溴化乙锭清除液
质粒提取的原理操作步骤各溶液的作用
质粒提取的原理、操作步骤、各溶液的作用细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。
各类质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情形下可持续稳固地处于染色体外的游离状态，但在必然条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞割裂传递到后代。
质粒已成为目前最经常使用的基因克隆的载体分子，重要的条件是可取得大量纯化的质粒DNA分子。
目前已有许多方式可用于质粒DNA的提取，本实验采纳碱裂解法提取质粒DNA。
碱裂解法是一种应用最为普遍的制备质粒DNA的方式，其大体原理为：当菌体在NaOH和 SDS 溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。
纯化质粒DNA的方式一般是利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。
例如，氯化铯-溴化乙锭梯度平稳离心、离子互换层析、凝胶过滤层析、聚乙二醇分级沉淀等方式，但这些方式相对昂贵或费时。
关于小量制备的质粒DNA，通过苯酚、氯仿抽提，RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA，所得纯化的质粒DNA已可知足细菌转化、DNA 片段的分离和酶切、常规亚克隆及探针标记等要求，故在分子生物学实验室中经常使用。
一、试剂预备1. 溶液Ⅰ: 50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH ，10mM EDTA(pH ）。
1M Tris-HCl<!--[if !supportAnnotations]--><!--[endif]--> (pH ）， EDTA（pH ）10ml，葡萄糖，加ddH2O至500ml。
在10 lbf/in2高压灭菌15min ，贮存于4℃。
任何生物化学反映，第一要操纵好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液。
实验室常用溶液的配制
实验室常用溶液的配制1．30%丙烯酰胺溶液【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。
加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。
用Nalgen e滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的p H值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。
【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。
称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。
可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallin ckrodt），搅拌过夜，然后用What man 1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2．40%丙烯酰胺【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。
继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3．放线菌素D溶液【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1：10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。
放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。
【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
有毒有害气体
"溴化乙锭是一种强有力的诱变剂，有毒。
有关特殊的操作和处理程序与当局安全机构联系。
避免吸入其粉末。
用含有溴化乙锭的溶液工作时要戴合适的手套。
"乙酸乙酯：咽下可致命，可因吸入或皮肤吸收而受害。
操作时戴合适的手套和安全护目镜。
切勿吸入其粉末。
在通风良好的地方使用。
"N-乙基-N'-(二甲氨丙基)-碳二亚胺(EDC)对黏膜和上呼吸道有刺激作用。
可因吸入、咽下或皮肤吸收而受害。
操作要谨慎，戴合适的手套和安全护目镜。
"甲基磺酸乙酯(EMS)是易挥发的有机试剂，是诱变剂和致癌剂。
可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。
将含有EMS的上清液和洗液要放在含有50%硫代硫酸钠的烧杯内。
清除所有接触有EMS的材料都要用大体积的10%(m/v)硫代硫酸钠处理，在操作时要格外小心。
当使用未稀释的EMS时，要戴防护手套并在化学通风橱里进行。
储存于冷处。
严禁用嘴吸取EMS，用于吸取未稀释EMS的移液管不能太热；为使EMS的挥发降至最小程度，在使用前要放到冰箱中预冷。
所有EMS接触过的玻璃制品都应浸在盛有1mol/L NaOH的大烧杯中。
"氯化铁(FeCl3)可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。
