化妆品微生物指标检验.pptx
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化妆品中的微生物ppt课件
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3.氧气：作为了解
化妆品中检测的全部为有氧环境下测试。偶尔会出现鼓包极有可能 是存在厌氧菌。
专性好氧菌:
好氧菌
微好氧菌：
微 生
兼性厌氧菌
物
耐氧厌氧菌：
厌氧菌
(专性)厌氧菌：
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4.光及射线
太阳光除可见光线外，还有长光波的红外 线和短光波的紫外线以及更短的电磁波包 括X—射线和γ（Co60电子流辐照）—射线。
和兼性厌氧菌落总数。
厌氧菌可能会导
致面膜袋鼓包面 膜原液腐败。
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2.霉菌和酵母菌总数（真菌）：化妆品检 样在一定条件下培养后，1g或1mL化妆品中 所污染的活的霉菌和酵母菌数量，藉以判
明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一
般卫生状况。本方法根据霉菌和酵母菌特
有的形态和培养特性，在虎红培养基上， 置28℃±2℃培养5d，计算所生长的霉菌和 酵母菌数（ATCC10231、ATCC16404）
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6.化学物质（防腐剂研发部门比较熟悉）
很多化学药物对微生物有杀菌作用和抑制生长 作用。 低剂量的化学药物对微生物起抑制或防腐 作用，
高剂量的化学药物对微生物起杀菌作用。
化学药物杀菌剂种类很多，现分如下几大类 进行讨论。
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6.1重金属盐类
有无机和有机的重金属盐类，如汞、银、铅、 锌、铜等重金属元素的化合物都有很强的毒性 杀菌作用很强。
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6.6毒性物质
二氧化硫（SO2）、硫化氢（H2S）、一氧化碳
（CO）和氰化物（HCN）。O3
杀菌原理：对原生质中的一些活性基团或辅酶成 分能发生专性结合，使其失活，降低代谢活动或 使代谢不能进行，达到杀菌作用。
化妆品微生物[1]
![化妆品微生物[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/2c9035d665ce05087732134f.png)
的清洗消毒。 5.操作人员：个人卫生、每年健康体检
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化妆品微生物[1]
四、化妆品微生物污染的预防
❖化妆品一次污染的预防 ❖化妆品二次污染的预防
防1. 腐涂剂抹要前求洗：净手、用后盖好； 2. 化妆用具清洁干燥、避免交叉污染； ✓3.不产影品响包产装品上的使色用泽难；混入细菌的容器； ✓4.无防气腐味剂，适不量改：变应产符品合的《粘化度妆、品p卫H生值规；范》 ✓用量范围内无毒性、对皮肤无刺激。
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化妆品微生物[1]
五、化妆品微生物研究的前景
加强预防化妆品微生物污染的研究 提高化妆品微生物的检验能力 修订、完善化妆品微生物法规
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化妆品微生物[1]
小结
生境特征 来源、分类、卫生学意义 检测及卫生标准 预防
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化妆品微生物[1]
第13章 药品微生物
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朱紫杭，周焕宁，卢嘉明.化妆品微生物二次污染 研究.海峡预防医学杂志2006年第12卷第2期
化妆品微生物[1]
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朱紫杭，周焕宁，卢嘉明.化妆品微生物二次污染 研究.海峡预防医学杂志2006年第12化卷妆品第微生2物期[1]
二、来源、种类及其卫生学意义
❖ 来源 ❖ 种类
细菌 霉菌 酵母菌
放线菌 病 毒
化妆品微生物[1]
规定灭菌药物 对这类药物要求达到无菌。
非规定灭菌药物 对这类药物没有无菌要求，但对污 染菌的数量和种类有相应卫生标准。
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化妆品微生物[1]
药品微生物污染种类
剂型 常见微生物
规 注射剂
定 输液剂
灭 菌
滴眼剂
药 眼药膏
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化妆品微生物[1]
四、化妆品微生物污染的预防
❖化妆品一次污染的预防 ❖化妆品二次污染的预防
防1. 腐涂剂抹要前求洗：净手、用后盖好； 2. 化妆用具清洁干燥、避免交叉污染； ✓3.不产影品响包产装品上的使色用泽难；混入细菌的容器； ✓4.无防气腐味剂，适不量改：变应产符品合的《粘化度妆、品p卫H生值规；范》 ✓用量范围内无毒性、对皮肤无刺激。
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化妆品微生物[1]
五、化妆品微生物研究的前景
加强预防化妆品微生物污染的研究 提高化妆品微生物的检验能力 修订、完善化妆品微生物法规
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化妆品微生物[1]
小结
生境特征 来源、分类、卫生学意义 检测及卫生标准 预防
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化妆品微生物[1]
第13章 药品微生物
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朱紫杭，周焕宁，卢嘉明.化妆品微生物二次污染 研究.海峡预防医学杂志2006年第12卷第2期
化妆品微生物[1]
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朱紫杭，周焕宁，卢嘉明.化妆品微生物二次污染 研究.海峡预防医学杂志2006年第12化卷妆品第微生2物期[1]
二、来源、种类及其卫生学意义
❖ 来源 ❖ 种类
细菌 霉菌 酵母菌
放线菌 病 毒
化妆品微生物[1]
规定灭菌药物 对这类药物要求达到无菌。
非规定灭菌药物 对这类药物没有无菌要求，但对污 染菌的数量和种类有相应卫生标准。
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化妆品微生物[1]
药品微生物污染种类
剂型 常见微生物
规 注射剂
定 输液剂
灭 菌
滴眼剂
药 眼药膏
化妆品的微生物学检查
或 等于2,应报告其平均数，若大于2则报告其中稀释度较低 A
的平皿的菌落数
9.
