dna分子形成eb-dna复合物，其发射的荧光强度较游离状态eb发射的荧光强度大10倍以上，且荧光强度与dna含量成正比。

三、仪器和试剂
仪器：微量移液管、电泳仪、电泳槽、微波炉
试剂：琼脂糖：1.0%；电泳缓冲液（50×tae电泳缓冲液取tris24.2g，冰醋酸
5.7ml，0.25mol/ledta（ph8.0）20ml，加入蒸馏水至100ml）EB:5μl/100mltbe
电泳材料：标准分子量核酸（dl2000）四.操作步骤
（1）制胶（以20ml为例）
a.称取0.2g琼脂糖，加入20ml的1xtae缓冲液（ph8.0），摇匀；
b.微波炉加热，
至琼脂糖完全溶解（要防止过热溢出三角瓶）；
c、将制胶板放入制胶槽中，插入合适的梳子，将溶解的琼脂糖（约50℃）加入
2uleb中，搅拌均匀，倒入其中，直到厚度为4~6mm（如果有气泡，将其赶走），并在室
温下冷却固化（约30~45min）；
d.小心垂直向上拔出梳子,以保证点样孔完好,将胶板置于电泳槽中。

（2）点样
移液管5用微管μL将含有蓝色染料的DL2000添加到取样孔的下部。

（3）电泳
打开电源开关，调节电压至3~5v/cm(约100v)，可见到溴酚蓝条带由负极向正极移动，约30-40分钟后即可观察结果。

（4）观察
将电泳凝胶放在紫外线透射检测器上，打开紫外线灯，可以看到橙红色的核酸条带。

根据条带的厚度，可以粗略估计样本的DNA浓度。

正如电泳中有已知分子量的标准DNA一样，样品的分子量可以通过线性DNA条带的相对位置进行初步估计。

5、实验结果
点样时效果较好的照片点出的白色荧光线比较亮，条带粗细均匀；条带没有出现两端
粗中间细的情况六、思考题
1、琼脂糖凝胶电泳应注意哪些问题？
答：①eb为强致癌剂，使用时一定要戴手套，避免造成伤害。

eb废液要进行正确的
处理。

②制胶过程中要注意细节，用微波炉加热时要分三步，每步只加热十秒，且要用不
戴手套的那只手开微波炉，以免污染。

③拔梳子时要垂直向上拔出，以防破坏点样孔。

④
点样时要小心，既要将样品点到样孔里，又不至于将点样孔戳破。

⑤接电源时不可把正负
极接反。