要戴合适的手套和安全眼镜并在化学通风橱内进行操作。
"甲醛(HCOH)有很大的毒性并易挥发，也是一种致癌剂。
很容易通过皮肤吸收，对眼睛、黏膜和上呼吸道有刺激和损伤作用。
避免吸入其挥发的汽雾。
要戴合适的手套和安全眼镜。
始终在化学通风橱内进行操作。
远离热、火花及明火。
"甲酰胺是一种致畸剂。
其挥发的汽雾对眼睛、皮肤、黏膜和上呼吸道有刺激作用。
可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。
戴合适的手套和安全眼镜。
当用浓的甲酰胺工作时，要始终在化学通风橱内进行。
工作液尽可能地遮盖。
"甲酸(HCOOH)毒性强，对黏膜组织、上呼吸道、眼睛和皮肤非常有害。
可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。
实验室有毒常用药品及中毒解决方法
实验室有毒常用药品及中毒解决方法实验室有毒常用药品0.溴化乙锭（EB）：大家都比较熟悉了。
具有强诱变致癌性，使用时一定要戴一次性手套，注意操作规范，不要随便触摸别的物品。
1.DEPC(焦碳酸二乙酯):闻起来香香甜甜的,可是害人不眨眼!一种强有力的蛋白质变性剂,而且怀疑是致癌剂.开瓶时将瓶子远离你,内压可导致溅泼.操作时戴合适的手套,穿工作服,并在化学通风橱里进行.2.PMSF(苯甲基磺酰氟):老板说是神经毒!!!是一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂.它对呼吸道黏膜,眼睛和皮肤有非常大的破坏性.可因吸入,咽下或皮肤吸收而致命.戴合适的手套和安全眼镜,始终在化学通风橱里使用.在接触到的情况下,要立即用大量的水冲洗眼镜或皮肤,已污染的工作服丢弃掉.3.乙腈，易挥发易燃，是一种刺激物和化学窒息剂，通风橱中远离热、火。
4.放线菌素D，是一种致畸剂和致癌剂，通风橱中操作。
5.alpha-鹅膏蕈毒环肽，具有强毒性，可能致命。
6.NN-亚甲双丙烯酰胺，有毒，影响中枢神经系统，切勿吸入粉末。
7.甲醇，有毒，能引起失明。
8.乙酸（浓的）：可能因为吸入或皮肤吸收而受到伤害，要戴手套和护目镜，最好在化学通风橱中操作。
9.过硫酸铵：对粘膜和上呼吸道、眼睛和皮肤又较大危害性，吸入可致命。
操作时戴手套、护目镜。
始终在通风橱中操作。
10.氯化铯：可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。
操作时戴手套和护目镜。
DTT: 很强的还原剂，散发难闻的气味。
可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。
当使用固体或高浓度储存液时，戴手套和护目镜，在通风橱中操作。
11.甲醛：毒性较大且易挥发，也是一种致癌剂，易通过皮肤吸收，对眼睛、粘膜和上呼吸道有刺激和损伤作用。
避免一如其挥发的气雾。
戴手套和护目镜。
始终在通风橱中操作。
远离热、火花及明火。
12.TRIzol ，对眼睛有刺激性，腐蚀皮肤。
有一次不小心溅出一小滴在脸上，马上就红了，过一会儿感觉到疼，一周之后才好。
溴化乙锭溶液(EB,1mgml)
北京雷根生物技术有限公司
溴化乙锭溶液(EB,1mg/ml)
简介：
溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)分子式为C 21H 20BrN 3，分子量为394.31，是一种非常灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA ，302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号。
溴化乙锭具有一定的毒性，实验结束后应对含EB 的溶液进行净化处理再行弃置，避免污染环境。
组成：
自备材料：
1、 电泳缓冲液(如TAE 、TBE 等)
2、 微波炉
3、 紫外分析仪或凝胶成像系统
操作步骤(仅供参考)：
1、 将50ml 琼脂糖凝胶溶液在微波炉中融化。
2、 加入 Ethidium Bromide(1mg/ml)，轻轻摇匀避免气泡。
3、 冷却不烫手时倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固，拔出梳子并置于电泳缓冲液中，上样电泳。
4、 紫外分析仪或凝胶成像系统下观察并拍照或记录。
注意事项：
1、 凝胶厚度一般不超过0.5cm ，凝胶太厚会影响检测的灵敏度。
2、 通过凝胶电泳回收DNA 片段时，应避免长时间暴露于紫外线下。
3、 EB 有一定毒性，对皮肤、眼睛有一定刺激，请小心操作。
4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：24个月有效。
编号 名称 NA0089 Storage Ethidium Bromide(1mg/ml) 10ml RT 避光 使用说明书 1份。
EB溴化乙锭清除去除剂
「保护环境，关爱健康，生物实验室必备」
EB溴化⼄乙锭清除/去除剂
EB：化学全名（溴化乙锭）是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA，RNA。
溴化乙锭的损害：EB染料可以嵌入碱基分子中，导致错配。
溴化乙锭是强诱变剂，具有高致癌性（引用分子克隆原文）！
试剂说明：
该试剂由三种成分组成，按照使用说明书将这三种成分按比例配置成工作液喷洒，浸泡说明书要求处理各种缓冲液，有机溶液，固体表面（玻璃，不锈钢，塑料，地板，设备）尤其是实验室EB污染区的各个角落，实现EB污染的彻底清理。
处理结果可检测。
溴化乙锭溶液的一般净化处理：