三、细菌、真菌总数检董
5.菌落计数及报告方法
(3) 若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀
释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之；
(4) 若所有稀释度的平均菌落数均小于30个，则应按稀释
度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之； 匕； (5) 若所有稀释度的平均菌落数均不在30〜300个之间， 其
1 1365 164 20
16400
报告方式 (CFU/mL 或 CFU/g)
16000或 1.6*1。4
2 2760 295 46
1.6
3 2890 271 60
2.2
4 不可计 4650 513
一
5
27
11
5
6 不可计 305 12
—
38000
27100 513000
270 30500
38000或 3.8*1。4
;•；
i
27100或 2.7*1。4
]
513000或 5.1*1。
5
270或 2.7*1。2
1
31000或 3.1*1。4
7
0
0
0
—
<1*10
f
21(
(1)
试验：应无菌生长。
(2)
试验：供试品+阳性对照菌, 应检
出相应的阳性对照菌。
(3) 控制菌检查：依相应的检查方
法进行。
、控制菌检查一检查流程
供试品
增菌培养
分离培养
纯培养
生化反应试验 染色镜检
(A
使被检药物中的 被 检菌增殖，避 免出 现漏检。
微生物限度检验PPT课件
- 表面活性剂、中和剂或灭活剂：应证明其有效性及 对微生物的生长和存活无影响。
- 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小 时。
- 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 - 供试液的体积：100ml。
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稀释剂（ 中国药典2005版）
（1） 氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 （2） 无菌磷酸盐缓冲液 （3） 无菌磷酸盐缓冲液
中国药典2005版
菌株名称
CMCC编号
大肠埃希氏菌(E. coli)
CMCC(B)44102
金黄色葡萄球菌(Sta. aureus) CMCC(B)26003
枯草芽孢杆菌（Bac. subtilis）
CMCC(B)63501
白色念珠菌(Can. albicans) 黑曲霉菌(Asp. niger)
CMCC(F)98001 CMCC(F)98003
一次检出为准
第一次结果超过规定标准，复 试两次，三次结果平均报告
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
一次检出为准
测定结果在规定的限度标准5 倍以内均为合格
6
验证目的
- 在于确认（寻找）一种有效的检验方法，如果样 品（药品）中有一定数量的微生物存在，那么采 用此法可以使得样品（药品）中的微生物得以检 出。
过滤
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
菌种组：
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
过滤
空白样品组：
过滤
计数A 计数B （阴性对照） 计数C （阳性对照） 计数D
- 充分验证样品（药品）本身对微生物生长的影响。
7
验证目的
确认一种检验方法。 验证实验 检验条件
- 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小 时。
- 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 - 供试液的体积：100ml。
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稀释剂（ 中国药典2005版）
（1） 氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 （2） 无菌磷酸盐缓冲液 （3） 无菌磷酸盐缓冲液
中国药典2005版
菌株名称
CMCC编号
大肠埃希氏菌(E. coli)
CMCC(B)44102
金黄色葡萄球菌(Sta. aureus) CMCC(B)26003
枯草芽孢杆菌（Bac. subtilis）
CMCC(B)63501
白色念珠菌(Can. albicans) 黑曲霉菌(Asp. niger)
CMCC(F)98001 CMCC(F)98003
一次检出为准
第一次结果超过规定标准，复 试两次，三次结果平均报告
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
一次检出为准
测定结果在规定的限度标准5 倍以内均为合格
6
验证目的
- 在于确认（寻找）一种有效的检验方法，如果样 品（药品）中有一定数量的微生物存在，那么采 用此法可以使得样品（药品）中的微生物得以检 出。
过滤
