HPLC法测定连翘败毒丸中大黄素和大黄酚的含量

HPLC法测定连翘败毒丸中大黄素和大黄酚
的含量
【摘要】目的：成立连翘败毒丸的含量测定方式。

方式：采纳高效液相色谱法。

色谱柱：SHIMADZU VP-ODS（250 mm× mm,5 um），流动相：甲醇%磷酸溶液（80：20，V/V），流速：·min-1，检测波长：254nm，柱温：30℃。

结果：大黄素在～μg·ml-1范围内线性关系良好（r =）；平均加样回收率为%， RSD=%（n=6）；大黄酚在～μg·ml-1范围内线性关系良好（r =）；平均加样回收率为%， RSD= %（n=6）。

结论：该方式简便易行，结果准确靠得住，可适用于连翘败毒丸的质量操纵。

【关键词】高效液相色谱法连翘败毒丸大黄素大黄酚含量测定
Determination the content of Emodin and Chrysophanol in Lianqiao baidu Pills by HPLC
LI Ya-rong Wang-Shu
（Jilin Institute for Food and Drug Control Jilin Jilin 132001）
【Abstract objective】To establish a HPLC method for determination the content of emodin and chysophanol in. lianqiao baidu Pills METHOD: The shimadzu VP-ODS C18(250 mm× mm,5 um) was used, the mobile phase was % phosphoric acid solution(80:20), the column temperature was 30 ℃,the detection wavelength was 254 flow rate was ·min-1. RESULTS The linear ranges of emodin and chrysophanol were at ～μg·ml-1 (r= ～μg·ml-1 (r= respectively, the average recoveries(n=6) were % and % with RSD % and % respeclivery. CONCLUSION The method is simple and accurate, it can be used for quality control of lianqiao baidu Pills.
【Key words】HPLC;lianqiao baidu Pills; emodin;chrysophanol; determination
连翘败毒丸为《卫生部药品标准》第二十册（中药成方制剂）收载的品种，由连翘、金银花、大黄、苦地丁、天花粉等19味中药组成，具有清热解毒，散风消肿之功效。

临床用于脏腑积热、风热湿毒引发的疮疡初起，红肿疼痛，憎寒发烧，风湿疙瘩，遍身刺痒，大便秘结[1]。

处方中大黄为君药之一，大黄素和大黄酚为其要紧有效成份，原标准中无含量测定方式。

为了更好地操纵制剂的内在质量，本文采纳高效液相色谱法测定连翘败毒丸中大黄素和大黄酚的含量，以期为该制剂的质量提供快速、准确的测定方式，现报告如下。

1 仪器与试药
LC－2020C 高效液相色谱仪，CLASS－VP 色谱工作站，紫外检测器；大黄素对照品（批号：），大黄酚对照品（批号：），由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用；连翘败毒丸为市售样品（呼伦贝尔哈慈制药厂，规格6g·100粒-1 批号：，，）。

甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方式与结果
色谱条件与系统适用性实验
色谱柱：SHIMADZU VP-ODS(250 mm× mm,5 um)；流动相：甲醇%磷酸溶液（80：20，V/V）；检测波长：254nm；流速：·min-1；柱温：30℃。

溶液制备
对照品溶液的制备周密称取经五氧化二磷减压干燥12h以上的大黄素对照品和大黄酚对照品各适量，加甲醇制成每1ml含大黄素80μg、大黄酚100μg的混合溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液
的制备取重量不同项下的连翘败毒丸，粉碎，混匀，取约1g，周密称定，置烧杯中，加水3ml，置水浴温热并搅拌使溶散，加硅藻土1g，拌匀，置100℃烘箱中，烘干。

转移至锥形瓶中，并用水3ml洗涤烧杯及玻棒，洗液并入锥形瓶中，置100℃烘箱中，烘干，周密加入盐酸-乙醇（1：25）混合溶液25ml，称定重量，超声处置（功率300W，频率50kHz）10 min，置水浴上加热回流2 h，放冷，再称定重量，用盐酸-乙醇（1：25）混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。

周密量取续滤液5ml，置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液[2]。

阴性对照溶液的制备取除大黄之外的处方中其余药材的十分之一量，按法制成水丸，再按供试品溶液制备方式，制成阴性对照溶液。

专属性实验
别离周密吸取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各10μl 注入液相色谱仪，记录色谱图（图1）。

由图1可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时刻（1.大黄素：；2.大黄酚：）的色谱峰，阴性实验无干扰。

线性关系考察
周密吸取对照品贮备液（大黄素：·ml-1 ，大黄酚 mg·ml-1）各适量，别离置于10ml量瓶中，加甲醇定容，配成浓度别离为大黄素：、、、、、μg·ml-1，大黄酚：、、、、、μg·ml-1的溶液，摇匀，滤过，周密吸取续滤液各10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。

以峰面积（A）为纵坐标，其浓度（C）为横坐标，经线性回归，大黄素回归方程为：A=，r =；大黄酚回归方程为：A=，r =。

结果说明，大黄素在～μg·ml-1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系；大黄酚在～μg·ml-1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。

周密度
取对照品溶液，重复进样5次，进样量10μl，在上述色谱条件下求得大黄素峰面积的RSD为%(n=5)，大黄酚峰面积的RSD为%(n=5)。

稳固性实验
取同一供试品溶液，在0、六、1二、24、48 h别离进行测定峰面积结果，大黄素峰面积的RSD为%(n=5)，大黄酚峰面积的RSD 为%(n=5)。

重复性实验
取供试品（批号），共5份，别离按“方式制备供试品溶液，进行测定，求得大黄素含量的RSD为%(n=5)，大黄酚含量的RSD为%(n=5)，说明重复性较好。

加样回收率实验
周密称取已知含量的样品（批号，大黄素含量·g-1，大黄酚含量 mg·g-1，平均装量·袋-1）适量，共6份，别离置烧杯中，别离周密加入大黄素对照品贮备液（·ml-1）、大黄酚对照品贮备液（ mg·ml-1）及 ml各适量，按“供试品溶液的制备”方式操作，依法测定，结果见表1。

表1 大黄素、大黄酚加样回收率实验
样品含量测定
别离周密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定三批样品中大黄素、大黄酚峰面积，按外标法计算其含量（n=5），结果见表2。

表2 3批样品含量测定结果
3 讨论
通过对3批样品中大黄素、大黄酚的测定，结果说明大黄素最高含量为·袋-1，最低为·袋-1；大黄酚最高含量为·袋-1，最低为·袋-1。

综合考虑确信限量，每丸含大黄素不得低于，含大黄酚不得低于。

本方式结果准确，方式简便，重复性及回收率均理想，能够作为该制剂的质量操纵方式。

【参考文献】
[1] 卫生部药品标准中药成方制剂[S]．第二十册．1998，144．
[2] 中国药典[S]．2005年版，一部．613．。