由于溴化乙锭具有一定的毒性，实验结束后，应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置，以避免污染环境和危害人体健康。
(1) 对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下处理：
1、将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5mg/ml；
2、加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4，混匀，再加入等量的2.5mol/L HCl，混匀，置室温数小时；
3、加入一倍体积的2.5mol/L NaOH，混匀并废弃。
(2) EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下处理：
1、按1mg/ml的量加入活性炭，不时轻摇混匀，室温放置1小时；
2、用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。
EB替代品：
super sybr
gelred
gle green
goldview
ADNAgreen
Sybrgreen
EB溶液。
实验室常用溶液配置
实验室常用溶液配置 1.30丙烯酰胺溶液【配制方法】将29g丙烯酰胺和1gNN-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。
加热至37℃溶解之补加水至终体积为100ml。
用Nalgene滤器0.45μm孔径过滤除菌查证该溶液的pH值应不大于7.0置棕色瓶中保存于室温。
【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收其作用具累积性。
称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。
可认为聚丙烯酰胺无毒但也应谨慎操作因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂MB-1Mallinckrodt搅拌过夜然后用Whatman1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2.40丙烯酰胺【配制方法】把380g丙烯酰胺DNA测序级和20gNN-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml 的蒸馏水中。
继续按上述配制30丙烯酰胺溶液的方法处理但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
【注意】见上述配制30丙烯酰胺的说明40丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3.放线菌素D溶液【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml100乙醇中1:10稀释贮存液用100乙醇作空白对照读取OD440值。
放线菌素D分子量为1255纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21900故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中保存于-20℃。
【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作而不能在开放在实验桌面上进行谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。
只要通过测量贮存液在440nm 波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度这类制品便可用于抑制自身引导作用。
4.0.1mol/L腺苷三磷酸ATP溶液【配制方法】在0.8ml水中溶解60mgATP用0.1mol/LNaOH调至pH值至7.0用蒸馏水定容1ml分装成小份保存于-70℃5.10mol/L乙酸酰溶液【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中加水定容至1L后过滤除菌。
实验室安全考试——新生安全类
1.蒸馏时加入沸石可防止爆沸，所以加入量越多，效果越好。
F2.任何电气设备在未验明无电之前，一律认为是（有电）。
3.防止电气危害的措施错误的是（使用多插头适配器）。
4.波长在可见光范围内，光的辐射功率在1 mW内的激光属于（2级激光）。
5.哪级激光可能使易燃物起火燃烧？（4级激光）6.下列哪项措施不能用于激光的防护？使用反射材料7.相同成分的物质，超细颗粒或纳米粒子的毒性比体材料的毒性（大）8.出现机械事故，应该立即（关闭设备电源）。
9.下列哪种射线穿透能力最强？γ射线10.下列那种材料对γ射线的阻隔效果最好？铅11.进行放射性实验时，下列做法不正确的是（实验操作应由一个人完成）。
12.胚胎和胎儿对射线的敏感度比成人要（高）13.万一发生人员触电事故，首先应（切断总电源或用绝缘体挑开导线）。
14.防护噪声不能使用的手段是（敞开门窗）15.实验室使用的润滑油、真空泵油等在环境中的降解（很难）16.防止电磁辐射和电离辐射对环境的危害的最简单和有效的方式是（屏蔽）。
17.下列措施中，哪种不能对机械危害有好的防护作用？有足够近的距离以便操作机器18.下列做法错误的是（）。
使用泡沫灭火器扑灭电器着火19.当机械在运行中出现故障是应该（）。