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
菌种组：
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
过滤
空白样品组：
过滤
计数A 计数B （阴性对照） 计数C （阳性对照） 计数D
- 充分验证样品（药品）本身对微生物生长的影响。
7
验证目的
确认一种检验方法。 验证实验 检验条件
化妆品微生物学检验
化妆品微生物检验药品所化妆品微生物检验•微生物简介•微生物与化妆品•化妆品微生物检验•化妆品微生物挑战试验微生物简介•微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物，个体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物，统称为微生物。
微生物包括细菌、病毒、真菌等。
（但有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。
）•微生物基本特征：个体微小、种类繁多、分布广泛、繁殖快速微生物简介•微生物基本特征•微生物所需的营养物质•微生物的危害霉菌细菌酵母菌•2 .种类繁多，至少有十万种以上。
按其结构、化学组成及生活习性等差异可分成三大类。
•一、原核细胞型微生物•二、真核细胞型微生物•三、非细胞型微生物•原核细胞型微生物细胞核分化程度低，仅有原始核质，没有核膜与核仁；细胞器不很完善。
这类微生物种类众多，有细菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体和放线菌。
•真核细胞型微生物细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体；胞质内有完整的细胞器（如内质网、核糖体及线粒体等）。
真菌属于此类型微生物。
•非细胞型微生物没有典型的细胞结构，亦无产生能量的酶系统，只能在活细胞内生长繁殖。
病毒属于此类型微生物。
•3. 分布广泛：空气、土壤、江河、湖泊、海洋等都有数量不等、种类不一的微生物存在。
在人类、动物和植物的体表及其与外界相通的腔道中也有多种微生物存在。
•4. 繁殖快速：微生物细胞在合适的环境条件下，会不断获取外界的营养物质，进行生长和繁殖，繁殖以二分裂的方式进行，即由一个细胞变成两个，两个变成四个，……，最后发展成一个群体。
微生物所需的营养物质•1.水和无机盐•2.碳源。
碳源对微生物生长代谢的作用主要为提供细胞的碳架，提供细胞生命活动所需的能量，提供合成产物的碳架。
•3.氮源。
氮源主要用于菌体细胞物质(氨基酸、蛋白质、核酸等)和含氮代谢物的合成。
培养基中使用的氮源可分为两大类：有机氮源和无机氮源。
•4.能源:能为微生物生命活动提供最初能源来源的营养物质或辐射能。
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供试液 的制备
混合平板 的制备
细菌的培 养
书写检验 记录单
数据 处理
检查结果、 观察与计数
• 化妆品中防腐剂抑制细菌的生长.
• 含卵磷脂、吐温80 营养琼脂培养基进行 中和。对尼泊金类、苯甲酸类、六氯酚 类等有效，但对卡松类的防腐剂的中和 效果有限。
• 卡松的中和剂半胱氨酸,可较好的中和卡 松的抑菌效果。因此,检测时不同的防腐 剂加入不同的中和剂
甘露醇发酵试验 血浆凝块 液态血浆
霉菌和酵母菌
• 霉菌和酵母菌数测定（Determination of molds and yeast count）是指化妆品检样 在一定条件下培养后，1g 或 1mL 化妆品 中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，藉 以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度 及其一般卫生状况。
3、检验量
检验时，应分别从两个包装单位以上的 样品中共取10g 或10mL。包装量小于20g 的样品，采样量可适当增加样品包装数 量。
样品的制备
液体样品 膏、霜、乳剂半固体状样品 固体样品
样品的制备注意事项 无菌容器、材料及操作 样品的均一性
样品的检验及保管
及时检验 样品应放在室温阴凉干燥处 样品先进行微生物检验，再做其他指标 须防止微生物的再污染和扩散 如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发 出之日起该菌种及被检样品应保存一个月
样品的采集
总则
1、具有代表性 随机抽取相应数量的包装单位。 应从批的整体中各部位抽取，如从四角+中
间；分上、中、下层；或上、中上、中、中 下、下层；梅花点式等。
所有接触样品的工具、容器都必须保持清洁。
JJF1070－2005 定量包装 商品净含量计量检验规则
• 2、抽/采样数量 • 按照抽样批及抽样方案
菌落总数检验
• 菌落总数（Aerobic bacterial count）是指化妆品 检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养 基成分、培养温度、培养时间、pH 值、需氧性 质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。 所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长 的嗜中温的需氧性菌落总数。
