植物石蜡切片包埋_修蜡过程的改进

收稿日期:2010-01-06;修回日期:2010-01-18基金项目:十一五科技支撑项目(2006BAD07B06-10)
作者简介:姜建福(1982-),男,硕士,汉族,主要从事果树栽培生理生态研究;通讯作者:方金豹(1963-),男,博士,汉族,研究员,E ma i :l jf ang @pub li c2 zz ha cn 。

do i 10.3969/j issn 1008-9632.2011 01 085
植物石蜡切片包埋、修蜡过程的改进
姜建福,赵长竹,方金豹
(中国农业科学院郑州果树研究所 中国农业科学院果树生长发育与品质控制重点开放实验室,河南郑州450009)
摘 要:传统的石蜡切片包埋、修蜡操作过程耗时费力。

采用金属框替代纸质包埋盒进行组织包埋,将蜡块冷水冷却改为自然冷却,趁蜡块未完全变硬之前进行快速修整。

该方法不仅提高了实验效率,而且修出的蜡块工整一致,同时对后面的切片过程无任何影响。

关键词:石蜡切片;包埋;修蜡;改进中图分类号:Q -336
文献标识码:B
文章编号:1008-9632(2011)01-0085-02
Improve m ent i n paraffi n e mbedding and finis hing
JIvANG Jian fu ,Z HAO Chang zhu ,FANG Ji n bao
(K ey Laboratory f or Fruit T ree G ro w th ,D evel op m e nt and Q uality Contro,l Zhengzhou Fruit R esearc h I nst itute ,CAA S ,Zhengzhou 450009,China)
Abstrac t :The traditiona l pa ra ffi n e mbedd i ng and fi n ishi ng was ti m e consu m i ng and l abo rious .The tissues w ere e m bedded by using m eta l fra m e i nstead o f pape r box ,na t ura l coo li ng i nstead of hydro coo ling ,repa i red para ffi n block qu i ckly before it turned harden co m p l etely .T h i s m ethod no t only enhanced the exper i m ental effic i ency but a l so un ifor m ed size of block .T here w as no any i nfl uence on late r process .
K eywords :para ffi n sec tion ;e m bedd i ng ;paraffi n fi nish i ng ;
i m prove m ent
石蜡切片法是生物学中一种基础实验方法,广泛用于多个学科领域的研究,但其制作过程繁琐,包括脱水、透明、浸蜡、包埋、修蜡、切片、展片、染色、封片等一系列步骤,并且各步互相关联,任何一个环节出现差错都会影响整个实验的进程和质量
[1-4]。

其中,包埋与
修蜡也是制片过程中一个关键步骤。

常规方法包埋修蜡过程首先用光滑牛皮纸制作包埋盒,然后将融化的石蜡倒入包埋盒中,用镊子轻轻将浸好蜡的组织材料夹入包埋盒中并摆正好位置,待蜡液表层凝固后将包埋盒迅速放到冷水中冷却。

蜡块完全凝固后将其取出切成小块,每一小块包含一个材料,按照所需的切面,用单面刀片将小蜡块修整成锥体,然后将其粘到载蜡台上准备切片
[5-9]。

由于该传统方法包埋好的蜡块比
较硬,所以修整蜡块耗时费力。

为了提高包埋、修蜡效
率,我们在参考前人成果的同时[10-11]
,结合自己的实
验经历,对包埋、修蜡的过程进行了改进,取得了满意
的效果,现介绍如下。

1 方法
首先制作 L 型金属框,材质以不锈钢板条或铜板条为佳,要求其壁尽量厚,内侧面平整光滑,其长度、宽度和高度可以根据包埋组织材料的大小和数量决定(图1A )。

用两个完全一样的 L 型金属框并在一起放到玻璃板上构成长方形包埋槽(图1B),将融化的石蜡倒入包埋槽内,再将浸过蜡的材料放入包埋槽内,用热的解剖针将材料进行排列,在室内或冰箱中静置冷却(图1C),待包埋槽内石蜡已全部凝固但未变硬之前,将两个金属框掰开即得到包埋的蜡块。

由于此时蜡块较软,可以轻易地修蜡。

迅速用单面刀片根据组
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织材料的位置将其初步分成小块(图1D ),然后进一步的将其修成锥体,修蜡过程同传统方法(图1E)。

图1 包埋和修蜡过程
F i g 1The process of e mb edd i ng and fi n i sh i ng
2 结果与讨论
我们利用该方法对甜樱桃花芽及子房3000余份组织材料进行石蜡制片观察(图2、3),深刻地体会到该方法具有以下优点
:
2 1 节约时间 通常纸盒包埋法须待纸盒放入水中冷却且蜡块完全凝固变硬后才可操作,修蜡耗时费力;而改进后,蜡块在未完全变硬之前就进行修整,此时蜡块质地较软,可以大大加快修蜡速度,根据我们的经
历,修蜡速度可以提高4~6倍。

修好的蜡块与传统方法相比,对后面的切片过程无任何影响。

2 2 蜡块工整一致 将 L 型金属框放置在玻璃板上代替纸质包埋盒,有利于将材料调整到同一平面上,而且包埋出的组织蜡块比较方正,进一步修出的蜡块也工整一致,便于进一步切片。

2 3 调整自由、节约石蜡 两个 L 型金属框合围成的包埋槽的长度,可以根据组织材料的大小和数量进行灵活调整,节约包埋石蜡。

在采用该方法过程中应注意:(1)保证两个 L 型金属框相邻的两个面必须垂直,且首尾对接在一起时边侧不能有缝隙,以免液态石蜡从缝隙渗流。

(2)包埋好的蜡块硬度需要把握好,凝固时间短,金属框与蜡块不易分离,凝固时间长,蜡块硬度大,修整起来难度加大,具体时间还应结合自己材料多摸索总结。

(3)当需要包埋的组织材料较多时应在各个包埋槽上标上序号,按顺序包埋,避免差错。

(4)应结合自己的包埋和修蜡速度,确定每次组织材料和包埋槽的数量。

一次包埋过多,容易造成前面的蜡块还未修完,后面的蜡块已经完全凝固变硬,不易修整。

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