立刻关掉电源，让机器完全停止后再检查20.纳米材料与普通材料正确的说法是（）。
有物理或化学性质方面的变化21.激光对人体的伤害说法错误的是（）。
可能损失智力22.进入实验室开始实验时，下列做法错误的是（）。
抓紧时间做实验23.当实验室出现自己无法处理的危险时，应当（）。
马上示警并迅速脱离危险24.在纳米材料实验室里，不允许（）。
喝水、吃食物25.在使用低温液体时，一般应穿着什么样的服装？宽松的棉质服装26.装有低温液体的容器，最大限量能够装载容器体积的（）。
0.827.干粉灭火器正确的使用步骤是（）。
拔掉保险栓，喷嘴对准火苗根部，按下把手上的开关28.实验室安全，必须做到（）。
EB清除液
EB 清除液简介：EB 清除液(EB Erasol)又称EB 清除剂或去除剂，是专用于清除Ethidium Bromide 污染的产品。
EB Erasol 能有效破坏溴化乙锭的分子结构、消除EB 荧光，减少对后续实验的影响，同时使EB 致癌突变性降低99%以上，保障科研人员和环境的安全。
Leagene EB Erasol 作用原理是通过与EB 分子中的氨基反应和断开EB 分子中含氮杂环而有效破坏EB 的分子结构，达到去除EB 污染的目的，专用于清除溶液和物体表面污染的溴化乙锭。
主要用于处理含EB 污染的水、氯化铯溶液、电泳缓冲液(TAE 、TBE 、MOPS 等)、有机溶剂(异丙醇、乙醇、异戊醇、异丁醇等)和受污染的多种物体表面(玻璃、塑料、不锈钢、地板、设备等)的EB 污染。
组成：操作步骤(仅供参考):(一)清除水溶性溶液(如水、Tris 、MOPS 、氯化铯等)中的EB1、用水将需要清除的溶液稀释，使EB 浓度低于0.5mg/ml(如果EB 浓度已经低于1mg/ml ，则省略该稀释步骤)。
2、按试剂(A):试剂(B):水溶性溶液=1:2:97的比例，将A solution 和B solution 先后加入到溶液中(由于溶液混合初期会产生少量有害气体，整个操作须在化学通风橱中小心操作)。
3、搅拌，室温静置。
4、用饱和碳酸氢钠溶液中和使其pH 变为中性。
5、检查消除程度，弃液。
(二)清除氯化铯饱和的异丙醇中的EB1、用水将氯化铯饱和的异丙醇溶液稀释，使EB 浓度低于1mg/ml(如果EB 浓度已经低于1mg/ml ，则省略该稀释步骤)。
2、按试剂(A):试剂(B) =1:2的比例混合，即为EB Erasol 工作液。
3、按氯化铯饱和的异丙醇溶液:EB Erasol 工作液=1:4的比例，加入新鲜配制的EB Erasol 工作液，室温搅拌。
4、用饱和碳酸氢钠溶液中和使其pH 变为中性。
编号 名称NZ0001 50T NZ0001 100T Storage试剂(A): EB Erasol A solution 50ml 100ml RT 试剂(B): EB Erasol B solution 100ml200ml RT使用说明书1份5、检查消除程度，弃液。
实验室常用溶液的配制
实验室常用溶液的配制1．30%丙烯酰胺溶液（100ml）【配制方法】将29g丙烯酰胺和1gN,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的蒸馏水中。
加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。
用Nalgene滤器（μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于，置棕色瓶中保存于4℃温度。
【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。
称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。
可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸，因此大于1年的溶液应该被丢弃。
2．40%丙烯酰胺（用于DNA测序，1L）【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20gN,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。
继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
置棕色瓶中保存于室温。
【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3．L腺苷三磷酸（ATP）溶液（1ml）【配制方法】在蒸馏水中溶解60mgATP，用LNaOH调至pH值至，用蒸馏水稀释1ml【注意】分装成小份保存于-70℃4．10mol/L乙酸铵溶液（1L）【配制方法】把770g乙酸铵溶解于800ml蒸馏水中，加水稀释至1L后过滤除菌。
在4°C储存。
【注意】乙酸铵是热不稳定的。
不要高压灭菌。
5．10%过硫酸铵溶液（10ml）【配制方法】把1g过硫酸铵溶于8ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至10ml。
该溶液可在4℃保存数周。
6．1mol/LCaCl2溶液（200ml）【配制方法】称取54gCaCl2·6H2O并溶解在170ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至200ml。
溴化乙锭清除剂
溴化乙锭清除剂EB Erasol货号：E1027保存：室温保存及运输，有效期至少一年。