测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程 度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。
• 为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每 100mL 卵磷脂吐温 80 营养琼脂中加入 1mL 0.5％的 TTC 溶液，如有细菌存在，培养后 菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。
• 在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附 着于颗粒状的原料中,检测时不易洗脱下 来,因此,需要验证检测方法的有效性。
• 铜绿假单胞菌 （化妆品卫生规范-2007年） GB/T 7918.4-1987 化妆品微生物标准检验方法 绿脓杆菌
• 金黄色葡萄球菌 GB/T 7918.5-1987 化妆品微生物标准检验方 法 金黄色葡萄球菌
• 霉菌和酵母菌：（化妆品卫生规范-2007年）
适用范围
总则
• 微生物检验的基本要求 • 微生物检验样品的采集、保存及制备
化妆品微生物检验
• 化妆品因含有水分，油脂， 蛋白质，多元醇等，为微 生物的生长创造了良好的 条件，造成产品变质。
• 为了抑制微生物的繁殖和 消费者使用过程中的产品 污染，往往在化妆品中加 入防腐剂，但不能过量。
• 因此，化妆品一方面为微 生物的生长繁殖提供了良 好的环境；另一方面由于 防腐剂的应用又可抑制微 生物的生长。
化妆品卫生标准
微生物检验方法
• GB/T 7918.1-1987 化妆品微生物标准检验方法 总则
• 菌落总数 （化妆品卫生规范-2007年） GB/T 7918.2-1987 化妆品微生物标准检验方法 细菌总数测定
• 粪大肠菌群：GB/T 7918.3-1987 化妆品微生物标准检验方法 粪大肠菌群
配培 养基 和稀 释液
供试 品的 处理
增 菌 24±2h 培 36±1℃ 养
分
离 24~48h 纯 36±1℃ 化
特征菌落
无菌落或无特征菌落
书写检验 记录单
最终结 果判断
革兰染色、镜检→ 生化试验:血浆凝固酶试验
甘露醇发酵试验
★金黄色葡萄球菌检查流程图
灰/黑色
Baird Parker’s平板 血浆凝固酶试验
金黄色葡萄球菌
• 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列， 无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆 凝固酶阳性。
该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种， 能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致 败血症。
SCDLP培养基或 7.5%NaCl肉汤
Baird Parker’s 或血琼脂
粪大肠菌群
• 粪大肠菌群（Fecal coliforms） 系一群需 氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌， 在 44.5℃±0.5℃培养 24h～48h 能发酵乳 糖产酸并产气。
该菌直接来自粪便，是重要的卫生指示菌。
双倍胆盐乳糖M
产酸：黄色 产气：气泡
EMB琼脂
配培 养基 和稀 释液
供试 液的 制备
书写检验 记录单
增 菌 44 ±0.5℃ 培 24~28h 养
检查 结果 判断
不产酸不产气
最终结 果判断
分离培养
产酸产气
36±1 ℃ 18~24h
蛋白胨水
培养
特
44 ±0.5℃ 24±2h
征 菌
落 靛基质
★粪大肠菌群检查流程图
液面玫瑰红色
紫黑色
铜绿假单胞菌
• 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌 ，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外 还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐 ，在 42℃±1℃条件下能生长。
★铜绿假单胞菌检查流程图
革兰染色、镜检→ 氧化酶试验 绿脓菌素试验
生化试验 硝酸盐还原试验 42℃生长试验 明
十六烷三甲基溴化铵平板
SCDLP培养基
粉红/ 紫红色
氧化酶试验
盐酸层呈粉紫色 氯仿层呈蓝绿色
绿脓菌素试验
明胶液化 试验
N2
硝酸盐还原产气试验 明胶液化 明胶培养基（高层）
该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血 症等。
SCDLP培养基
配培 养基 和稀 释液
供试 液的 制备
十六烷三甲基 溴化铵琼脂
增
菌 18~24h 培 36±1℃ 养
分 离 18~24h 纯 36±1℃ 化
灰白色、扁 平、周围有 水溶性蓝绿 色素
特征菌落
无菌落或无特征菌落
书写检验 记录单
最终结 果判断