产品内容包装溶液A100mL溶液B2×100mL说明书1份产品说明：本产品通过与溴化乙锭(EB)分子中的氨基反应和断开EB分子中的含氮杂环而有效破坏EB的分子结构，达到去除EB污染的目的，适用于清除溶液和物体表面污染的EB。
主要特点如下：1.能消除EB的荧光，并使其致突变性降低99%以上。
2.适用范围广泛，可用于含EB污染的水、氯化铯溶液、电泳缓冲液（TAE、TBE、MOPS等）、有机溶剂（乙醇、异丙醇、异戊醇、异丁醇等）和受污染的多种物体表面（玻璃、不锈钢、塑料、地板、紫外滤光片等）。
3.使用简单、方便、迅速。
4.无色或浅黄色透明液体、无毒但有腐蚀性和刺激性气味。
5.本品暴露于空气中的时间不宜过长，使用完毕请立即密封、保存于避光、通风处。
操作步骤：一：清除水溶性溶液（如水、Tris、MOPS、氯化铯等）中的EB1.用水将溶液稀释使其EB浓度低于0.5mg/mL(如果EB浓度已经低于0.5mg/mL，直接进行下一步操作)。
2.按溶液A:溶液B:被污染溶液=1:2:100的比例将溶液A和溶液B先后加入到溶液中(由于溶液混合初期会产生少量有害气体，所以整个操作必须在化学通风橱中小心操作)。
3.搅拌五分钟。
室温静置20小时，用自备的饱和碳酸氢钠溶液中和使其pH变为中性。
4.检查清除程度，弃废液。
二：清除氯化铯饱和的异丙醇中的EB1.用水将氯化铯饱和的异丙醇溶液稀释使其EB浓度低于1mg/mL(如果EB浓度已经低于1mg/mL，直接进行下一步操作)。
2.按氯化铯饱和的异丙醇溶液:EB Erasol工作液=1:4的比例加入新鲜配制的EB Erasol工作液(配制方法见五)，室温搅拌20小时。
3.用自备的饱和碳酸氢钠溶液中和，使溶液pH为中性。
4.检查清除程度，弃废液。
三：清除异戊醇和丁醇中的EB1.用水将溶液稀释使其EB浓度低于1mg/mL(如果EB浓度已经低于1mg/mL，直接进行下一步操作)。
一种简单有效的去除植物DNA中多糖等杂质的方法
图5 菌株B60的分生孢子的形态特征(×1000)Fig.5 C onidial of B60strain(×1000)3 讨论目前已经对上百种植物的内生菌进行了研究,涉及藻类、针叶树、灌木和草本[14]等多个类群,其中研究较多的植物有牧草、棉花、小麦、高粱、水稻、玉米、马铃薯、甘蔗、甜菜、番茄、黄瓜、柠檬、香蕉等。
目前分离的内生细菌主要包括芽孢杆菌属(Bacillus)、土壤杆菌属(Agrobacterium)、黄单孢菌属(Xan2 thomonas)、假单孢菌属(P seurlomonas)、肠杆菌属(Enterobacter)、及棒状杆菌属(Corynebacterium)和节杆菌属(Arthrohacter)等。
在甘草内生细菌的研究中,饶小莉[15]在甘草中得到分离率较高的内生细菌有芽孢杆菌属(Bacillus)、黄单孢菌属(Xan2 thomonas)、假单孢菌属(P seudomonas)、类芽孢杆菌属(paeniba2 cillus)及短小杆菌属(Curtobacterium),其中芽孢杆菌属出现的频率最高,约占30%。
龚明福[16]分离的内生细菌有气芽孢杆菌属(Aerobacillus)、气单胞菌属(Aeromonas)、芽孢杆菌属(Ba2 cillus)、黄单孢杆菌属(Xanthomonas)、假单胞杆菌属(P seudo2 monas)、土壤杆菌属(Agrobacterium)。
本实验也从甘草植株的根茎叶中分离到了大量内生细菌,与饶小莉和龚明福相同的内生细菌有:芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞杆菌属(P seudo2 monas)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)。
在已研究的甘草内生细菌中,分离到的优势菌群都为芽孢杆菌,这可能与芽孢杆菌的有较强生活能力和适应能力有关。
另外,许多内生细菌属于兼性内生,它们不仅存在于植物内部,也常见于土壤,如假单胞菌(P seudomonas)、芽孢杆菌(Bacillus)、肠杆菌(Enterobacter)、土壤杆菌(Agrobacterium)、沙雷氏菌(Serratia)、产碱菌(Alcali2 genes)等研究者认为,根际土壤是植物内生细菌的主要来源。
浅谈县级兽医实验室废弃物的处理
2019年第05期随着世界畜禽疫病的复杂多变，尤其是畜禽传染病毒株的变异，疫病的诊断光靠临床已经满足不了疫病防控的需要，所以实验室确诊迫在眉睫，进而如何正确处理实验室废弃物是一个非常重要的问题。
实验室废弃物一般包括化学废弃物；气体废弃物；固体废气物，本文对自己在实验室十年的工作中如何处理废弃物作如下总结，与同行们共勉。
1实验室一般化学废弃物（化学废液）的处理实验室化学废液产量大，处理任务重，是三废处理中的重要环节。
废液处理必须分类收集、安全存放，严禁随意排放。
在废液桶（池）上将废弃物的详细情况，如废弃物的成份、含量、性质、收集日期、负责人等信息填写在废液收集单上，贴上标签，由专职人员定期交由学校回收处理。
2实验室气体废弃物（废气）的处理对少量的有毒气体可通过通风设备（通风橱或通风管道）经稀释后排至室外，通风管道应有一定高度，使排出的气体易被空气稀释。
大量的有毒气体必须经过处理，如吸收处理或与氧充分燃烧，然后才能排到室外，如氮、硫、磷等酸性氧化物气体，可用导管通入碱液中，使其被吸收后排出。
对生物安全柜、超净工作台、紫外灯等采用紫外臭氧杀菌的设备，由于臭氧分解的半衰期为20～50min，因此消毒结束后，需关闭紫外灯至少0.5h 以上再进行无菌操作实验。
3实验室固体废气物（废渣）的处理对固体废弃物的处理，同废液处理类似，需根据其性质进行分类收集处理，禁止随意混合存放。
其中，需特别注意的事项如下：存放实验废弃物必须使用标记有“医疗废物”的专用黄色塑料袋，存放生活垃圾必须使用黑色塑料袋。
使用过的微生物、细胞等培养材料的固体废弃物，如：培养基、培养瓶、培养皿、培养板等需经过有效的消毒处理（如高压蒸汽灭菌30min、或有效氯溶液浸泡2~6h ）后方可丢弃或清洗。
鉴于溴化乙锭（EB）的强诱变性，研究院不鼓励使用EB 染料，建议选用毒性小的新型替代染料（如荧光染料、花箐类染料等）。
如果一定要使用EB，则EB 污染过的废弃物严禁随意丢弃，必须经过有效的净化处理（如使用专业的EB 清除剂或采用活性炭吸附、氧化使其失活等方法）。
毒麻药残余液处理流程
毒麻药残余液处理流程一、前言随着科技和医疗的进步，越来越多的毒麻药物被应用于临床治疗和研究工作中。
然而，这些药物在使用过程中产生的毒麻药残余液带来了环境和人体健康的潜在风险。
因此，对毒麻药残余液的处理成为一项重要的工作。
二、毒麻药残余液的分类毒麻药残余液主要包括两种类型：一种是医疗废物中产生的药物残余液，主要是来自医院、临床试验机构、药企等单位；另一种是实验室中产生的实验废液，主要是来自科研单位、高校实验室等。
医疗废物中的药物残余液主要包括医院输液袋、注射器、药瓶等医疗器械使用后的废弃物；实验室中的实验废液主要包括实验用药物的废弃物、溶液、培养基等。
三、毒麻药残余液的危害1. 对环境的危害：毒麻药物残余液如果未经适当处理直接排放到环境中，容易造成地下水和土壤的污染，对生态环境造成潜在的危害。
2. 对人体健康的危害：毒麻药物残余液如果接触到人体，可能会对人体健康造成慢性或急性的影响，甚至有致癌的危险。
四、毒麻药残余液处理的原则1. 安全性原则：处理过程中要确保操作人员的安全，并防止毒麻药物残余对周围环境和人体造成危害。
2. 环保原则：处理过程中要遵循环保法规和相关规定，确保不对环境造成污染。
3. 经济性原则：处理过程中要考虑成本效益，尽量降低处理成本。
五、毒麻药残余液处理流程1. 收集和分类首先需要对医疗废物和实验液体进行分类和收集。
将医疗废物中的药物残余液和实验废液分别分类存放，并标注好容器的内容和特性。
2. 预处理针对不同性质的毒麻药残余液进行预处理，主要包括稀释、中和等处理方式，以降低其对环境和人体的危害。
3. 处理处理方式主要包括化学处理、热处理、生物处理等方式。
化学处理主要是利用化学方法将药物残余液中的有害物质转化为无害物质。
热处理主要是通过高温将药物残余液中的有害物质分解和破坏。
生物处理主要是利用微生物等生物体对药物残余液进行降解和清理。
4. 储存和运输经过处理后的毒麻药残余液需要进行储存和运输。
化验室医疗废物处置办法
据有关法律法规的要求，对化验室医疗废物的处理要遵循以下原则：将操作、收集、运输、处理及处置废物的危险减至最小；将其对环境的有害作用减至最小；只可使用被承认的技术和方法处理和处置危险废物；排放符合国家规定和标准的要求。
具体的处置方法是这样的：一、固体废气物（废渣）的处理1、存放实验废弃物必须使用标记有“医疗废物”的专用黄色塑料袋，存放生活垃圾必须使用黑色塑料袋。
2、使用过的微生物、细胞等培养材料的固体废弃物，如：培养基、培养瓶、培养皿、培养板等需经过有效的消毒处理（如高压蒸汽灭菌30min、或有效氯溶液浸泡2-6h）后方可丢弃或清洗。
3、鉴于溴化乙锭（EB）的强诱变性，研究院不鼓励使用EB染料，建议选用毒性小的新型替代染料（如荧光染料、花箐类染料等）。
如果一定要使用EB，则EB污染过的废弃物严禁随意丢弃，必须经过有效的净化处理（如使用专业的EB清除剂或采用活性炭吸附、氧化使其失活等方法）。
二、生物废弃物的处理1、生物废液的处理生物类废液主要有微生物（多为细菌或酵母菌）及细胞培养液、培养基、或废弃的实验动物血液标本等。
生物类废液则需经有效消毒（高压蒸汽灭菌）后方可处理。
装生物废液的可重复利用耗材，用1g/L 有效氯浸泡2-6h，洗涤，用时再蒸汽灭菌。
2、动物尸体的处理动物实验结束后的动物尸体需装入标记有“医疗废物”的黄色塑料袋内，并放至实验动物中心专用动物尸体冷冻柜中保存，由实验动物中心定期统一处理。
动物实验中所使用的一次性手术器具（如注射器、针头、输液管等）严禁混入动物尸体收集袋内，必须分开处理。
3、锐器及其他医疗废物处理实验中使用的注射器、针头、输液器、手术刀、刀子及破碎玻璃等锐器不应与其他废弃物混放，必须稳妥安全地置入锐器容器中。
盛放锐器的容器必须是不易被刺破的，而且不能将容器装得过满，锐器容器的标签上应该清楚标明：“锐器废弃物”。
丢弃锐器及其他相关医疗废物时应放入黄色塑料袋中，由实验室管理人员统一定期交由专业医疗废物回收公司处理。
溴化乙锭的染色原理
溴化乙锭的染色原理溴化乙酰胺（常简称为溴化乙锭）是一种常用的组织染色剂，广泛应用于生物医学领域中。
其染色原理主要涉及到溴离子的释放、沉淀和胺基化反应等环节。
首先，溴化乙锭在水溶液中可迅速释放溴离子（Br-）和乙锭阳离子（EtNH3+）。
溴离子是一种氧化剂，可以与血红蛋白中的亚硝酸根（NO2-）发生反应，氧化为亚碘酸根（IO3-）。
血红蛋白中的亚硝酸根来自于细胞内一氧化氮（NO）和亚硝酸（HNO2）的反应产物。
溴化乙锭的染色机制即基于以上反应过程。
首先，染色前的组织标本经过固定、脱水和透明化等处理，然后被浸入含有溴化乙锭的染色液中。
染色液中的溴化乙锭溶液会快速地附着在组织标本的细胞核和其他细胞成分上。
在这个过程中，溴化乙锭中的溴离子会与组织标本中的亚硝酸根发生反应，生成亚碘酸根。
这样，通过溴化乙锭的染色，可以使细胞核和其他成分显现出棕色至黑色的沉积物。
重要的是要注意，溴化乙锭染色只是一种显示亚硝酸根存在的方法，并不直接显示细胞核或其他细胞成分。
因此，溴化乙锭染色通常会与其他染色方法结合使用，从而更全面地展示组织结构。
此外，溴化乙锭的染色原理中还涉及到胺基化反应。
溴化乙锭中的乙锭阳离子具有亲和力，可以结合到组织中的胺基。
这一特性使得溴化乙锭染色在组织学研究中特别有价值，因为它可以用来显示组织中胺基含量丰富的结构，如神经元。
胺基化反应还可以使溴化乙锭的染色结果更加稳定，因为乙锭阳离子与胺基的结合很难被溶液中的其他物质竞争性地解离。
总的来说，溴化乙锭的染色原理主要取决于溴离子的释放、沉淀和胺基化反应等过程。
它通过与亚硝酸根发生反应产生亚碘酸根，使组织标本中的细胞核和其他成分显现出棕色至黑色的沉积物。
此外，溴化乙锭还能与组织中的胺基发生结合，使染色结果更加稳定。
溴化乙锭的染色方法常与其他染色方法结合使用，以全面地展示组织结构。
电泳拖尾原因
1、可以考虑是不是样品不纯，目的产物与杂带相差不大，所以要多跑一段时间才有尾巴。
参考marker,marker应该不会有。
如果有的话说明配胶有问题。
2 、琼脂糖检测DNA一般去1~5微升原液，加2微升溴酚蓝便可，注意上样浓度；3、可能是原液浓度太大造成的；4、可能DNA已降解。
5、在提取前对样品进行一定的脱腐处理呀。
很简单。
有一种TENP buffer，文献中查的到的。
6、 DNA降解避免核酸酶污染。
7、 DNA上样量过多??减少凝胶中DNA上样量。
8、所用电泳条件不合适??电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃,巨大DNA 链，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。
9、 DNA样含盐过高??电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。
10、有蛋白污染??电泳前酚抽提去除蛋白。
11、 DNA变性，?电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。
12、电泳缓冲液的PH根据片段的大小选择合适的胶浓度和电压，胶要完全凝好再用（微微发白）13、根据目的条带大小，选作不同浓度的胶，这个很重要，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。
一般是1%的。
煮胶时，沸腾3次以上，煮胶一定要均匀，加入尽量少的EB或核酸染料。
14、点样前，先把胶放在槽里，空跑10分钟，预电泳，让电泳液均匀。
15、预电泳后，先冲洗胶孔，点样时样品要被垂直点如，在胶孔中来回移动，使样品均匀进入。
16、电泳的电压根据电泳槽选定，别太大，不然会出现微笑型条带注：凝胶回收DNA实验的关键在哪里?参考见解：最关键的是切胶之后,溶胶的那一步.切胶的时候要尽量把多余的琼脂糖凝胶切干净,按照实验步骤,第一步应该是将胶充分的溶化.这以后步一定要做充分,保证凝胶已经完全溶解了.加乙醇这步也很关键，当凝胶溶解后最好多过几次柱子。
还有就是洗脱的那一步。
洗脱的时候最好用加热到60度的洗脱液洗脱，如果实在效果不好可以分两次洗脱。
GoldView Ⅰ型核酸染色剂使用说明
GoldViewⅠ型核酸染色剂使用说明货号：G8140规格：1.0ml（10000×）保存：常温保存，有效期至少一年。
产品介绍：GoldViewⅠ是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型DNA染料，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
在紫外灯下双链DNA呈现绿色荧光，而单链DNA呈红色荧光。
通过小鼠皮下注射实验，尚未发现GoldViewⅠ有致癌作用；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。
因此用GoldViewⅠ代替EB不失为一种明智的选择。
使用方法：将100ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）放入微波炉中融化，冷却至60℃左右（不烫手时）后加入10ul GoldViewⅠ核酸染料，轻轻摇匀后倒胶（避免产生气泡），待胶完全凝固后上样电泳，电泳完毕在紫外灯下观察。
注意事项：1、胶厚度宜不要超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。
2、加入GoldViewⅠ的琼脂糖凝胶反复融化可能对DNA检测的灵敏度产生一定影响，但不明显。
3、GoldViewⅠ在pH3.6-7.0之间能更好地与核酸结合，因此电泳时最好使用新鲜的电泳缓冲液。
4、由于GoldViewⅠ产生绿色荧光，因此不适于用一般单色胶卷拍照，可以使用凝胶成像系统保存图像。
5、含有GoldViewⅠ的凝胶不适于进行凝胶回收实验。
要进行回收实验，请使用EB或GoldViewⅡ型。
6、GoldViewⅠ特别适合于大片段DNA的检测(大于1kb的片段,检测灵敏度与EB相当);当DNA片段小于1kb时,检测灵敏度低于EB,特别是低于500bp的片段,GoldViewⅠ型可能亮度很弱或检测不到。
如果检测小片段的DNA,请选用GoldViewⅡ型核酸染色剂,该染色剂适合于检测所有片段大小的DNA片段。
7、虽然尚未发现GoldViewⅠ有致癌作用，但由于GoldViewⅠ溶液酸性较强，因此对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴手套。
应用特点：高效：GoldViewⅠ可以检测50ng级的DNA或RNA片段。
AO EB染色的讨论
吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色AO / EB原理与流程zhongyisheng:1 原理：吖啶橙(AO)能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的绿色荧光。
溴乙锭(E仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。
凋亡的细胞呈现为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。
非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。
二者形态迥然相异，很易判别。
在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞(NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构；晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状。
2 AO/EB染色及观察结果：取20-100μl的1：100稀释的染色剂置于载玻片的贴壁细胞上室温下静置20min，PBS洗涤2-3遍，上覆盖玻片，荧光显微镜下观察结果并计数20-200个细胞。
ym1051: 1.能否提供具体实验步骤?2.您在文中所说的"1：100稀释的染色剂"是怎样稀释的?如何在载玻片上种上贴壁细胞? zhongyisheng:1 用1mlEP管稀释时，先取微量的染色剂，然后再取稀释剂（如BSA）加入EP管吹打即可。
2 消毒灭菌处理后的盖玻片平放入培养皿或中即可实验。
ym1051:我好像已明白具体过程了:首先要进行细胞爬片,然后将染色剂滴加在已爬有细胞的盖玻片上,温育后洗涤,再盖上盖玻片则可进行观察了.是这样吗?如果不经过爬片处理而将细胞进行消化,再将细胞和染色剂滴加在盖玻片上进行观察,行吗?zhongyisheng:的确，不经过爬片而是将贴壁细胞消化下来一样可以进行进一步的实验。
这是悬浮细胞的典型方法。
当然，由于进行免疫组化染色进行的形态学检查经常考虑到细胞的原貌，在国际上比较通用，尤其是在进行动态检查时。
医琳师妹：我将我所作的方法与大家共享：吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定PC12细胞凋亡（acridine orange/ethidium bromide, AO/EB）：1）细胞爬片：在6孔培养板中预先置入玻璃盖玻片，接种细胞悬液，干预后，予95%乙醇固定15分钟，微干，然后准备荧光染色。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
溴化乙锭清除液
简介：
溴化乙锭清除液(EB Erasol)又称溴化乙锭清除剂或去除剂，是专用于清除溴化乙锭(Ethidium Bromide)污染的产品。
EB Erasol 能有效破坏溴化乙锭的分子结构、消除EB 荧光，减少对后续实验的影响，同时使EB 致癌突变性降低99%以上，保障科研人员和环境的安全。
EB Erasol 可以广泛用于清除各种缓冲液、有机溶液和固体表面的EB 污染(玻璃、不锈钢、塑料、地板、设备等)，处理实验室EB 污染区如电泳废水池、微波炉、凝胶系统附近地方，地板等能彻底除掉60平米范围内的EB 污染，去除结果可检测。
组成：
操作步骤(仅供参考):
(一)清除水溶性溶液(如水、Tris 、MOPS 、氯化铯等)中的EB
1、用水将需要清除的溶液稀释，使EB 浓度低于0.5mg/ml(如果EB 浓度已经低于1mg/ml ，则省略该稀释步骤)。
2、按试剂(A):试剂(B):水溶性溶液=1:2:100的比例，将A solution 和B solution 先后加入到溶液中(由于溶液混合初期会产生少量有害气体，整个操作须在化学通风橱中小心操作)。
3、搅拌，室温静置。
4、用饱和碳酸氢钠溶液中和使其pH 变为中性。
5、检查消除程度，弃液。
(二)清除氯化铯饱和的异丙醇中的EB
1、用水将氯化铯饱和的异丙醇溶液稀释，使EB 浓度低于1mg/ml(如果EB 浓度已经低于1mg/ml ，则省略该稀释步骤)。
2、按试剂(A):试剂(B) =1:2的比例混合，即为EB Erasol 工作液。
3、按氯化铯饱和的异丙醇溶液:EB Erasol 工作液=1:4的比例，加入新鲜配制的EB Erasol 工作液，室温搅拌。
4、用饱和碳酸氢钠溶液中和使其pH 变为中性。
5、检查消除程度，弃液。
(三)清除异戊醇和丁醇中的EB
编号 名称
NZ0001 50T NZ0001 100T Storage
试剂(A): EB Erasol A solution 50ml 100ml RT 试剂(B): EB Erasol B solution 100ml
200ml RT 避光
使用说明书
1份
1、用水将异戊醇和丁醇稀释，使EB浓度低于1mg/ml(如果EB浓度已经低于1mg/ml，则省略该稀释步骤)。
2、按试剂(A):E试剂(B)=1:2的比例混合，即为EB Erasol工作液。
3、按溶液EB Erasol工作液:异戊醇和丁醇=1:4的比例加入新鲜配制的EB Erasol工作液, 溶液分成两相，室温搅拌。
4、按2g活性炭/100ml混合液的比例加入活性炭，再搅拌。
5、检查消除程度，弃液。
注意事项：
1、溶液在清除EB过程中会产生少量有害气体，所以尽量在在化学通风橱中小心操作。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。